真空负压法在ER、PR免疫组化染色中的应用

免疫组化染色是一个较为复杂的过程 ,步骤繁多 ,染色时间较长。为此 ,我们采用真空负压法对ＥＲ、ＰＲ做免疫组化染色 ,并在一抗孵育及切片洗涤方法上加以改进 ,取得了良好效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1 1　材料　均来自本院手术切除的标本 ,10 %中性福尔马林固定 18～ 2 4ｈ ,石蜡包埋 ,4 μｍ切片贴在涂有多聚 Ｌ 赖氨酸的载玻片上 ,6 0℃温箱烤 3～ 5ｈ〔1〕。一抗ＥＲ、ＰＲ ,ＳＰ试剂盒 (ＤＫＴ 94 11) ,多聚 Ｌ 赖氨酸 ,抗原修复液为 10ｍｍｏｌ/ｄｌ(ｐＨ6 0 )的柠檬酸盐缓冲液 ,0 0 1ｍｏｌ/ｄｌ(ｐＨ 7 2 )的ＰＢＳ ,ＤＡ…     

1例Budd—Chiari综合征患者肿瘤标志物的变化

金黄色葡萄球菌ＤＮＡ多采用经典的溶菌酶、酚、氯仿提取法 ,但是获取的ＤＮＡ量较少。我们参照文献报道[1] 的方法加以改良 ,建立一种ＤＮＡ制备方法。介绍如下。1　材料和方法1 1　菌株来源　临床分离到的细菌 ,经形态学、生化反应鉴定为金黄色葡萄球菌。1 2　主要试剂　 2 0ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ 8 0缓冲液 ;溶菌酶、ＳＤＳ、蛋白酶Ｋ(均为Ｓｉｇｍａ公司生产 ) ;丙酮 ;ＴＥ缓冲液 :10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ(ｐＨ 7 4 ) ,1ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ(ｐＨ 8 0 ) ;裂解液 :含 10 0ｇ/ＬＳＤＳ的ＴＥ缓冲液。1 3　方法　自血平皿…     

介绍一种简便的RNA制备方法

异硫氰酸胍法是组织制备ＲＮＡ的经典方法 ,但操作繁琐 ,耗时费力。现介绍一种在ＭｉｎｈＤ .Ｔｏ方法基础上加以改进的更为简便的方法。1　材料与方法1 1　材料　取新鲜组织 (1ｃｍ× 1ｃｍ× 0 5ｃｍ)经液氮速冻处理后 ,保存于 - 70℃。提取ＲＮＡ前 ,将其制成厚度约为 2 0 μｍ的冷冻切片 2张。另需高速离心机及水浴恒温箱各 1台。试剂选用 0 15ｍｍｏｌ/ＬＮａＣｌ、10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ(ｐＨ8 0 )、0 2 5ｍｍｏｌ/ＬＤＴＴ(ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ)、5ＵＲｎａｓｅ抑制剂和ＤＥＰＴ Ｈ2 Ｏ配成 10 μｌ的冷冻液 ,8ｍｍｏｌ/…     

两种提取石蜡包埋组织DNA方法的比较

从石蜡包埋组织提取组织ＤＮＡ的质量是关系到ＰＣＲ是否成功的关键因素之一,我们对ＴｈｏｍａｉｓＳ等人提出的方法与传统酚氯仿抽提法从石蜡包埋组织提取组织ＤＮＡ进行了比较,并加以评价。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　23例石蜡包埋肺癌组织标本为我科存档1991～1996年间外科手术切除标本。1.1.2　引物　Ｋｒａｓ和ｐ16基因第2外显子引物均由赛百盛公司合成。1.2　方法1.2.1　酚氯仿抽提法　甲醛固定,常规石蜡包埋组织块,经对原片观察后,标出所需部位。用一次性紫外消毒刀片,10μｍ连续切片,割弃不需组织(主要为纤维结缔组织及坏死组织,…     

