前列腺癌组织中细胞外基质的免疫组织化学研究

应用免疫组化ＡＢＣ法，观察２０例前列腺增生症和３０例前列腺癌组织内细胞外基质成份的分布（ＥＣＭ）。其中包括层粘连蛋白（ＬＮ）、纤维连接蛋白（ＦＮ）、Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白。结果显示：ＬＮ和Ⅳ型胶原分布在上皮基底膜（ＢＭ）内，ＦＮ在基底膜和非基底膜内均有分布，Ⅰ型和Ⅲ型胶原仅分布在间质内。良性病变时ＬＮ、Ⅳ型胶原和ＦＮ（ＢＭ）呈连续线状完整分布，Ⅰ、Ⅲ型胶原含量少，而ＦＮ含量多。癌组织内ＢＭ有不同程度的缺失。Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原分布呈明显的异质性和ＦＮ含量少。上述资料提示前列腺癌组织中ＢＭ明显缺失。Ⅰ、Ⅲ型和Ⅳ型胶原分布呈明显的异质性，这是肿瘤细胞反应的结果，这种改变可能具有限制癌细胞生长的作用。     

子宫颈鳞状细胞癌细胞外间质改变的免疫荧光抗体法研究

目的：通过对细胞外间质 ECM 成分进行检测，探讨间质重构与子宫颈鳞状细胞癌侵袭性生长及播散的关系。方法：应用双重免疫荧光染色技术和激光共聚焦显微镜观察，对正常人及不同分化程度的子宫颈鳞状细胞癌患者的子宫颈石蜡包埋组织切片纤维结合素 FN、层粘连蛋白 LN 及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白的表达进行检测。结果：正常子宫颈组织中，ECM内可见结构致密的Ⅰ、Ⅲ型胶原和细条索状的FN蛋白表达，Ⅳ型胶原和LN蛋白主要呈线状分布于基底膜内。子宫颈鳞状细胞癌组织中，Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原降解，尤以后者为著，表现为Ⅰ、Ⅲ型胶原结构稀疏，排列紊乱，基底膜内Ⅳ型胶原的线状荧光减弱、断裂甚至缺失，间质和癌细胞浆内FN和LN蛋白表达增多，胶原的降解和FN、LN表达与癌细胞分化程度负相关。结论：子宫颈鳞状细胞癌，间质胶原降解，基底膜断裂，FN及LN表达增多，ECM重构，其程度与癌细胞分化程度呈负相关。     

前列腺癌细胞外基质的免疫组织化学研究

用免疫组化ＡＢＣ法观察２０便前例腺癌及２０例前列腺结节性增生组织内细胞外基质成分（ＥＣＭ）──层粘连蛋白（ＬＮ）、纤维连接蛋白（ＦＮ）、Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原（Ⅰｃ、Ⅲｃ、Ⅳｃ）的分布。结果显示结节性增生组织内基底膜（ＢＭ）呈连续线状完整地分布，Ⅰｃ、Ⅲｃ及ＦＮ含量较少。癌症组织内，癌细胞周围ＢＭ有不同程度的缺失现象，癌细胞分化愈差，ＢＭ丢失愈严重，Ⅰｃ、Ⅲｃ及ＦＮ在间质内分布呈明显的异质性。提示在癌浸润性生长过程中，宿主组织内胶原发生了不均一性的反应，这种改变可能具有限制癌细胞生长的作用。     

大肠癌Col Ⅳ、LN及FN的免疫组化研究

目的：检测基底膜主要成分层粘连蛋白（ＬＮ）、纤维粘结蛋白（ＦＮ）及Ⅳ型胶原纤维（ＣｏｌⅣ）在大肠癌中的表达以及与浸润、转移的关系。方法：免疫组化标记大肠癌组织中ＣｏｌⅣ、ＬＮ及ＦＮ。结果：大肠 工在底膜成分存在不同程度的缺失,表现为Ｃｏｌ、ＬＮ呈不连续片状分布;癌组织分化越低,ＬＮ缺失越明显;ＣｏｌⅣ表达与组织类型有显著低于Ａ期大肠癌;ＦＮ表达与上述因素关系不大。结论：大肠癌基底膜成分的缺失与其     

子宫颈鳞状细胞癌组织中细胞凋亡及相关调控基因蛋白的表达

目的：通过对细胞凋亡及部分相关蛋白表达进行检测,探讨子宫颈鳞状细胞癌组织中凋亡细胞的调控机制。方法：应用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和双重免疫荧光染色技术对正常子宫颈及不同分化程度的鳞状细胞癌组织中凋亡细胞和Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达进行检测,利用共聚焦显微镜观察结果。结果：ＴＵＮＥＬ法检测发现,每例标本均有不同程度的细胞凋亡,但数量及分布区域不完全相同,低分化鳞状细胞癌凋亡细     

