分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２－３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异鉴定时，选择了以３－５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分     

抗E．coli RecA单克隆抗体的制备与鉴定

本研究用纯化Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，以粗制Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ包被酶标反应板，间接ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性孔，经有限稀释法４次克隆化，建立了两株分泌抗ＲｅｃＡ蛋白ＭｃＡｂ的细胞系２Ｄ６和３Ｂ１。免疫印迹表明ＭｃＡｂ只对细菌的ＲｅｃＡ有反应，不与细菌其它成分发生反应。间接ＥＬＩＳＡ进一步表明，ＭｃＡｂ２Ｄ６、３Ｄ１只对细菌ＲｅｃＡ类蛋白有反应，不与小鼠肝、心、肺、脾等和ＢＨＫ细胞的内外蛋白反应。     

抗E.coli RecA单克隆抗体的制备与鉴定

本研究用纯化Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，以粗制Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ包被酶标反应板，间接ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性孔，经有限稀释法４次克隆化，建立了两株分泌抗ＲｅｃＡ蛋白ＭｃＡｂ的细胞系２Ｄ６和３Ｂ１。免疫印迹表明ＭｃＡｂ只以地细菌的ＲｅｃＡ有反应，不与细菌其它成分发生反应。间接ＥＬＩＳＡ进一步表明，ＭｃＡｂ２Ｄ６，３Ｄ１只对细菌ＲｅｃＡ类蛋     

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的 探讨抗独特抗体２Ｈ４和５Ｄ３模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法 用Ａｂ２免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠获得抗血清,以ＥＬＩＳＡ检测其Ａｂ３,Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和淋巴细胞增殖试验,检测Ａｂ２诱发细胞免疫反应的能力。结果 ２Ｈ４,５Ｄ３免疫同系动物产生的含有抗抗蚀特型抗体（Ａｂ３）的抗血清,可特异性地与靶细胞结合。ＦＣ２（Ａｂｌ）和经２Ｈ４免疫的Ａｂ     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能从复杂的淋球菌菌体崩解物中特异地识别分子量为３５ＫＤａ的ＰＩＡ抗原，与淋球菌ＰＩＢ无交叉反应。     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０－５～１０－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥＣ１，敏感性可达１ｎｇ／ｍｌ。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ，ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０＾－５～１０＾－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳ     

抗D型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其初步应用

应用小鼠杂交瘤技术获得５株分泌抗Ｄ型葡萄球菌肠毒素（ＳＥＤ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞（ＤＣ３、ＤＣ４、ＤＢ１１、４Ｄ３和４Ｄ５）。其中４Ｄ３为ＩｇＭ（λ），其余为ＩｇＧ１（ｋ）。这组ＭｃＡｂ除ＤＣ３外，其它４株ＭｃＡｂ识别的抗原构象表位相同，其相对亲和力依次为４Ｄ５＞ＤＣ３＞ＤＣ４＞４Ｄ３＞ＤＢｌｌ。利用抗ＳＥＤ多克隆抗体与ＨＲＰ标记的ＤＣ３和４Ｄ３（针对不同表位）混合ＭｃＡｂ建立了夹心ＥＬＩＳＡ法，并以该法检测了自临床标本中分离的８０林金葡萄菌所产生的ＳＥＤ，其产毒率为４１．３％。     

抗D型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其初步应用

应用小鼠杂交瘤技术获得了５株分泌抗Ｄ型葡萄球菌肠毒素（ＳＥＤ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞（ＤＣ３、ＤＣ４、ＤＢ１１、４Ｄ３和４Ｄ５）。其中４Ｄ３为ＩｇＭ（λ），其余为ＩｇＧ１（ｋ）。这组ＭｃＡｂ除ＤＣ３外，其它４株ＭｃＡｂ识别的抗原构象表位相同，其相亲和力依次为４Ｄ５〉ＤＣ３〉ＤＣ４〉４Ｄ３〉ＤＢ１１。利用抗ＳＥＤ多克隆抗体ＨＲＰ标记的ＤