siRNA沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响*

目的 探讨沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（TNFAIP2）表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响。方法 使用Lipofectamine 2000介导siRNA转染胶质瘤细胞U87和U251下调TNFAIP2 mRNA的表达;运用细胞划痕及Transwell实验检测沉默TNFAIP2表达对U87及U251细胞迁移、侵袭的影响;通过CCK-8实验检测沉默TNFAIP2表达对胶质瘤细胞U87及U251增殖的影响。结果 Lipofectamine 2000介导si-TNFAIP2转染U87及U251细胞可下调TNFAIP2 mRNA的表达;沉默TNFAIP2表达可降低胶质瘤细胞U87和U251迁移侵袭的能力;沉默TNFAIP2表达可抑制U87及U251细胞的增殖。结论 siRNA沉默TNFAIP2表达可抑制胶质瘤细胞的侵袭和增殖。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3在胶质瘤中的表达特性及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响。方法 采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞株U87、U251、SNB19、T98和LN229中TNFAIP3的表达,以U87和SNB19为实验对象。使用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导小干扰RNA(siRNA)转染U87和SNB19以下调TNFAIP3的表达;采用Transwell检测下调TNFAIP3对U87及SNB19侵袭的影响;运用划痕实验检测下调TNFAIP3对U87及SNB19迁移的影响。结果 和NHA(0.144±0.008)相比,TNFAIP3在U87(1.380±0.066)、U251(0.663±0.062)、SNB19(1.405±0.032)、T98(1.002±0.068)、LN229(0.667±0.027)中的表达均升高(均P<0.05)。si-TNFAIP3转染U87及SNB19可下调TNFAIP3的表达,继续培养24 h, U87及SNB19侵袭和迁移能力均下降(均P<0.05)。结论 ...     

和厚朴酚促进组织因子途径抑制物-2表达并诱导神经胶质瘤细胞凋亡

目的探究和厚朴酚对神经胶质瘤细胞凋亡的作用及组织因子途径抑制剂因子TFPI-2在其中的分子机制。方法在体外培养神经胶质瘤细胞系U87b,使用不同浓度(0、40、80μM)的和厚朴酚处理神经胶质瘤细胞,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,利用western blot检测TFPI-2、BAX、BCL-2、Cleaved caspase3的蛋白表达情况。利用siRNA沉默U87细胞中TFPI-2的表达,进一步确定TFPI-2的作用。结果 40μM和厚朴酚处理诱导的U87细胞凋亡率(26. 3±0. 55)%明显高于对照组(4. 8±0. 22)%,P 0. 001);相比于对照组(4. 8±0. 22)%,80μM和厚朴酚[(79. 1±0. 31)%,P 0. 001]同样也显著增加细胞凋亡;和厚朴酚成浓度依赖性增加U87细胞内凋亡相关基因BAX/BCL-2比值、Cleaved caspase3的表达以及TFPI-2的蛋白表达;和厚朴酚+si TFP1-2组的细胞凋亡率(12. 7±0. 29)%明显低于和厚朴酚+NC组细胞凋亡率[(57. 2±0. 55)%,P 0. 001];TFPI-2沉默能明显抑制促凋亡蛋白BAX、Cleaved caspase3的表达水平,并促进抑凋亡蛋白BCL-2的表达。结论和厚朴酚可以通过诱导U87神经胶质瘤细胞中TFPI-2高表达,进而促进细胞凋亡的发生。     

