三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶抗人大肠癌细胞的实验研究

 目的 探讨三氧化二砷（As2O3）与5-氟尿嘧啶（5-Fu）联合应用对人大肠癌细胞株CoLo-320的影响及其作用机制。方法 经不同浓度的As2O3和／或5-Fu处理CoLo-320细胞后，采用MTT法测定细胞的增生抑制效应；AO／EB荧光染色、DNA电泳、电镜、流式细胞术观察细胞凋亡、形态学和细胞周期变化；免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化。结果 与As2O3或5-Fu单药作用相比，As2O3与5-Fu联合应用可显著增强抑制CoLo-320细胞增生和诱导细胞凋亡作用，联合用药后细胞S期比例均较各单药使用时下降，癌细胞bcl-2基因表达明显下降，Bax和Fas基因表达显著增强。结论 As2O3与5-Fu联合应用具有显著协同抗大肠癌作用，其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

5－氟尿嘧啶的耐药与逆转研究进展

5-氟尿嘧啶(5-FU)是代谢拮抗剂类药物,广泛应用于头、颈、胸、卵巢、胃和结直肠等部位恶性肿瘤的治疗。然而,由于许多肿瘤的敏感性降低或者连续治疗使肿瘤对5-FU产生耐药性,从而导致许多患者的化疗失败。现将近年来5-FU的耐药及其逆转研究的文献综述如下:1 5-FU的作用机理     

PI3K/AKT信号通路与结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药机制的关系

化疗药物耐药是影响肿瘤有效治疗的主要因素之一。5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）作为一种基础化疗药物,其耐药机制成为研究热点。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号转导通路在促进细胞生长、运动、增殖、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗等方面起重要作用。近年来,关于PI3K/AKT信号通路与药物耐药性关系的研究越来越多,并被认为是化疗耐药治疗的新靶点。笔者查阅国内外近年来有关PI3K/AKT信号通路在结肠癌细胞5-FU耐药中作用机制的文献并做综述。     

胃癌组织中胸腺嘧啶合成酶和双氢嘧啶脱氢酶的表达及临床意义

目的 了解胸腺嘧啶合成酶(TS)和双氢嘧啶脱氢酶(DPD)mRNA在胃癌组织及癌旁非肿瘤组织中的表达情况以及与临床病理学特征的关系.方法 采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定50例胃癌患者TS、DPD mRNA在胃癌及癌旁非肿瘤组织的表达.结果 胃癌组织中TS mRNA水平明显高于非肿瘤组织中的水平(...     

5-氟尿嘧啶的耐药与逆转

5-氟尿嘧啶(5-FU)是代谢拮抗剂类药物,广泛应用于头、颈、胸、卵巢、胃和结直肠等部位恶性肿瘤的治疗.然而,由于许多肿瘤的敏感性降低或者连续治疗使肿瘤对5-FU产生耐药性,从而导致许多患者的化疗失败.现将近年来5-FU的耐药及其逆转研究的文献综述如下:     

5-氟尿嘧啶联合干扰素α对胃癌细胞的影响

目的：探讨化疗药物与细胞因子联合应用对肿瘤细胞增殖的影响。方法：首先MTT法测出不同浓度干扰素α（IFN）和5-氟尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制率，根据公式求出5-FU的半抑制浓度，然后用此浓度的5-FU与不同浓度的干扰素α配伍作用于胃癌细胞，用MTT法检测抑制率。用免疫细胞化学方法检测干扰素α、5-FU和干扰素α＋5-FU作用组的p53、p27、PCNA、Fas—L蛋白的表达情况。结果：MTT检测结果未发现干扰素α明显抑制肿瘤细胞增殖作用；5-Fu有抑制肿瘤增殖作用，且有浓度相关性；与5-FU作用组相比干扰素α＋5-Fu作用组的抑制率大于单纯5-FU组，且与配伍的干扰素浓度呈正相关性。之后的免疫组化试验发现IFNα＋5FU组p53、p27、Fas—L蛋白表达的阳性率高于单纯的5-FU组的阳性率，更明显高于IFN组的阳性率，而PCNA蛋白则相反。结论：5-FU对SGC7901胃癌细胞有明显的抗增殖作用，IFNα未见明显的抗增殖作用，但这两药物联合应用时，IFNα明显增强5-Fu的抗增殖作用；联合用药组的凋亡相关蛋白表达阳性率与5-FU组明显不同，IFNα增强5-Fu的抗肿瘤增殖作用可能是由凋亡途径参与作用的。     

