尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其意义

目的：探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖影响的机制及意义。方法：体外高糖培养大鼠肾MC，分为5组：对照组及不同浓度UⅡ（10^-7、10^-8、10^-9和10^-10 mol•L^-1）组，37℃孵育24 h，用流式细胞术分析处于细胞周期中S期的MC比例，MTT比色法检测细胞增殖率，BrdU-ELISA法测定细胞培养上清中BrdU含量。结果：MTT实验，UⅡ10^-9及10^-8 mol•L^-1组细胞增殖率明显高于对照组（P<0.05），UⅡ10^-10及10^-7 mol•L^-1组细胞增殖率与对照组比较差异无显著性（P>0.05）；流式细胞术实验，UⅡ10^-9及10^-8 mol•L^-1组MC细胞周期中S期比例较对照组明显增加（P<0.05），UⅡ10^-10及10^-7 mol•L^-1组MC细胞周期中S期的比例与对照组比较差异无显著性（P>0.05）；BrdU-ELISA实验，UⅡ10^-9及10^-8 mol•L^-1组MC培养上清中BrdU含量明显低于对照组（P<0.05），UⅡ10^-10及10^-7 mol•L^-1组MC培养上清中BrdU含量与对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：10^-9及10^-8 mol•L^-1浓度的UⅡ对体外高糖培养的大鼠肾小球MC具有明显促增殖作用。     

尾加压素Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用

目的：研究尾加压素Ⅱ（UⅡ）对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用。方法：采用机械分离和酶消化法获取肾小管上皮细胞进行培养、鉴定;用免疫细胞化学法定位溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入到肾小管上皮细胞DNA内;用MTT和BrdU掺入法观察不同浓度UⅡ（0、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7和10^-6mol•L^-1）对肾小管上皮细胞增殖和DNA合成的影响,以确定其促丝裂作用。结果：培养的细胞经Cytokeratin-18免疫细胞化学染色后,强度不一和不均匀分布的棕黄色颗粒定位于大部分细胞的胞核周围和胞浆内。培养的肾小管上皮细胞经BrdU掺入和免疫细胞化学显色后,细胞核内有棕黄色颗粒沉着。10^-10 mol •L^-1 UⅡ组的MTT值、 BrdU掺入量与对照组（0 mol•L^-1 UⅡ）比较差异无显著性（P>0.05）;10^-9和10^-8mol•L^-1 UⅡ组的MTT值、BrdU掺入量高于对照组（P<0.01或P<0.05）;与对照组比较,10^-7和10^-6 mol•L^-1 UⅡ组的MTT值明显增加（P<0.05）,但增加的幅度较10^-9 和10^-8mol•L^-1 UⅡ组低,而BrdU掺入量无明显改变。结论：UⅡ对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞具有促丝裂作用。     

阿司匹林和塞来昔布对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：观察阿司匹林和塞来昔布及二者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用。方法：MTT法检测不同浓度的阿司匹林（2.5 、5.0和10.0 mmol•L^-1）和塞来昔布（30、60和120 μmol•L^-1）分别作用人乳腺癌细胞株MCF-7不同时间（24、48和72 h）的细胞增殖抑制率,以不含药物的培养液作为阴性对照组,以阿霉素作为阳性对照组。MTT法检测不同浓度阿那曲唑（0.5和1.0 mmol•L^-1及其分别联合不同浓度阿司匹林（2.5、5.0和10.0 mmol•L^-1）和塞来昔布（30、60和120 μmol•L^-1）作用于MCF-7细胞48 h的细胞增殖抑制率,以不含药物组为阴性对照组。结果：①阿司匹林各剂量组细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而提高(P<0.01)。②塞来昔布各剂量组的细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而升高(P<0.01)。③10 mmol•L^-1阿司匹林和120 μmol•L^-1塞来昔布单独作用72 h抑制率分别达68.88%和87.00％;阳性对照组阿霉素2.0 μmol•L^-1作用72h抑制率达86.30％。④0.5 μmol•L^-1阿那曲唑与阿司匹林联合各剂量组的抑制率均明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑单药组(P<0.05),0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合10.0 mmol•L^-1阿司匹林对MCF-7的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合2.5、5.0 mmol•L^-1阿司匹林(P<0.05)。0.5 μ mol•L^-1阿那曲唑分别与60、120 μmol•L^-1塞来昔布联合组的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑单药组及0.5 μmol•L^-1阿那曲唑与30 μmol•L^-1塞来昔布联合组的抑制率(P<0.05),0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合120 μmol•L^-1塞来昔布对MCF-7的抑制率明显高于0.5 μmol•L^-1阿那曲唑联合60 μmol•L^-1塞来昔布(P<0.05)。1.0 μmol•L^-1阿那曲唑分别联合10.0mol•L^-1阿司匹林、60和120 μmol•L^-1塞来昔布各组的抑制率明显高于1.0 μmol•L^-1阿那曲唑单药组(P<0.05),1.0 μmol•L^-1阿那曲     