TKTL-1基因对神经胶质瘤细胞凋亡和迁徙的影响

目的:研究人转酮醇酶样蛋白1(TKTL-1)表达对神经胶质瘤细胞凋亡和迁徙的影响。方法:分别在神经胶质瘤组织、U87和U251神经胶质瘤细胞株中检测TKTL-1和mRNA表达水平。用RNA干扰方法(SiRNA)特异性抑制TKTL-1在U87和U251细胞株的表达。细胞增殖实验用于评估TKTL-1的迁徙侵袭能力,Annexin V/PI双染色法和流式细胞仪用于评估细胞的凋亡。结果:正常脑组织、低级别和高级别神经胶质瘤中TKTL-1 mRNA的表达水平分别为1.00±0.28、21.46±3.17和41.58±3.06。神经胶质瘤组织中TKTL-1 mRNA的表达水平高于正常脑组织(P<0.01)。高级别神经胶质瘤组织中TKTL-1 mRNA的表达水平高于低级别神经胶质瘤组织(P<0.05)。在高、低级别神经胶质瘤中,TKTL-1蛋白的阳性表达率分别为97.67%(42/43)和63.64%(14/22),高于正常脑组织(P<0.05)。流式细胞术分析显示,TKTL-1基因干扰可诱导U87和U251细胞系发生早期凋亡(P<0.05)。通过SiRNA特异性干扰TKTL-1表达后,U87和U251细胞的增殖活性降低(P<0.01)。克隆形成实验表明,通过抑制TKTL-1的表达降低了U251和U87细胞中肿瘤细胞克隆的形成(P<0.01)。蛋白质印迹分析显示SiRNA后神经胶质瘤细胞株(U251/U87)HIF-1α蛋白表达降低(P<0.01)。结论:TKTL-1在神经胶质瘤组织和细胞株中表达明显上升。特异性干扰TKTL-1的表达可减少细胞的迁徙,促进细胞凋亡。TKTL-1可作为神经胶质瘤基因治疗的潜在分子靶点,其表达水平可作为神经胶质瘤的预后指标。     

大剂量冲击法建立胶质瘤耐替莫唑胺细胞株及生物学鉴定

目的:体外构建胶质瘤耐替莫唑胺细胞株,并探讨其生物学特征。方法:采用大剂量冲击法诱导构建人脑胶质瘤耐替莫唑胺(TMZ)U251细胞株(命名为U251/TMZ);采用MTT法检测亲代细胞(U251)和U251/TMZ对TMZ的敏感性;绘制细胞增殖倍增曲线,比较两种细胞生长情况;采用免疫荧光技术检测两者CD133的表达;蛋白质印迹法检测两种细胞ABCG2的表达。结果:成功构建胶质瘤耐替莫唑胺细胞株,其耐药指数为亲代的8.1倍(t=-63.28,P=0.00);U251/TMZ增殖倍增较亲代细胞延长;U251/TMZ细胞表达CD133较亲代细胞明显增加(t=45.35,P=0.00),U251/TMZ细胞ABCG2表达较亲代明显增高(t=6.19,P=0.00)。结论:通过大剂量冲击法构建的U251/TMZ细胞产生一定的耐药性,具有明显的胶质瘤干细胞生物学特性。     

EphB3通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤细胞侵袭及迁移的影响

目的 探究促红细胞生成素产生的肝细胞受体B3(EphB3)通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤的侵袭、迁移的作用机制。方法 通过EphB3慢病毒过表达及EphB3-siRNA感染U87MG、U251细胞系,采用细胞划痕实验、细胞侵袭(Transwell)实验检测细胞的侵袭、迁移能力,采用蛋白印迹法(Western Blot)检测EphB3过表达及siRNA干扰后磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达,采用细胞多重免疫荧光检测EphB3的过表达及敲低检测EphB3、p-PI3K、p-AKT共表达情况;收集Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织样本40例,采用免疫组化检测EphB3的表达,组织多重免疫荧光检测EphB3及p-PI3K、p-AKT的共表达。结果 U87MG、U251细胞系过表达EphB3后细胞侵袭、迁移能力减弱(P<0.05),敲低EphB3后U87MG、U251细胞侵袭、迁移能力增强(P<0.05);EphB3过表达后p-PI3K、p-AKT表达下降(P<0.05),EphB3敲...     

三种胶质瘤细胞株U87、U251及T98G体外趋化血液单核细胞的实验研究

目的观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251、T98G)对血液单核细胞的趋化作用,探讨胶质瘤组织相关巨噬细胞的来源及其临床病理意义.方法应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251、T98G)对血液单核细胞的趋化作用.结果 3种胶质瘤细胞株(U87、U251、T98G)对血液单核细胞的趋化活性高于空白对照组(无血清培养液)(P<0.01);其中U87细胞株对血液单核细胞的趋化活性高于U251、T98G细胞株(P<0.01),U251细胞株对血液单核细胞的趋化活性高于T98G细胞株(P<0.05).结论 3种胶质瘤细胞株均具有趋化血液单核细胞能力,提示血液中单核细胞是胶质瘤相关巨噬细胞的重要来源,在胶质瘤发生、发展中起到重要作用.     

