新生鼠缺氧缺血性脑损伤缺氧诱导因子1α表达与神经元凋亡

目的探讨缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemia braindamage，HIBD）时缺氧诱导因子1α（hypoxiainducible factor 1α，HIF—1α）表达与神经元凋亡的相关性，探索HIF—1α在神经元凋亡中的作用及对损伤神经修复重建的意义。方法新生10dSD大鼠40只，随机分为对照组和实验组，每组20只。实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎，氮氧混合气（92％氮气、8％氧气）缺氧2．5h，即为HIBD模型；对照组分离颈总动脉，不结扎，不作缺氧处理。分别于术后4、8、24、48及72h处死两组动物取脑组织，应用免疫组织化学法检测HIF—1α、活化的半胱天冬氨酸酶3（cleavedcaspase 3，CC3）的表达，应用TUNEL检测凋亡细胞。结果实验组H1F～1a蛋白表达在术后4h明显升高，8h达高峰，24h后下降；CC3蛋白于术后4h开始表达，8h有少量表达，24h明显升高，48h及72h维持较高水平。对照组各时间点HIF1α和CC3均有极少量弱阳性表达。实验组HIF—1α和CC3蛋白表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。TUNEL染色显示实验组术后随时间延长阳性细胞数逐渐增多，72h达高峰；但对照组TUNEL阳性细胞极少。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF—1α与促凋亡蛋白CC3表达趋势相反，HIF—1α对新生儿HIBD神经元可能具有保护作用，可望对缺氧缺血神经的修复重建发挥一定作用。     

重组人促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血时脑组织Bid mRNA表达及caspase-3活性的影响

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠缺氧缺血时脑组织Bid mRNA表达及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响,以探讨其神经保护作用机制.方法 7日龄雄性SD大鼠90只,体重12～18 g,随机分为3组(n=30):假手术组(S组)、缺氧缺血组(HIBD组)和rhEPO组.HIBD组和rhEPO组建立HIBD模型后,分别腹腔注射生理盐水和rhEPO 3 000 IU/ks.于腹腔注射后6、12、24、48和72 h(T1～5)时每组各处死6只大鼠,取左侧大脑组织100 mg,采用RT-PCR法检测Bid mRNA表达,比色法测定caspase-3活性.结果 与S组相比,HIBD组和rhEPO组大鼠T1-5时脑组织Bid mRNA表达上调,caspase-3活性升高(P＜0.01);与HIBD组相比,rhEPO组T1-5时脑组织BidmRNA表达下调(P＜0.01),T2-4时caspase-3活性降低(P＜0.01).脑组织Bid mRNA表达与caspase-3活性呈正相关(r=0.911,P＜0.01).结论 外源性rhEPO可通过下调Bid mRNA表达和降低caspase-3活性从而对HIBD后脑组织产生保护作用.     

双链小片段干扰RNA抑制缺氧条件下乳鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达

目的　构建含缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)小片段干扰RNA(siRNA)靶序列的U6启动子表达框结构 ,观察其对缺氧条件下乳鼠心肌细胞HIF 1α表达的影响。　方法　分离培养乳鼠心肌细胞 ,分为常规培养液对照组、RNA干扰 (RNAi)组 (转染无效干扰序列Ⅳ )、RNAi抑制组 (转染有效干扰序列并按下游引物不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组 )。设计、合成 3对 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ )含HIF 1α编码基因片段(正、反义 )和 1对 (Ⅳ )随机序列 (正、反义 )的PCR下游引物。PCR法构建U6启动子表达框及相应正、反序列表达框 ,同时转染心肌细胞。每组每时相点 5皿细胞。于缺氧 1h后 ,用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定其蛋白水平表达 ,免疫组织化学法检验干扰效果。缺氧 6h后采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达。　 结果　筛选出的最佳抑制片段为Ⅱ组序列。缺氧 1h,对照组、RNAi组心肌细胞HIF 1α蛋白水平显著增高 ,Ⅰ、Ⅱ、ⅢRNAi抑制组HIF 1α蛋白水平较对照组明显降低 ,其中Ⅱ组降低最为显著 (P <0.0 1);缺氧 6h,RNAi组心肌细胞HIF 1αmRNA水平较常氧条件下明显增高 (P <0.0 1);RNAi抑制Ⅱ组未见明显增高 (P >0.0 5 )。　 结论　构建的HIF 1αⅡ组表达框能有效地抑制缺氧乳鼠心肌细胞HIF 1α表达     