胞二磷胆碱对1-甲基-4-苯基吡啶诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的：探讨胞二磷胆碱对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP⁺)诱导的多巴胺能神经元数量减少及形态学改变的影响。方法：体外原代培养怀孕第14 天小鼠胚胎中脑神经元，采用MPP⁺（10 μmol•L^-1）在体外建立多巴胺能神经元损伤细胞模型。实验分为对照组、单纯MPP⁺药物组及5个不同浓度胞二磷胆碱（0.01、0.101.00、10.00和100.00 μmol•L^-1）与MPP⁺共同给药组。应用酪氨酸脱氢酶免疫化学染色方法观察不同浓度胞二磷胆碱对MPP⁺诱导多巴胺能神经元损伤的形态及数量的变化。结果：体外培养第12天，单纯MPP⁺药物组中多巴胺能神经元的数量明显少于对照组（P<0.05）；0.10μmol•L^-1和100.00μmol•L^-1 胞二磷胆碱治疗组，多巴胺能神经元的数量分别高于单纯MPP⁺药物组(11.83%和21.26%)（P<0.05）。0.10和100.00 μmol•L^-1胞二磷胆碱加MPP⁺药物组中多巴胺能神经元的突起长度明显高于单纯MPP⁺药物组（P<0.05）。结论：胞二磷胆碱可有效地防止MPP⁺的多巴胺能神经元的损伤和死亡，可能为帕金森氏病的防治提供一个新途径。     

吲哚美辛对喉癌Hep-2细胞增殖与iNOS活性的影响

目的：探讨吲哚美辛对喉癌细胞增殖与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性的影响,为喉癌的预防和治疗提供理论依据。方法： Hep-2细胞培养于含吲哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）的培养基中,分别培养24 h和48 h;用MTT方法检测吲哚美辛组细胞增殖的抑制率,用台盼蓝染色法检测吲哚美辛组细胞活力的抑制作用,并与溶剂对照组进行比较;吲哚美辛（125、250和500 μmol•L^-1）与脂多糖（LPS,10 μmol•L^-1）同时处理细胞16　h,同时设只加LPS对照组,采用酶法和分光光度法检测细胞培养上清液中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活性。结果：与对照组比较,不同浓度的吲哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）组Hep-2细胞增殖的抑制率均显著增加（P<0.05）。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞增殖的抑制率显著降低（P<0.05）;与对照组比较,不同浓度的吲 哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）随剂量增加,Hep-2细胞活力的抑制程度均显著增加（P<0.05）。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞活力的抑制程度显著降低（P<0.05）;与LPS对照组比较,吲哚美辛在125、250及500 μmol•L^-1浓度时, LPS诱导的细胞培养上清液中iNOS的活性显著降低（P<0.05）。结论：吲哚美辛在30～250 μmol•L^-1浓度范围内显著抑制Hep-2细胞的细胞增殖与细胞活力,明显降低LPS诱导的细胞 iNOS的活性升高。     

银杏叶提取物对破骨细胞分化和骨吸收的作用及其机制

目的：探讨不同浓度银杏叶提取物（GBE）对破骨胞分化和骨吸收的作用,并阐明其作用机制。方法：体外培养RAW264.7细胞,采用核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和不同浓度GBE处理细胞,分为空白对照组（0μg·L^-1 RANKL）、RANKL组（100 μg·L^-1RANKL）和RANKL+75mg·L^-1 GBE和RANKL+150 mg·L^-1 GBE组。抗酒石酸酸性染色（TRAP）法观察各组破骨细胞的形态及数量,骨吸收陷窝面积评估GBE对破骨细胞骨吸收能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法检测RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因活化T细胞核因子c1（NFATc1）、树突状细胞特异性跨膜蛋白（DC-STAMP）、组织蛋白酶K （Cathepsin K）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、P27和细胞周期蛋白D1（Cyclin-D1）的表达水平。结果：与空白对照组比较,RANKL组破骨细胞的数量明显增加（P < 0.05）;与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L^-1 GBE和RANKL+150 mg·L^-1 GBE组破骨细胞数量明显降低（P < 0.05）。与空白对照组比较,RANKL组骨片中骨吸收陷窝面积明显升高（P < 0.05）;与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L^-1 GBE和RANKL+150 mg·L^-1 GBE组骨片中骨吸收陷窝面积明显降低（P < 0.05）。与空白对照组比较,75和150 mg·L^-1 GBE组RAW264.7细胞凋亡率升高（P < 0.05）,RAW264.7细胞中Bcl-2基因表达水平明显降低（P < 0.05）,Bax基因表达水平明显升高（P < 0.05）。与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L^-1 GBE和RANKL+150 mg·L^-1 GBE组RAW264.7细胞G₀-G₁期阻滞明显缩短（P < 0.05）;RAW264.7细胞中P27基因表达水平明显降低（P < 0.05）,Cyclin-D1基因表达水平明显升高（P < 0.05）。与空白对照组比较,RANKL组RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表达水平明显升高（P < 0.05）;与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L^-1 GBE和RANKL+150 mg·L^-1 GBE组RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：GBE可抑制破骨细胞分化和骨吸收能力,其机制可能与促进RAW264.7细胞凋亡、缩短RANKL诱导的RAW264.7细胞的G₀-G₁期有关。     

PDGF抗体对体外培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：探讨血小板源性生长因子（PDGF）抗体对体外培养人视网膜色素上皮细胞（hRPE）增生的影响。方法：体外培养hRPE分为对照组和实验组，对照组未加入抗体，实验组分别加入1×10^-6、5×10^-6、1×10^-5、5×10^-5和1×10^-4mg•L^-1PDGF抗体。采用生长曲线法及MTT比色法检测 PDGF抗体对hRPE细胞增殖的影响，并用流式细胞术检测细胞周期的变化，透射电镜观察抗体作用后细胞超微结构的变化。结果： 1×10^-6mg•L^-1PDGF抗体对hRPE细胞有轻度促增生作用，MTT结果显示其抑制率为－11.74%。5×10^-6、1×10^-5、5×10^-5和1×10^-4mg•L^-1PDGF抗体对细胞有抑制作用，作用72 h抑制率分别为12.55%、43.72%、55.10%和55.10%。台盼蓝染色检测细胞存活率，各组细胞活力均大于80%。流式细胞仪检测结果显示，5×10^-5mg•L^-1 PDGF抗体作用72 h，细胞明显阻滞于G₂/M期，可见凋亡指数明显增加。透射电镜结果显示，5×10^-5mg•L^-1 PDGF抗体作用72 h电镜下可见胞质空化，核染色质轻度趋边凝聚，有早期凋亡的改变。结论：PDGF抗体对hRPE细胞的增生有明显的抑制作用，在一定范围内随着抗体浓度的增大对hRPE细胞增生的抑制作用逐渐加强。PDGF抗体对hRPE细胞增生的抑制作用主要是依赖于诱导细胞的凋亡，而不是促使细胞变性坏死，作用性质比较温和。     

taurolidine对小鼠黑色素瘤细胞辐射敏感性的作用及机制

目的：研究taurolidine通过增强Bax和Bad蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，提高小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的辐射敏感性的作用及机制。方法：流式细胞仪检测0、10、25、50、100和150 μmol•L^-1 taurolidine诱导B16-F10细胞凋亡的百分比；细胞 克隆实验检测放射增敏性；Western blotting分析检测蛋白的表达。结果：50 μmol•L^-1 taurolidine作用于B16-F10细胞48 h，可诱导5%的细胞凋亡,随作用时间的延长及taurolidine浓度的增加，细胞凋亡的百分率增加（P<0.05）,呈显著的时效和量效关系；细胞克隆存活实验显示,当25 μmol•L^-1 taurolidine与2 Gy X射线照射联合作用B16-F10细胞时，与单纯给药组和单纯照射组比较，给药联合放疗组的细胞存活率显著降低（P<0.05），并随着药物浓度及照射剂量的增加细胞存活率进一步下降。随着taurolidine的浓度逐渐提高，小鼠黑色素瘤细胞放射增敏比（SER D₀和SER D_q）增高,50 μmol•L^-1 taurolidine组与10 μmol•L^-1组比较差异有显著性(P<0.05)；同时促凋亡蛋白Bax和Bad的表达增强，抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下降。结论：taurolidine联合X射线照射通过调节Bcl-2家族蛋白协同诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡，从而提高了放射敏感性。     

