严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化机制研究

目的研究严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化及机制。方法 2012年1～6月收集严重烧伤伴脓毒症患者8例为脓毒症组。同时选择整形患者10例作为对照。检测对照组及脓毒症组伤后3、5、7、14、21d血清中肿瘤坏死因子-α、皮质醇、尿液中3-甲基组氨酸的含量,以及股四头肌中泛素基因表达和蛋白表达。结果脓毒症组烧伤后3、5、7、14、21d各指标均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。脓毒症组皮质醇、TNF-α、3-MH在烧伤后逐渐升高,7d时达到高峰,后逐渐下降,但在21d时仍然高于对照组。尿内3-MH的排泄量与血TNF-α和皮质素水平的变化呈正相关,r=0.89、0.91,P<0.01。脓毒症组股四头肌组织内泛素mRNA、E2-14k mRNA、C2亚基的mRNA、蛋白酶体C2亚基蛋白的表达较对照组均显著增加。结论严重烧伤脓毒症患者出现骨骼肌降解,与皮质醇、TNF-α升高有一定的关系。     

脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解增强与泛素转录表达关系的研究

目的 :测定脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解率的变化 ,探讨骨骼肌蛋白降解的分子机制。方法 :腹腔注射内毒素建立大鼠脓毒症模型 ,动物随机分成 4组 ,分别为腹腔注射内毒素后 2h、6h、12和 2 4h组 ,每组各设正常对照。借助骨骼肌充分氧供离体孵育系统 ,氨基酸自动分析仪测定不同时相点孵育液中伸指长肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率 ;应用northernblot方法测定伸指长肌组织泛素mRNA的表达变化 ,分析骨骼肌蛋白降解与泛素mRNA表达的关系。结果 :脓毒症大鼠伸趾长肌总蛋白降解率在 2h和 6h轻度增加 ,肌纤维蛋白降解率则在 2h和 6h增加 1 5～ 2 2倍 ,在 12h增加 40 %。伸指长肌组织泛素mRNA 2 4kb的水平主要在 2h和 6h增加明显 ,增幅达 2～ 5倍 ,泛素mRNA 1 2kb未见明显变化 ;肌纤维蛋白降解与泛素mRNA 2 4kb表达间呈显著正相关 (r =0 9731,P =0 0 0 3)。结论 :脓毒症时骨骼肌蛋白降解增加可能同泛素 蛋白酶体蛋白降解途径活性增强相关。     

Ⅱ型胶原变构肽对胶原性关节炎软骨破坏的影响

目的研究连续替换Ⅱ型胶原(CⅡ)268-270位T细胞受体(TCR)结合氨基酸的CⅡ变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)关节软骨损伤的抑制作用。方法使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA。将CIA大鼠分为30μg组、5μg组、1μg组和空白对照组,每组8只,每次分别接受CⅡ变构肽sub268-27030μg、5μg、1μg及磷酸盐缓冲液静脉注射,每周2次。从关节炎症积分、病理学滑膜炎症积分、血管翳评分、关节软骨损伤评分和骨破坏积分评价变构肽疗效,用血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平和关节组织切片中软骨番红花红含量来评价变构肽对关节软骨损伤的抑制作用。结果30μgCⅡ变构肽组关节炎症积分为5·6±2·63,显著低于5μg组为(9·67±5·61)、1μg组为(10·02±5·06)及空白对照组为(11·8±5·34)(P<0·01)。与5μg变构肽、1μg变构肽和PBS相比,30μg变构肽可以显著降低CIA大鼠滑膜炎积分(P<0·01)、血管翳积分(P<0·01)、软骨损伤积分(P<0·01)和骨破坏积分(P<0·01)。30μg变构肽组血清COMP水平(μg/ml)为2·21±0·76,5μg变构肽组为5·63±1·73,1μg变构肽组为6·04±1·76,空白对照组为7·00±1·46,30μg治疗组与空白对照组比P<0·01。关节组织切片中软骨蛋白聚糖含量(A值)30μg组为2·35±0·76,5μg组为1·57±0·63,1μg组为1·37±0·53,空白对照组为1·00±0·41,30μg组与空白对照组比P<0·01。结论30μgCⅡ变构肽sub268-270可以有效缓解CIA,显著抑制CIA中的关节软骨破坏。     