大鼠重度烫伤后早期心肌组织内缺氧诱导因子-1α表达的变化

目的　观察烫伤大鼠伤后早期心肌组织中缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA和蛋白的表达变化 ,探讨其意义。　方法　制作 4 0 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,设正常对照组及伤后不同时相组。取心脏解剖左、右心室 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达 ,采用蛋白免疫印迹法测定其蛋白水平的变化。　结果　正常大鼠左、右心室肌HIF 1αmRNA、蛋白表达结果有所不同。大鼠烫伤后 ,心肌组织内HIF 1αmRNA水平、蛋白表达量明显升高 (P <0.0 1)。结论　正常状态下 ,大鼠左心室肌对缺血缺氧耐受能力较右心室肌强。严重烫伤可以诱导大鼠心肌细胞HIF 1α表达增加 ,介导心肌保护效应     

缺氧诱导因子转染内皮祖细胞治疗大鼠缺血后肢

目的 使用缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染内皮祖细胞(EPC)治疗大鼠后肢缺血,观察EPC、HIF-1α转染EPC对大鼠缺血后肢血管新生和肢体成活的影响.方法 制作SD大鼠后肢缺血模型,将动物随机分为3组,每组6只.将构建的HIF-1α基因真核表达载体转染入EPCs后通过尾静脉注射入大鼠体内,并与注射磷酸盐缓冲液(PBS)或EPC的大鼠进行比较,观察转染HIF-1α对新生血管形成的影响.结果 (1)EPC组、HIF组较PBS组肢体恢复率明显增加(P<0.05),EPC组肢体恢复率较HIF组差(P<0.05).(2)与PBS组比较,各时间点中EPC、HIF组微血管密度(MVD)均明显增多(P<0.05),HIF组较EPC组明显增高(P<0.05).(3)HIF组的HIF与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达较PBS组、EPC组明显增多(P<0.05).PBS组Capase-3的表达较EPC组、HIF组明显增多(P<0.05).(4)术后7 d,各组的大鼠肢体灌注均明显降低,但EPC、HIF组细胞的血流灌注较PBS组多(P<0.01).术后14、21 d,与PBS对照组比较,HIF组的血流灌注恢复明显(P<0.01),EPC组血流灌注较HIF组少(P<0.05).结论 EPCs对大鼠缺血后肢的局部血管新生有明显促进作用,联合应用HIF-1α和EPCs有更优的治疗效果.     

颅脑创伤后缺氧诱导因子-1α表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的 探讨缺氧诱导因子－1α（HIF－1α）在颅脑创伤后的表达及其对细胞凋亡的调控作用。方法 制作液压冲击大鼠脑创伤模型30只，用免疫组织化学方法（SP法）测定脑损伤后3、12、24、48、72h脑细胞HIF－1α蛋白表达、末端脱氧核苷酸介导的X－dUTP制品末端标记法（TUNEL）测定细胞凋亡、并用免疫组织化学和TUNEL双重标记法研究脑细胞HIF－1α表达与细胞凋亡的相互关系。结果 对照组，有少量细胞轻度HIF－1α和TUNEL阳性表达，在脑挫伤区和伤灶周围水肿区均出现较多的细胞HIF－1α阳性表达，48h达高峰，受伤3h有少量散在TUNEL阳性细胞，48h达高峰；双重标记法得出，在挫伤区和周围水肿区，3h后有逐渐增多的HIF－1α阳性细胞，在HIF－1α阳性表达较多区域TUNEL阳性表达也增多（两者相关系数r＝0.62），个别细胞还有HIF－1α和TUNEL同时表达。结论 颅脑创伤后继发性脑组织缺血缺氧可引起细胞凋亡，HIF－1α对细胞凋亡有促进作用。     