溶血磷脂酸对豚鼠心室乳头肌动作电位及收缩力的影响

目的：观察溶血磷脂酸（LPA）对离体豚鼠心室乳头肌动作电位及收缩力的影响。方法：健康成年豚鼠18只，随机分LPA 0.1、1.0、10.0 μmol•L^-1组，每组6只，采用给药前后自身对照的方法观察LPA对豚鼠乳头肌的作用。对10.0 μmol•L^-1组，灌流洗脱后，加入四乙基铵(TEA)20 mmol•L^-1+ LPA 10 .0 μmol•L^-1，观察TEA对LPA作用的影响。结果：LPA1.0和10.0 μmol•L^-1组乳头肌收缩幅度由给药前的100%增加到(122.6±7.9)% 和(139.48±8.2)%（P<0.05或P<0.01）。LPA 0.1 、1.0和10.0 μmol•L^-1组心室肌动作电位的幅度（APA）由给药前的（106.79±11.80 ）、（96.86±9.81）和（100.22±7.55）mV升高到（113.49±12.66）、（112.54±10.07）和（118.91±10.62）mV（P<0.05或P<0.01）；动作电位50%时程（APD₅₀）和动作电位90%时程(APD₉₀)均较给药前延长（ P<0.05）。20 mmol•L^-1的TEA 可使LPA 10.0 μmol•L^-1对APD₅₀的作用降低（P<0.05）。结论：LPA可增加豚鼠心脏乳头肌动作电位幅值，延长动作电位时程，增加心室肌收缩力。     

脱乙酰壳聚糖对大鼠胃溃疡的抑制和修复作用

目的：采用胃溃疡动物模型探讨脱乙酰壳聚糖对胃溃疡的抑制及修复作用。 方法：Wistar大鼠分别建立束水应激型（40只）、乙酸烧伤型（32只）和胃黏膜损伤型（32只）胃溃疡模型,胃溃疡模型动物随机分为对照组（0.5% CMC 10 mL^-1•kg^-1）与实验组（脱乙酰壳聚糖Ⅰ组：100 g•L^-1•kg^-1;脱乙酰壳聚糖Ⅱ组：50 g•L^-1•kg^-1;雷尼替丁组：3 g•L^-1•kg^-1）,按上述药物剂量灌胃给药,观察溃疡指数和溃疡面积。 结果：束水应激型溃疡大鼠溃疡指数脱乙酰壳聚糖Ⅰ组、Ⅱ组和雷尼替丁组低于对照组（P<0.01）,各实验组间差异无显著性; 乙酸所致烧灼型胃溃疡和胃黏膜损伤型溃疡大鼠溃疡面积脱乙酰壳聚糖Ⅰ组、Ⅱ组和雷尼替丁组小于对照组（P<0.01）, 各实验组间差异无显著性。结论：脱乙酰壳聚糖对束水应激型溃疡和乙酸烧伤型溃疡有抑制作用,对黏膜损伤型溃疡有修复作用。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠C6胶质瘤细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：分别以不同浓度（10、20和50 μmol•L^-1）的MG-132培养C6胶质瘤细胞,通过MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,HE染色、AO/EB染色以及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：MTT法检测显示10 μmol•L^-1MG-132作用于C6胶质瘤细胞24、48和72 h后,细胞增殖A值(0.46±0.03、0.48±0.03和0.45±0.02)均显著低于正常对照组（P<0.01）,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强;10μmol•L^-1 MG-132作用C6胶质瘤细胞12 h后即可经流式细胞仪检测到明显的凋亡亚二倍体峰,以不同药物浓度（10、20和50 μmol•L^-1）处理C6胶质瘤细胞12 、24 和48 h后其细胞凋亡率均显著高于正常对照组（P<0.01）;形态学检查呈现凋亡细胞的特征。结论：蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

