健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响

目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响。方法:以TGF-β1诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0%、5%、10%、15%、20%、30%含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力。结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10%含药血清,24 h 15%、20%、30%含药血清,48 h 15%含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P0.01),其中以48 h 15%含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果最明显。健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10%、15%、20%、30%浓度的含药血清都具有显著性差异(P0.01);而与空白血清组相比,15%、20%、30%浓度的含药血清均具有显著性差异(P0.01),其中以15%浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用最明显。结论:15%健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果最好。     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

双氢青蒿素含药血清抑制人肝癌SMMC-7721细胞活性的研究

目的:研究双氢青蒿素含药血清抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用及作用机制。方法:制备空白组、双氢青蒿素15 mg/kg、30 mg/kg、60mg/kg、120 mg/kg 5个剂量组含药血清,以贝伐单抗为对照药,作用于人肝癌SMMC-7721细胞;噻唑蓝法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;制作细胞爬片,免疫组化法检测各组细胞的血管内皮生长因子表达。结果:和空白组比较,双氢青蒿素含药血清30 mg/kg组、60 mg/kg组、120mg/kg组能明显抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导细胞凋亡。24h的增殖抑制率分别为22.41%、29.31%和36.21%,48h的增殖抑制率分别为24.68%、36.36%和41.56%,72h的增殖抑制率分别为30.59%、38.82%和45.88%;凋亡率分别为16.13%、17.42%和19.73;免疫组化结果显示各双氢青蒿素组细胞的血管内皮生长因子表达均受到明显抑制。结论:双氢青蒿素含药血清浓度达到30 mg/kg以上时表现出明显的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,并且这种作用可能与其对血管内皮生长因子的表达抑制相关。     

肝癥口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响

本文就肝癌口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响进行了研究。通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测表明，肝癌口服液可以促进人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡，且对正常人的免疫系统影响不大。     

芪术方诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制研究

目的:探讨芪术方(QZP)诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制。方法:以不同浓度的QZP干预人肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况,RT-PCR法检测AKT1、AKT2、Caspase-9mRNA的表达;蛋白质印迹法检测p-AKT、PTEN蛋白表达。结果:QZP能阻滞人肝癌细胞SMMC-7721从G0/G1期进入S期,并诱发细胞凋亡;能抑制AKT1、AKT2表达,提高Caspase-9表达,且跟浓度呈正比例关系。结论:QZP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡和阻滞细胞周期,其机制可能为促进人肝癌细胞SMMC-7721 PTEN表达的增加,使得PI3K/AKT信号通路激活受阻,同时抑制p-AKT、AKT1、AKT2的表达,激活下游Caspase-9促凋亡分子的表达,从而为PI3K/AKT信号通路介导细胞凋亡这一设想提供了理论依据。     

健脾益气方含药血清下调Vimentin蛋白水平对人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的研究健脾益气方下调Vimentin蛋白水平对肝癌细胞的影响,探讨健脾益气方防治肝癌的机制。方法利用TGF-β1诱导的人肝癌细胞SMMC-7721 EMT模型,采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%、15%、30%浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin、Caspase-3、PARP-1与Caspase-1蛋白表达的影响。结果与空白血清组比较,健脾中、高剂量组健脾益气方含药血清均可以降低肝癌细胞Vimentin和PARP-1蛋白表达量(P0.01),其下调程度与二者的裂解程度,及肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;并升高肝癌细胞Caspase-3、降低Caspase-1蛋白的表达(P0.01)。Vim裂解组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和早期凋亡率在各实验组中均为最高值,其肝癌细胞中各蛋白表达趋势与健脾组一致,但下调或上调程度更明显。Casp抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率在各实验组均为最低值,早期凋亡率在各实验组中也仅高于EMT模型组,两组间差异无统计学意义(P0.05);细胞中Caspase-3蛋白表达下调(P0.01),PARP-1表达上调(P0.01),Vimentin表达差异无统计学意义(P0.05),Vimentin和PARP-1无蛋白裂解片段出现。健脾各剂量组中以中剂量组效果最佳。结论 15%浓度的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的干预效果最佳。健脾益气方可能通过下调人肝癌细胞SMMC-7721中Vimentin蛋白的表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭、并诱导部分肝癌细胞凋亡;导致Vimentin蛋白下调的原因可能在于Caspase-3对它的裂解。此过程中,健脾益气方一方面利用Caspase-3/Vimentin裂解片段形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡,另一方面可能利用Vimentin水平的下调导致NLRP3/Caspase-1炎症信号通路减弱,干预肝癌炎症微环境。     

抗癌扶正方及含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用

目的:探讨抗癌扶正方的抗肝癌作用。方法:提取抗癌扶正方,使用药物及含药血清,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养,分光光度计检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响。结果:抗癌扶正方及药物血清,具有良好的抑肝癌细胞生长作用,尤以1、10mg/mL剂量组效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机制有必要进一步深入探讨。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