血小板活性因子及其拮抗剂对大鼠肝硬化门脉高压的影响

目的探讨肝硬化时肝脏和血循环中血小板活性因子(PAF)的变化以及其对门脉高压的影响。方法CCl4腹腔注射8周(0·15ml/kg,2次/周)诱导大鼠肝硬化,快速3H-PAF液闪检测肝及循环中PAF水平;受体饱和结合实验分析肝组织PAF结合能力;监测外源性PAF及其拮抗剂BN52021对门脉压和系统动脉压的影响。结果与对照组相比,肝硬化时肝内PAF、肝脏输出PAF及肝内生PAF水平明显升高,分别4·0ng/g±0·4ng/gvs2·7ng/g±0·5ng/g(P<0·01)、6·3ng/ml±0·6ng/mlvs3·4ng/ml±0·6ng/ml(P<0·01)、1·0ng/ml±0·6ng/mlvs-0·3ng/ml±0·5ng/ml(P<0·01);肝组织PAF结合能力Bmax明显升高(2·8±0·21)fmol/μg膜蛋白vs(0·9±0·06)fmol/μg膜蛋白,P<0·01,而受体亲和力Kd差异无统计学意义(8·0nmol/L±1·3nmol/Lvs5·8nmol/L±1·0nmol/L,P>0·05)。肝硬化组基础门脉压升高(12·2mmHg±0·7mmHgvs5·3mmHg±0·6mmHg,P<0·01),系统动脉压降低(82mmHg±10mmHgvs114mmHg±9mmHg,P<0·01)。门脉注入PAF(1μg/kg)后,肝硬化组门脉压提高了32%(12·1mmHg±0·6mmHgvs16·0mmHg±0·7mmHg,P<0·01),升高幅度约为对照组的227%(4·1mmHg±1·0mmHgvs1·8mmHg±0·3mmHg,P<0·01),而系统动脉压在两组均下降(肝硬化组由82mmHg±10mmHg降至48mmHg±4mmHg,P<0·01;对照组由114mmHg±9mmHg降至52mmHg±4mmHg,P<0·01)。门脉注入BN52021(5mg/kg),肝硬化组门脉压降低了16%(14·6mmHg±1·6mmHgvs12·3mmHg±0·8mmHg,P<0·05),而系统动脉压在肝硬化组和对照组均无明显变化(P>0·05)。结论肝硬化时肝脏合成PAF明显增加是循环血PAF升高的重要来源,并上调节肝的血流动力学影响门脉高压形成,其作用可被其拮抗剂BN52021部分逆转。     

高糖通过PI3K-Akt信号途径抑制内皮细胞迁移和增殖及血管发生改变

目的观察高糖对内皮细胞迁移、增殖和血管发生改变及PI3K-Akt信号途径的影响。方法不同浓度(5、15、30mmol/L)D-葡萄糖处理后,用体外“伤口愈合”实验、细胞增殖试剂盒和缺乏生长因子的Matrigel胶观察内皮细胞迁移、增殖和血管发生情况,并用免疫沉淀和Western印迹检测p85/PI3K、磷酸化PI3K、Akt、磷酸化Akt(苏氨酸308)和磷酸化GSK3β的表达变化。观察加入PI3K抑制剂——LY294002后,内皮细胞的迁移、增殖和血管发生的变化。结果与5mmol/LD-葡萄糖组(细胞迁移数为100个/μm2±23个/μm2,增殖细胞数为59128个/孔±7415个/孔)相比,15mmol/L和30mmol/LD-葡萄糖组内皮细胞迁移明显降低(77个/μm2±18个/μm2和46个/μm2±18个/μm2,均P<0·01)、细胞增殖(33144个/孔±9082个/孔和11625个/孔±4196个/孔,均P<0·01)和血管发生改变(包括血管床面积、平均血管长度、毛细血管数和血管分支点数)及磷酸化PI3K、磷酸化Akt(苏氨酸308)和磷酸化GSK3β的表达(均P<0·05或P<0·01),且随葡萄糖浓度增高抑制作用增强(均P<0·05或P<0·01)。0·1、1和10μmol/L的LY294002抑制内皮细胞迁移(细胞迁移率分别为68μm2±16μm2、36μm2±12μm2和13μm2±3μm2,均P<0·01)、增殖(增殖细胞数分别为42560个/孔±4213个/孔、17688个/孔±7198个/孔和5704个/孔±558个/孔,均P<0·01)和血管发生水平(均P<0·05或P<0·01),且随LY294002浓度增高抑制作用增强(均P<0·05)。结论高糖可能通过PI3K-Akt信号途径抑制内皮细胞的迁移、增殖和血管发生变化。     

