P53、P21^WAF/CIP1和Cyclin D1基因蛋白在沥青烟暴露小鼠肺组织中的表达

[目的]探讨沥青烟对小鼠肺组织形态及基因蛋白P53、P21^WAF/CIP1和Cyclin D1表达的影响。[方法]建立沥青烟亚急性染毒小鼠模型，将120只昆明种健康小鼠随机分为3组，即1个对照组和2个染毒组，染毒组进行不同浓度（55、165mg,／m^3）和不同时间（30、60d）染毒，光镜下观察肺组织形态改变，采用免疫组化S-P法，对P53、P21、Cyclin D1染色，观察P53、P21和Cyclin D1基因蛋白表达。[结果]不同浓度、不同时间染毒小鼠肺组织形态有不同程度改变，高浓度染毒组出现不典型增生。小鼠肺组织P53基因蛋白表现为低浓度染毒30d组，未见阳性表达；高浓度染毒60d组呈强阳性表达（P〈0．01）。P21^WAF/CIP1基因蛋白表达低浓度染毒30d呈阳性表达；高浓度染毒60d组表达明显下调（P〈0．01）。Cyclin D1基因蛋白表达同P53基因蛋白表达。[结论]随着染毒浓度和染毒时间的增加，肺组织增生逐渐明显，P53和Cyclin D1基因蛋白的表达呈上升趋势，P21^WAF/CIP1呈下降趋势。     

结缔组织生长因子对肾性高血压大鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的从分子水平探讨结缔组织生长因子（CTGF）在肾血管性高血压大鼠左心室重构发生、发展中的作用。方法构建肾血管性高血压大鼠（RHR）模型，并以假手术实验大鼠（SOR）为对照，运用免疫组化法对CTGF、TGF-β1在左室心肌的分布及表达进行半定量分析；用RT-PCR法检测心肌组织CTGF mRNA、TGF-β1mRNA；并观察左室心肌胶原形态，检测胶原容积分数、血清I型前胶原羧基端前肽和胶原浓度。结果在同周龄RHR组CVF、PJP、Coll明显高于SOR组（P〈0．01）；在同周龄RHR组左室心肌中的CTGF、TGFβ1表达和CTGF mRNA、TGFβ1mRNA较SOR组明显增强（P〈0．05）；在RHR和SOR组左室心肌中的cTGF、TGF-β1表达12周大鼠明显高于6周大鼠（P〈0．05）；相关分析表明，CTGF与CTGF mRNA（r=0．815，P〈0．01）、TGF-β1（，=0．626，P〈O．05）、CVF（r=0．742，P〈0．01）、Coll（r=0．793，P〈0．01）、PICP（r=0．675，P〈0．01）均呈正相关。结论CTGF参与了肾血管性高血压大鼠心肌纤维化的形成。     

槐杞黄对IgA肾病大鼠蛋白尿及肾组织nephrin及podocin的影响

目的观察槐杞黄对IgA肾病（IgAnephropathy,IgAN）大鼠蛋白尿及肾组织nephrin及podocin的影响,探讨槐杞黄对IgA肾病大鼠蛋白尿的治疗作用及其机制。方法将24只雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、槐杞黄组,每组8只。模型组和槐杞黄组建立1gA肾病模型,槐杞黄组给予槐杞黄颗粒治疗。应用定量尿沉渣计数法检测尿红细胞个数,考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血生化指标。应用直接免疫荧光法检测肾小球IgA沉积强度,间接免疫荧光法检测肾小球nephrin及podocin蛋白的表达及分布,采用实时荧光定量PCR技术检测肾皮质nephrinmRNA和podocinmRNA的表达。结果①槐杞黄组大鼠的尿红细胞计数、尿蛋白,较模型组显著减少,差异有显著意义（P〈0．05）;②槐杞黄组大鼠肾组织病变,较模型组减轻;③槐杞黄组大鼠肾小球nephrin表达量,较模型组显著升高,差异有显著意义（P〈0．01）,podocin表达量较模型组稍有下降,但差异无显著意义（P〉0．05）;槐杞黄组大鼠肾皮质nephrinmRNA及podocinmRNA的表达,较模型组显著升高,差异有显著意义（P〈0．01）;④槐杞黄组大鼠肾小球nephrin及podocin的不连续斑片状、团块状异常分布,较模型组改善。结论IgA肾病大鼠肾组织nephrin及podocin出现表达变化及分布异常,槐杞黄能降低IgAN大鼠尿蛋白,其作用可能与调节nephrin及podocin的表达及分布有关。     

