EPO硬膜外途径干预大鼠脊髓损伤后caspase-3及FasL表达与细胞凋亡的相关性研究

[目的]在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察并探讨其对脊髓神经功能的保护作用以及对脊髓神经细胞凋亡的影响.[方法]将48只体重(270±10)g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1、6、24 h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射.n=18),实验组(1、6、24 h组分别给与5 000 u/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18).按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;分别采用TUNEL法及免疫组化法检测脊髓神经细胞凋亡指数和Caspase-3,fas-fasl死亡蛋白的表达.光镜下观察统计分析结果.[结果]与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1、6、24 h干预的实验组神经运动功能均有改善,脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降(P＜0.01);实验组中,fas-fasl死亡蛋白较对照组表达减少.2组中神经细胞凋亡数与Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白表达细胞数呈线性正相关(P＜0.01),相关系数分别为r=0.941(Caspase-3)和r=0.929(fas-fasl).[结论]早期应用外源性EPO对脊髓不完全损伤具有保护作用,可明显改善神经运动功能恢复情况,此种保护作用可能与EPO能够阻断Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白途径的神经细胞凋亡有关.     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocyc line）对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组），于损伤后不同时点取材，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞，原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达，神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组〉A组（P〈0．01）。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。     

促红细胞生成素治疗急性脊髓损伤

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对急性脊髓损伤神经功能恢复的疗效.方法 急性脊髓损伤患者65例,根据用药分为EPO治疗组35例和对照组30例;分别于入院时及治疗后末次随访时对脊髓损伤程度按ASIA2000评分标准进行神经功能评定,观察两组差异;同时监测患者用药前后血常规及血清EPO浓度,记录不良反应.结果 65例患者术后随访1～3年,平均1.7年,末次随访时治疗组患者ASIA运动、触觉、痛觉功能评分为58,2±8.2、78.5±11.5、82.6±13.5,显著优于对照组运动、触觉、痛觉功能评分45.6±6.8、65.5±13.4、68.7±14.7,差异有统计学意义(P<0.05),EPO组治疗过程中未见明显不良反应.结论 促红细胞生成素是治疗急性脊髓损伤安全有效的药物,早期应用EPO对促进患者神经功能的改善与恢复具有积极意义.     

重组人促红细胞生成素(rH-EPO)对急性脊髓水肿抑制作用的实验研究

目的研究重组人促红细胞生成素对急性脊髓水肿的抑制作用及其机制探究其临床应用的可能性。方法实验动物随机分为3组,采用静力加载技术于Wistar大鼠T13椎体水平造成急性脊髓损伤。生理盐水对照组,伤后立即给予生理盐水尾静脉注射。rHu-EPO治疗组,动物伤后立即给予rHu-EPO 1000unit/kg of bw尾静脉注射。甲基强的松龙治疗组,伤后立即给予甲基强的松龙30mg/kg of bw尾静脉注射。观察治疗前后实验动物神经功能评分变化、以及脊髓组织含水量的改变,细胞内游离钙含量([Ca2 ]i)的变化。结果(1)较之对照组,rH-EPO治疗组伤后1h运动功能已明显恢复(P<0.01)Rh-EPO治疗组受伤节段含水量在伤后各阶段均明显低于对照组(P<0.01),Rh-EPO在伤后12h对细胞内[Ca2 ]i含量的上升表现出明显的抑制作用(P<0.05)(。2)较之对照组,MP治疗组伤后伤后24h开始出现明显的功能恢复(P<0.05),伤后24h、48h含水量少于对照组(P<0.01),MP在伤后24h对细胞内[Ca2 ]i含量的上升表现出明显的抑制作用(P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素对急性脊髓水肿具有明显的抑制作用,并且起效时间早,有效促进急性脊髓水肿时的神经功能恢复。     

脊髓损伤后促红细胞生成素对bcl-2的影响

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠脊髓损伤后伤区脊髓细胞凋亡和神经功能恢复的影响。方法 Wistar大鼠210只，随机分为4组：假手术组、脊髓损伤组、脊髓损伤加重组人EPO治疗组、脊髓损伤加生理盐水治疗组。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记（TUNEL标记法）检测神经元和少突胶质细胞凋亡，Western blot免疫印迹法和免疫组化染色检测bcl-2表达，免疫组化染色和图像分析方法观察对白质内神经纤维（NF-200染色）的保护作用，通过感觉诱发电位（SSEP）、运动诱发电位（MEP）和大鼠BBB后肢运动功能评分，观察损伤脊髓传导功能的恢复。结果 EPO保护组bcl-2在各时相点的表达明显增高，8h和7d时神经元和少突胶质细胞的TUNEL阳性细胞数明显减少；在7d时白质中NF-200阳性神经纤维明显增多；SSEP和MEP的平均潜伏期和波幅以及BBB功能评分明显提高，与损伤组和生理盐水治疗相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 EPO通过上调bcl-2的表达，在抑制脊髓损伤后神经元和少突胶质细胞的凋亡中起到神经保护作用。     