外周血管阻力指数联合降钙素原对脓毒症早期诊断的价值

目的 分析外周血管阻力指数(SVRI)联合血浆降钙素原(PCT)对脓毒症(sepsis)早期诊断的临床价值,为临床及早对脓毒症病患者开展治疗提供依据,提高脓毒症患者的预后质量.方法 选择2012年1月至2016年1月无锡市第二人民医院收治的符合纳入标准的疑似感染患者284例作为研究对象,在完善各项检查后进行诊断,对患者入组时行SVRI和PCT进行检测,建立ROC曲线,根据ROC曲线设立SVRI和PCT诊断脓毒症的临界值,并根据该临界值对患者做出是否为脓毒症的判断,计算SVRI联合PCT诊断脓毒症的特异度、灵敏度和准确度.结果 一般脓毒症患者[(7.69±0.67)μg/L]、严重脓毒症[(16.47±1.35)μg/L]和脓毒症休克[(23.14±1.84)μg/L]患者的PCT明显高于非脓毒症患者[(0.32±0.10)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05),其中脓毒症休克患者PCT高于一般脓毒症患者和严重脓毒症患者(P<0.05),严重脓毒症患者高于一般脓毒症患者(P<0.05);一般脓毒症患者[(156.75±35.52)kPa·s·L-1·m-2]、严重脓毒症[(124.60±24.76)kPa·s·L-1·m-2]和脓毒症休克[(108.39±15.64)kPa·s·L-1·m-2]患者的SVRI明显低于非脓毒症患者[(192.25±54.33)kPa·s·L-1·m-2],差异均有统计学意义(P<0.05),其中脓毒症休克患者SVRI低于一般脓毒症患者和严重脓毒症患者(P<0.05),严重脓毒症患者SVRI低于一般脓毒症患者(P<0.05).SVRI联合PCT诊断脓毒症的特异度、灵敏度、准确度分别为77.46%、71.83%、74.65%,明显高于单纯采用SVRI(72.87%、63.87%、67.96%)和PCT诊断(48.33%、43.90%、45.77%),差异均有统计学意义.结论 SVRI联合PCT检查对明确感染的患者进行早期脓毒症诊断,灵敏度和特异度均较好,具有较高的临床价值.     

不同剂量舒芬太尼伍用布比卡因鞘内注射分娩镇痛的研究

目的探讨不同剂量舒芬太尼伍用2.5mg布比卡因鞘内注射分娩镇痛的临床效果。方法选择96例ASAⅠ~Ⅱ级的足月妊娠初产妇,随机分为4组,宫口开至2~3cm时,鞘内注射布比卡因2.5mg及舒芬太尼混合液,舒芬太尼剂量分别为0μg(对照组),2.5μg,5.0μg和7.5μg。待镇痛作用消退后经硬膜外腔注入0·125%罗哌卡因与舒芬太尼(0.5μg/ml)混合液,5~8ml/h。宫口开全后停药。观察镇痛起效时间、持续时间、视觉模拟评分(VAS)、运动阻滞程度、产程进展、副作用、新生儿Apgar s评分等。结果各组VAS、产程、分娩方式及新生儿Apgar s评分等差异无显著性(P>0·05)。对照组镇痛持续时间显著短于其他各组,分别为(41±27)min,(96±38)min,(97±49)min和(98±36)min(P<0·01)。瘙痒发生率分别为0%,37.5%,62.5%和83·3%,各组比较差异有显著性(P<0·01)。结论2.5μg舒芬太尼伍用2.5mg布比卡因鞘内注射分娩镇痛效果满意,增大舒芬太尼剂量对分娩镇痛并无益处。     

脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解增强与泛素转寻表达关系的研究

目的：测定脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解率的变化，探讨骨骼肌帽白降解的分子机制。方法：腹腔注射内毒素建立大鼠脓毒症模型，动物随机分成4组，分别为腹腔注射内毒素后2h、6h、12和24h组，每组各设正常对照。借助骨骼肌充分氧供离体孵育系统，氨基酸自动分析仪测定不同时相点孵育液中伸指长肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率；应用northern blot方法测定伸指长肌组织泛素mRNA的表达变化，分析骨骼肌帽白降解与泛素mRNA表达的关系。结果：脓毒症大鼠伸趾长肌总蛋白降解率在2h和6h轻度增加，肌纤维蛋白降解率则在2h和6h增加1．5－2．2倍，在12h增加40％。伸指长肌组织泛素mRNA－2．4kb的水平主要在2h和6h增加明显，增幅达2－5倍，泛素mRNA-1.2kb未见明显变化；肌纤维蛋白降解与泛素mRNA-2.4kb表达间呈显著正相关（γ=0.9731,P=0.003)。结论：脓毒症时骨骼肌蛋白降角增加可能同泛素－蛋白酶体蛋白降解途径活性增强相关。     