吡柔比星对大鼠心肌细胞的损伤作用及其模型建立

目的：探讨吡柔比星（THP）对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法：常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度（1×10^-6 mol·L^-1、1×10^-5 mol·L^-1、1×10^-4 mol·L^-1、1×10^-3 mol·L^-1和1 μmol·L^-1、3 μmol·L^-1、5 μmol·L^-1、7 μmol·L^-1、9 μmol·L^-1和10 μmol·L^-1 THP组,采用不同浓度THP处理细胞,并在6、12、24、36和48 h时间点采用CCK-8法检测各组细胞存活率,DCFH-DA活性氧（ROS）探针法检测细胞中ROS水平,硫代巴比妥酸比色法检测各组细胞中丙二醛（MDA）水平,黄嘌呤氧化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性,二硝基苯肼显色法检测各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）活性,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）和活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,1、5和9μmol·L^-1 THP组H9C2细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,细胞中ROS和MDA水平及LDH活性升高（P<0.05或P<0.01）,SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平降低（P<0.05）,Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论：THP对大鼠心肌细胞具有损伤作用,其中5 μmol·L^-1是THP诱导H9C2细胞损伤模型的最佳造模浓度。     

氯胺酮对大鼠海马脑片突触长时程增强效应的影响

目的：观察氯胺酮对大鼠海马脑片突触长时程增强(LTP)效应的影响,并探讨其影响记忆的机制。方法：98只雄性SD大鼠,断头后取出海马组织,制备厚400 μm的海马脑片。取49张脑片,随机分为7组：对照组、氯胺酮1、5、10、30、50和100 μmol•L^-1组。各组脑片分别灌流人工脑脊液(ACSF)、氯胺酮1、5、10、30、50和100 μmol•L^-1。采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外群体峰电位(PS)的变化。另取49张脑片,随机分为7组：LTP组、氯胺酮LTP 1、5、10、30、50和100 μmol•L^-1组。各组脑片分别灌流ACSF、氯胺酮1、5、10、30、50和100　μmol•L^-1。海马脑片记录PS 30 min后,施以100 Hz的高频强直刺激(HFS),诱发LTP,观察各组脑片HFS后PS幅值的变化。结果：与对照组比较,氯胺酮1、5和10 μmol•L^-1组给药后PS幅值无明显改变(P>0.05),氯胺酮30、50和100 μmol•L^-1组给药后PS幅值明显降低(P<0.01)。LTP组HFS后PS幅值增高,较刺激前增加了(52±12)% (P<0.01)。与LTP组比较,氯胺酮LTP 1和5 μmol•L^-1组HFS后其PS幅值无明显改变(P>0.05),氯胺酮LTP 10、30、50和100 μmol•L^-1组HFS后其PS幅值均明显降低(P<0.01)。结论：氯胺酮能够抑制海马LTP的形成而影响记忆功能,其机制与抑制海马N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体有关。     

CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂他罗利姆（FK506）对细胞的保护作用,为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据。方法：将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验,实验分为正常对照组（n=6）和H₂O₂各处理组（n=6）。正常对照组采用生理盐水,实验各组分别用50、100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理1、 6和24 h后,用罗丹明（Rhodamme-123）荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψmt)变化,用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;并采用100 μmol•L^-1 H₂O₂处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型,给予高、低剂量FK506（0.60和0.15 μmol•L^-1）干预,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果：①100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1 h 时线粒体膜电位均较对照组显著升高（P<0.01）, 6和24 h时,200和400 μmol•L^-1组Δψmt值均低于100 μmol•L^-1 组（P<0.05）,且400 μmol•L^-1组低于200 μmol•L^-1组（P<0.05）;②200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1　h 时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加（P<0.05）,24　h达高峰。③ 高、低剂量FK506干预组与单纯100 μmol•L^-1H₂O₂处理组比较,心肌细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,高、低剂量组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：H₂O₂可损伤心肌细胞线粒体,引起线粒体膜电位下降,导致细胞凋亡。CaN抑制剂对H₂O₂诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用。     

三氧化二砷对人大肠癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人大肠癌细胞株 CCL-187 端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：CCL-187 细胞分为对照组、1.0 μmol•L^-1As₂O₃ 组和 2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组，共同孵育1～6 d。MTT 法计算细胞生长抑制率，电镜下观察细胞形态学变化，RT-PCR 法检测细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达，TRAP-PCR-ELISA 法检测细胞端粒酶活性。结果：1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组细胞分化明显，2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组出现细胞凋亡。同时2组端粒酶 hTERT-mRNA 的表达均下调，端粒酶活性降低，且具有时间依赖性，与对照组比较差异有显著性（P<0.01 或 P<0.05）；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组与 1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组比较差异也有显著性（P<0.01）。细胞生长抑制率与细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.803，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.697，P<0.01），与端粒酶活性的下调呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.836，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.792，P<0.01）；细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达与细胞端粒酶活性呈正相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.956，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.988，P<0.01）。结论：As₂O₃ 对 CCL-187 细胞有促进分化及诱导凋亡的作用，其机制可能是下调细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的基因表达，从而抑制端粒酶的活性。     

