肺炎嗜衣原体三种不同抗原的临床诊断价值评价

目的 研究肺炎嗜衣原体3种重组抗原Cpn0146、Cpn0147及Cpn0308应用于肺炎嗜衣原体感染血清学诊断中的价值.方法 构建pGEX6p-2/Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308重组质粒,并诱导表达重组蛋白,采用间接ELISA法和免疫印迹法(Western-blot)分析其免疫原性及其免疫反应性.建立分别以3种重组蛋白为包被抗原的间接ELISA法,与肺炎嗜衣原体IgG商品诊断试剂盒平行检测183份呼吸道感染患者的血清标本及32份沙眼衣原阳性患者血清标本,比较各方法检出准确性及阳性率.结果 GST-Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308免疫兔血清中特异性IgG抗体效价滴度分别达1:6 400、1:12 800和1:12 800以上;以3种重组蛋白为包被抗原的ELISA法准确性分别为92.3%、94.5%、96.7%.各方法检测出阳性率结果显示,Cpn0146组的阳性率为38.8%(71/183)、与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义(x~2=12.07,P<0.05);Cpn0147阳性率40.9%(75/183),与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义(x~2=8.10,P<0.05);Cpn0308阳性率44.8%(75/183),与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异无统计学意义(x~2=0.57,P>0.05).结论 Cpn0308在肺炎嗜衣原体感染血清学诊断实验中表现出良好的准确性(96.2%)和较高的阳性率(44.8%),可望用于进一步研制肺炎嗜衣原体诊断试剂盒.     

肺炎衣原体感染与脑梗死的关系

目的：检测脑梗死患者外周血单核细胞内的肺炎衣原体DNA，从血脂、吸烟量、高血压患病率等传统危险因素入手,分析肺炎衣原体感染与脑梗死的关系。 方法：纳入2004-12／2005-03华中科技大学同济医学院附属协和医院脑梗死住院患者47例为观察组，男29例，女18例；非脑梗死患者48例,系同期在本院外科、妇产科住院的患者为对照组，男28例，女20例。用酶联免疫吸附试验法测定了两组患者的血清特异性抗肺炎衣原体IgG抗体及用聚合酶链反应检测两组患者外周血单核细胞内的肺炎衣原体DNA。比较两组患者的抗肺炎衣原体IgG抗体阳性率及血脂、吸烟量、高血压患病率等传统危险因素与脑梗死的关系。 结果：实验组和对照组患者95例全部进入结果分析。（1）观察组抗肺炎衣原体IgG抗体阳性牢明显高于对照组[78．7％（37／47例），37．5％（18／48例），χ^2=16．555，P=0．000]。（1）用聚合酶链反应检测两组患者外周血单核细胞内肺炎衣原体DNA均为阴性。血清抗肺炎衣原体IgG抗体阳性病例血清胆固醇、兰酰甘油、低密度脂蛋白及脂蛋白（a）浓度明显高于血清抗肺炎衣原体IgG抗体阴性病例[（5．4816&;#177;1．1917），（3．9965&;#177;0．8371）mmol／L；（1．6564&;#177;0．8644），（1．2365&;#177;0．7503）mmol／L；（3．2454&;#177;0．8918）．（2．1815&;#177;0．7565）mmol／L：（379．96&;#177;220．31），（222．53&;#177;176．03）mg／L；t=2．469～6．758．P〈0．05]。 结论：（1）脑梗死患者肺炎农原体感染率明显增高，肺炎衣原体感染与脑梗死有关，可能是脑梗死的一个重要危险因素，深入研究有可能探索出防治脑梗死的新途径。（2）用酶联免疫吸附试验法测定血清特异性抗肺炎衣原体IgG抗体的敏感性高。可用来判定肺炎衣原体感染。（3）用聚合酶链反应检测患者外周血单核细胞内的肺炎衣原体DNA阳性率太低，不适于用来判断有无肺炎衣原体感染。     