新型气体信号分子硫化氢对左向右分流大鼠一氧化氮/一氧化氮合酶体系的影响

目的探讨内源性硫化氢(H2S)对左向右分流大鼠一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为分流组,分流+炔丙基甘氨酸(PPG)组,假手术组和假手术组+PPG组,每组8只。分流组及分流+PPG组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺建立左向右分流动物模型。术后4周,测量大鼠平均肺动脉压(MPAP);测定血浆NO、肺组织H2S、NO含量及NOS活性;用Western印迹方法测定肺组织eNOS含量。结果分流术后4周,分流组与假手术组比较,大鼠MPAP无明显变化;分流组与假手术组比较血浆NO(23·2μmol/L±3·6μmol/Lvs17·9μmol/L±3·4μmol/L,P<0·05)、肺组织H2S(37·6μmol/mg±2·1μmol/mgvs14·4μmol/mg±1·8μmol/mg,P<0·05)、肺组织NO(38·5±6·5μmol/μgvs31·8±6·5μmol/μg,P<0·05)、肺组织NOS活性(15·1U/mg±2·4U/mgvs12·0U/mg±1·4U/mg,P<0·05)及肺组织eNOS含量(0·3±0·1vs0·2±0·1,P<0·05)均明显升高。分流+PPG组大鼠MPAP较分流组及假手术组分别升高了15·82%和20·55%(19·5mmHg±1·7mmHgvs16·4mmHg±1·7mmHg和19·5mmHg±1·7mmHgvs15·5mmHg±1·3mmHg,P<0·05),肺组织H2S含量降低(28·8μmol/mg±2·2μmol/mgvs37·6μmol/mg±2·1μmol/mg,P<0·05),而血浆NO(27·8μmol/L±4·8μmol/Lvs23·2μmol/L±3·6μmol/L,P<0·05)、肺组织NO(46·0μmol/μg±6·0μmol/μgvs38·5μmol/μg±6·5μmol/μg,P<0·05)、NOS活性(20·9U/mg±3·9U/mgvs15·1U/mg±2·4U/mg,P<0·05)及eNOS含量均明显升高(0·4±0·1vs0·3±0·1,P<0·05)。结论内源性H2S可能通过抑制NO/NOS体系调节左向右分流大鼠肺动脉压力。     

鼠心肌成纤维细胞NOS活性的变化和AVP对NO合成的影响

目的　探讨在基础状态和精氨酸升压素 (AVP)干预下 ,心肌成纤维细胞 (CFs)一氧化氮合酶 -一氧化氮 (NOS-NO)系统活性的变化 .方法　胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,采用硝酸还原酶法和分光光度法分别测定基础状态和 AVP干预下 CFs的 NOS活性和 NO含量 .结果　 1基础状态下 CFs的 36 h组 NO含量 (4 2± 5 ) μm ol· L- 1 和 NOS活性 (6 17± 83)μkat· L- 1 ,显著高于 6 h组 (14± 3)μmol·L- 1 ,(16 7± 6 7)μkat· L- 1 . 2 AVP干预下 36 h组 NO含量(6 2± 1) μm ol· L- 1和 NOS活性 (115 0± 10 0 ) μkat· L- 1也显著高于 6 h组 (34± 4) μmol· L- 1 ,(6 0 0± 33) μkat· L- 1 ,且AVP干预组的 NO含量和 NOS活性均高于同时间点基础状态组(P<0 .0 5 ) . 3CFs的 NO含量和 NOS活性随 AVP浓度的增高而增加 ,其中 10 - 6mol· L- 1 AVP组 (6 3± 6 ) μmol· L- 1 ,(110 0± 5 0 )μkat· L- 1 和 10 - 7mol· L- 1 AVP组 (6 9± 6 )μmol· L- 1 ,(12 0 0± 5 0 )μkat· L- 1 都显著高于对照组 (2 9± 5 )μmol· L- 1 ,(4 5 0± 83) μkat· L- 1 ,10 - 9mol· L- 1 AVP组(32± 2 )μmol· L- 1 ,(5 0 0± 133)μkat· L- 1 和 10 - 8mol·L- 1 AVP组 (37± 2 ) μmol· L- 1 ,(6 0 0     