用于PCR扩增分析的DNA提取方法比较

从福尔马林固定和石蜡包埋组织中提取ＤＮＡ ,是ＰＣＲ扩增分析成功的重要一步。由于固定和组织处理对ＤＮＡ的化学修饰作用 ,使常规方法提取的核酸ＰＣＲ扩增效率低 ,且不稳定 ,在一定程度上制约了ＰＣＲ临床的应用。本研究对 6种ＤＮＡ提取方法进行比较 ,对所获得ＤＮＡ数量和质量、电泳、ＰＣＲ扩增及直接测序结果做综合评估。所用组织标本均经 1 0 %福尔马林溶液室温固定过夜 ,石蜡包埋。 6种提取方法的前 4种是采用以有机化学溶剂为基础的技术。首先利用二甲苯脱蜡 ,蛋白酶Ｋ消化 ,氯仿提纯和乙醇沉淀 ,主要靠温度的改变来获取高产量和…     

定量逆转录PCR测定健康人外周血细胞甲状腺球蛋白mRNA

新近研究发现定量逆转录ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)测定甲状腺球蛋白 (Ｔｇ)ｍＲＮＡ有助于监测转移性甲状腺癌患者的疗效。而此种ＲＴ ＰＣＲ通常需要繁琐的、高度敏感的抽提技术 ,作者介绍了一种从全血中提取ＲＮＡ的简化方法 ,并检测了ＴｇｍＲＮＡ采用标准ＥＤＴＡ采血管收集健康人全血 17份 ,用ＰＵＲＥ手工药盒提取ＲＮＡ ,15份用ＴＲＩＺＯＬＬＳ提取ＲＮＡ。以随机六聚引物将 1μｇＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ。反应条件如下 :1×ＴａｑＭａｎ缓冲液 ,5 5ｍｍｏｌ/ＬＭｇＣｌ2 ,5 0 0 μｍｏｌ/ＬｄＮＴＰ ,2 .5 μｍｏｌ/Ｌ引物 ,40 0ｋＵ/…     

限制性显示技术分离差异表达基因--Mac30

为了进一步从基因水平上阐明Ａｓ2 Ｏ3 治疗白血病的作用机制 ,以更好地预防和治疗白血病 ,我们应用限制性显示ＰＣＲ(ＲＤ ＰＣＲ)技术收集Ａｓ2 Ｏ3 处理前后Ｋ5 6 2细胞的ｃＤＮＡ片段 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,并进一步筛选、分析了细胞内基因表达的变化情况。材料和方法1　主要试剂　精制小牛血清和ＲＰＭＩ 16 4 0培养基购自Ｈｙ ｃｌｏｎｅ公司 ,Ａｓ2 Ｏ3 购自Ｓｉｇｍａ公司 ,用 12 0ｍｍｏｌ/Ｌ的ＮａＯＨ溶液配成 1ｍｍｏｌ/Ｌ的贮备液 ,4℃贮存。总ＲＮＡ提取试剂(ＴＲＩｚｏｌ)购自上海生工生物工程公司。ｍＲＮＡ纯化试剂…     

酸碱平衡失调及电解质紊乱

1　化验名称和参考值见表 1。表 1　化验名称和参考值化验名称英文缩写参考值法定单位新→旧系数旧制单位旧→新系数血清钾Ｋ 　　 3.5～ 5 .3ｍｍｏｌ/Ｌ 13.5～ 5 .3ｇ/Ｌ 1血清钠Ｎａ 　　 136～ 145ｍｍｏｌ/Ｌ 1136～ 145ｇ/Ｌ 1氯Ｃｌ　　 98～ 10 8ｍｍｏｌ/Ｌ 3.5 7 35 0～ 386ｍｇ/ｄｌ 0 .2 8镁Ｍｇ儿童 0 .6～ 0 .8ｍｍｏｌ/Ｌ 2 1.2～ 1.6ｇ/Ｌ 0 .5成人 0 .8～ 1.2ｍｍｏｌ/Ｌ 2 1.6～ 2 .4ｇ/Ｌ 0 .5钙Ｃａ　总钙Ｃａ儿童 2 .5～ 3.0ｍｍｏｌ/Ｌ 410～ 12ｍｇ/ｄｌ 0 .2 5成人 2 .3～ 2 .8ｍｍｏｌ/Ｌ 49.2～ 11.2ｍｇ/ｄｌ 0…     

尿常规检查

近年来很多医院使用各种尿液分析仪进行尿八项或十项检测 ,现介绍如下。1　化验名称和参考值 　见表 1。表 1　尿常规检查化验名称和参考值化验名称英文缩写参　　考　　值法定单位新→旧系数旧制单位旧→新系数酸碱度ｐＨ 5～ 7比重ｓｐｅｃｉｆｉｃｇｒａｖｉｔｙ ,ＳＧ 1.0 10～ 1.0 2 5最大范围 1.0 0 3～ 1.0 35蛋白ｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｐｒｏ定性 ( - )～ (± ) ( - )定量 2 0～ 80ｍｇ 2 4ｈ糖ｇｌｕｃｏｓｅ ,Ｇｌｕ定性 ( - )定量 0 .5 6～ 5 .0ｍｍｏｌ 2 4ｈ 180 10 0～ 90 0ｍｇ 2 4ｈ 0 .0 0 5 5 5儿童 <0 .2 8ｍｍｏｌ Ｌ 185ｍ…     

藻酸双酯钠引起肝功能损害2例

例 1,男性 ,49岁 ,系高血压病Ⅱ期入院 ,入院查血生化 :甘油三脂 6 .98ｍｍｏｌ/Ｌ(正常参考范围 0 .2 3～ 1.71ｍｍｏｌ/Ｌ) ,极低密度脂蛋白 1.40ｍｍｏｌ/Ｌ(正常参考范围 0 .10～ 0 .5 6ｍｍｏｌ/Ｌ) ,肝功能正常 ,为降血脂予藻酸双酯钠 0 .2 ｇ加入 5 %葡萄糖液 5 0 0ｍｌ中静滴。静滴 2 0天后复查血生化 :甘油三脂 2 .78ｍｍｏｌ/Ｌ ,极低密度脂蛋白 0 .5 6ｍｍｏｌ/Ｌ ,丙氨酸转氨酶 173Ｕ/Ｌ(正常参考范围 5～40Ｕ/Ｌ) ,门冬氨酸转氨酶 73Ｕ/Ｌ(正常参考范围 5～ 40Ｕ/Ｌ) ,谷氨酰转肽酶 36 9Ｕ/Ｌ(正常参考范围 0～ 5 0Ｕ/Ｌ)。例 …     

免疫组化、原位杂交及PCR法检测霍奇金淋巴瘤石蜡组织中EB病毒

霍奇金淋巴瘤 (ＨＬ)与ＥＢ病毒 (ＥＢＶ)密切相关[1 ,2 ] 。然而 ,不同作者所报道ＨＬ中ＥＢＶ的检出率为 2 0 %～ 95 %[1 ,2 ] 。为探讨造成差异的原因 ,我们选取广东地区 39例ＨＬ蜡块组织 ,采用 3种常用的ＥＢＶ测定方法———ＰＣＲ检测ＥＢＶ的ＤＮＡ、免疫组织化学检测ＥＢＶ潜伏膜蛋白 1(Ｌａｔｅｎｔｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＬＭＰ1)、原位杂交检测ＥＢＶ编码的ｍＲＮＡ (Ｅｐｓｔｅｉｎ ｓｔｅｉｎ ＢａｒｒＥｎｃｏｄｅｄＲＮＡｓ1,ＥＢＥＲ1) ,进行了比较研究。材料和方法1　标本来源及其临床资料　 39例ＨＬ石蜡包埋…     

石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应影响因素的研究

目的　探讨石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。方法　应用从石蜡包埋组织中提取的DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子 ,分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。结果　 10 .0 μm× 1组织切片组 ,PCR反应循环次数 4 0次组 ,PCR反应模板量 0 .0 5 μg组PCR反应取得高质量目的基因DNA。结论　减少提取组织用量有利于减少抑制PCR物质的量 ,有利于反应的成功 ;PCR反应循环次数一般应大于 4 0次 ;PCR反应时减少模板量有利于PCR反应成功。     