恶性肿瘤体内外生长和发展过程与细胞外基质相关性的研究

目的探讨细胞外基质在肿瘤侵袭转移中的作用。方法利用小鼠肺腺癌细胞母系ＬＡ７９５移植于Ｔ７３９小鼠皮下和肾包膜下,以及人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ移植于裸小鼠皮下等体内移植模型,通过间接免疫酶标和间接免疫荧光技术,测定纤维粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＮ）与Ⅳ型胶原（ⅣＣ）在肿瘤移植后不同时间的表达,并利用多种体外实验方法（琼脂糖滴瘤细胞移动实验、软琼脂上瘤细胞集落生长速度测定、斑点杂交等）,分析瘤细胞运动能力、瘤细胞集落生长速度等与ＬＮ、ＦＮ和ⅣＣ之间的关系。结果随着肿瘤的生长,ＦＮ、ＬＮ与ⅣＣ的表达均增强,且呈不同的分布;外源性ＦＮ、ＬＮ及ⅣＣ能提高瘤细胞的体外运动能力和促进瘤细胞集落的体外生长。结论细胞外基质的分布及其合成和降解的变化,与恶性肿瘤的侵袭和转移有关,对预测肿瘤生物学行为有参考价值。观察细胞外基质与瘤细胞侵袭的关系,肾包膜下移植模型较为理想     

肝癌细胞外基质的免疫组化研究

对４０例肝细胞癌（ＨＣＣ）进行纤维粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＮ）及Ⅳ型胶原（ｃｏｌⅣ）免疫组化染色。结果发现三种成分有类似分布。它们的分布与ＨＣＣ分化程度及生长方式密切相关，在高分化ＨＣＣ和膨胀型ＨＣＣ其分布方式主要为连续的索周型，而在低分化ＨＣＣ和浸润型ＨＣＣ则多为中断的索周型。     

肝癌细胞外基质的免疫组化研究

对４０例肝细胞癌（ＨＣＣ）进行纤维粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＮ）及Ⅳ型胶原（ｃｏｌⅣ）免疫组化染色。结果发现三种成分有类似分布。它们的分布与ＨＣＣ分化程度及生长方式密切相关，在高分化ＨＣＣ和膨胀型ＨＣＣ其分布方式主要为连续的索周型，而在低分化ＨＣＣ和浸润型ＨＣＣ则多为中断的索周型。     

高危型人乳头瘤病毒感染的子宫颈鳞状上皮组织中p16INK4α蛋白表达及其意义

目的：研究高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染的子宫颈鳞状上皮组织中p16INK4α蛋白表达情况,探讨其在子宫颈鳞状上皮癌变过程中的作用。方法应用HC2法检测子宫颈高危型HPV-DNA,收集HPV阳性的慢性子宫颈炎组织31例、子宫颈上皮内瘤变（CIN）组织48例（CINⅠ级16例、CINⅡ级14例、CINⅢ级18例）及鳞状细胞癌组织48例,采用免疫组织化学法检测各组p16INK4α蛋白表达情况。结果慢性子宫颈炎组、CINⅠ级组、CINⅡ级组、CINⅢ级组及鳞状细胞癌组中p16INK4α蛋白阳性率分别为0（0／31）、25%（4／16）、100%（14／14）、100%（18／18）及100%（48／48）。 CINⅡ级及以上病变组中p16INK4α蛋白阳性率明显高于慢性子宫颈炎组及CINⅠ级组（P＜0.05）。结论 p16INK4α蛋白阳性表达可反映鳞状上皮异型增生,对高危型HPV感染的子宫颈鳞状上皮内病变的准确诊断具有重要参考价值。     

整合素 β１诱导人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞迁移侵袭及三苯氧胺耐药

目的：研究整合素 β１（ｉｎｔｅｇｒｉｎβ１,ＩＴＧＢ１）在人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞过表达对其迁移侵袭能力及三苯氧胺 （ｔａｍｏｘｉｆｅｎ,ＴＡＭ）耐药的影响。方法：构建携带 ＩＴＧＢ１的质粒（ｐＢＡＢＥ ｐｕｒｏ ｍｙｃ ＩＴＧＢ１）,通过包装反转录病毒转染人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞系,构建稳定高表达 ＩＴＧＢ１的细胞株 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１;实验设置 ＭＣＦ-７组（对照组）、ＭＣＦ-７ ｖｅｃｔｏｒ 组（阴性对照组）和 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１（实验组）;采用 ｑＲＴ ＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术分别检测各组 ＩＴＧＢ１ｍＲＮＡ和蛋白表 达量;ＭＴＴ法检测不同 ＴＡＭ浓度下细胞增殖活性;Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测不同 ＩＴＧＢ１表达情况下细胞迁移及侵袭能力; Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测上皮间质转换（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）标志物 Ｅ 钙黏蛋白（Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ）、Ｎ 钙黏蛋白 （Ｎ ｃａｄｈｅｒｉｎ）、间质表型标志物波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、纤维黏连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）等相关蛋白的表达情况。结果：在人 乳腺癌细胞 ＭＣＦ-７中,成功构建稳定高表达 ＩＴＧＢ１细胞系;ＭＣＦ-７及 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１的 ＴＡＭ半数抑制浓度（ｈａｌｆ ｍａｘｉ ｍａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ,ＩＣ５０）分别为 １．２４ｎｍｏｌ／Ｌ和 ２０．２８ｎｍｏｌ／Ｌ;ＭＣＦ ７ ＩＴＧＢ１的耐药指数为 １６．３５。ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１较 ＭＣＦ-７及 ＭＣＦ-７ ｖｅｃｔｏｒ细胞迁移及侵袭能力显著增强,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１的 ＥＭＴ标志物 Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ显著下调（Ｐ＜０．０５）,ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、Ｎ ｃａｄｈｅｒｉｎ、ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白显著上调（Ｐ＜０．０５）。结论：稳定 过表达 ＩＴＧＢ１促进乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞迁移侵袭能力增强及三苯氧胺的耐药,其作用机制可能与 ＩＴＧＢ１活化上皮间质转换通路诱导细胞 ＥＭＴ相关。