视黄酸对肿瘤坏死因子α诱导肺泡上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549增殖凋亡的影响与视黄酸(RA)对其调控作用。方法用不同浓度的TNF-α、1μmol/LRA和10μg/LTNF-α+1μmol/LRA处理肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞24h和48h后MTT法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。用10μg/LTNF-α处理24h或48h后继续培养,用台盼蓝染色计算24、48和72h活细胞数。结果分别用0、0.1、1、5、10μg/L浓度的TNF-α培养A549细胞24h和48h测定细胞增殖数(%):24h分别为95.0%、90.0%、79.6%、72.4%和59.6%,方差分析结果F值为18.04,P<0.01;48h分别为93.2%、82.7%、61.5%、50.3%和44.7%,F值为40.61,P<0.01。用10μg/LTNF-α处理A549细胞24h,其对细胞的增殖抑制作用可逆转,但处理48h后的A549细胞增殖抑制作用不能逆转。用TNF-α和视黄酸培养A549细胞12、24与48h后,凋亡的细胞数(%)TNF-α组分别为14.3%±3.2%、18.6%±2.9%和43.4%±3.5%,与对照组(6.3%±1.2%,8.2%±1.3%和26.1%±2.5%)比较差异有统计学意义;视黄酸加TNF-α组为4.8%±1.1%,5.2%±1.3%和16.4%±2.3%,明显少于TNF-α组。结论视黄酸通过抑制TNF-α对肺泡Ⅱ型上皮细胞的破坏,可以达到减轻肺泡上皮细胞损伤,保护肺表面活性物质的作用。     

重组人生长激素对败血症大鼠肠粘膜屏障功能保护作用的机制研究

目的观察重组人生长激素(RHGH)对败血症大鼠肠粘膜屏障功能的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法采用腹腔注射E.COLI复制大鼠败血症模型。42只健康雌性SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、败血症组(S组)及RHGH治疗组(T组),S组及T组又依观察时点再分为1D、3D两个亚组(T1D,T3D,S1D,S3D)。应用RT-PCR、免疫组化、放射免疫等方法,动态观测肝组织IGF-1MRNA表达情况、肠粘膜BCL-2蛋白表达水平及细菌移位、血浆生长激素(GH)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平及肠道形态等指标的变化情况。结果1RHGH能明显减轻败血症大鼠肠粘膜结构损伤,减轻肠道细菌移位。2T组大鼠肠粘膜BCL-2表达水平(T1D:2441±117;T3D:3628±235)明显高于S组水平(S1D:321±36;S3D:1873±57)(P<0.01)。3T组大鼠血浆GH水平〔T1D:(1.28±0.24)ΜG/L;T3D:(2.14±0.48)ΜG/L〕显著高于S组水平〔S1D:(0.74±0.12)ΜG/L;S3D:(0.60±0.18)ΜG/L〕(P<0.01)。4T组大鼠血浆IGF-1水平〔T1D:(168.94±65.67)ΜG/L;T3D:(201.56±64.98)ΜG/L〕明显高于S组水平〔S1D:(116.72±13.96)ΜG/L;S3D:(107.50±23.53)ΜG/L〕(P<0.05)。5T组大鼠肝IGF-1MRNA表达水平〔T1D:(0.98±0.20);T3D:(1.76±0.17)〕显著高于S组水平〔S1D:(0.38±0.09);S3D:(0.46±0.10)〕(P<0.01)。结论RHGH可能通过抑制肠粘膜上皮细胞凋亡及GH/IGF-1的作用来维护败血症大鼠肠粘膜屏障功能。     

环境毒素导致多巴胺能神经元蛋白水解应激的实验研究

目的探讨环境毒素诱发蛋白水解应激在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法6-羟多巴（6-OHDA）、1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP^＋）、鱼藤酮作用于神经生长因子诱导的PC12细胞,MTT法检测各种药物的神经毒性作用,应用共聚焦免疫荧光双标染色观察药物处理后细胞内仪．突触核蛋白及泛素化蛋白的表达及聚集。荧光分光光度计测量各组细胞蛋白酶体中各蛋白水解酶活性的变化。结果3种神经诱变剂处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中6-OHDA 100μmol／L、MPP^＋ 75μmol／L、鱼藤酮20nmol／L作用24h使细胞活力分别下降52％、44％、40％（P〈0．01）。共聚焦显微镜观察显示药物处理后细胞胞质内α-突触核蛋白及泛素表达上调,并形成蛋白颗粒物。酶活性测定提示MPP^＋75μmol／L、鱼藤酮20nmol／L处理使胰蛋白酶,糜蛋白酶及PgH水解酶活性明显下降（P〈0．05）,而6-OHDA 100μmol／L处理使细胞蛋白酶水解能力轻度降低,差异无统计学意义（P〉0．05）,6-OHDA 200μmol／L则诱导3种蛋白酶活性进一步下降,荧光指数分别为7．23±0．58,79．60±2．73和4．23±0．49（正常组为13．90±1．75,99．30±5．23和6．90±0．60,P〈0．01）。结论神经诱变剂可导致多巴胺能神经元泛素蛋白酶体功能失调及仪．突触核蛋白和泛素化蛋白的积聚,诱发蛋白水解应激异常状态。     