健脾益肾方对5／6肾切除大鼠肾组织纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨健脾益肾方治疗慢性肾衰竭（CRF）及其抗肾纤维化的作用机制。方法将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组（N组）、模型组（M组）、低剂量治疗组（L组）、高剂量治疗组（H组）,除N组外均行5／6肾切除手术制作CRF动物模型。于造模后一周开始干预,干预8周后取血清及肾组织标本,检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及肾组织纤维连接蛋白（FN）的表达。结果N组肾小管间质区、上皮细胞基底膜、血管平滑肌区轻微表达;M组肾小管间质及小管均有强表达,肾小球系膜区有表达,与N组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;L组及H组肾小管间质及小管中等强度表达,与N组相比表达显著增多（P〈0．01）,与M组相比表达显著降低（P〈0．01）;H组与L组相比表达减少（P〈0．05）。结论健脾益肾方可以降低CRF大鼠血清BUN和Cr,抑制肾脏组织FN的表达,表明健脾益肾方是治疗CRF的有效方剂,其机制可能与抑制大鼠肾组织内FN表达,从而延缓肾纤维化有关。     

双重血流同时开放对大鼠肝移植胆管TNF-α表达的影响

目的探讨门静脉、肝动脉双重血流同时开放对大鼠肝移植胆道缺血／再灌注（I／R）损伤中的TNF-α表达的影响。方法选用雄性SD大鼠建立大鼠自体原位肝移植模型，随机分为双重血流同时开放组（P组）、门静脉先开放组（N组）和假手术对照组（S组）。供肝再灌注后检测血清ALT、AST、GGT、AKP、TBiL及DBiL水平，比色法测定髓过氧化物酶（MPO）含量，RT-PCR法检测胆管组织TNF-α mRNA表达。结果肝脏再灌注后6h及24h两个时点P组的GGT水平明显低于N组水平（P〈0.05）；肝脏再灌注后24h，P组的AKP、TBiL、DBiL水平及胆管损伤病理学评分明显低于N组水平（P〈0．05）；再灌注后6h，N组大鼠肝组织的MPO含量明显高于P组（P〈0．05）；供肝再灌注后2h、6h，P组大鼠肝组织TNF-α mRNA的相对表达水平明显低于N组（P〈0．05）。结论门静脉、肝动脉双重血流同时开放，有利于减轻肝移植物胆管组织的I／R损伤；其机制可能与TNF-α表达水平的降低以及中性粒细胞（PMN）浸润的减少有关。     

整合素αvβ3在IgA肾病肾组织中的表达和意义

目的探讨整合素αvβ3在IgA肾病（IgAN）患者肾组织中表达及其,临床意义。方法免疫组化法检测53例IgAN患者肾组织整合素αvβ3、纤维连接蛋白（Fn）和结缔组织生长因子（CTGF）的表达,并与病理和临床指标进行相关性分析。结果αvβ3表达：随病变程度加重,肾小球毛细血管袢表达逐渐增强,并在系膜细胞,上皮细胞,部分肾小球新月体表达;Ⅰ-Ⅳ级病变肾小球αvβ3表达的阳性率分别为（16．18±0．98,19．58±0．99,28．35±1．99,17．72±2．17）％,Ⅲ级达峰值,Ⅳ级反而降低（P〈0．05）;表达强度与血IgA水平呈正相关（r=0．52～0．79,P〈0．05）。Ⅰ-Ⅲ级病变时,肾小球内αvβ3与尿蛋白、肾小球硬化率、肾间质CTGF及小球内Fn表达呈正相关（P均〈0．05）。纤维蛋白相关抗原（FRA）阳性、IgA或Fn毛细血管袢和系膜区沉积组肾小球内αvβ3表达高于、eGFR低于单纯系膜区沉积组（P均〈0．05）。结论整合素αvβ3与IgAN细胞外基质的异常沉积和肾小球硬化有关,其高表达可能示预后不良。     