异丙酚预先给药对缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚预先给经对缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响.方法 体外分离、培养SD胎鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞,接种于96孔培养板,细胞浓度为1×106/L,每孔180μl,随机分为3组(n=72),正常对照组(C组)常氧培养,缺氧组(H组)和异丙酚-缺氧组(P-H组)缺氧(5%O2)培养,P-H组于缺氧前1 h加入异丙酚(终浓度为5μmol/L).分别于缺氧3、12、24或48 h时测定细胞凋亡率、缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)mRNA、Bnip3L mRNA、HIF-lα蛋白和Bnip3L蛋白的表达水平.结果 与C组比较,H组细胞凋亡率升高,HIF-lα mRNA、Bnip3L mRNA及其蛋白表达水平上调(P＜0.05).异丙酚预先给药可抑制缺氧诱导的上述改变(P＜0.05).结论 异丙酚预先给药可抑制缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,其机制与抑制HIF-1的激活,从而下调Bnip3L蛋白表达有关.     

缺氧诱导因子-1α在去势前后大鼠腹叶前列腺中表达的变化

目的探讨与缺氧相关的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是否参与去势后前列腺萎缩过程.方法24只SD大鼠分为3组,其中A组(n=8)为假手术对照组,B组(n=8)为去势组,C组(n=8)为雄激素替代组(去势后肌注十一酸睾酮50mg/kg);术后3天处死,通过半定量RT-PCR检测与HIF-1α在去势前后前列腺表达变化.结果去势后大鼠前列腺的体积萎缩变小;雄激素替代组出现前列腺增生变大;对照组正常的大鼠前列腺有HIF-1 α mRNA低水平表达,去势组HIF-1α mRNA表达量增加,雄激素替代组HIF-1αmRNA表达量减少,与正常对照组比较,去势组的HIF-1α mRNA的表达量显著增加(P＜0.05),雄激素替代组的HIF-1αmRNA的表达量显著减少(P＜0.01).结论前列腺组织的缺氧参与去势后大鼠前列腺的早期萎缩过程.     

HIF1α调控TRPC6通道在肾小球系膜细胞缺氧损伤中的分子机制

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1α)和瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)在人肾小球系膜细胞(mesangial cells,MC)缺氧损伤中的作用及机制。方法:用不同缺氧时间处理系膜细胞诱导细胞损伤,采用MTT还原法测定细胞存活率,Tunel法观察细胞凋亡情况,采用real-time PCR,Western-blot分析检测HIF1α及TRPC6的mRNA及蛋白含量变化。结果:缺氧可以诱导系膜细胞损伤,使系膜细胞HIF1α表达上调,TRPC6表达增加,导致细胞凋亡,应用HIF1α的抑制剂可以使TRPC6含量下调,细胞凋亡减轻。结论:HIF1α和TRPC6介导了缺氧诱导的系膜细胞凋亡。     

丙泊酚对缺氧诱导的大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞凋亡的调控作用

目的 探讨丙泊酚预处理对缺氧条件下大鼠Ⅱ型肺泡七皮(ATⅡ)细胞凋亡的影响.方法 体外分离并培养大鼠ATⅡ细胞,将细胞分为三组:缺氧组(H组)、丙泊酚-缺氧组(P组)和对照组(C组).测定各组细胞存活率、早期凋亡率、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及Bnip3LmRNA 表达水平.结果 与C组比较,H组和P组细胞存活率显著降低(P＜0.05)、早期凋亡率显著升高(P＜0.05),HIF-1α mRNA及Bnip3LmRNA表达显著增强(P＜0.05).与H组比较,P组上述指标显著降低(P＜0.05).结论 丙泊酚预处理可抑制缺氧条件下大鼠ATⅡ细胞凋亡,推测其与丙泊酚-HIF-1α-缺氧反应元件(HRE)轴的抑制有关.     