兔骨髓间充质干细胞体外诱导软骨形成

目的：体外分离培养兔骨髓间充质干细胞(MSCs),在诱导刺激物作用下,使其分化为软骨细胞。方法：在骨髓MSCs培养液内加入地塞米松10_-7 mol•L^-1,维生素C 50 mg•L^-1, 基因工程牛酸性成纤维细胞生长因子(bFGF)10 μg•L^-1,培养1周后将bFGF换为基因工程人转化生长因子-β₁(TGF-β₁)10 μg•L^-1,继续培养3周。 结果：细胞形态由纺锤形变为圆形或椭圆形,细胞分泌了大量的甲苯胺蓝异染的基质,形成了类软骨陷窝。碱性磷酸酶(ALP)的活性增高了近20倍。逆转录PCR证实转化前的细胞主要表达Ⅰ型胶原mRNA。转化后的细胞主要表达Ⅱ型胶原mRNA。 结论：在该种诱导环境下,部分骨髓MSCs可以转化为软骨细胞。     

锌离子对牙各矿化成份破骨细胞性吸收的体外调控

目的:研究锌离子对破骨细胞体外吸收牙片功能的影响.方法:体外分离、培养新生乳兔破骨细胞,与玻片和灭活牙片共同培养,加入不同浓度锌离子.抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定玻片上的破骨细胞,显微摄影分析破骨细胞吸收造成的牙片上的吸收陷窝,原子吸收分光光度法测定溶出的钙,并将实验组与对照组上清液钙离子浓度的比值定义为骨吸收指数,以评价破骨细胞的功能.结果:体外成功分离培养出多核的、TRAP(+)的破骨细胞.破骨细胞吸收牙片时,首先在接近牙根牙骨质或牙本质部位开始形成吸收陷窝,这与这些部位的矿化程度相对较低有关;破骨细胞在牙片上形成的吸收陷窝与骨片相比,吸收陷窝数量较少,体积较小,多为正圆形;吸收深度较浅,常为大面积的浅吸收.用原子吸收分光光度法测定不同浓度的锌离子对溶出的钙和骨吸收指数的影响,初步结果表明,培养第3天,1×10^-4～1×10^-14 mol/L锌离子刺激破骨细胞吸收牙片,其中1×10^-8 mol/L,1×10^-10 mol/L和1×10^-14 mol/L锌离子能够显著刺激吸收(P＜0.05);但是到了培养第7天,各浓度组除了对照组和1×10-14 mol/L锌离子还进一步有吸收外,其余浓度锌离子组的上清液钙离子浓度与自身第3天相比都有降低,但与同时期的对照组相比差异无统计学意义.在培养末期(第7天)1×10^-4～1×10^-7 mol/L,1×10^-9 mol/L,1×10^-12 mol/L和1×10^-13 mol/L浓度组的骨吸收指数小于1,而1×10^-8 mol/L,1×10^-10 mol/L,1×10^-11 mol/L和1×10^-14 mol/L浓度组骨吸收指数都大于1.结论:锌离子对破骨细胞吸收功能的作用与浓度和时程有关.     