阿奇霉素治疗慢性阻塞性肺疾病患者肺炎衣原体慢性感染

目的：探讨阿奇霉素治疗慢性阻塞性肺病（COPD）患者肺炎衣原体（Cpn）慢性感染的疗效。方法：选择COPD稳定期患者合并Cpn慢性感染者65例,随机分为对照组（30例）和治疗组（35例）,分别口服安慰剂（淀粉片）和阿奇霉素（500mg·d^-1）治疗,连续服用5d、停用23d为1个疗程,重复3个疗程。治疗前及疗程结束后进行临床症状评分,检测肺功能的FEV1/FVC（％）、高敏C-反应蛋白（HS—CRP）、Cpn—IgG和Cpn—IgA。结果：65例均完成试验,治疗组与对照组相比,临床症状改善[治疗组：治疗前（2．60±0．50）分,治疗后（1．70±0．28）分,P〈0．05];FEV,／FVc（％）也有改善[治疗组：治疗前（57±9）％,治疗后（60±7）％,P〈0．05];Hs-CRP较前下降[治疗组治疗前（4．54±0．65）mg·L^-1,治疗后（3．80±0．5）mg·L^-1,P〈0．05];Cpn-IgG阳性率和Cpn-IgA阳性率均下降,均有统计学意义。结论：阿奇霉素治疗COPD患者Cpn慢性感染有一定疗效,可改善临床症状及肺功能,减轻炎性反应。     

肺炎衣原体感染与脑梗死的关系

目的:检测脑梗死患者外周血单核细胞内的肺炎衣原体DNA,从血脂、吸烟量、高血压患病率等传统危险因素入手,分析肺炎衣原体感染与脑梗死的关系。方法:纳入2004-12/2005-03华中科技大学同济医学院附属协和医院脑梗死住院患者47例为观察组,男29例,女18例;非脑梗死患者48例,系同期在本院外科、妇产科住院的患者为对照组,男28例,女20例。用酶联免疫吸附试验法测定了两组患者的血清特异性抗肺炎衣原体IgG抗体及用聚合酶链反应检测两组患者外周血单核细胞内的肺炎衣原体DNA。比较两组患者的抗肺炎衣原体IgG抗体阳性率及血脂、吸烟量、高血压患病率等传统危险因素与脑梗死的关系。结果:实验组和对照组患者95例全部进入结果分析。①观察组抗肺炎衣原体IgG抗体阳性率明显高于对照组[78.7%(37/47例),37.5%(18/48例),χ2=16.555,P=0.000]。②用聚合酶链反应检测两组患者外周血单核细胞内肺炎衣原体DNA均为阴性。血清抗肺炎衣原体IgG抗体阳性病例血清胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白及脂蛋白(a)浓度明显高于血清抗肺炎衣原体IgG抗体阴性病例[(5.4816±1.1917),(3.9965±0.8371)mmol/L;(1.6564±0.8644),(1.2365±0.7503)mmol/L;(3.2454±0.8918),(2.1815±0.7565)mmol/L;(379.96±220.31),(222.53±176.03)mg/L;t=2.469～6.758,P<0.05]。结论:①脑梗死患者肺炎衣原体感染率明显增高,肺炎衣原体感染与脑梗死有关,可能是脑梗死的一个重要危险因素,深入研究有可能探索出防治脑梗死的新途径。②用酶联免疫吸附试验法测定血清特异性抗肺炎衣原体IgG抗体的敏感性高,可用来判定肺炎衣原体感染。③用聚合酶链反应检测患者外周血单核细胞内的肺炎衣原体DNA阳性率太低,不适于用来判断有无肺炎衣原体感染。     