胎盘FIC1 mRNA的表达及其与ICP关系的研究

目的通过研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘胆盐载体家族性肝内胆汁淤积相关蛋白-1(FIC1)mRNA的表达,以及母胎血中总胆汁酸(TBA)和甘胆酸(CG)水平的变化,探讨胎盘胆盐载体在ICP胎儿病理机制中的作用。方法纳入ICP患者(ICP组)及正常孕妇(对照组)各20例。采用速率法测定母体静脉、脐静脉血中TBA水平;测定放射免疫法CG水平;RT-PCR法测定胎盘组织中胆盐载体FIC1 mRNA表达;另采用原位杂交法对随机选取的两组各两例胎盘组织进行FIC1 mRNA的定位检测。结果1ICP组母血和脐血中的TBA、CG水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ICP组母血中TBA、CG水平均高于脐血(25.77±16.64)μmol/Lvs(8.55±5.48)μmol/L;(3416.09±1986.04)μg/dLvs(821.84±673.17)μg/dL,差异有统计学意义(P<0.05);对照组母血和脐血中TBA水平(3.40±2.51)μmol/Lvs(4.37±3.26)μmol/L、CG水平(342.74±234.88)μg/dLvs(309.32±145.20)μg/dL比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2ICP组、对照组胎盘组织中均有FIC1 mRNA的表达,且均定位于合体滋养细胞。ICP组FIC1 mRNA表达量低于对照组(0.76±1.22vs37.28±75.03),差异有统计学意义(P<0.05)。3ICP组和对照组胎盘组织中FIC1 mRNA表达量与母血、脐血中TBA和CG水平均无相关性(r=-0.229~0.163,P>0.05)。结论胎盘FIC1 mRNA表达降低,这可能是导致胎盘对胆汁酸的转运障碍,引起ICP胎儿体内胆淤的因素之一。     

氯胺酮对致敏原诱导哮喘模型大鼠的肺保护

目的观察氯胺酮对哮喘模型大鼠气道高反应性及炎症的影响。方法56只Brown Norway大鼠随机分成阴性对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和不同浓度氯胺酮雾化吸入预处理组（C组、D组和E组）及不同剂量氯胺酮腹腔用药预处理组（F和G组）。采用卵蛋白（OVA）辅以百日咳杆菌菌苗和氢氧化铝为佐剂注射致敏大鼠。雾化吸入10mg／ml OVA激发。氯胺酮预处理组大鼠在激发前分别给予12．5mg／ml、25mg／ml或50mg／ml浓度的氯胺酮雾化吸入或50μg/kg,100μg／kg剂量的氯胺酮腹腔注射。A组采用磷酸盐缓冲液替代OVA进行雾化吸入。最后1次激发后24h,测定气道反应性。并取肺组织作诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的基因和蛋白表达,一氧化氮（NO）生成量及病理组织学检测。结果（1）B组的呼气阻力（Re）增长百分率的剂量反应曲线向左上移位,而且PC100（Re增长达100％幅度时所需乙酰胆碱的激发剂量）,PC200及PC400值显著低于A组（分别为14．65±1．19vs32．28±1．43,15．17±1．19vs38．91±1．39及16．28±1．18vs56．53±1．38）差异有统计学意义（P〈0．01）。氯胺酮预处理组的Re剂量反应曲线向右下移位,而PC100,PC200及PC400值均明显高于B组（P〈0．05）。（2）B组可见明显的气道炎症性病理改变。氯胺酮治疗组炎症细胞浸润及上皮细胞损伤程度明显减轻,肺间质水肿改善。（3）B组iNOS基因表达与A组相比明显增强（1．00±0．07vs0．48±0．07,P〈0．01）。与B组相比,iNOS基因的表达在C组（0．65±0．07）,D组（0．58±0．09）,E组（0．56±1．00）及F组（0．66±0．06）均减低,差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）与A组相比,B组iNOS蛋白表达（0．54±0．08）明显增强（P〈0．05）,而与B组相比,iNOS蛋白表达量在C组（0．20±0．03）,D组（0．18±0．03）及F组（0．21±0．04）均减低,差异有统计学意义（P〈0．05）。（5）B组肺组织NO产量[（0．39±0．04）μmol／g蛋白]显著高于A组（P〈0．01）。肺组织NO产量在C组[（0．19±0．03）μmol／g蛋白],D组[（0．17±0．03）μmol／g蛋白]及F组[0．16±0．04）μmol／g蛋白]明显低于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氯胺酮明显抑制致敏原诱发的肺iNOS的高表达,降低NO的过度产生,从而减轻炎性损伤,抑制气道高反应性,对哮喘模型大鼠具有肺保护作用。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者单个核细胞对血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者血管内皮细胞的损伤机制。方法：按多导睡眠监测仪检查结果将研究对象分为正常对照组（n=20）、轻度OSAHS组（n=21）、中度OSAHS组（n=24）和重度OSAHS组（n=20）。所有研究对象睡醒后（约6点30分左右）采外周静脉血,分离单个核细胞（MNC）。分离的MNC与人脐静脉内皮细胞ECV304共同培养48h,培养后收集上清液及内皮细胞,ELISA检测上清液中的TNF-α、IL-6,流式细胞仪检测内皮细胞的凋亡率、Fas蛋白表达。结果：正常对照组、轻、中及重度OSAHS患者MNC细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）分别为（0．80±0．10）μg／L、（1．20±0．30）μg/L、（1．40±0．50）μg/L及（2．10±0．60）μg/L,多组比较（F=69．65,P〈0．01）;产生白细胞介素6（IL-6）分别为（23．50±6．50）μg/L、（49．60±2．80）μg/L、（46．90±10．80）μg／L及（64．80±9.90）μg／L,多组比较（F=182．83,P〈0．01）。MNC细胞产生TNF-α及IL-6均高于正常对照组（均P〈0．01）;而重度OSAHS患者MNC产生TNF-α及IL-6均高于轻度及中度（均P〈0．01）,轻度与中度OSAHS患者之间差异无统计学意义。内皮细胞的凋亡率：正常对照组、轻、中及重度OSAHS患者分别为8．3％±3．2％、9．2％±3．0％、19．3％±6,3％及19．6％±3．8％,多组比较（F=39．36,P〈0．01）;中、重度OSAHS患者较正常对照组升高（P〈0．01）;而轻度OSAHS患者与正常对照组比较,中度与重度OSAHS患者组比较,差异均无统计学意义。内皮细胞表达Fas蛋白各组问差异无统计学意义。内皮细胞凋亡率与OSAHS患者AHI呈正相关（r=0．58913,P=0．0106）、与夜间最低血氧饱和度呈负相关（r=-0．50737,P〈0．01）。结论：OSAHS患者血管内皮细胞损伤过程中,单个核细胞可能起重要作用,且这种作用同病情严重程度、夜间缺氧密切相关。     

RNA干扰对活化的小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的：观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因的小干扰RNA（siRNA）在体外对小鼠巨噬细胞系RAW264．7表达TNF-α的抑制作用。方法：采用化学法合成针对TNF-α mRNA不同位点设计的3条siRNA序列（siRNA1～3）和1条带有荧光标记的BLOCK—IT^TM荧光Oligo（修饰的荧光标记的dsRNA,siRNA4）通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264．7,同时设立1个无任何靶基因的siRNA作为阴性对照（siRNA4）。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验（ELISA）法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果：内毒素刺激后6h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成分泌的TNF-α量均增加,于9～12h达高峰。利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72％～80％。siRNA1～4转染巨噬细胞后,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-α mRNA（0．158±0．030、0．114±0．028）和TNF-α蛋白表达[（1355±348）pg／ml、（817±138）pg／m1]均明显少于未转染组[TNF-α mRNA0．294±0．147,蛋白（2104±32）pg／ml,均P〈0．05],其中siRNA3的抑制率非常显著,达61．2％（P〈0．01）。阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响。结论：内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成。化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞能有效抑制TNF-α mRNA及蛋白的表达。     

Parthenolide inhibits tumor necrosis factor-alpha induced catabolism of aggrecan in chondrocytes in osteoarthritis: in vitro experiment with cultured human chondrocytes