促红细胞生成素在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的:观察促红细胞生成素(EPO)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)中的表达和重组人促红细胞生成素(rhuEPO)预处理对再灌注损伤脊髓神经细胞的作用。方法:将W ister大鼠分为正常组、假手术组、rhuEPO处理组和生理盐水对照组;rhuEPO处理组和生理盐水对照组于术前3h腹腔注射rhuEPO和生理盐水,制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。以免疫组化和W estern blot法检测脊髓组织中EPO的表达变化;以原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法(TUNEL法)检测细胞的凋亡情况。结果:EPO在无损伤脊髓中即有少量的表达,SCII后8h表达显著上调,于12、24h(12h与24h组比较差异无显著性意义,P>0.05)达高峰,伤后3d表达逐渐下调,5d仍保持较高水平。rhuEPO处理组SCII后8h、12h及24h时神经细胞凋亡水平明显低于生理盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在脊髓缺血再灌注损伤中EPO呈现时序性表达变化,可能是机体内源性神经保护的机制之一;EPO预处理能明显抑制SCII后神经细胞的凋亡。     

大剂量甲基强地松龙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用大剂量甲基强地松龙(MP)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用大剂量甲基强的松龙治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组)，损伤后不同时间点(4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d)按Tarlov标准评价大鼠双后肢神经功能恢复情况，然后处死。用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞，原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达，神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0．01)。结论：大剂量甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡。     

预防使用大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用

目的研究预防使用大剂量甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠的神经功能保护作用方法采用Allen重物打击模型，动物随机分为三组：对照组；脊髓损伤组；预防使用大剂量甲基强的松龙组。分别在脊髓损伤后24h、72h进行神经功能评分(Tarlov评分障碍率、Molt斜板功能障碍率)、脊髓病理形态学及超微结构观察、神经中丝(NF)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)观察、结果预防使用大剂量MP可明显改善损伤脊髓的病理形态及超微结构；脊髓损伤后72h大鼠神经功能评分明显提高；显著提高NF的表达、抑制GFAP的表达．结论预防使用大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤有神经保护作用     

大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤预防保护作用的研究

目的：探讨大剂量甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠神经功能的预防保护作用。方法：采用Allen‘s重物打击模型，大鼠随机分为对照组、脊髓损伤组、预防使用大剂量甲基强的松龙组。在脊髓损伤后24h和72h对大鼠进行神经功能评分(Tarlov评分)，对损伤部位脊髓行病理形态学、超微结构及神经细胞凋亡观察结果：与脊髓损伤组相比，预防使用大剂量甲基强的松龙组大鼠损伤脊髓的病理形态及超微结构改善：Tarlov评分明显提高；神经细胞凋亡明显减少。结论：预先使用大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤有预防性保护作用。     

大鼠神经干细胞缺氧后的内源性促红细胞生成素表达规律

[目的]观察神经干细胞缺氧后的内源性促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）表达规律，初步探讨缺氧预处理诱导神经保护作用的机制。[方法]测定大鼠神经干细胞缺氧培养4h后不同时间的内源性EPO表达情况，以及预处理后不同时间，再次遭受致死剂量缺氧伤害后的EPO表达情况。[结果]缺氧时间为4h，EPO蛋白在处理后即刻出现表达，4h达高峰，8h仍有部分表达。再次遭受致死剂量缺氧伤害后，与预处理4h组相比，预处理24h组细胞的EPO表达量明显增多。[结论]缺氧预处理能够提高神经干细胞应对伤害刺激时内源性EPO的表达，并降低再次缺氧时诱导EPO表达的阈值。     

Erythropoietin exerts neuroprotection after acute spinal cord injury in rats: effect on lipid peroxidation and early ultrastructural findings

Lipid peroxidation has been reported to play an important role in spinal cord injury (SCI). Erythropoietin (EPO) is a hematopoietic growth factor that stimulates proliferation and differentiation of erythroid precursor cells and is also known to exert neurotrophic activity in the central nervous system. The purpose of this study was to investigate the effectiveness of recombinant human EPO in attenuating the severity of experimental SCI. Rats were divided into seven groups. Controls (1) received only laminectomy. The trauma-only group (2) underwent 50-g/cm contusion injury and had no medication. In group 3, 30 mg/kg of methylprednisolone was introduced. The vehicle group (4) received vehicle solution containing human serum albumin, which is a solvent of EPO. Groups 5, 6, and 7 received 100 IU/kg, 1,000 IU/kg, and 5,000 IU/kg of EPO, respectively. All treatments were given as single doses, intraperitoneally, immediately after injury. Thiobarbituric acid-reactive substances were estimated to demonstrate lipid peroxidation, and ultrastructure was evaluated by electron microscopy. The results showed that lipid peroxidation by-products increased after injury. Administration of EPO and methylprednisolone sodium succinate (MPSS) reduced thiobarbituric acid-reactive substances after trauma. The best biochemical results were obtained with 5,000 IU/kg of EPO. Electron microscopic findings showed that EPO protected the spinal cord from injury. Although 1,000 IU/kg and 5,000 IU/kg of EPO inhibited lipid peroxidation better than MPSS, ultrastructural neuroprotection was similar.     

早期手术减压对损伤脊髓caspase-3表达的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后不同减压时间对大鼠脊髓细胞caspase-3表达的影响。方法将动物分为:大鼠脊髓挫伤即刻手术减压组(A组),大鼠脊髓挫伤2小时手术减压组(B组),大鼠脊髓挫伤8小时手术减压组(C组),大鼠脊髓挫伤24小时手术减压组(D组)。手术后1、3、7、14、28天对脊髓损伤区进行细胞凋亡caspase-3蛋白表达的测定(免疫组化法),采用计算机图像分析技术,进行定量分析。并用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况。结果A、B、C、D四组中均发现凋亡caspase-3蛋白阳性表达细胞,图象分析发现,各组凋亡细胞caspase-3免疫反应阳性细胞表达顺序为D>C>B>A,与大鼠后肢功能恢复有平行的变化趋势。结论大鼠脊髓损伤早期手术减压能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡,促进大鼠后肢功能恢复。     

环扎法致大鼠脊髓损伤早期减压后caspase-3的表达及其与神经细胞凋亡相关性研究

[目的]探讨大鼠急性脊髓损伤后早期不同减压时间对神经细胞凋亡及caspase -3表达的影响.[方法]采用环扎法大鼠急性脊髓损伤压迫模型.84只SD大鼠,随机分成4组,对照组即A组:行椎板减压;实验组分为B组:环扎术后8h行减压术;C组:环扎术后72 h行减压术;D组:环扎术后不行减压术.分别于手术后1、3、7、21 d行HE染色、免疫组化染色测定caspase -3的表达、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平、行为学(BBB评分,斜板评分)观察大鼠神经功能恢复情况.[结果]各组不同时间点BBB评分、斜板评分之间比较具有显著性差异(P＜0.05);实验组caspase -3、Tunel阳性细胞均在术后1d增多、3d达高峰、7d表达减弱、21 d仍有表达;不同时间点caspase -3、Tunel阳性细胞数比较均具有统计学差异,二者成正相关(r =0.69 ～0.98,P＜0.05).[结论]环扎法致大鼠脊髓损伤动物模型是一种理想的脊髓损伤造模方法.大鼠脊髓损伤早期减压可能阻止或减轻脊髓神经细胞凋亡.     

脊髓爆震伤后早期治疗神经元的形态学变化

[目的]研究脊髓爆震伤后早期采用不同药物干预对脊髓前角运动神经元影响。[方法]将36只家兔随机分为对照组（A组，n=12）、地塞米松实验纽（B组，n=12）、甲强龙实验组（C组，n=12），每组家兔均采用0．9g单质金属炸药黑索金（cyclotrimethylene trinitramine）进行爆震，伤后各组分别给予静脉输入生理盐水、地塞米松及甲强龙，于伤后6h、24h2个时间点取材，在光镜下观察脊髓前角运动神经元形态和数量的改变。[结果]发现爆震伤后6h脊髓运动神经元出现可逆性改变，伤后24h脊髓死亡运动神经元显著增加，伤后早期给予地塞米松及甲强龙治疗后，死亡神经元的数量减少与对照组相比有显著的统计学意义（P〈0．001），而B、C组之间无显著差别（P〉0．05）。[结论]脊髓爆震伤后早期应用糖皮质激素对运动神经元具有保护作用，在本实验条件下，甲强龙在早期脊髓爆震伤中的疗效与地塞米松相比没有优势。     

胚胎脊髓不同移植方法对损伤后大鼠脊髓轴突再生的作用

[目的]研究胚胎脊髓不同移植方法对损伤后大鼠脊髓轴突再生的作用。[方法]将成年大鼠分为四组，A组：单纯脊髓挫伤和半切洞组；B组：脊髓挫伤和半切洞＋胚胎脊髓移植组；C组：脊髓挫伤和半切洞＋胚胎脊髓移植＋损伤区上下神经根吻合组；D组：脊髓挫伤和半切洞＋胚胎脊髓移植＋带蒂大网膜移植组。移植后6周，应用行为学检查，观察大鼠功能恢复情况，用光、电镜检查计算轴突和观察轴突病理变化，采用计算机图像分析技术，进行定量分析。[结果]作者发现脊髓损伤后6周A组轴突丢失最严重，各组轴突都有不同程度的减少，其减少程度顺序是A组〉B组〉C组〉D组。D组与其它三组比较有显著差异性。残留的轴突数目与神经功能的改善相平行。[结论]大鼠胚胎脊髓和大网膜移植后能增强损伤脊髓轴突再生并能促进大鼠后肢神经功能的恢复。     

Effect of mannitol administration and myelotomy on acute experimental spinal cord injury: investigation by spinal cord evoked potential

The authors reported the changes in spinal cord evoked potential following impact injury by the weight-dropping technique in untreated and treated animals. The effect of mannitol and myelotomy therapy on spinal cord evoked potential in experimental spinal cord injury was discussed. (Materials and Methods) 32 adult dogs, ranging in weight from 9 to 13 kg, were used. 28 dogs received 300 gm-cm contusion of the T10 spinal cord. Eight dogs were not treated and twenty dogs were treated with mannitol. Ten dogs were treated with intravenous continuous infusion of mannitol (1g/kg/hr) 30 minutes after the injury, and ten dogs with intravenous bolus injection of mannitol (2 g/kg) at 30 minutes and 3 hours after the injury. At one hour after the injury, five dogs with 400 gm-cm contusion were treated with posterior midline myelotomy. The spinal cord evoked potential following direct stimulation of the spinal cord was recorded from the epidural space for 5 hours. The recording electrode was located cephalad to the site of the impact injury. (Results and Discussion) In each group, the amplitude of I potential decreased remarkably immediately after the injury. Subsequently, gradual recovery was obtained. In the untreated 300 gm-cm contusion group, no apparent improvement was seen from one hour after injury. On the other hand, in the mannitol-treated group, the recovery of the amplitude was superior to that found in the untreated group at a significant level of P less than 0.05. However, in the group with intravenous bolus injection of mannitol, the recovery was transient.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

兔脊髓损伤后脑红蛋白的表达变化及其意义

[目的]探讨兔脊髓损伤(SCI)后脑红蛋白(Ngb)的表达变化规律及其意义。[方法]健康新西兰大白兔48只,随机分为8组,采用球囊压迫SCI模型,应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质印迹(West-ern blot)检测伤段脊髓组织Ngb mRNA和蛋白的表达变化情况。[结果]Ngb在正常兔脊髓组织内表达,SCI后6 hNgb表达逐渐增强,伤后24 h达到高峰;随后逐渐下降但维持较高水平至损伤后72 h,伤后7 d Ngb表达接近正常水平。[结论]Ngb存在于正常的脊髓组织内,Ngb的高表达与SCI的时间密切相关,SCI后Ngb表达上调是机体内源性保护机制之一。     

促红细胞生成素对脊髓缺血再灌注损伤保护作用及其机理的实验研究

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)处理对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机理.方法:建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型,通过动物神经运动功能评分和组织学染色评价神经损伤程度;采用免疫组织化学染色测量bcl-2和bax蛋白表达情况;TUNEL法检测脊髓细胞凋亡情况.结果:EPO处理组能明显改善动物的神经运动功能并减轻脊髓由于缺血再灌注所引起的病理性损害:EPO组与对照组相比,脊髓前角细胞的凋亡指数明显下降(P＜0.05),脊髓内bcl-2表达增高(P＜0.01),而bax蛋白表达下降(P＜0.01).结论:EPO对脊髓由于缺血而引起的神经运动功能损害具有保护作用,此种保护作用与EPO能够上调bcl-2和下调bax蛋白表达有关.     

急性脊髓损伤时经颅磁刺激运动诱发电位监测的实验研究

目的 通过观察经颅磁刺激运动诱发电位(TMS-MEP)在急性脊髓损伤时的表现及其与功能预后的关系,探讨TMS—MEP于临床手术时在脊髓运动功能监测中的应用。方法 32只家兔被随机分成4组,对照组了解麻醉及手术对实验的影响,另3组动物为脊髓损伤组,观察脊髓损伤后动物TMS—MEP和运动功能的变化情况以及脊髓的病理学改变。结果 TMS—MEP在脊髓损伤后有不同程度的恶化但并未完全消失的动物,大部分动物的运动功能能基本恢复正常;脊髓损伤后TMS-MEP完全消失但其后1h内能有不同程度恢复的动物,其运动功能可以大部保存;对于TMS-MEP在脊髓损伤后完全消失而且后来一直未见有恢复迹象的动物,其运动功能的恢复大多较差。结论 TMS—MEP监测对脊髓的损伤非常敏感,伤时TMS-MEP的表现与其后运动功能的恢复有着很好的相关性,可以有效地应用于临床术中监测。