促肝纤维化因子在水砷暴露小鼠肝组织中表达

目的探讨促肝纤维化因子基质金属蛋白酶-8（MMP-8）、基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）和Ⅰ、Ⅲ型胶原（Col—Ⅰ、Col-Ⅲ）在水砷暴露小鼠肝组织中的表达及其意义。方法50只雄性小鼠被随机分成对照组、亚砷酸钠组和砷酸钠组。亚砷酸钠组和砷酸钠组给予普通饲料和砷溶液。10个月后处死小鼠。血清进行肝功能检测；苏木素-伊红（HE）染色部分肝组织；Trizol-酚-氯仿一步法提取小鼠肝组织总RNA。紫外分光光度法测定总RNA浓度及纯度，实时荧光定量PCR法测肝组织中MMP-8、MMP-2、Col—Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA的表达。以18S基因作为质控。结果亚砷酸钠组、砷酸钠组血清丙氨酸转氨酶（Ju汀）、天冬氨酸转氨酶（AST）、球蛋白（GLB）值均高于对照组；肝组织病理检查显示有明显的肝细胞坏死、再生和少许纤维化；与对照组比较，亚砷酸钠组肝组织Col—Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA表达的差异均有统计学意义（tCol—Ⅰ=5．49，tCol-Ⅲ=8．64，P〈0．05）；MMP-8mRNA降低差异有统计学意义（t=7．35，P〈0．05）；砷酸钠组TIMP-2、Col—Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA差异均有统计学意义（tTIMP-2=6．72，tCol—Ⅰ=13．59，tCol-Ⅲ=9．68，P〈0．05）；MMP-8 mRNA降低差异有统计学意义（t=6．28，P〈0．05）。结论长期饮水砷暴露，可导致慢性肝损伤、肝纤维化；TIMP-2、MMP-8基因在砷致小鼠纤维化发生中起重要作用。     

超微六味地黄汤对孕期被动吸烟胎鼠脑Bax、Bcl-2和Casepase-3的影响

目的研究六味地黄汤超微和传统饮片对胎鼠脑发育不全的干预作用，并从细胞凋亡角度探讨其机理。方法采用孕鼠被动吸烟造成胎鼠脑发育不全，分别给予六味地黄汤超微和传统饮片进行治疗。采用免疫组化法检测Bax、Bcl-2和Casepas’e-3。结果模型组三项指标均明显高于正常组（P〈0．01）；治疗组与模型组相比Bax和Caspase-3明显减少（P〈0．01）；但仍高于正常组（P〈0．01）；治疗组与模型组相比Bcl-2变化不大（P〉0．05）。超微全量组和1／3量组Caspase-3表达较传统组少（分别为P〈0．05和P〈0．01）；超微全量组Caspase-3的表达较超微1／3量组少（P〈0．01）。结论孕期被动吸烟可以导致胎鼠脑Bax、Bcl-2和Casepase-3表达水平升高，六味地黄汤能降低Bax和Casepase-3的表达水平。     

番茄红素对动脉粥样硬化兔血浆内源性纤溶活性及一氧化氮的影响

目的观察番茄红素对高脂喂饲所致动脉粥样硬化兔模型内源性纤溶活性及一氧化氮的影响。方法采用高脂喂饲模型，将30只新西兰家兔随机分为3组：对照组、高脂模型组和番茄红素组，分别给予普通饲料（正常对照组）和高脂饲料（其它2组）喂养，番茄红素组另加用番茄红素；于实验开始前1d和开始后第8周末取空腹血测定血浆t-PA、PAI-1活性和含量以及血清一氧化氮含量。实验结束后，观察主动脉血管病理变化。结果与正常对照组相比，高脂模型组t-PA活性与含量减低，PAI-1活性与含量增加，NO含量减低；与高脂模型组相比，番茄红素组t-PA、PAI-1活性与含量差异无统计学意义；但一氧化氮含量增加（t=2．05，P〈0．05），主动脉脂质斑块面积减少（t=1．94，P〈0．05）。结论动脉粥样硬化兔纤溶活性减低，番茄红素对动脉粥样硬化病变形成具有较好的保护作用。其保护作用与改善内源性纤溶活性无关；与抗氧化损伤，维持一氧化氮分泌，保护血管内皮功能有关。     

吲哚美辛对5/6肾切除大鼠残余肾VEGF表达及MVD变化的影响

目的观察非甾体类抗炎药（NSAIDS）吲哚美辛对5／6肾切除大鼠残余肾血管内皮生长因子（VEGF）表达、微血管密度（MVD）变化的影响。方法以SD大鼠建立5／6肾切除肾衰模型,设假手术组、模型组、吲哚美辛组。灌药8周后观察残余肾肾组织病理病变,用免疫组化法检测肾组织VEGF表达及CD141阳性微血管密度并与肾小球硬化指数（GtS）、肾间质损伤指数（TtS）、血液尿素氮（BUN）及血清肌酐（cr）做相关分析。结果灌药8周后与模型组比较,吲哚关辛组TIS显著增高、肾间质VEGF、PTC密度显著减少（P〈0．05）,尿蛋白明显减轻（P〈0．05）,BUN、Cr、GIS、肾小球VEGF表达、GC密度较模型组无明显变化（P〉0．05）。灌药8周后肾脏VEGF表达与MVD呈正相关（P〈0．05）。结论吲哚美辛能降低5／6肾切除大鼠尿蛋白,但可明显降低残余肾肾间质VEGF表达及PTC密度并加重小管间质的损伤程度。     

