MiR-26b增强顺铂对宫颈癌细胞株Hela的杀伤活性

目的:研究microRNA-26b(miR-26b)是否能增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性及机制。方法:用荧光定量PCR方法检测人正常宫颈上皮细胞系CRL-2614及宫颈癌细胞系Hela、SiHa和C-33a miR-26b的表达水平。MTT法检测顺铂单独治疗及联合miR-26b治疗对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学及western blot方法验证miR-26b是否调节Hela细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-26b联合顺铂杀伤Hela细胞疗效的影响。结果:宫颈癌细胞系Hela(0.21±0.04)、SiHa(0.42±0.03)和C-33a(0.33±0.03)的miR-26b的相对表达水平显著低于正常宫颈上皮细胞系CRL-2614 (1.00±0.05)。miR-26b联合1mmol/L顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性(细胞活力抑制率为52.6±6.9)显著高于1mmol/L顺铂单治疗组(细胞活力抑制率为6.7±3.5)。miR-26b转染后,Hela细胞Mcl-1的蛋白表达水平下降。miR-26b联合1mmol/L顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性(细胞活力抑制率为19.6±6.7)显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-26b联合1mmol/L顺铂组(细胞活力抑制率为55.7±7.6)。结论:MiR-26b通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。     

维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

维生素C增加入宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用，流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长，将肿瘤细胞阻滞在G0／G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用，细胞生长抑制率显著提高，凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

内源性NO在人宫颈癌Hela细胞株合成对顺铂敏感性的影响

目的通过细胞因子γ-干扰素（INF-γ）诱导内源性一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的产生,探讨其对人宫颈癌Hela细胞株顺铂（DDP）敏感性的影响。方法用NO测试盒检测一定浓度的INF-γ处理人宫颈癌Hela细胞在不同时间NO的产生量及一定作用时间下不同浓度的INF-γ处理Hela细胞NO的产生量;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测经一定浓度及一定时间INF-γ处理后的人宫颈癌Hela细胞在不同浓度顺铂作用后的生存率;分别加入一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase,NOS）的抑制剂NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）及NO的合成原料L-精氨酸（L-arginine,L-Arg）再次以MTT法检测Hela细胞生存率的变化。结果体外培养的Hela细胞在经INF-γ作用后第8小时NO生成量达高峰,随后呈下降趋势,而不加INF-γ的空白对照组,Hela细胞NO的生成量无明显变化（P〈0.05）;Hela细胞NO的生成量与INF-γ的浓度之间有一定的依赖性。采取MTT法检测：经1nMINF-γ作用8 h的实验组Hela细胞与不加INF-γ的对照组相比,低浓度DDP作用时前者Hela细胞生存率显著下降（P〈0.05）,但随DDP浓度升高后两组的生存率无显著差异;经1nMINF-γ处理8 h的Hela细胞加入L-NMMA组Hela细胞在DDP作用后的生存率显著提高（P〈0.05）,而加入L-Arg组结果则与之相反。结论人宫颈癌Hela细胞在一定剂量、一定时间INF-γ的作用下,能够诱导iNOS产生内源性NO,且NO产生的量与INF-γ存在时间、剂量依赖关系;经INF-γ诱导产生的内源性NO可提高人宫颈癌Hela细胞株对DDP的敏感性。     

影响人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用

探讨叉头盒蛋白M1（FOXM1）对人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用。方法 将含有正义FOXM1 互补的脱氧核糖核酸（cDNA）的真核表达载体、空质粒的真核表达载体采用脂质体转染法转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为过表达组、过表达对照组;另构建干扰FOXM1基因表达的重组载体、空载载体,利用脂质体介导将其转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为沉默组、沉默对照组;并设置空白组、抑制剂组。上述每组5个复孔,均加入顺铂,抑制剂组另加入硫链丝菌肽,培养48 h。实时逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测各组FOXM1 信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表达;倒置显微镜观察细胞形态学改变;噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪双染法检测各组细胞凋亡率;RT-qPCR、Western Blot检测各组细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）、细胞分裂周期因子25B（CDC25B）、存活蛋白（Survivin）、p21 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,沉默组和抑制剂组FOXM1、Cyclin B1、CDC25B、Survivin mRNA及蛋白表达均下降（P＜0.05）,过表达组上述指标均升高（P＜0.05）;与空白组比较,沉默组和抑制剂组增殖抑制率、凋亡率、p21 mRNA及蛋白表达均升高（P＜0.05）,过表达组上述指标均下降（P＜0.05）;空白组、沉默对照组、过表达对照组细胞连接紧密、形态均匀、轮廓清楚,过表达组细胞连接致密,沉默组和抑制剂组细胞减少,轮廓不清、形态不均、大小不一,且可见细胞皱缩及细胞碎片。结论 FOXM1表达下调可增加人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性,FOXM1表达上调则可降低其化疗敏感性,推测与正反馈调节Cyclin B1、CDC25B、Survivin表达,负反馈调节p21表达有关。     