AEG-1在5-氟尿嘧啶诱导的人口腔鳞状细胞癌细胞耐药中的作用

目的:探讨星形胶质细胞升高基因-1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）对5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导的口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞系耐药性的影响。方法:验证高（SCC15）、中（转染空质粒的对照组SCC15、CAL27）、低（CAL27）四组不同AEG-1表达量细胞模型AEG-1基因转染效果。MTT实验观察四组细胞对5-FU耐受性的变化;蛋白质印迹法和细胞划痕实验观察四组细胞在5-FU作用下caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平变化及细胞迁移能力的变化。结果:AEG-1基因在细胞中转染成功。MTT实验显示不同浓度5-FU作用四组细胞后,过表达组细胞的半数抑制浓度（IC50）为423.7 μg/ml,其对照组为213.5 μg/ml（P<0.05）;沉默细胞组IC50值为291.6 μg/ml,其对照组为463.1 μg/ml（P<0.05）。Western blot显示过表达组及其对照组中5-FU的浓度分别为400 μg/ml和200 μg/ml时,MMP-2、MMP-9及caspase-3的表达水平开始升高（P<0.05）;沉默组及其对照组中5-FU的浓度分别为240 μg/ml和480 μg/ml时,MMP-2、MMP-9及caspase-3的表达水平开始升高（P<0.05）。划痕实验显示加入相同浓度5-FU后过表达组细胞迁移率明显高于其对照组（P<0.05）;而沉默组细胞迁移率明显低于其对照组（P<0.05）。结论:上调/下调AEG-1表达能增加/降低OSCC细胞对5-FU的耐药性,提示OSCC细胞的耐药性可能与AEG-1表达量相关,OSCC细胞系中AEG-1的表达情况可能能间接干扰临床药物化疗的效果。     

重楼复方与氟尿嘧啶对胃癌细胞的体外协同作用研究

目的:探讨重楼复方(Chong Lou Fu Fang, CLFF)与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)对胃癌细胞有无体外协同作用及CLFF对胸苷酸合成酶(thymidylate synthase, TS)基因表达和细胞凋亡的影响.方法:MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估CLFF与5-FU对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的相互作用;Annexin-Ⅴ-FITC和PI双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定TS和β-actin mRNA表达.结果:CLFF在两株细胞中与5-FU均产生较好的协同细胞毒性,两药合用亦以协同方式诱导肿瘤细胞凋亡;CLFF作用24 h后,SGC-7901和BGC-823细胞中TS mRNA表达水平分别为对照组的(0.30±0.03)倍和(0.46±0.03)倍,用药前后两株细胞中TS mRNA表达水平具有统计学差异.结论:CLFF与5-FU有较好的协同抗肿瘤作用,可能与二者协同诱导肿瘤细胞凋亡以及CLFF可下调胸苷酸合成酶基因表达有关.     

重楼复方与氟尿嘧啶对胃癌细胞的体外协同作用研究

目的：探讨重楼复方（ChongLouFuFang,CLFF）与5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对胃癌细胞有无体外协同作用及CLFF对胸苷酸合成酶（thymidylatesynthase,TS）基因表达和细胞凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估CLFF与5一FU对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的相互作用;Annexin-V—FITC和PT双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定佟和B-actinmRNA表达。结果：CLFF在两株细胞中与5一FU均产生较好的协同细胞毒性,两药合用亦以协同方式诱导肿瘤细胞凋亡;CLFF作用24h后,SGC-7901和BGC-823细胞中TsmRNA表达水平分别为对照组的（0．30±0．03）倍和（0．46±0．03）倍,用药前后两株细胞中TSmRNA表达水平具有统计学差异。结论：CLFF与5-Fu有较好的协同抗肿瘤作用,可能与二者协同诱导肿瘤细胞凋亡以及CLFF可下凋胸苷酸合成酶基因表达有关。     