感染负荷与急性冠脉综合征的相关性研究

目的 探讨感染负荷和急性冠脉综合征(ACS)的相关性.方法 采用酶联免疫吸附法测定104例ACS患者和66例冠脉造影正常的健康者血清肺炎衣原体(Cpn)、幽门螺杆菌(Hp)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、巨细胞病毒(CMV)、Hp细胞毒素相关蛋白(CagA-Hp)特异性抗体(IgG、IgM),用聚合酶链反应技术检测病原体DNA,并检测两组的炎症介质(sICAM-1、IL-6、hsCRP).结果 ①ACS组Cpn、Hp、HSV-1、CMV病原体IgG阳性率和水平均高于正常对照组(均P<0.01),病原体DNA检测与抗体检测结果吻合.校正冠心病危险因素前后,各病原体IgG阳性均与ACS相关.②ACS组中各病原体感染患者sICAM-1、IL-6、hsCRP水平均高于非感染患者(均P<0.05),且4种病原体IgG均与sICAM-1、IL-6、hsCRP呈正相关.③ACS组中3种以上病原体IgG阳性患者的比例显著高于正常对照组,3、4种病原体IgG阳性患者ACS发生率及其炎症介质水平显著高于1、2种病原体IgG阳性患者(P均<0.05).结论 Cpn、Hp、HSV-1、CMV感染与ACS、炎症反应独立相关,不同毒力的Hp感染与ACS无关,感染负荷可增强炎症反应,增加ACS的危险.     

急性心肌梗死患者血肺炎衣原体感染的检测

目的研究肺炎衣原体感染与急性心肌梗死(AMI)的关系。方法应用间接微量免疫荧光法测定42例急性心肌梗死(病例组)患者,72例健康人(对照组)血清肺炎衣原体特异性IgG、IgM抗体滴度。结果对照组、病例组肺炎衣原体总感染率分别为30.6%,88.1%,其中既往感染率分别为30.6%,71.4%,急性感染率分别为0%,16.7%。总感染率、既往感染率及急性感染率在病例组明显增高(优势比分别为16.82%,5.68%,14.2%;95%可信区间分别为5.83~48.54,2.46~13.11,1.68~119.97);与对照组比较病例组血清肺炎衣原体IgG抗体平均几何滴度有非常显著性差异(P<0.01),IgM抗体病例组仅2例阳性,对照组无一例阳性。结论研究结果表明急性心肌梗死肺炎衣原体感染率及血清肺炎衣原体平均几何滴度均较高,肺炎衣原体感染可能是构成急性心肌梗塞发生发展的一个危险因子。     

原发性高血压的发生与血清肺炎衣原体抗体的关系

目的：探讨肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae，Cpn)感染与原发性高血压(essential hypertension，EH)的关系，进行EH的流行病学调查。方法：采用酶联免疫试验(enzyme immunoassay，EIA)检测62例EH患者和58例正常对照者的血清Cpn特异性抗体免疫球蛋白G(IgG)。结果：EH组和对照组的酶联免疫单位(enzyme immunounits，EIU)均值分别为：73．14&;#177;61．59和99．93&;#177;68.00，EH组的EIU均值低于对照组，差异有显著性意义(t=-2．265，P=0．025)；两组抗体IgG的阳性率分别为58％(36／62)和76％(44／58)，EH患者的抗体阳性率低于对照者，差异有显著性意义(x^2=4．271，P=0．039)。在各因素的不同水平下．Cpn抗体IgG阳性率与EH关系的分析发现，在年龄≥50岁、男性及有吸烟史的水平下，两组抗体IgG阳性率的差异均有统计学意义(OR均&;lt;1)。结论：Cpn感染可能是EH发生的一种保护性因素；Cpn感染可能对年龄≥50岁、男性及有吸烟史者易感高血压是一种保护性因素。     

肺炎衣原体与急性呼吸道感染的相关性分析

目的：研究成人急性呼吸道感染患肺炎衣原体感染情况及临床特征,为临床诊断及治疗此类疾病提供参考依据。方法．90例患及40例健康献血员,采用微量免疫荧光法检测肺炎衣原体抗体。结果：23例患(25．6％)血清学IgG≥1：512或IgM≥1：32提示肺炎衣原体引起的急性呼吸道感染,其中支气管哮喘急性发作13例,肺炎2例,肾移植后合并肺部感染1例,急性支气管炎2例,慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重5例,对照组无1例出现血清学滴度有显的升高。结论：肺炎衣原体是呼吸道感染的重要致病原之一,应引起临床医师重视,一旦拟诊有此种病原体感染时在常规治疗同时可联合应用罗红霉素、阿奇霉素等大环内酯类抗生素．     