抑制USP22表达对胶质瘤细胞顺铂耐药的影响

目的 探讨泛素特异性肽酶22（ubiquitin specific peptidase 22,USP22）对胶质瘤细胞顺铂耐药的作用。 方法 采用顺铂剂量梯度爬升筛选方法诱导顺铂耐药胶质瘤细胞株U251/CP2,转染USP22小干扰RNA沉默胶质瘤顺铂耐药细胞株U251/CP2中USP22的表达,RT-PCR检测细胞USP22 mRNA的表达水平,流式细胞术检测转染USP22-shRNA对细胞凋亡的影响,CCK-8法检测细胞的活力及耐药指数,Western blotting检测USP22的蛋白水平。 结果 成功构建了顺铂耐药胶质瘤细胞株U251/CP2、USP22基因沉默细胞株U251-shUPS22和U251/CP2-shUSP22。抑制USP22的表达可以明显提高U251/CP2-shUSP22细胞的凋亡率（P < 0.05）,顺铂上调USP22蛋白在U251和U251/CP2细胞中的表达（P < 0.01）。U251-shUPS22、U251/CP2和U251/CP2-shUSP22各组细胞的顺铂半数抑制浓度分别为（0.56±0.07）μg/mL、（73.73±2.74）μg/mL和（51.25±1.09）μg/mL,与对照U251组（1.23±0.13）μg/mL比较差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 抑制USP22表达可增强胶质瘤细胞对顺铂的敏感性,且可在一定程度上逆转耐药细胞株的顺铂耐药,提示USP22是胶质瘤顺铂耐药的潜在分子机制之一。     

3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)体外趋化组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的实验研究

目的 观察胶质瘤细胞株U87(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)、U251(人神经胶质细胞瘤细胞)及T98G(人胶质母细胞瘤细胞)对U937(组织细胞淋巴瘤细胞)的趋化活性.方法 体外传代培养U87、U251、T98G及U937细胞,应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)对U937细胞的趋化活性.结果 Transwell小室下孔细胞离心浓缩后白血球计数板计数;3种胶质瘤细胞株对于U937细胞趋化活性明显高于正常对照组(P＜0.05);U87对于U937细胞趋化活性明显高于U251及T98G (P＜0.05);U251及T98G对于U937细胞趋化活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)可促进U937细胞的趋化迁移,U87趋化活性更为明显.     

长链非编码RNA ATB调控miR-144对胶质瘤迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA ATB （lncRNA ATB）调控miR-144对胶质瘤迁移和侵袭的影响。方法 采用qPCR检测lncRNA ATB在胶质瘤组织和癌旁正常组织中的表达差异以及慢病毒si-ATB对胶质瘤细胞的转染效率情况;通过双荧光素酶报告基因进行检测lncRNA ATB和miR-144之间的关系;通过平板克隆实验检测lncRNA ATB对胶质瘤细胞株U87和U251增殖能力的影响;流式细胞术检测lncRNA ATB对胶质瘤细胞株凋亡行为的影响;Transwell实验检测lncRNA ATB对细胞株侵袭能力的影响;裸鼠体内实验检测lncRNA ATB对裸鼠移植瘤的体积和质量的影响情况。结果 胶质瘤lncRNA ATB的表达水平高于癌旁正常组织（P<0.05）,高水平lncRNA ATB患者的生存率低于低水平lncRNA ATB患者;使用si-ATB1和si-ATB2分别转染胶质瘤U87和U251细胞后,lncRNA ATB的表达水平降低;过表达miR-144后,野生型lncRNA ATB的荧光素酶活性受到抑制,对突变型lncRNA ATB的荧光素酶活性影响不明显。转染si-ATB 24、48和72小时后,U87[（186.4±12.4）个比（73.6±8.6）个比（62.6±5.6）个,P<0.05]和U251细胞[（192.2±15.3）个比（63.6±6.3）个比（68.3±7.6）个,P<0.05]和U251细胞的增殖能力低于对照组;lncRNA ATB的下调提高了U87和U251凋亡百分比（P<0.05）;抑制lncRNA ATB后,U87细胞和U251细胞的细胞侵袭能力降低;与对照组相比,si-ATB组肿瘤体积和肿瘤重量均小于或低于对照组（P<0.05）。结论 lncRNA ATB通过调控miR-144的表达促进胶质瘤细胞的生物学行为。     