一种新型MCC-478衍生物抗乙型肝炎病毒活性及体外毒性实验

目的：研究一种具有新结构类型的MCC-478衍生物030705的抗乙肝病毒活性和体外毒性。方法：实验组以不同浓度受试化合物030705（0.01、0.03、0.10、0.30和1.0 μmol•L^-1）、对照组以不同浓度阿德福韦酯（0.10、0.30、1.0、3.0和10.0 μ mol•L^-1），分别作用于HepG2.2.15细胞，采用Southern blotting杂交法测定其对HBV DNA的抑制率，计算其50%抑制浓度（IC₅₀ ）和90%抑制浓（IC₉₀）值，采用ELISA法测定不同药物浓度受试化合物030705对HBeAg分泌的抑制率。采用MTT法测定不同浓度受试化合物030705（10、30、100、300和1 000　μmol•L^-1）对HepG2细胞毒性，计算其50%致死浓度（CC₅₀）值。采用Dot blotting法分别测定不同浓度受试化合物030705（0.10、1.0和10.0　μmol•L^-1）对HepG2细胞线粒体含量的抑制率；同时设相应浓度双脱氧胞苷（ddC）阳性药物对照组和仅加入培养基的阴性对照组。结果：受试化合物030705抑制HepG2.2.15细胞HBV DNA作用与阿德福韦酯对照组比较差异无显著性（P>0.05），显示其具有与阿德福韦酯相近的抗乙肝病毒活性。不同浓度受试化合物030705（0.01、0.03、0.10、0.30和1.0 μmol•L^-1）对HBeAg分泌的抑制率分别为5.94%、6.08%、6.32%、10.31%和12.49%，与阴性对照组比较差异均无显著性（P>0.05）。受试化合物030705对HepG2细胞毒性的CC₅₀值为2 014 μmol•L^-1(>1 000 μmol•L^-1)，属于低细胞毒性药物。阳性对照药物ddC在不同浓度下（0.10、1.0和10.0 μmol•L^-1），对HepG2细胞线粒体含量的抑制率分别为38.43%、46.51 %、56.51%，与阴性对照组比较差异均有显著性（P＜0.05）。相同浓度下受试化合物030705抑制率分别为7.00%、5.81%、5.78%，与阴性对照组比较差异均无显著性（P>0.05）。 结论：受试化合物030705对HepG2.2.15细胞HBV DNA的抑制作用与阿德福韦酯的作用相近，对HepG2细胞毒性的CC₅₀值2 014 μmol•L^-1，无明显线粒体毒性，是一种低毒、高效的新型核苷类抗乙肝病毒药物。     

帕金森病体外实验细胞模型的建立

目的： 探讨1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子（MPP⁺ ）对小鼠胚胎中脑原代培养多巴胺能神经元的毒性作用及其机制。在体外建立帕金森病（PD）实验研究的细胞模型。方法：采用小鼠胚胎（孕14 d）中脑进行原代细胞培养，实验分为对照组和不同浓度(0.1、１、10和15 μmol•L^-1)MPP⁺药物实验组，应用酪氨酸羟化酶（TH）免疫化学细胞染色方法 和Hoechst33342荧光染色对多巴胺能神经元的损伤及凋亡进行测定。结果：对照组中多巴胺能神经元的数量为(875±23)个/孔。在0.1、１、10和15 μmol•L^-1 MPP⁺实验组，多巴胺能神经元的数量分别为(612±25)、(586±32)、(459±16)和(435±19)个/孔，与对照组比较，MPP⁺实验组多巴胺能神经元数量均明显降低（P<0.05）,多巴胺能神经元突起的数目和长度明显减少。Hoechst33342 染色发现，对照组中凋亡细胞数占总细胞数的(5.45±0.29)%,10 μmol•L^-1 MPP⁺药物治疗组细胞凋亡率为(26.97±1.36)%，显著高于对照组水平（P<0.05）。结论：0.1、１、10 和15 μmol•L^-1 MPP⁺均引起多巴胺能神经元的数量显著减少，随着药物浓度的增加，多巴胺能神经元减少的程度越显著。MPP⁺引起的多巴胺能神经元的变性死亡可能通过凋亡途径所诱导。     

脑皮质星形细胞在1,25-(OH)2D3限定培养中表达NGF

目的：研究原代中枢神经胶质细胞在1,25-二羟维生素D₃［1,25-(OH)₂D₃］化学限定培养中神经生长因子（NGF）基因转录及表达。方法：用新生乳鼠脑皮质制备星形胶质细胞,采用浓度0、10_-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11及10^-12 mol•L^-1 1,25-(OH)₂D₃化学限定无血清培养液培养后,RT-PCR法检测NGF mRNA转录,双向夹心-ELISA检测NGF。 结果：1,25-(OH)₂D₃化学限定无血清原代培养的神经胶质细胞在1,25-(OH)₂D₃作用下可分泌NGF,实验中1,25-(OH)₂D₃有效浓度范围10^-11~10_-7mol•L^-1;1,25-(OH)₂D₃培养6 h后开始检测到mRNA的表达,12 h时表达最高,36 h后检测不到NGF mRNA的表达;而NGF蛋白的ELISA反应持续时间大于48 h。结论：星形神经胶质细胞的NGF基因可被甾体激素1,25-(OH)₂D₃激活并转录表达。