中药保留灌肠的改进及临床应用

1998年 1月至 2 0 0 1年 6月 ,我院中医科将传统中药保留灌肠改为肛门点滴用药 ,即将中药药汁自肛门滴入并保留在直肠或结肠内治疗尿毒症 2 1例和盆腔炎 2 5例 ,疗效良好 ,现报告如下。1　资料与方法1 1　临床资料　 1998年至 2 0 0 1年我院收住尿毒症 2 1例 ,盆腔炎 2 5例。尿毒症患者均表现为贫血貌 ,乏力 ,双肾叩击痛 ,双下肢凹陷性水肿 ,尿少或尿闭 ,尿常规检查示 :ＧＬＵ( )、ＰＲＤ( )、ＳＬＤ( ) ;血生化 6项 :Ｋ+ 5 3ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｎａ+ 138ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｃｌ-10 2ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｃａ+2 0ｍｍｏｌ/Ｌ ,ＣＯ2 -ＣＰ 19ｍｍｏｌ/Ｌ。…     

应用DNA探针杂交化学发光自显影检测结核分枝杆菌

本研究建立了一种无需聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增将一种新的裂解液与ＤＮＡ探针、化学发光自显影优化组合成一个整体 ,,具备高敏感度和高特异性的检测结核分枝杆菌的新方法。该法操作简便、经济 ,适用于常规检测。报告如下。一、材料和方法1 仪器 :ＴＧＬ 1 6Ｇ型台式离心机 ,ＡＧ960 0型ＰＣＲ仪和ＤＹＹ34型电泳仪。2 试剂 :裂解液 (0 1ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓＨＣｌ,0 0 1 %ＴｒｉｔｏｎＸ 1 0 0 ,0 0 5 %吐温 2 0和 1ｍｇ/ｍｌ蛋白酶Ｋ ,50ｍｍｏｌ/ＬＫＣｌ) ,Ｘ片为国产 ,硝酸纤维素膜为Ａｍｅｒｓｈｅｍ公司产品 ,链霉亲和素标记辣根…     

不同液体pH值、加药时间对胰岛素浓度的影响

静脉输注胰岛素是临床治疗糖尿病的常用方法。通过实验观察不同液体对胰岛素作用的影响以及液体加入药物后 ,ｐＨ值在 5 .0～ 8.0、室温为 10℃的环境下 ,放置时间与胰岛素浓度的关系 ,以指导临床医疗和护理工作。1　材料和方法1.1　材料　胰岛素 (ＲＩ) :诺和灵Ｒ (为基因重组人正规胰岛素 ) ,0 .9%氯化钠溶液 5 0 0ｍｌ和 5 %葡萄糖溶液 5 0 0ｍｌ ,聚苯乙烯管 ,胰岛素测定试剂盒 ,Ｈ -10 0尿液分析仪 (吉林迪瑞公司生产 )用以测定液体 ｐＨ值 ,5 %碳酸氢钠 ,维生素Ｃ。1.2　方法1.2 .1　实验分组　根据不同液体分为 0 .9%氯化钠和 5 %葡…     

50例糖耐量异常者胰岛功能的改变

为了解糖耐量异常时胰岛功能的改变 ,我们选择了 5 0例糖耐量异常 (包括糖耐量减低和糖尿病 2型 )者 ,对其糖耐量试验时胰岛功能的变化进行了研究。1　对象与方法1 1　对象　来源于我院门诊查体者 ,符合空腹血糖≥ 6 .1ｍｍｏｌ/Ｌ和 (或 )餐后 2小时血糖≥ 7.8ｍｍｏｌ/Ｌ者作为调查组 ,共 5 0例 ,其中男 30例 ,女 2 0例 ,平均年龄 (43.78± 8.86 )岁 ,体重指数 (ＢＭＩ) (2 5 .16± 2 .99)ｋｇ/ｍ2 ,腰臀围比 (0 .88± 0 .0 3) ,空腹血糖 (6 .5 6± 1.36 )ｍｍｏｌ/Ｌ ,餐后 2小时血糖 (8.6 2± 3.17)ｍｍｏｌ/Ｌ ;另选健康查体中空腹血糖…     