OBJECTIVE: To investigate the effect of parthenolide (PAR) on the tumor necrosis factor (TNF)-alpha induced aggrecan catabolism of chondrocytes in ostroarthritis (OA). METHODS: Human chondrocytes were obtained from the condyles of femur of OA patients undergoing knee joint replacement during operation, cultured, and randomly divided into 4 groups: control group, TNF group (cultured in medium containing 10 ng/ml TNF-alpha) , PAR group (cultured in medium containing 10 micromol/L PAR), and PAR + TNF group (cultured in medium containing 10 micromol/L PAR and 10 ng/ml TNF-alpha). Eight days later 1, 9-dimethylmethylene blue spectrophotometric assay was used to measure the content of glycosaminoglycan (GAG) , marker of aggrecan catabolism, in the culture fluid and the cells. Using anti-aggrecan monoclonal antibodies Mab 5D4 and 3B3, ELISA was employed to detect the contents of 5D4 and 3B3, aggrecan catabolic fragments. RT-PCR was used to detect the mRNA expression of the aggrecan, ADAMTS-4 and ADAMTS-5, both aggrecanases, tissue inhibitor of metalloprotease (TIMP)-1, mitogen-activated protein kinase (MAPK)-1 and 18S, a marker. RESULTS: The GAG percentage in the culture fluid of the TNF-alpha was 57.1% +/- 2.0%, significantly higher than those of the control and TNF-alpha + PAR groups (P = 0.001 and 0.02). The 5D4 fragment level of the TNF-alpha group was 509 ng/ml +/- 32 ng/ml, significantly higher than that of the control group (166 ng/ml +/- 15 ng/ml, t = 11.60, P =0.007), and the level of 5D4 fragment of the PAR + TNF-alpha group was 333 ng/ml +/- 15 ng/ml, significantly lower than that of the TNF-alpha group (t = 7.93, P = 0.016). There was not significant difference in the 3B3 fragment level among the 4 groups (F = 1.316, P = 0.335). The aggrecan mRNA expression level of the TNF-alpha group was significantly lower than those of the other 3 groups (F = 133.7, P = 0.000), the mRNA expression levels of ADAMTS-5 and MAPK-1 of the TNF-alpha group were significantly higher than those of the other 3 groups (F = 209. 7, 117.1; P =0. 000), the ADAMTS-5 mRNA expression level of the PAR group was significantly lower than that of the control group (t = 11.1, P= 0.008) , and there was not significant differences in the mRNA expression levels of ADAMTS-4 and TIMP-1 among the 4 groups (F = 1.87, 0.73; P > 0.05) . CONCLUSION: PAR inhibits TNF-alpha induced catabolism of aggrecan in the chondrocytes of OA and reduces the mRNA expression of ADAMTS-5 and MAPK-1. PAR may be useful in the treatment of OA and other inflammatory joint diseases.     

性激素对老龄大鼠颏舌肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性及其基因表达的影响

目的:观察雌、雄激素对老龄大鼠颏舌肌细胞肌浆网(SR)Ca2 -ATP酶活性及其基因表达的影响,探索性激素影响上气道稳定性的机制.方法:将24只老龄雄性大鼠随机分为3组:老龄对照组、老龄雌激素组(肌注苯甲酸雌二醇,每次0.1 mg/kg,每周2次,共4周)和老龄雄激素组(肌注丙酸睾酮,每次2.5 mg/kg,每周2次,共4周).采用定磷法检测颏舌肌SR Ca2 -ATP酶活性,荧光定量RT-PCR测定SR Ca2 -ATP酶mRNA表达的变化.结果:与对照组相比,老龄雌激素组颏舌肌SR Ca2 -ATP酶活性[前者34.24 ± 6.14 μmol Pi/(mg protein·hour),后者 38.39 ± 8.49 μmol Pi/(mg protein·hour)]及其mRNA表达水平(前者0.029 7 ± 0.014 0,后者0.031 4 ± 0.017 4 )差异无统计学意义(P＞0.05);老龄雄激素组SR Ca2 -ATP酶活性[22.91 ± 4.56 μmol Pi/(mg protein·hour)]下降到对照组的67%(P＜0.01),其mRNA表达水平(0.017 2 ± 0.008 6)亦明显下降(P＜0.05).结论:雄激素可能通过降低颏舌肌SR Ca2 -ATP酶活性、抑制其mRNA的表达而影响老龄大鼠颏舌肌的功能;而雌激素没有此项作用.