Celiac Disease-Type Tissue Transglutaminase Autoantibody Deposits in Kidney Biopsies of Patients with IgA Nephropathy

An association between celiac disease and IgA nephropathy (IgAN) has been suggested. In celiac disease, in addition to circulating in serum, IgA-class tissue transglutaminase (tTG) autoantibodies are deposited in the small bowel mucosa and extraintestinal organs. In this case series of IgAN patients with or without celiac disease, we studied whether celiac disease-type IgA-tTG deposits occur in kidney biopsies. The study included nine IgAN patients, four of them with celiac disease. At the time of the diagnostic kidney biopsy serum tTG autoantibodies were measured and colocalization of IgA and tTG was investigated in the frozen kidney biopsies. Three IgAN patients with celiac disease had IgA-tTG deposits in the kidney even though in two of these the celiac disease diagnosis had been set years later. These deposits were not found in a patient with already diagnosed celiac disease following a gluten-free diet. Of the five non-celiac IgAN patients, three had IgA-tTG deposits in the kidney. We conclude that tTG-targeted IgA deposits can be found in the kidney biopsies of gluten-consuming IgAN patients but their specificity to celiac disease seems limited.     

Dietary fish oil suppresses experimental immunoglobulin a nephropathy in mice

Dietary fish oil (FO) supplementation reportedly retards the progression of renal disease in patients with immunoglobulin (Ig)A nephropathy (IgAN), the most common glomerulonephritis worldwide. Using an experimental mouse model in which early immunopathological hallmarks of IgAN are induced by the mycotoxin vomitoxin (VT), the ameliorative effects of FO ingestion on this disease were evaluated in two studies. In Study 1, the capacity of VT to induce IgAN was evaluated in mice fed for 12 wk AIN-76A diets containing 50 g/kg corn oil (CO), 50 g/kg CO plus 9 mg/kg tert butylhydroquinone (TBHQ), or 5 g/kg CO plus 45 g/kg menhaden FO that contained 200 mg/kg TBHQ. Serum IgA, serum IgA immune complexes and kidney mesangial IgA deposition were greater in mice fed VT + CO compared with the CO control group, whereas all three variables were significantly attenuated in mice fed VT + FO. Although TBHQ also had attenuating effects, these were significantly less than those for the VT + FO group. In Study 2, the effects of feeding modified AIN 93G diets containing either 70 g/kg CO or 10 g/kg CO plus 60 g/kg FO for 20 wk on VT-induced IgAN were compared. Again, consumption of FO attenuated all three immunopathological variables. In addition, spleen cell cultures from the VT + FO group produced markedly less IgA than those cultures from mice fed VT + CO. Taken together, the results suggested that diets containing FO may impair early immunopathogenesis in VT-induced IgAN and that this was not totally dependent on the presence of the antioxidant TBHQ.     

53例IgA肾病临床相关研究

目的：分析血清IgA对IgA肾病（IgAN）发生发展的影响,探讨影响kAN预后的病理和临床因素。方法：分析53例IgAN患者血清IgA以及Katafuchi积分、24小时尿蛋白、年龄及高血压等对IgAN发生发展及预后的影响。结果：①IgAN组血清IgA明显高于非IgAN组及对照组,病理损害较重的Ⅳ-V级组血清IgA明显高于病理损害较轻的I-Ⅲ级组;②与病理损害较轻的I-Ⅲ级组相比,病理损害较重的Ⅳ-V级组Katafuchi积分、24小时尿蛋白、年龄及高血压均明显增高。结论：IgAN是一种免疫复合物性肾小球肾炎,血清IgA的升高对IgAN的诊断及判断病情严重程度有一定的意义。Katafuchi积分能较满意地判断IgAN的病情严重程度。年龄、高血压、持续性蛋白尿是IgAN进展的危险因素．     