胞外信号相关蛋白激酶1/2信号通路与人参皂苷Rg1抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡

目的探讨人参皂苷Rg 1在新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)中的抗凋亡作用,分析可能的信号通路机制。方法 10日龄SPF级SD大鼠48只,体质量17~21 g,随机分为4组(n=12),假手术组、模型组(HI组)、模型+人参皂甙Rg 1组(HI+Rg 1组)、模型+人参皂甙Rg 1+U 0126干预组(HI+Rg 1+U 0126组)。HI组、HI+Rg 1组及HI+Rg 1+U 0126组大鼠采用结扎单侧颈总动脉并低氧通气方法制备HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉。HI+Rg 1+U 0126组于造模前1 h右侧脑室注射5μL含U 0126(25μg/kg)的PBS,其余3组同法注射5μL PBS。HI+Rg 1组及HI+Rg 1+U 0126组于术后即刻腹腔内注射0.1 m L含Rg 1(40 mg/kg)的生理盐水;HI组和假手术组注射0.1 m L生理盐水。术后4、24 h处死各组大鼠,取右侧半球皮层和海马脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测胞外信号相关蛋白激酶1/2(extracellular signalrelated protein kinase 1/2,Erk 1/2)及磷酸化Erk 1/2(phospho-Erk 1/2,p-Erk 1/2)、缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)和活化的半胱天冬氨酸酶3(cleaved Caspase-3,CC 3)蛋白表达;TUNEL法检测原位神经元凋亡情况。结果 Western blot检测示,各时间点各组均有Erk 1/2、p-Erk 1/2、HIF-1α、CC 3蛋白表达;术后4、24 h,HI组HIF-1α、CC 3蛋白表达均较假手术组明显增加(P0.05);术后4 h,HI组p-Erk 1/2蛋白表达较假手术组明显增加(P0.05);术后4、24 h,HI+Rg 1组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI组明显上调(P0.05),CC 3蛋白表达则明显下调(P0.05);术后4、24 h,HI+Rg 1+U 0126组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI+Rg 1组明显下调(P0.05),CC 3蛋白表达则明显上调(P0.05)。各时间点各组间Erk 1/2蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色可见HIF-1α蛋白、CC 3蛋白定位主要集中在细胞核及细胞质,Erk 1/2、p-Erk 1/2蛋白定位主要集中在细胞质,蛋白表达强度与Western blot结果一致。TUNEL染色示术后4、24 h,HI组神经元凋亡指数较假手术组明显上升(P0.05);术后24 h,HI+Rg 1组神经元凋亡指数较HI组及HI+Rg 1+U 0126组明显降低(P0.05)。结论Rg 1通过Erk 1/2信号通路增强并稳定HIBD诱导的HIF-1α表达,从而抑制Caspase-3活化,减轻新生鼠HIBD后神经元凋亡。     

丙泊酚对缺氧原代胎鼠大脑神经元热休克蛋白70表达的影响

目的 探讨丙泊酚的脑保护机制.方法 培养12 d的胎鼠大脑神经元,随机分为丙泊酚组(n=12)、缺氧组(n=6)和对照组(n=6).丙泊酚组于缺氧前1 h换入含有14 μmol/L和56 μmol/L丙泊酚的培养液,随后缺氧30 min.于缺氧后1、3、6、8、24、48 h分别用原位杂交法和免疫组化法观察三组热休克蛋白70(HSP70)mRNA、热休克同源蛋白70(HSC70)mRNA及HSP70的表达.结果 缺氧30 min可诱导神经元HSPT0 mRNA、HSC70 mRNA和HSPT0表达,表达高峰分别为24、24和48h.14 μmol/L和56 μmol/L丙泊酚可诱导缺氧鼠脑神经元HSP70 mRNA和HSC70 mRNA表达高峰提前至8和6 h;56 μmol/L丙泊酚可使缺氧鼠脑神经元HSP70表达高峰提前至24 h.结论 丙泊酚可从转录和翻译两个水平促进缺氧鼠脑神经元HSP70的表达,产生延迟神经保护作用.     