格尔德霉素对胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响

目的：研究格尔德霉素（GDM）对肝细胞生长因子（HGF）引起的胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响。方法：选用人恶性胶质瘤细胞系U251 MG和U87 MG,应用HGF作用24 h后,分别加入不同浓度的GDM再处理48 h。MTT法检测细胞增殖及抑制,分组为：正常细胞组、HGF组、GDM组、HGF+GDM组和紫杉醇组,其中HGF为终浓度30 μg•L^-1,GDM为50、250、500与1 000 nmol•L^-1,紫杉醇为60 μg•L^-1;RT-PCR法检测HGF及c-Met基因的表达,分组如上,GDM为1　000 nmol•L^-1。结果：HGF作用U251 MG与U87 MG细胞24 h后,细胞增殖率分别为0.139±0.070与0.242±0.167,而50、250、500与1 000 nmol•L^-1 GDM对U251 MG和U87 MG生长具有抑制作用,抑制率分别为0.029±0.028、0.027±0.017、0.312 ±0.084和0.339±0.047与0.116±0.069、0.222±0.191、0.269±0.056和0.276±0.031;而紫杉醇对U251 MG和U87 MG细胞的抑制率分别为0.075±0.062与0.071±0.044;RT-PCR结果显示,HGF组HGF与c-Met表达较正常组增加（P<0.05）,而HGF+GDM组则较HGF组明显降低（P<0.05）。结论：GDM能抑制HGF诱导的胶质瘤细胞增殖,并且能从基因水平抑制其表达。     

miR-138-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨微RNA (microRNA,miR)-138-5p对胶质瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法 体外培养人胶质瘤U251细胞,采用随机数字表法将其分为对照组(n=6)、miR-NC组(n=6)、miR-138-5p组(n=6)、miR-138-5p+pc-NC组(n=6)、miR-138-5p+pc-细胞分裂周期5样(cell division cycle 5-like,CDC5L)组(n=6)。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-138-5p、CDC5L mRNA水平,检测细胞增殖活力、细胞周期和细胞凋亡以及细胞侵袭能力,检测细胞中CDC5L和侵袭相关蛋白表达。结果 miR-138-5p的过表达可下调CDC5L mRNA和蛋白水平,降低胶质瘤细胞增殖活力和侵袭能力,并诱导G2/M期细胞周期停滞,促进细胞凋亡,降低N-钙粘蛋白、波形蛋白水平,升高E-钙粘蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05);上调CDC5L表达可明显逆转过表达miR-138-5p对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响(P<0....     

miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响

  目的  探究miR-382-5p过表达对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响。  方法  将miR-382-5p mimic转染入U251细胞,逆转录-聚合酶链反应检测miR-382-5p、磷酸酶-张力蛋白同源物（PTEN） mRNA水平;生物信息学预测miR-382-5p与PTEN存在碱基结合位点,构建PTEN pcDNA载体过表达,荧光素酶报告实验检测miR-382-5p与PTEN靶向关系,将细胞随机分为4组:Control组、mimics组、pc-PTEN组和mimics+pc-PTEN组进行后续实验,逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞PTEN水平;克隆形成法检测细胞增殖;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、 Survivin、 c-Myc mRNA水平;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。  结果  miR-382-5p和PTEN存在直接靶向作用关系,与Control组相比较,mimics组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平降低（P<0.05）,PTEN mRNA水平升高（P<0.05）,细胞克隆形成率升高（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平升高（P<0.05）,c-Myc mRNA水平降低（P<0.05）,细胞侵袭数升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平升高（P<0.05）;与pc-PTEN组相比较,mimics+pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。  结论  miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调可抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、生长和上皮细胞-间充质转化。     

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响.方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况.体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响.依据细胞转染情况,分为Control组(不转染任何基因)、Mock组(转染miRNA-neg序列)和miRNA-34 a mimic组(转染miRNA-34a mimic序列).结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为(0.35±0.07),低于正常人脑组织的(1.00±0.13),差异有统计学意义(P<0.05);转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为(1.00±0.08)、(0.98±0.11)和(6.19±0.34),miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05);MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为(90.53±5.84)个、(88.21±5.04)个和(27.46±2.76)个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭.     