低频超声联合微泡增强宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 研究低频率、低声压超声激励微泡增强顺铂对宫颈癌Hela细胞的杀伤作用.方法 实验分为对照组(C组),顺铂组(P组),顺铂联合超声组(PU组),超声微泡组(UM组),超声微泡联合顺铂组(PUM组).采用频率1MHz、声压400 kPa的非聚焦超声联合脂质微泡及顺铂,按照分组处理对数期生长的宫颈癌Hela细胞.Hoechst33342染色后通过荧光显微镜观察并计算各组细胞的凋亡率;采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测处理后各组细胞的增殖活性;对各组细胞行Annexin V-FITC/PI双染色后,运用流式细胞仪检测各组处理后24 h细胞凋亡情况.结果 测定Hela细胞对顺铂的敏感性,顺铂的IC50为4.882 μg/mL.通过流式细胞仪检测到超声微泡顺铂组(PUM)的细胞凋亡率为58.1％,较顺铂联合超声组(PU)增高40％,明显高于其余各组,组间差异有统计学意义(P＜0.05);CCK-8检测结果显示PUM组较其余各组细胞生长明显受到抑制;Hoechst33342染色后,PUM组典型凋亡细胞明显多于其余各组.结论 低频率低声压超声联合微泡可以增强顺铂对宫颈癌Hela细胞的杀伤作用,明显抑制Hela细胞生长,促进其凋亡.     

NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 用含NS-398和顺铂的细胞培养液作用于Hela细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测作用后的Hela细胞对顺铂敏感性的变化;采用流式细胞仪分别检测经过NS-398和顺铂作用的细胞与顺铂联合单独作用的细胞的COX-2蛋白表达情况.结果 NS-398和顺铂联合作用后的Hela细胞COX-2表达量较顺铂单独作用后的减少,差异有统计学意义（P〈0.05）;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量（IC50值）从（10.475±1.713）μg/ml提高到（0.194±0.021）μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍.结论 NS-398能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性.     

PTEN影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:通过转染PTEN基因表达载体,提高宫颈癌Hela细胞中PTEN的表达水平,观察能否影响Hela细胞对顺铂的敏感性,并探讨其分子学机制.方法:将培养的宫颈癌Hela细胞分为空白对照(未转染质粒的Hela细胞)、质粒对照(转染空质粒的Hela细胞)和PTEN转染(转染PTEN表达载体的Hela细胞)3组.分别用RT-PCR和Western检测各组Hela细胞中PTEN的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测各组Hela细胞对顺铂的化学敏感性;RT-PCR检测各组Hela细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达水平.结果:PTEN转染组Hela细胞中PTEN的表达水平比另2组细胞显著增高(P＜0.01);经顺铂处理后,PTEN转染组Hela细胞生长抑制率比其它2组显著增高(P＜0.01),PTEN转染组Hela细胞中PI3K被显著抑制(P＜0.01).结论:PTEN能增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,它可能通过下调Hela细胞中PI3K而导致Hela细胞对顺铂耐药性下降.     

青蒿琥酯增强顺铂对前列腺癌细胞杀伤活性及作用机制研究

目的观察体外联用青蒿琥酯对顺铂抗前列腺癌活性的影响并研究其机制。方法人前列腺癌细胞系LNCaP分为对照组、青蒿琥酯组、顺铂组、顺铂+青蒿琥酯组、顺铂+青蒿琥酯+MET质粒组。采用噻唑蓝(MTT)法检测前列腺癌细胞系LNCaP的细胞活力抑制率;流式细胞术检测LNCaP细胞的凋亡;Western blot实验检测LNCaP细胞Met表达水平,AKT和Bad磷酸化水平,caspase-9和caspase-3活化水平;免疫共沉淀法检测Bad与Bcl-xl及Bcl-2相互作用。结果顺铂+青蒿琥酯组LNCaP细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%均高于顺铂单处理组的细胞活力抑制率(14.7±1.1)%和凋亡率(12.5±1.0)%(P均0.05)。顺铂+青蒿琥酯组LNCaP细胞Met表达水平,AKT和Bad磷酸化水平均低于顺铂组,而顺铂+青蒿琥酯组LNCaP细胞Bad与Bcl-xl及Bcl-2结合水平,caspase-9和caspase-3活化水平均高于顺铂组(P均0.05)。青蒿琥酯发挥对顺铂的辅助治疗作用依赖于Met的抑制,顺铂+青蒿琥酯+Met质粒组LNCaP的细胞活力抑制率(20.3±1.4)%和凋亡率(15.5±1.2)%均低于顺铂+青蒿琥酯组的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%(P均0.05)。结论青蒿琥酯可能通过Met/AKT/Bad途径增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性。     

藏红花素对人宫颈癌Hela细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨藏红花素对人宫颈癌Hela细胞顺铂耐药性的影响.方法 将对数生长期耐顺铂人宫颈癌Hela/DDP细胞随机分为空白对照组、藏红花素组、顺铂组及联合组.藏红花素组细胞以含终质量浓度400 mg·L-1藏红花素的培养基培养,顺铂组细胞以含终质量浓度5 mg·L-1顺铂的培养基培养,联合组细胞以含终质量浓度400 m...     

中药活性成分青蒿琥酯增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性及机制研究

目的 探讨体外联用青蒿琥酯对顺铂抗前列腺癌活性的影响并研究其机制。方法: 前列腺癌细胞系LNCaP的细胞活力抑制率用噻唑蓝(MTT)法进行检测。LNCaP细胞的凋亡用流式细胞术进行检测。LNCaP细胞中Met的表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平,caspase-9和caspase-3的活化水平用western blot实验进行检测。Bad与Bcl-xl及Bcl-2的相互作用用免疫共沉淀法进行检测。结果: 青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%均显著高于顺铂单处理组的细胞活力抑制率(14.7±1.1)%(P<0.05)和凋亡率(12.5±1.0)%(P<0.05)。青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Met表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平均低于顺铂组,而青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Bad与Bcl-xl及Bcl-2的结合水平,caspase-9和caspase-3的活化水平均均高于顺铂组。青蒿琥酯发挥对顺铂的辅助治疗作用依赖于Met的抑制,青蒿琥酯+顺铂+Met质粒组LNCaP的细胞活力抑制率(20.3±1.4)%和凋亡率(15.5±1.2)%均显著低于顺铂+顺铂组的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%(P<0.05)和凋亡率(34.8±2.9)%(P<0.05)。结论: 青蒿琥酯通过Met/AKT/Bad途径增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性。     

白藜芦醇对宫颈癌细胞株Hela增殖的影响

目的研究白藜芦醇诱导宫颈癌细胞株Hela的细胞生长和发育的改变,细胞周期的进行和凋亡等。方法MTT法测定白藜芦醇对Hela细胞的作用。3H-TdR掺入法检测白藜芦醇对Hela细胞DNA合成的影响。流式细胞术分析细胞周期。结果白藜芦醇作用后,Hela细胞的增殖速度减缓,DNA合成减少。白藜芦醇在较低浓度时即可诱导较快的可逆的S期停滞。结论合适浓度的白藜芦醇可有效预防早期肿瘤,但不至于引起细胞毒作用和细胞死亡。     

顺铂对人宫颈癌Hela细胞超弱发光影响的观察

目的：探讨人宫颈癌Hela细胞株经顺铂（DDP）作用后其超弱发光与细胞增殖活性变化的关系．方法：选择DDP诱导人宫颈癌Hela细胞株,比较人宫颈癌Hela,Hela＋DDP细胞株形态变化．MTT比色法、流式细胞仪检测细胞生长周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测Hela,Hela＋DDP细胞的超弱发光强度变化．结果：DDP对Hela细胞有生长抑制作用,并呈时间和浓度依赖性,其48h的Ic5。值为3mg,／L,当DDP浓度在3mg／L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系（P〈0．01）．流式细胞仪结果表明,与Hela细胞相比较,Hela＋DDP细胞G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少（P〈0．01）;细胞凋亡率在24,48,72h分别为（11．4±5．8）％,（21．8±7．9）％,32．5±11．6）％．在1×10^-4mol／L鲁米诺及3mL／L双氧水（H2O2）条件下超弱发光强度随着时间的变化,Hela＋DDP细胞明显降低（P〈0．01）．结论：在DDP非毒性剂量作用后,Hela＋DDP细胞超弱发光强度降低,提示超弱发光检测可能作为筛选敏感化疗药物的一项指标．     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡与自噬的研究

目的 探讨顺铂对Hela细胞凋亡和自噬的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察顺铂对HeLa细胞生长抑制情况;Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡;间接免疫荧光法检测自噬标志蛋白LC3和P62的变化;免疫印记法检测细胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-3和自噬标志蛋白LC3和P62的变化.结果 顺铂对Hela细胞生长抑制作用表现为时间剂量依赖关系;顺铂作用Hela细胞导致Bax/Bcl-2比值和Caspase-3表达增加,同时自噬标志蛋白LC3和P62活化.结论 顺铂诱导Hela细胞发生凋亡,伴有自噬发生.     