阿奇霉素辅助治疗咳嗽变异性哮喘的疗效观察

目的；探讨咳嗽变异性哮喘与肺炎支原体感染的关系及阿奇霉素治疗的效果。方法：随机选择咳嗽变异性哮喘惠儿100例为观察组，100例同期就诊年龄相仿的急性上呼吸道感染患儿为对照组。应用颗粒凝集法测定两组患儿肺炎支原体-IgM，同时应用阿奇霉素进行治疗。结果：观察组肺炎支原体-IgM阳性48例，阳性率为48％，对照组阳性14例。阳性率14％。两组比较有显著差异。观察组肺炎支原体-IgM滴度明显高于对照组，其中滴度〉1：320者占43．8％。对照组较低，仅1例最高滴度为1：320。100例咳嗽变异性哮喘的患儿在常规治疗的基础上。加用阿奇霉素口服．有效率88％，随访6～24个月，无1例出现哮喘发作。结论：咳嗽变异性哮喘与肺炎支原体感染有密切关系，阿奇霉素疗效明显。     

肺炎衣原体在急性冠状动脉综合征中的意义及其致病机制

目的探讨肺炎衣原体 (Cpn)在急性冠状动脉综合征 (ACS)中的意义及其可能的致病机制。方法对 86例冠心病 (CHD)患者包括急性冠状动脉综合征患者 (A组 ,55例 )和症状稳定患者 (B组 ,31例 )与非CHD患者 (对照组 ,2 6例 )进行外周血Cpn特异性抗体IgG、肿瘤坏死因子 (TNF α)、C 反应蛋白 (CRP)水平检测及白细胞和中性粒细胞计数。 结果 3组Cpn特异性IgG抗体 ,阳性率分别为78.1 8%、54 .84%和 42 .30 % ;Cpn IgG阳性率、CRP、TNF α、白细胞与中性粒细胞计数 ,A组均高于B组和对照组 (P <0 .0 1 ) ,但B组与对照组差异无显著意义 (P >0 .0 5)。A组急性心肌梗死患者CRP、TNF的均值高于不稳定型心绞痛患者 (P <0 .0 5)。结论Cpn的感染与激活在ACS的发展中具有一定意义 ,其致病机制与急性炎症反应有关。     

套式PCR法检测外周血肺炎衣原体DNA

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中肺炎衣原体(Cpn)DNA的检测方法.方法用淋巴细胞分层法和低渗溶血法提取PBMC.设计2对引物用套式PCR(nPCR)法测定150例冠心病患者(冠心病组)外周血PBMC中Cpn-DNA.同期临床55例非冠心病患者作对照组.结果冠心病患者肺炎衣原体DNA阳性率32.7%,对照组阳性率为1.8%,两组差异显著(P＜0.001),OR 26.2,95%CI 3.52～194.98.冠心病组中无症状组阳性率为29.1%,不稳定型心绞痛组阳性率为39.6%,急性心肌梗死组阳性率为29.9%,各亚组间差异不显著(P＞0.05).结论用nPCR法检测PBMC中Cpn-DNA,可为临床Cpn感染的诊断提供依据.     

Increase of chlamydial LPS antibodies in patients with acute coronary syndrome without detection of chlamydial DNA in atherectomy samples.

