下调细胞分裂周期蛋白45基因表达对宫颈鳞癌细胞发展的影响

目的 探究下调细胞分裂周期蛋白45(Cdc45)基因表达对宫颈鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 免疫组化法检测70例宫颈鳞癌患者和35例子宫脱垂患者的正常宫颈组织中Cdc45蛋白的表达,分析Cdc45蛋白表达与患者临床病理参数的关系。利用细胞转染技术下调宫颈鳞癌Hela细胞中Cdc45基因表达,采用CCK-8法、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测下调Cdc45基因表达对Hela细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。结果 宫颈鳞癌组织中Cdc45蛋白高表达率高于正常宫颈组织(χ²=7.620,P=0.006),且低分化宫颈鳞癌组织中Cdc45蛋白高表达率高于高中分化宫颈鳞癌组织(χ²=7.565,P=0.005)。与对照组比较,Cdc45-SiRNA-1组Hela细胞增殖受到抑制,迁移、侵袭能力下降(t=4.093,P=0.003;t=4.684,P=0.009;t=6.847,P=0.002)。结论 Cdc45在宫颈鳞癌组织中表达高于正常宫颈组织,其可能作为致癌基因促进宫颈鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

细胞分裂周期相关蛋白5在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)在肝细胞肝癌中的表达及临床意义.方法 取260例原发性肝细胞肝癌患者的肝细胞肝癌组织,取52例肝脏良性病变患者的正常肝组织作为对照.蛋白质印迹法(Western blot)检测CDCA5、ERK、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋...     

RNA干扰细胞分裂周期蛋白6基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其机制研究

目的 探讨RNA干扰细胞分裂周期蛋白6(CDC6)基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制.方法 采用蛋白质印迹法(Western blot)检测永生化结直肠细胞株(FHC)、结直肠癌细胞株(SW620、LOVO、HT29)中CDC6蛋白的表达情况.利用Lipofectamine 2000将CDC...     

miR-375 靶向调控YAP表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

[摘要] 目的：探讨miR-375 靶向调控Yes 相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）的表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：收集2015 年1 月至2016 年12 月河南中医药大学第二附属医院普外二科行手术切除的70 例肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者的癌组织及对应的癌旁组织标本,以及肝癌细胞系SMMC-7721、Hb611、HepG2 和BEL-7405,用qPCR 法检测HCC癌组织和肝癌细胞中miR-375 的表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-375 与YAP的相互作用;分析miR-375 和HCC患者的临床病理特征之间的关系,MTT法检测miR-375 对肝癌细胞增殖能力的影响,Transwell 小室法检测抑制miR-375 表达后HCC细胞侵袭能力的变化;Western blotting 检测HepG2 细胞中YAP的表达。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察抑制miR-375表达后移植瘤体积和质量的变化,免疫组化法和Western blotting 检测裸鼠移植瘤中YAP的表达情况。结果：HCC组织中miR-375 和YAP表达水平明显高于癌旁组织（均P<0.05）,肝癌HepG2 细胞中miR-375 的表达水平最高（P<0.05）。miR-375 能与YAP的3’UTR特异性结合,调控YAP的表达活性。抑制miR-375 的表达后,HepG2 细胞增殖、侵袭的能力显著减弱（均P<0.05）,裸鼠移植瘤体积和质量都明显减小（均P<0.05）,移植瘤组织细胞中YAP的表达水平相应下调（P<0.05）。结论：miR-375 在肝癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调控YAP的表达影响肝癌细胞的恶性生物学行为。     

siRNA靶向抑制CDCA5基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）基因表达对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的影响。方法 优化siRNA转染条件,将3条靶向抑制CDCA5基因的siRNA载体片段（序列1、2和3）分别高效转染人肝癌HepG2细胞（A、B和C组）,并设阴性对照组（NC组）及空白组。免疫印迹法检测转染72h各组CDCA5蛋白的表达水平。CCK-8法检测转染24、48、72、96、120h各组细胞的增殖能力,Annexin V-FITC／PI 双标记流式细胞术检测各组转染48h的凋亡情况。结果 A、B和C组的CDCA5蛋白水平均低于NC组和空白组（P＜0.05）,其中B组的表达率最低,抑制率最高,达89.3％,故选择序列2进行后续实验。自转染48h起,B组的相对增殖率均低于NC组和空白组（P＜0.05）;B组转染72h的相对增殖率为（66.58±2.58）％,均低于其他观察时间点（P＜0.05）。B组转染48h的早期和晚期凋亡率分别为（17.43±2.31）％和（22.37±2.21）％,均高于NC组和空白组（P＜0.05）。 结论 通过siRNA能够降低HepG2细胞的CDCA5表达水平,有效抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。     

肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

黄芪甲苷对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

目的:研究黄芪甲苷对肝癌细胞系MHCC97-H增殖和侵袭能力的影响。方法:MTT法检测5、10、20、40、80、100μg/ml不同终浓度和24、48、72h作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖的影响。Tran-swell侵袭实验检测100μg/ml黄芪甲苷处理48小时对MHCC97-H细胞侵袭能力的影响。选择100μg/ml黄芪甲苷处理48小时作为处理条件,实时定量PCR、Westernblot检测黄芪甲苷处理后MHCC97-H细胞MMP-2、9mRNA和蛋白质表达水平的变化,明胶酶谱法检测黄芪甲苷处理后MHCC97-H细胞培养上清中MMP-2、9分泌水平的变化。结果:各浓度和作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖均无明显抑制作用。100μg/ml黄芪甲苷处理48小时后,MHCC97-H细胞侵袭能力降低,MMP-2、9分子mRNA和蛋白质表达水平均下降,且细胞培养上清中分泌的MMP-2、9减少。结论:体外黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖无明显抑制作用,但黄芪甲苷可以通过降低MHCC97-H细胞MMP-2、9分子的表达起到降低其细胞侵袭能力的作用。     

YAP蛋白在结肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究YAP蛋白在结肠癌中的表达及临床意义, 并初步探讨其对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:免疫组化检测YAP蛋白在25例结肠癌组织及配对正常组织中的表达,并分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系;用Real-Time PCR和 Western blot验证YAP-shRNA慢病毒载体转染效率;生长曲线实验和MTT法检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480增殖的影响;Transwell实验检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480侵袭的影响;Western blot检测下调YAP表达对CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的影响。结果:YAP在结肠癌组织中的表达显著高于正常结肠组织（P＜0.05）,并且与淋巴结转移密切相关(P＜0.05);转染YAP-shRNA慢病毒载体的SW480细胞YAP的表达在mRNA 和蛋白水平明显降低（均P＜0.05）;下调YAP表达后结肠癌细胞增殖及侵袭明显减弱（均P＜0.05）;下调YAP 表达可抑制结肠癌细胞CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的表达（均P＜0.05）。结论:YAP在结肠癌组织中高表达,且与淋巴结转移相关,下调YAP表达可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭能力,预示YAP在结肠癌恶性进展中具有重要的作用。     

细胞分裂周期蛋白42在肿瘤中的作用及其分子机制研究进展

细胞分裂周期蛋白42（CDC42）是小G蛋白Rho家族的核心成员,在与GTP结合/活化状态和与GDP结合/失活状态之间循环切换,在复杂的细胞信号转导网络中,发挥开关作用,调控细胞的微丝骨架结构,与细胞的生长、迁移和黏附等重要生物学行为事件关系密切。已有研究发现,CDC42在肺癌、结直肠癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤中明显上调表达,与肿瘤细胞的恶性演进密切相关,是肿瘤治疗的潜在靶点。围绕着CDC42在肿瘤细胞的分裂增殖、侵袭迁移,以及代谢中的作用及其分子机制,近年来取得了许多新的研究进展,是肿瘤学的热点研究领域之一,对此本文进行了系统综述。     

miR-122在肝癌细胞中的表达及其与细胞周期调控的关系

目的 探讨miR-122在肝癌细胞中的表达及其与细胞周期调控间的关系。方法 应用荧光定量PCR和原位杂交法分别检测50例肝癌及相应癌旁组织中miR-122的表达水平;用流式细胞术检测肝癌细胞的细胞周期;分析miR-122的表达水平与细胞周期的关系。结果 50例肝癌组织中miR-122的相对表达量为癌旁正常组织的（17.74±9.20）％。其中,40例高中分化肝癌组织中miR-122的相对表达量为癌旁组织的（19.89±8.80）％,而在10例低分化肝癌中仅为癌旁组织的（9.16±4.77）％。肝癌组织中miR-122的阳性表达率为30.0％（15／50）,癌旁组织为80.0％（40／50）,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。与癌旁组织相比,肝癌细胞G1／G0期比例降低（P＜0.05）,S期比例增加;与miR-122阳性表达组比较,miR-122阴性表达组的肝癌细胞S期比例增加,而G1／G0期细胞比例降低（P＜0.05）。结论 miR-122在肝癌组织中低表达,且表达水平随着肿瘤分化程度的降低而下调,这种改变促进肝癌细胞的分裂和增殖。     

ACCα在肝细胞癌中的表达及对细胞生长的影响

目的  探讨乙酰辅酶A羧化酶α（acetyl CoA carboxylase alpha，ACCα）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma ，HCC）中的表达及其在HCC细胞生长中的调控作用。 方法 采用qRT-PCR及Western blot法检测30例HCC患者癌组织及其相应癌旁正常组织中ACCα mRNA与蛋白的表达。采用siRNA下调HCC SNU-368细胞中ACCα的表达后，采用MTS法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。结果 qRT-PCR及Western blot结果显示，HCC组织中ACCα mRNA与蛋白表达水平均显著高于癌旁正常组织（3.26±0.81 vs 1.88±0.64，P=0.021；3.41±0.71 vs 1.74±0.54，P=0.019）。下调ACCα表达后，HCC SNU-368细胞的增殖能力降低（P<0.01），细胞周期进程被抑制（P<0.05），细胞凋亡比例增多（P<0.01）。 结论 HCC细胞SNU-368中ACCα表达显著上调，可能通过诱导细胞周期进程并抑制细胞凋亡促进HCC细胞增殖，ACCα可作为HCC治疗的潜在靶点。     

FOXK1对肝癌高转移细胞系Huh7侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子1(FOXK1)对肝癌高转移细胞Huh7侵袭和迁移能力的影响。方法 采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测40例肝癌组织及其癌旁正常组织FOXK1 mRNA的表达,qRT-PCR和Western blot检测正常肝细胞HL7702、肝癌细胞BEL7402和肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白的表达。小RNA干扰技术下调FOXK1表达后,qRT-PCR和Western blot检测肝癌高转移细胞Huh7 FOXK1 mRNA和蛋白的表达,Transwell实验检测其侵袭和迁移能力。 结果 qRT-PCR检测结果显示,肝癌组织中FOXK1 mRNA的表达高于癌旁正常组织(2.87±0.21 vs 1.35±0.11,P=0.004);qRT-PCR和Western blot检测结果显示,相比正常肝细胞HL7702,肝癌细胞BEL7402和肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.001)。下调FOXK1表达后,肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01),侵袭和迁移细胞数目明显减少(P<0.01)。结论 下调FOXK1表达能抑制肝癌高转移细胞Huh7侵袭和迁移能力。     

反义survivin-脂质体复合物对肝癌细胞生长凋亡和细胞周期的影响

目的探讨反义survivin-脂质体复合物（survivin-ASODN）对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用及其机制,为肝癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法用脂质体介导survivin-ASODN转染肝癌细胞系HepG2细胞;通过RT-PCR和Western blot检测survivin表达水平;以MTT法测量细胞生长情况;以流式细胞术测定caspase-3活性及凋亡率,电镜观察细胞形态学变化,并应用流式细胞仪同步分析survivin-ASODN对肝癌细胞系HepG2增殖周期的影响。结果surviving-ASODN可有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,其IC50值为250nmol／L,最大效应浓度为600nmol／L;可抑制细胞生长,激活caspase-3活性,诱导细胞凋亡,使其出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。细胞周期的同步分析显示,surviving-ASODN对HepG2细胞增殖周期有明显影响,HepG2先出现细胞周期阻滞,紧接着出现细胞凋亡;低浓度处理后,可将细胞先后阻滞在S期和G2／M期;高浓度时,S期阻滞被加强,可快速诱导细胞凋亡,并且,细胞凋亡率随着药物浓度的增加和作用时间的延长明显上升。结论surviving-ASODN对肝癌细胞有强的生长抑制效应,其机制是与阻断细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

N-Myc down-regulated gene 1 mediates proliferation, invasion, and apoptosis of hepatocellular carcinoma cells

The over-expression of N-myc down-regulated gene 1 (NDRG1) in hepatocellular carcinoma (HCC) was previously reported to correlate with vascular invasion and patient survival. Our current study aims to elucidate its functions in HCC. We found that it lacked the tumorigenic ability to promote soft agar colony formation or serum-independent growth of NIH3T3 cells. We used specific small interfering RNA (siRNA) oligos to suppress the expression of NDRG1 in human HCC (Hep3B and HepG2) cell lines, and found that this significantly reduced cell proliferation and invasion, and induced apoptosis. Additionally, NDRG1-specific siRNA inhibited the HepG2 xenograft growth in nude mice. These results are consistent with our earlier clinical observations that NDRG1 is associated with more aggressive tumor behavior, and suggest that NDRG1 may be a potential therapeutic target for HCC.     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.     

CDCA7通过与MCM3相互作用介导胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨细胞分裂周期相关蛋白7(cell division cycle-associated protein 7,CDCA7)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,及其可能的作用机制.方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达谱数据动态分析(Gene Expre...     

MARK2在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移的影响

背景与目的：肝细胞癌是我国常见恶性肿瘤之一,其发生机制目前尚未明确。该研究旨在探讨微管亲和性调节激酶2（microtubule affinity-regulating kinase 2,MARK2）在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移能力的影响。方法：通过组织芯片和免疫组织化学法对肝癌组织中MARK2的表达进行分析;将MARK2基因真核表达载体及其空载体转染至肝癌HepG2细胞中,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测转染后MARK2蛋白表达水平;采用Transwell实验及细胞划痕实验检测MARK2对HepG2细胞迁移能力的影响;通过癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas,TCGA）分析MARK2在肝癌组织和正常组织中的表达差异,及其与肝癌患者临床病理特征的关系;运用网络在线生存期分析软件Kaplan-Meier plotter分析MARK2表达与肝癌患者生存预后的关系。结果：MARK2在肝癌组织中表达明显高于癌旁组织,肝癌组织中MARK2高表达与TNM分期及病理分级显著相关（P<0.001）;生存分析结果表明,MARK2高表达患者5年生存率明显低于MARK2低表达组（P<0.01）;将MARK2基因真核表达载体转染肝癌HepG2细胞后,MARK2蛋白表达上调,肝癌细胞的迁移能力增强。结论：MARK2在肝癌组织中高表达,并促进肝癌细胞的迁移。