TRAIL联合顺铂体外杀伤前列腺癌PC-3细胞株的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物顺铂(DDP)对前列腺癌PC-3细胞株的体外杀伤作用. 方法 分别采用不同浓度的DDP(1.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml)与TRAIL(10.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml、200.0ng/ml)作用PC-3细胞株,24h后MTT法检测细胞的吸光度;DDP(5.0ng/m1)与TRAIL(50.0ng/ml)联合作用PC-3细胞4h、8h、12h、16h、20h、24h后,MTT法检测检测细胞的吸光度;并按细胞的抑制率(100%)=(1-实验组吸光度/阳性对照组吸光度)×100%计算DDP组、TRAIL组及两者联合应用对细胞的抑制率,比较组间细胞抑制率的差异. 结果 单独应用DDP或者TRAIL对PC-3细胞体外杀伤作用有浓度依赖性,浓度增高一定程度时对PC-3细胞的抑制作用会处于一个相对平台期;联合应用DDP+TRAIL组与单独应用同浓度的DDP及TRAIL组相比,其对PC-3细胞的体外杀伤作用明显增强,P<0.05,差异具有显著性意义;联合应用DDP与TRAIL对PC-3细胞的体外杀伤作用具有明显的时间依赖性. 结论 DDP能明显提高TRAIL对前列腺痛PC-3细胞株的杀伤作用,其机制与死亡受体DR5的表达上调有关.     

顺铂对肝癌细胞杀伤效应的研究

目的：探讨顺铂（ＣＤＤＰ）对Hca-F细胞的生长抑制及其导凋亡的作用。方法：采用MTT,Hoechst33342和PI荧光染色,流式细胞术分析法。结果：CDDDP对Hca-F细胞有明显的细胞毒性,其IC50值为0．57μg/ml,且诱导细胞凋亡贯穿全程并呈逐渐增强趋势。结论：顺铂能明显抑制癌细胞的生长;诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的主要机制之一。     

顺铂对结直肠癌肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的影响

以结直肠癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）和顺铂（ＣＤＤＰ）为研究对象，旨在为临床选择有效的免疫化疗方案提供一定的理论依据。在８名手术治疗结直肠癌患者，分别观察ＣＤＤＰ体内注射及体外预处理ＴＩＬ和Ｒａｊｉ细胞对ＴＩＬ表面标志和杀伤活性的影响。流式细胞仪检测结果显示静脉注射ＣＤＤＰ能增加结直肠癌ＴＩＬ中ＣＤ３＋／ＣＤ４＋和ＣＤ３＋／ＣＤ８＋细胞含量，同时增强ＴＩＬ体外杀伤Ｒａｊｉ细胞的活性；而体外以ＣＤＤＰ处理Ｒａｊｉ细胞能增强其对结直肠癌ＴＩＬ杀伤的敏感性。提示有必要进一步研究联合应用ＴＩＬ和ＣＤＤＰ治疗结直肠癌的临床效果     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对COX-2的反义寡核苷酸,并转染宫颈癌Hela细胞,应用细胞蛋白印记法(West-blot)测定转染COX-2反义寡核苷酸后Hela细胞COX-2基因蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测(MTT)COX-2反义寡核苷酸转染后Hela细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对COX-2的反义寡核苷酸后,在24、48和72h,Hela细胞COX-2蛋白的表达水平下降;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论COX-2反义寡核苷酸能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性。     

MG132联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的影响。方法:建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,将荷瘤鼠分成4组,每组5只,分别给予腹腔注射。对照组:生理盐水0.2 ml,1次.d-1,共7 d。MG132组:5 mg.kg-1MG132,0.2 ml,1次.d-1,共7 d。顺铂组:3 mg.kg-1顺铂,0.2 ml,第3、5、7天,1次.d-1。MG132联合顺铂组:5 mg.kg-1MG132,0.2 ml,1次.d-1,共7 d;3 mg.kg-1顺铂,0.2 ml,第3、5、7天,1次.d-1。计算瘤体积,绘制瘤体生长曲线;称瘤重,计算抑瘤率及瘤体抑制率,比较各组荷瘤鼠瘤体积和瘤重的差异。结果:各组荷瘤鼠瘤体积两两比较差异均有统计学意义(P<0.001),MG132组、顺铂组以及MG132联合顺铂组的瘤体生长较对照组明显缓慢。荷瘤鼠瘤重各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.001),各干预组的荷瘤鼠瘤重比对照组明显减轻。MG132组、顺铂组、MG132联合顺铂组荷瘤鼠抑瘤率分别为15%、48%和81%;MG132组、顺铂组、MG132联合顺铂组荷瘤鼠瘤重抑制率分别为9%、43%和69%。结论:MG132能抑制裸鼠体内Hela细胞移植瘤的生长,并增强顺铂对裸鼠Hela细胞移植瘤生长的抑制作用。