BACKGROUND: Chlamydia pneumoniae, a respiratory pathogen, has been connected with the pathogenesis of coronary artery disease (CAD). Previous studies indicated a correlation between antibodies to chlamydial LPS and the risk of cardiovascular disease. The aim of this study was to determine whether C. pneumoniae plays a direct role in the pathology of acute coronary syndromes (ACS). METHODS AND RESULTS: Twenty-five consecutive patients (median age 56 years) with ACS (17 acute myocardial infarction, 8 unstable angina) were included in the study and underwent directional coronary atherectomy. Tissue and blood samples were subjected to conventional and real time polymerase chain reaction (PCR) for C. pneumoniae. Antichlamydial immunoglobulin A (IgA) and IgG were examined by LPS enzyme immunoassay (EIA) and microimmunofluorescence (MIF) at intervention and on days 20, 45 and 180 thereafter. DNA of C. pneumoniae was detected neither in atherectomy samples nor in peripheral blood. Serologic results with LPS EIA showed a rapid and significant increase in specific IgA and IgG within 20 days including seroconversion in six cases (4 IgA, 2 IgG). Positive IgA and IgG MIF levels (30% and 87%) remained stable throughout the observation period. CONCLUSIONS: We conclude that negative detection of chlamydial DNA excludes a direct role of chlamydia in ACS. Our findings of rapid LPS antibody increase suggest a role of chlamydial LPS antigen which appears to be released during the acute event e.g. from damaged tissue, indicating a renewed accessibility to the immune system. An indirect role of chlamydia in the further aetiologic process of CAD seems possible.     

儿童呼吸道感染与肺炎衣原体的关系

目的：探讨肺炎衣原体（Cpn）与儿童呼吸道感染之间的关系。方法：用直接免疫荧光（DIF）法检测外周血单核细胞（PBMC）中的Cpn特异性抗原，问接微量免疫荧光（MIF）法检测血浆中Cpn抗体。结果：在40例呼吸道感染患儿PBMC中Cpn特异性抗原阳性率57．5％（23／40），正常儿童28人PBMC中Cpn特异性抗原阳性率32．1％（9／28）；P=0．039。血浆中CpnIgG的阳性检出率分别为67．5％（27／40）和42．9％（12／28），P=0．043；CpnIgM的阳性检出率分别为62．5oA（25／40）和35．7％（10／28），P=0．030。结论：儿童呼吸道感染与肺炎衣原体有较密切关系。肺炎衣原体的检测可为儿童呼吸道感染诊治提供实验依据。     

外周血白细胞中肺炎衣原体核酸与冠状动脉粥样硬化关系的研究

目的　探讨外周血白细胞中肺炎衣原体核酸 (CpnDNA)与冠状动脉粥样硬化 (CAD)的关系及其可能机制。方法　选择 93例 (男 6 4例 ,女 2 9例 ;年龄 36～ 77岁 ,平均 5 3 81± 9 6 1岁 )成功进行冠状动脉造影患者 ,按冠脉造影结果分为对照组 (n =2 3)和冠心病组 (n =70 ) ,运用巢式PCR(nPCR)的方法检测外周血白细胞中CpnDNA及检测外周血CRP(C 反应蛋白 )等 ,比较CAD与各个因素之间 ,以及急性冠脉综合征(ACS)与各个因素之间相关性。结果　年龄及Cpn感染是CAD的独立危险因素 ;ACS者Cpn感染阳性率及CRP均数显著高于非ACS者。CRP除了与ACS有关外 ,还与Cpn、糖尿病有关。 结论　Cpn感染可能是CAD及ACS的病因之一 ,ACS与CRP显著相关。Cpn与CAD和 (或 )ACS的联系主要不是通过CRP实现的。Cpn引起的CRP增高可能主要是与IL 1、IL 6、TNF α、INF γ等共同起作用或可能起着关键的触发作用。     

两种免疫荧光方法检测肺炎衣原体抗体的比较

目的：比较研究两种免疫荧光技术检测抗肺炎衣原体（Cpn)特异性抗体的方法学，以选择一种适合国内医院开展的技术。方法：应用间接免疫荧光滴定平板技术和微量免疫荧光（MIF）试验对171例患者地进行了Cpn特异性IgG,IgA,IgM抗体的检测，结果：两种方法无论是方法学还是特异性，敏感性均无明显的差异，但间接免疫荧光滴定平板检测结果的荧光模型清晰，易辨认，结论：间接免疫荧光滴定平板技术是国内医院开展Cpn感染诊断较为适用的方法。     