草酸铂联合5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌临床观察

 目的 评价草酸铂（L-OHP）联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）治疗晚期胃癌的疗效及其毒副反应。方法 L-OHP 130 mg／m2加入5 %葡萄糖注射液500 ml静脉滴注2 h，第1天；亚叶酸钙（CF）200 mg／m2静脉滴注2 h第1，2天；5-Fu 400 mg／m2静脉推注，第1，2天；5-Fu 600 mg／m2持续静脉滴注第1，2天， 21 d为1周期，完成2周期者复查有关指标，评价疗效和毒副作用。结果 全组可评价病例38例，其中完全缓解（CR）0例，部分缓解（PR）13例（34.2 %），无变化（NC）18例，进展（PD）7例，总有效（CR+PR）率34.2 %。毒副反应主要为中性粒细胞下降、静脉炎和神经毒性，患者消化系统不良反应轻微。结论 L-OHP联合CF／5-Fu方案治疗晚期胃癌效果好，毒性可以耐受，值得进一步应用和研究。     

MEK/ERK抑制剂影响胃癌细胞对5-FU敏感性及其机制的探讨

目的:探讨MEK/ERK特异性抑制剂PD98059在5-氟尿嘧啶(5-FU)抗胃癌细胞增殖中的作用。方法:应用5-FU与MEK/ERK抑制剂(PD98059)处理胃癌细胞,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测ERK和p-ERK的表达。结果:随着5-FU浓度的增加,5-FU对3种胃癌细胞系的增殖抑制率逐渐增大。5-FU作用MGC803细胞72 h的抑制率显著高于48和24 h,t值分别为16.477和25.349,P值分别为0.002和0.001。与对照相比,5-FU作用MGC803细胞48和72 h可引起显著的凋亡,t值分别为-20.576和-40.389,P值分别为0.015和0.001。5-FU处理胃癌MGC803细胞48 h,与对照相比pERK表达一过性下降然后升高。20μmol/L的PD98059联合5-FU作用48 h,可明显抑制pERK的表达,抑制率为22%;同时可明显增加细胞凋亡,增加率为20%。结论:MEK/ERK信号传导通路在5-FU作用胃癌细胞的过程中被激活,联合应用MEK/ERK信号通路抑制剂可部分逆转ERK的活化,增加胃癌细胞凋亡,从而增加胃癌细胞对5-FU的敏感性。     

5-氟尿嘧啶引起心绞痛1例

蒽环类抗癌药物导致心脏损伤已引起广大临床医师的重视 ,而 5 氟尿嘧啶 (5 Ｆｕ)致心脏损伤临床上少见。Ｌａｂｉａｎｃａ等综述 1 0 0 0例使用 5 氟尿嘧啶的病人 ,有 1 6 %出现心脏毒性。原先有缺血性心脏病史者 ,心脏毒性发生率增加到 4 5 %。我科曾收治 1例因使用 5 氟尿嘧啶引起心绞痛患者 ,报告如下 :患者女性、44岁、因右乳癌行改良根治术后 2 0天于 1 996年 1 0月 2 8日入院、体检 :一般情况好 ,全身浅表淋巴结不肿大 ,右胸壁手术疤痕约 1 5厘米 ,中段未完全愈合 ,心肺无异常。辅助检查 :血常规、肝肾功能、心电图均正常。诊断为右…     

小剂量顺铂联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及其机制的研究

目的：探讨小剂量顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）在体外联合用药对SGC-7901胃癌细胞及胃癌耐药细胞株SGC-7901／5-FU细胞增殖及其相关基因表达的影响。方法：采用MTT法观察在小剂量DDP、5-Fu联合用药前后SGC-7901与SGC-7901／5-FU存活率的差异,同时应用免疫组化方法检测SGC-7901与SGC-7901／5-FU中p53、Fas／FasL基因的表达情况。结果：DDP与5-FU均有抑制肿瘤细胞增殖作用,且有浓度相关性;尤以DDP联合5-FU后对细胞存活率的影响明显高于两种药物的单独使用（P〈0．01）,小剂量DDP联合应用5-FU时效果最明显,但对SGC-7901／5-FU细胞增殖抑制作用明显小于SHC-7901;小剂量联合DDP＋5-FU,p53、FasL基因表达的阳性率显著高于单纯的5-FU组或DDP组（P〈0．01）,而Fas基因表达则相反。结论：小剂量DDP联合5-FU对胃癌细胞具有明显抑制作用,对耐药株也有-定抑制作用,但效果弱于非耐药株。p53、Fas／FasL基因对胃癌细胞的增殖活性有重要作用,在小剂量DDP联合5-FU比各单药应用组基因的改变更明显（P〈0．01）。     

单抗和超抗原的融合蛋白与5-氟尿嘧啶对人大肠癌细胞的协同抑制作用

机体存在着能识别肿瘤抗原的特异性T细胞,但由于种种因素使得抗肿瘤T细胞的质和量均不足放不能引起有效的免疫应答来抑制肿瘤生长.T细胞在肿瘤局部大量激活,可激发强烈的抗肿瘤免疫应答,这有可能成为恶性肿瘤免疫治疗的有效手段.在寻找这样有效的T细胞激活剂中,超抗原开始倍受人们关注.超抗原主要为一些细菌的毒素(如SEA、SEB),是目前已知最强的淋巴细胞激活剂之一,可通过MHCⅡ类分子的辅助,激活所有携带待殊TCR Vβ片段的T细胞,对表达MHCⅡ类的靶细胞产生细胞毒作用.为使超抗原能在肿瘤细胞靶向定位,并避免杀伤表达MHCⅡ类的抗原递呈细胞,近年来Kalland等用基因工程的方法构建了抗人大肠癌的单克隆抗体C215和C242的Fab段与SEA的融合蛋白,以增强超抗原对肿瘤细胞的靶向性.这种融合蛋白对MHCⅡ类分子的结合力大大减低而对肿瘤细胞的亲和力明显增强,使超抗原能在肿瘤局部激活T细胞,释放大量细胞因子,引起一系列抗肿瘤免疫反应,有望成为新的肿瘤生物治疗剂.本文目的在于观察融合蛋白C215 Fab-SEA和     

转染双耐药基因小鼠骨髓细胞对放化疗的作用

[目的]探讨人突变的胸腺嘧啶合成酶(mTS)及双突变的二氢叶酸还原酶（dmDHFR)基因转染给正常小鼠骨髓细胞后，体内和体外是否对小鼠骨髓细胞具有耐受大剂量放疗与化疗的作用。[方法]将mTS及dmDHFR基因通过反转录病毒转染给小鼠骨髓细胞。再将转染后的骨髓细胞输给经致死剂量照射(9Gy)的小鼠，4周后给小鼠大剂量腹腔注射5-氟尿嘧啶(5—Fu，50mg/kg.d，共5天)和氨甲喋呤(MTX)，观察小鼠骨髓造血集落CFU—S、白细胞、血小板和存活率。[结果]在骨髓移植后第5周，对照组7只小鼠全部死亡，含单药耐药基因TS组有5只存活，含双耐药基因组6只存活。骨髓移植后第8周，再给小鼠腹腔注射大剂量5—Fu(75mg/kg.d，共3天)和MTX(单次300mg/kg)，结果单耐药基因组动物全部死亡，双耐药基因组6只动物全部存活，随着时间推移，存活动物的骨髓功能逐渐恢复，白细胞、血小板逐渐升高。骨髓细胞中有耐药克隆(CFU—GM)形成，骨髓细胞和CFU—S中有相应耐药基因表达。[结论]含有双耐药基因的骨髓细胞对致死剂量照射加5—Fu和MTX处理的小鼠有明显的保护作用。     

胰岛素对化疗药物5-氟尿嘧啶的增效作用及其机制

目的建立裸鼠人食管癌模型,观察胰岛素是否增强5-氟尿嘧啶(5-Fu)对裸鼠的化疗疗效并探讨其机制。方法免疫组织化学方法检测肿瘤组织中CyclinD1的表达。ELISA方法检测裸鼠血清中胰岛素样生长因子(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋3(IGFBP-3)含量变化。结果大中小剂量胰岛素(0.09、0.06、0.03u/20g)均可明显增强5-Fu的抑瘤作用(P<0.05),但并不增加5-Fu的毒副反应。胰岛素组与对照组相比,CyclinD1表达水平明显增多(P<0.05)。5-Fu组和联合用药组之间IGF-I和IGFBP-3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在裸鼠人食管癌模型中,胰岛素能增强5-Fu对裸鼠人食管癌移植瘤的化疗疗效,CyclinD1表达水平增多在胰岛素增效机制中发挥着重要作用。而血清中IGF-I和IGFBP-3含量变化尚不能解释其增效机制。     

低剂量5-氟尿嘧啶持续静注联合顺铂、周剂量多西紫杉醇治疗晚期胃癌

目的：观察低剂量5-氟尿嘧啶（5-Fu）持续静注联合顺铂（DDP）,周剂量多西紫杉醇（DOC）即FPD方案治疗晚期胃癌的疗效和毒性。方法：60例晚期胃癌患者随机分成两组,A组30例用FPD方案：5-Fu 200mg.m^-2.d^-1,经静脉微量泵持续24h注射,DDP 6mg.m^-2.d^-1,静滴1h,每周5d,DOC 25 mg.m^-2.w^-1静滴,均连用3周。B组30例应用低剂量5-Fu持续静注联合DDP（FP）方案,具体用法同A组。两组均以21d为1个疗程,间隔1周重复,2个周期后评定疗效。结果：A、B两组近期有效率分别为73.3%（22/30）及63.3%（19/30）;中位无进展时间分别为4.8个月及2.6个月;中位生存期分别为9个月及5个月。两组无与化疗药物毒性有关死亡,毒副作用较轻。A组主要剂量限制性不良反应为骨髓抑制,Ⅲ/Ⅳ度白细胞减少占13.3%（4/30）,无Ⅲ/IV度血小板及血红蛋白下降。非血液毒性主要是消化道反应和脱发。而对照组B组有轻度骨髓抑制及消化道副反应,无Ⅲ/IV度血液毒性及其他严重副反应。结论：FPD方案治疗晚期胃癌近期疗效较好,毒副反应较小,是较为理想的方案。     

泰素帝联合顺铂、5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌临床观察

目的:观察泰素帝联合顺铂、5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌疗效及毒副作用.方法:35例晚期胃癌采用多西他赛联合顺铂、5-氟尿嘧啶方案治疗2-4周期.按照WHO标准进行评价.结果:35例中CR 1例,PR 16例,NC 10例,PD 8例,总有效率(RR)为48.6%(17/35);初治组RR为63.64%(7/11);复治组RR为41.67%(10/24).两组RR比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:泰素帝联合顺铂、5-氟尿嘧啶治疗进展期胃癌疗效确切,毒副作用可以耐受,可广泛应用.     

miR-7调控结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的机制研究

目的 研究microRNA-7(miR-7)和5氟尿嘧啶(5-FU)联合对5-FU耐药结直肠癌(SW620/5-FU)细胞增殖、凋亡的影响,探讨miR-7表达对结直肠癌细胞5-FU敏感性的调控机制。方法 收集2019年5月—2021年7月手术切除的结直肠癌组织和癌旁组织;培养结直肠癌细胞系(HCT116、SW1116、DLD1、SW620)和正常结肠上皮细胞(NCM460),培养SW620细胞并构建5-FU耐药结直肠癌细胞(SW620/5-FU)。用RT-qPCR检测细胞和组织中miR-7的表达量。对SW620细胞和SW620/5-FU细胞均瞬时转染miR-7 mimic、miR-7 inhibitor和vector,分为miR-7 vector组(空载体组)、miR-7 mimic组(过表达组)和miR-7 inhibitor组(抑制组),以及与5-FU联合处理的miR-7 mimic+5-FU组和control组(空细胞组)。采用CCK-8法检测细胞增殖和5-FU半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组的cle...     

5-氟尿嘧啶耐药机制及其治疗

5-氟尿嘧啶（5-Fu）作为结直肠癌的一线化疗药物,具有较低但持续的抗肿瘤活性;与亚叶酸（LV）联合应用后,其效应从10％-20％增长为20％-30％,5-FU也是头颈部肿瘤、乳腺癌等实体瘤的常用化疗药物,但有时因耐药性产生最终导致化疗失败,因此探明5-FU耐药机制,并提出合理对策,将提高其疗效。