Influence of all-trans retinoic acid(ATRA) on the expression of NANOG in Glioma cell lines

Objective To investigate the effects of all-trans retinoic acid(ATRA) on the expression of NANOG in glioma cell lines.Methods Each cell line was divided into the experimental group which was treated with ATRA for 5 days,and the control group which was cultured normally without ATRA treatment.Immunocytochemistry and RT-PCR were adopted to detect the expression of NANOG at protein and mRNA level among the three kinds of cell lines.Results Positive rates of NANOG protein in glioma cell lines SHG-44,U87 MG and U251 in control groups were(65.5±3.0)%,(64.8±8.0)% and(64.5±1.2)%,respectively,and the difference was not statistically significant(F=0.190,P=0.829).NANOG mRNA of the three cell lines in the relative content were 0.636 8±0.039 9,0.642 1±0.063 7,0.651 6±0.044 4,and the difference was not statistically significant(F=0.427,P=0.662).However,5 days after application of ATRA-induced NANOG protein in the three cell lines,the positive rates of NANOG protein of experimental groups were(36.5±7.3)%,(35.5±7.9)%,(35.2±6.1)%,respectively,compared with the control groups,the differences were statistically significant(FSHG-44=259.1,FU87=129.5,FU251= 431.8,PSHG-44=0.0,PU87=0.0,PU251=0.0),and the relative level of NANOG mRNA in these groups were 0.458 3±0.079 1,0.255 1±0.079 3 and 0.333 1±0.054 0,respectively,compared with the control groups,the difference was significant(FSHG-44=77.8,FU87=277.9,FU251=398.1,PSHG-44=0.0,PU87=0.0,PU251=0.0).Conclusion NANOG which highly expressed in glioma cell line SHG-44,U87 MG and U251 can be reduced by ATRA.     

异丙酚抑制胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的作用机制及其对miR-134表达的影响

目的： 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤作用的可能机制。方法： 胶 质瘤 U87 细胞分为空白组、阳性对照组和异丙酚处理组(1.00、2.00、5.00 mmol/L)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力,Transwell小室检测异丙酚对U87细胞侵袭、迁移能力的影响;采用real time PCR检测细胞微RNA-134(microRNA-134,miR-134)的表达;采用蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原Ki-67、侵 袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)以及磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路相关蛋白 的表达。结果： 与空白组相比,阳性对照组和异丙酚处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki- 67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白表达,以及磷酸化 PI3K (p-PI3K)/PI3K 和磷酸化 Akt(p-Akt)/Akt 比值均显著降低(均 P< 0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。与阳性对照组和1.00 mmol/L异丙酚处理组相比,2.00和5.00 mmol/L异丙酚 处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,以及p-PI3K/PI3K和p Akt/Akt比值均显著降低(均P<0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。与2.00 mmol/L异丙酚处理组相比,5.00 mmol/L 异丙酚处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,以及p-PI3K/ PI3K和p-Akt/Akt比值均显著降低(均P<0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。结论：异丙酚能降低人胶质瘤U87细 胞增殖速度,降低 U87 细胞侵袭和迁移能力,这可能是通过上调 miR-134 表达、抑制 PI3K/Akt 信号通路激活来实 现的。     

miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3'非翻译区(3'UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3'UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。     

MicroRNA-34a inhibits human brain glioma cell growth by down-regulation of notch1

The effects of microRNA-34a (miR-34a)-regulated Notch1 gene on the proliferation and apoptosis of the human glioma cell line U87 were investigated in this study. The U87 cells were divided into miR-34a mimics, negative control, mock transfection and blank control groups in terms of different treatments. In miR-34a mimics group, human U87 glioma cells were transfected with miR-34a mimics by using lipofectamine 2000. The cells transfected with nonsense microRNA were set up as negative control group. Those treated with lipofectamine 2000 only were designated to the mock tranfection group. In the blank control group, the cells were cultured routinely and no treatment was given. The expression of miR-34a and Notch1 was detected by using real-time RT-PCR. Western blotting was employed to monitor the change in Notch1 protein. Cell proliferation and apoptosis were measured by CCK-8 and flow cytometry. The results showed that the proliferative ability of U87 cells was significantly reduced and the apoptotic cells increased in miR-34a mimics group relative to control groups. The expression of miR-34a was significantly up-regulated in mimics group as compared with control groups (P<0.05). Furthermore, Notch1 protein levels were significantly decreased in miR-34a mimics group when compared with control groups (P<0.05), but the mRNA expression of Notch1 showed no significant difference among these groups. It was concluded that miR-34a may suppress the proliferation and induce apoptosis of U87 cells by decreasing the expression of target gene Notch1, suggesting that miR-34a may become a promising gene therapeutic target for brain glioma.