PCR反应体系中Mg2+浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响

目的　探讨PCR反应体系中Mg2 浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响。方法　从石蜡包埋组织中提取DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 13外显子 ,分析PCR反应体系中Mg2 浓度分别为1 5mmol L、2 0mmol L、2 5mmol L、3 0mmol L、4 0mmol L时PCR反应产物中目的基因含量及对PCR产物基因序列测定的影响。结果　 5种条件扩增的目的基因经纯化后DNA含量分别为 4 8ng μl(1 5mmol L)、2 6 6ng μl(2 0mmol L)、4 0 2ng μl(2 5mmol L)、38 5ng μl(3 0mmol L)、4 4 5ng μl(4 0mmol L) ;Mg2 浓度为 4 0mmol L时PCR产物电泳图见到多条非特异性条带 ;Mg2 浓度为 2 5mmol L时PCR产物直接测序反应曲线峰图背景噪音 (噪峰 )减小 ,信噪比 (信号 噪音 )增高。结论　从石蜡包埋组织中提取DNA行PCR反应 ,Mg2 浓度为 2 5mmol L时反应特异性强 ,PCR产物质量高。较高的Mg2 浓度可以增加PCR反应产量 ,但降低反应的特异性     

重症患者低磷血症致横纹肌溶解症分析

我院ＩＣＵ病房近 3ａ收治的重症病人中 ,8例确诊为严重低磷血症合并横纹肌溶解症 (ＲＭ) ,现进行回顾性分析。1　临床资料1 1　一般资料　 8例均为ＩＣＵ住院重症患者 ,男 5例 ,女 3例 ;年龄 19～ 6 8岁 ,平均 (38 4± 11 2 )岁。本组病人包括安眠药中毒 1例 ,酒精中毒 2例 ,ＣＯ中毒 1例 ,食道癌术后 1例 ,重症肺炎ＡＲＤＳ 1例 ,糖尿病酮症酸中毒 1例 ,肾综合征出血热伴ＡＲＦ 1例。1 2　诊断标准　低磷血症 :取清晨空腹静脉血 ,用酶法测定血磷 ,按血磷 <0 5ｍｍｏｌ/Ｌ、0 5～ 0 6ｍｍｏｌ/Ｌ、0 6～ 0 8ｍｍｏｌ/Ｌ ,分为重、中、…     

聚合酶链反应检出石蜡包埋肝癌组织的乙型肝炎病毒DNA

传统免疫组织化学方法及分子杂交检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ灵敏度低，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法能否检测到石蜡肝癌组织中的ＨＢＶＤＮＡ报道尚不多见。为此，采用ＨＢＶ与丙型肝炎病毒二合一ＰＣＲ试剂盒对１７例肝癌患者的石蜡包埋癌组织进行了ＨＢＶＤＮＡ检测，结果７例阳性，阳性率为４１％，而８例非肝癌对照患者则均阴性。组织ＨＢＶＤＮＡ结果与血清ＨＢｓＡｇ比较显示，该试剂盒有较高的检出率及符合率。这为今后进一步研究大量保存的肝病石蜡包埋组织的ＨＢＶ感染提供了一个可靠灵敏的方法，也为研究其他病毒感染的石蜡包埋材料提供了参考。     

脂肪肝健康教育的实施

20 0 1年 8月我院为 10 8名人员健康体检 ,经Ｂ超发现不同程度的脂肪肝 5 1例 ,我们通过对脂肪肝患者的健康知识需求进行问卷调查 ,有计划、有目标的进行了健康教育 ,取得了满意的效果 ,现报告如下。1　资料与方法1 1　临床资料　 5 1例中男 4 6例 ,女5例 ,2 3～ 6 7岁 ,平均 4 8岁。 31例甘油三酯 1 9～ 16 74ｍｍｏｌ/Ｌ (正常值0 2 3～ 1 2 4ｍｍｏｌ/Ｌ) ,10例谷丙转氨酶 883 5 1ｎｍｏｌ·ｓ-1/Ｌ (正常值 <5 0 0ｎｍｏｌ·ｓ-1/Ｌ) ,11例胆固醇 5 73～8 0 2ｍｍｏｌ/Ｌ (正常值 2 83～6 0 0ｍｍｏｌ/Ｌ ) ,9例血糖 6 2～19 9ｍ…