复氧方式对慢性缺氧幼年大鼠肺组织TNF-α、IL-1β和IL-10 mRNA表达的影响

目的观察不同复氧方式对慢性缺氧幼年大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达的影响。方法5周龄雄性SD大鼠54只,随机均分为三组Ⅰ和Ⅱ组大鼠分别在常压低氧(FiO2=10%)下持续缺氧2周后快速纯氧或21%O2复氧3h;Ⅲ组大鼠行间断缺氧(慢性缺氧同Ⅰ组,但每天暴露于空气中1h)2周后快速纯氧复氧3h。各组大鼠分别于复氧后0、1、3h留取肺组织标本。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织TNF-α、IL-1β、IL-10mRNA表达水平,光镜下观察肺组织病理改变。结果与复氧前相比,Ⅰ组大鼠肺组织TNF-α、IL-1βmRNA在复氧1、3h明显升高(P<0.01),IL-10mRNA表达在复氧3h后明显升高(P<0.01)。Ⅱ、Ⅲ组大鼠肺组织复氧1、3hTNF-α、IL-1βmRNA的表达和复氧3hIL-10mRNA表达均明显低于Ⅰ组(P<0.01)。肺组织病理检查见Ⅱ、Ⅲ组大鼠的肺损伤均较Ⅰ组明显减轻。结论慢性缺氧幼鼠肺组织复氧损伤早期存在炎症介质/抗炎介质失衡,21%O2复氧及复氧前间断吸入21%O2可明显减少复氧后炎性因子的表达和减轻复氧引起的肺损伤。     

异丙酚对大鼠创伤性脑损伤时DAPK mRNA表达的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠创伤性脑损伤(TBI)时死亡相关蛋白激酶(DAPK)mRNA表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,月龄3～4月,体重250～300 g,随机分为6组(n=10):正常对照组(C组)、假手术组(S组)、TVI组、生理盐水组(NS组)、脂肪乳剂组(FE组)及异丙酚组(P组).采用自由落体撞击法建立大鼠创伤性脑损伤模型,于制备模型成功后以2 ml·kg-1·h-1的速率经尾静脉分别输注生理盐水、10%脂肪乳剂、1%异丙酚4 h.于模型制备成功后24 h断头处死大鼠取脑,采用细胞原位末端标记(TUNEL)法计数凋亡神经元,计算神经元凋亡率;采用RT-PCR法检测DAPK mRNA的表达水平.结果 与C组和S组比较,TBI组模型制备成功后24 h时损伤区及损伤边缘区神经元DAPK mRNA表达上调,神经元凋亡率升高(P<0.05);P组DAPK mRNA表达水平及神经元凋亡率较TBI组、NS组和FE组降低(P<0.05).结论 异丙酚可能通过抑制DAPK mRNA表达上调减少脑神经元凋亡,从而在一定程度上减轻大鼠创伤性脑损伤.     

孕鼠产前缺氧性适应对新生大鼠的脑保护作用

目的研究产前缺氧性适应对新生大鼠脑组织是否具有保护作用.方法将临产前孕鼠(孕期22 d)12只随机分成2组,Ⅰ组为实验组(缺氧性适应组),Ⅱ组为对照组.Ⅰ组将孕鼠置于密封仓中,当氧浓度降至15%时,将孕鼠放入新鲜空气中5 min,再放入密封仓中,重复第一次过程,然后待其自然分娩.Ⅱ组除密封仓不密闭外(氧浓度21%),其余同Ⅰ组.将两组娩出的新生鼠分别随机取出40只,做新生鼠缺血缺氧性脑损伤模型,随机取两组的新生大鼠各30只于脑缺血缺氧后24 h处死,取脑组织分别进行光镜、电镜和流式细胞仪检测.结果Ⅰ组(缺氧性适应组)神经细胞多为正常,细胞排列较整齐,有少许早期凋亡细胞,凋亡率(2.9%±1.2%).Ⅱ组(对照组)神经细胞排列紊乱,部分细胞胞体肿胀,少部分呈空泡状,可见早期和中期凋亡细胞,少许晚期凋亡细胞和坏死细胞,凋亡率(9.51%±3.62%),凋亡率两组有统计学差异.结论孕鼠产前缺氧性适应可以明显降低新生鼠缺血缺氧性脑损伤程度,对新生大鼠脑组织具有明显的保护作用.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤时三磷酸肌醇激酶信号通路与缺氧诱导因子1α的调节

目的 探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白的表达及三磷酸肌醇激酶(phosphoinositid 3-kinase/Akt,P13K/Akt)信号通路的激活,推测P13K/Akt信号通路与神经元HIF-1α表达调节的关系,以期更确切地阐明P13K/Akt在发育期脑缺氧缺血性损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)神经元HIF-1α表达中的作用.方法 10d龄SD大鼠56只,分为正常对照组(n=12)、假手术组(n=12)、实验组(n=24)、wortmannin干预组(n=4)和溶剂干预组(n=4).实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎,氮氧混合气(92%N2、8%O2)缺氧2.5 h,即为HIBD模型;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理;正常对照组不作任何处理.wortmannin干预组和溶剂干预组分别在侧脑室内注射wortmannin和DMSO、PBS 3 μL,30 min后制备HIBD模型.分别于建模后4、8及24 h处死动物取脑组织,应用免疫组织化学法检测HIF-1α、Akt蛋白的分布和表达,Western blot检测HIF-1α、Akt及P-Akt蛋白含量.结果 实验组HIF-1α蛋白表达在术后4h明显升高,8 h达高峰,24 h后下降;p-Akt蛋白于术后4h明显升高,8 h后下降.正常对照组各时间点HIF-1α和p-Akt均有极少量弱阳性表达.实验组各时间点HIF-1α蛋白表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);实验组p-Akt于4 h和8 h明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Akt蛋白表达随术后时间的延长无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后4 h wortmannin干预组的HIF-1α蛋白的表达明显下降,与溶剂干预组及实验组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 发育期HIBD时,可激活P13K/Akt信号通路,并诱导HIF-1α表达增加,可针对P13K/Akt信号通路和HIF-1α寻找新生儿HIBD新的治疗靶点.     

重组腺相关病毒介导HIF-1α基因对移植静脉再内皮化的影响

目的　探讨缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)过表达对大鼠移植静脉再内皮化的影响。方法　56只大鼠,随机分为实验组和对照组,均行自体右颈内静脉移植至同侧颈总动脉手术,实验组移植静脉经HIF 1α重组腺病毒工作液预处理。分别于术后7 d或14 d切取移植静脉和血清。检测和观察组织标本中HIF 1αmRNA、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、E 选择素(E selectin)的表达及内皮细胞再内皮化的情况。结果　实验组与对照组比较,HIF 1αmRNA表达增强(P<0 01);HIF 1α和VEGF蛋白表达明显增加(P<0 01);血清E selectin含量明显降低(P<0 05)。内皮细胞增殖和肌内皮连接重建显著。结论　移植静脉重塑早期HIF 1α过表达可促进受损血管内皮细胞(VEC)结构和功能的重建,加速再内皮化进程。     

缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞缺氧诱导因子-1α和Survivin基因表达的影响

目的 构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Survivin基因表达的影响。方法 利用氯化钴（CoCl2）构建缺氧诱导模型；利用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分别测定CoCl2缺氧诱导与SW480细胞HIF—1α和Survivin基因mRNA表达的时效关系（0、2、4、8、24h）和量效关系（0、50、100、150、200／μmol／L）。结果HIF-1α和Survivin基因mRNA表达与氯化钴浓度呈明显的剂量依赖关系；HIF-1α基因表达随诱导时间的延长而逐渐增强，4h亚组出现一个表达高峰，Survivin基因在缺氧诱导4h呈现表达最高峰；HIF-1α与survivin基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系（r=0．521，P＜0．05）和时效关系（r=0．693，P＜0．05）中均呈显著正相关。结论 缺氧可以诱导HIF—1α和Survivin基因的表达增加；HIF—1α与Survivin基因的表达均呈显著相关，提示Survivin基因可能与HIF—1α存在某种调控关系并在缺氧抗凋亡机制中发挥作用。     

精索静脉曲张大鼠睾丸组织HIF-1α、VEGF、iNOS的表达及意义

目的:检测HIF-1α、VEGF及iNOS在实验性精索静脉曲张(VC)大鼠睾丸组织中的表达,探讨精索静脉曲张导致男性生育力低下的病理生理学机制。方法:用SD雄鼠制造VC模型。36只SD雄性大鼠分为对照组(n=10)、假手术组(n=11)和VC组(n=15),造模后30天行左侧睾丸切除,用免疫组织化学方法检测睾丸组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果:HIF-1α、VEGF和iNOS在VC组睾丸组织中的表达均上调,明显高于对照组和假手术组(P<0.05)。结论:青春期实验性VC大鼠的左侧睾丸组织存在低氧。低氧引起HIF表达并激活其下游基因表达,是精索静脉曲张一系列病理生理学改变的可能基础。NO表达上调与间质细胞中iNOS的激活有关。