外周血单核细胞中肺炎衣原体特异性抗原的检测

目的 :肺炎衣原体 (Cpn)特异性抗原检测方法的建立及其应用。方法 :分离人外周血单核细胞 (PBMC) ,用直接免疫荧光 (DIF)检测PBMC中的Cpn特异性抗原 ,同时用间接微量免疫荧光 (MIF)检测Cpn抗体。结果 :颈动脉粥样硬化病人和正常人PBMC中Cpn特异性抗原检出阳性率分别为 6 2 %和 30 % (P <0 .0 1) ;血浆中CpnIgG的检出阳性率分别为 72 %和2 8% ,P值 <0 .0 0 1;血浆中CpnIgM的检出阳性率分别为 16 %和 12 % (P值 >0 .0 5 )。结论 :PBMC中的Cpn特异性抗原和血浆中Cpn -IgG的高检出率均见于颈动脉粥样硬化病人 ,但抗原的检测具有更大的临床意义。     

动脉硬化性闭塞症患者肺炎衣原体DNA的表达

目的 从分子生物学角度探讨肺炎衣原体(Cpn)与动脉硬化性闭塞症(ASO)的相互关系.方法 随机选择60例ASO患者作为实验组,40名健康者作为健康对照组,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测2组静脉血中Cpn的DNA表达情况.结果 ASO 患者静脉血中Cpn DNA阳性表达率为78.33%(47/60),而健康对照组的阳性表达率为47.50%(19/40),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05),并且随着ASO的病情发展其阳性表达率升高(Ⅰ期+Ⅱ期为64.00%,Ⅲ期+Ⅳ期为88.57%).结论 Cpn的DNA表达与ASO的发生存在一定联系,其表达率同ASO的病程发展呈正相关.     

慢性肺炎衣原体感染与冠心病的关系

目的 :探讨慢性肺炎衣原体感染与冠心病的关系。方法 :用免疫荧光法检测并对比经冠状动脉造影证实为冠心病或除外冠状动脉粥样硬化者血清肺炎衣原体 Ig G/ Ig M抗体滴度。结果 :经冠状动脉造影证实为冠心病者慢性肺炎衣原体感染率明显高于经冠状动脉造影除外冠状动脉粥样硬化者 (71.88%比 2 5 .0 0 % ,P<0 .0 1)。结论 :慢性肺炎衣原体感染与冠心病之间有较强的相关性。     

自制与进口肺炎衣原体单克隆抗体的特性比较

目的:自制肺炎衣原体单克隆抗体(Cpn-McAb)与进口Cpn-McAb的特性比较及临床应用。方法:双向琼脂扩散法鉴定自制Cpn-McAb的效价和IgG亚型,用显色法检测单抗与Cpn-MOMP的免疫反应,然后用异硫氰酸荧光素(FITC)标记纯化的IgG。为了评估Cpn-McAb,用自制和进口Cpn-McAb同时检测外周血标本454例。另外,分别从Cpn特异性抗原(Cpn-Ag)阳性的外周血单核细胞(PBMC)标本(A组)中和Cpn-Ag阴性的对照组(B组)中随机各挑选40例,用PCR检测PBMC中的Cpn-DNA。结果:免疫琼脂扩散结果表明,Cpn单抗为IgG2b亚型,扩散效价为1:128。在1:30工作浓度下,微量免疫荧光检测的结果表明,自制Cpn-McAb与鹦鹉热衣原体有较弱的交叉反应;与沙眼衣原体无交叉反应,特性与进口Cpn-McAb一致。自制Cpn-McAb检测PBMC的Cpn-Ag阳性率为53.3%(242/454),进口Cpn-McAb检测PBMC的阳性率为52.6%(239/454),两种单抗检测同时阳性的标本207例,Kappa值是0.704,根据其判断标准提示两者有较高的一致性。A、B两组Cpn-DNA阳性标本分别为38例和2例。结论:自制Cpn-McAb几乎和进口Cpn-McAb一样有较高的特异性和敏感性,有可能替代进口单抗用于临床Cpn感染的检测,有助于相关疾病的诊治。