复方斑蝥胶囊抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

复方斑蝥胶囊是以斑蝥为君药,内含多种中药组分,根据部颁标准(第17册)生产的纯中药胶囊制剂,临床上用于治疗多种癌症,以原发性肝癌为主,显示出了较好的疗效。其抗肝癌作用的机制目前在国内外尚未见报道。本课题采用血清药理学方法,观察复方斑蝥胶囊对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和细胞周期、细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的影响,探讨复方斑蝥胶囊抗肝癌的作用以及可能的机制,以期为临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株和实验动物人肝癌细胞SMMC-7721由本校基础医学院病理生理教研室惠赠。新西兰大耳白兔6只,体重为(2.5±0.2…     

清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721 MEK表达的影响

目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞增殖和信号传导因子MEK影响.方法:采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,应用MTT比色法观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.用Western免疫印迹方法检测对MEK蛋白表达影响,RT-PCR方法检测对MEK1mRNA表达影响.结果:肝化瘀方含药血清对TGFα诱导的肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抑制效应呈时间依赖性.清肝化瘀方含药血清能抑制MEK蛋白的表达和MEK1的mRNA的表达.结论:清肝化瘀方含药血清能抑制TGFα诱导的人肝癌细胞增殖,抑制MEK1的mRNA的表达和MEK蛋白的表达,阻断TGFα在细胞内的信号传导.     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

肝癥口服液含药血清抑制肝癌细胞SMMC-7721血管内皮生长因子表达的研究

目的:观察服用肝癌口服液的原发性肝癌病人和正常志愿者含药血清对肝癌细胞SMMC-7721 VEGF mRNA表达的影响.方法:采用血清药理学方法,以正常志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人肝癌细胞SMMC-7721细胞,应用RT-PCR技术观察含药血清对肝癌细胞VEGFmRNA表达的影响.结果:正常人服用肝癌口服液前后血清对SMMC-7721细胞的VEGF mRNA表达无影响,VEGF/β-actin灰度值差异无显著性;SMMC-7721细胞在肝癌病人服药后血清中生长,VEGFmRNA的表达显著降低,统计学差异具有显著性.结论:肝癌病人肝癌口服液的含药血清可明显降低肝癌细胞VEGF mRNA的表达,而对健康人群无影响.     

华蟾素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素诱导人肝癌细胞凋亡及作用机理。方法:采用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法、流式细胞仪及免疫组化等方法,观察华蟾素对人肝癌 SMMC-7721细胞株的作用。结果:华蟾素可显著抑制SMMC-7721细胞的生长;经药物处理后,AO/EB 染色时,肝癌细胞在显微镜下呈现出典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见华蟾素能将细胞周期阻断在 S 期;对抗凋亡基因 bcl-2表达有一定的抑制作用。结论:华蟾素能抑制人肝癌 SMMC-7721细胞生长;能诱导人肝癌细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机理与其能阻断细胞周期、抑制 bcl-2基因表达有关。     

土荆芥挥发油诱导人肝癌SMMC-7721细胞Caspase依赖性凋亡

目的:探讨土荆芥挥发油对人肝癌SMMC-7721细胞和人正常肝LO2细胞的抑制作用及体外抗肿瘤机制。方法:MTT法检测细胞增殖;碘化丙啶(PI)单染流式细胞仪分析细胞周期;显微镜下观察细胞形态变化及凋亡效应;Annexin V-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:土荆芥挥发油对细胞增殖的抑制作用均呈浓度和时间依赖性(P0.05),24、48、72 h处理其对SMMC-7721细胞的IC50均小于LO2细胞(P0.05);土荆芥挥发油阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期;形态学观察表明细胞皱缩,粘附性降低;细胞核着橘红色,呈固缩状等晚期凋亡特征;细胞凋亡率呈浓度依赖性升高(P0.05),加入Caspase抑制剂,土荆芥挥发油100μg/m L组晚期凋亡率显著降低(P0.01)。结论:土荆芥挥发油能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,其机制可能与阻滞细胞周期,诱导细胞发生Caspase依赖性凋亡有关。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及作用机制的研究

氯化两面针碱(Nitidine chloride)属于苯菲啶型生物碱,为黄治勋等[1]从芸香科花椒属植物两面针的干燥根提取的一种生物碱.     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

清肝化瘀方药含药血清对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的:观察用两种方法制备的清肝化瘀方药含药血清对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:中药血清A为正常状态下大鼠的含药血清,中药血清B为病理状态下大鼠的含药血清,应用MTT比色法比较两种中药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用.用流式细胞术检测中药血清B对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:中药血清A对肝癌细胞SMMC-7721增殖有轻微的抑制作用.中药血清B对肝癌细胞有明显的抑制作用,两种血清的抑制效应均呈时间依赖性.中药血清B还能促进肝癌细胞凋亡,使细胞滞留于G0/1期,降低SPF和PI.结论:病理状态下长期给药制备的清肝化瘀方药含药血清能够明显抑制人肝癌细胞增殖,促进其凋亡.