尿足细胞阳性IgA肾病患者临床病理特点

目的探讨尿足细胞阳性原发性IgA肾病（IgAN）患者临床病理特点。方法50例肾活检明确诊断的IgAN患者和10例健康志愿者,利用足细胞的标记蛋白Podocalyxin（PCX）标记尿液和肾组织足细胞,采集IgAN患者肾活检时临床资料、肾活检光镜结果,其中光镜参照Hass分级,各项病理指标参照Fofi半定量积分法进行评分,荧光显微镜观察肾组织足细胞PCX荧光表达程度,电镜观察足细胞足突形态学改变。结果①尿足细胞阳性的IgAN患者尿蛋白水平、血肌酐水平、平均动脉压较尿足细胞阴性患者增高,血浆白蛋白、肾小球滤过率（GFR）较尿足细胞阴性患者降低（P〈0．05）;②光镜示尿足细胞阳性的IgAN患者肾小球硬化程度、新月体发生率较尿足细胞阴性患者增高（P〈0．05）,而两组比较,系膜增生、基质增多、肾小管萎缩、间质纤维化、间质炎细胞浸润、间质血管硬化程度的差异无统计学意义（P〉0．05）;③肾组织足细胞PCX抗体荧光表达显示：肾小球节段硬化和球性硬化处足细胞PCX抗体荧光表达缺失;④电镜观察提示,无论是否伴足细胞尿,其足细胞足突均可出现一系列形态学改变。结论足细胞尿是反映肾脏疾病轻重的一个指标,与肾脏病理类型有一定关系。     

Docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid, but not alpha-linolenic acid, suppress deoxynivalenol-induced experimental IgA nephropathy in mice

Diets enriched in the (n-3) PUFAs, docosahexaenoic acid (DHA), eicosapentaenoic acid (EPA), and their precursor alpha-linolenic acid (ALA), were evaluated for efficacy in ameliorating the development of IgA nephropathy (IgAN) induced in mice by the mycotoxin deoxynivalenol (DON). The effects of DON were compared in mice that were fed for 18 wk with AIN-93G diets containing 1) 10 g/kg corn oil plus 60 g/kg oleic acid (control); 2) 10 g/kg corn oil plus 35 g/kg oleic acid and 25 g/kg DHA-enriched fish oil (DHA); 3) 10 g/kg corn oil plus 33 g/kg oleic acid and 27 g/kg EPA-enriched fish oil (EPA); and 4) 10 g/kg corn oil plus 37 g/kg oleic acid and 23 g/kg DHA + EPA (1:1) enriched fish oil (DHA + EPA). The DHA, EPA and DHA + EPA diets attenuated induction by dietary DON (10 mg/kg) of serum IgA and IgA immune complexes, kidney mesangial IgA deposition, and ex vivo IgA secretion by spleen cells. Consumption of the DHA + EPA diet for 8 wk significantly abrogated the DON-induced gene expression of interleukin (IL)-6, a requisite cytokine for DON-induced IgA nephropathy, in spleen and Peyer's patches. Finally, incorporation of ALA-containing flaxseed oil up to 60 g/kg in the AIN-93G diet did not affect DON-induced IgA dysregulation in mice. Taken together, both DHA and EPA, but not ALA, ameliorated the early stages of IgAN, and these effects might be related to a reduced capacity for IL-6 production.     

Ⅳ型胶原的表达及血管病变在IgA肾病中的意义

目的探讨Ⅳ型胶原的表达及血管病变在IgA肾病中的意义。方法采用特异性抗体及免疫组织化学染色方法,对经肾活检诊断的30例不同病理改变的IgA肾病患者肾组织中的Ⅳ型胶原的表达及血管病变与临床指标(病程、血压、肾功能改变)进行分析。结果在IgA肾病患者肾组织中,肾小球内Ⅳ型胶原随病变加重表达增多,在重度病变组表达最多(P0.01);随病理改变程度加重,血管病变也加重。多因素分析显示高血压、年龄、病理分级Ⅲ级以上(Lee分级)对血管病变的发生影响有显著意义。结论在IgA肾病中Ⅳ型胶原的表达及血管病变与血压、尿蛋白定量、血肌酐水平等临床指标能够反映病变的程度,可以作为判断预后及干预治疗的一个重要病理指标。     

小鼠膜性肾病肾脏中MMP-2的表达及意义

目的：探讨肾脏MMP-2的表达与膜性肾病发病机制间的关系。方法：把小鼠随机分为膜性肾病模型组和对照组，用免疫组织化学（SABC法）检测肾脏组织中MMP-2的表达，用图像分析系统检测基底膜厚度。结果：模型组和对照组肾脏中均有MMP-2表达，且主要表达在肾小管上皮细胞胞浆中。模型组肾组织中MMP-2表达观显强于对照组（P〈0．01），且模型组中MMP-2表达与GBM厚度呈正相关（0．01〈P〈0．05），对照组MMP-2表达与GBM无相关性（P〉0．05）。结论：在MN过程中，肾脏中MMP-2参与了GBM增厚形成的调节机制，提示在MN发病中，细胞外基质（ECM）聚集的同时，可能通过反馈调节机制促使肾脏组织中MMP-2表达上调，从而可能在一定程度上减少ECM的过度堆积。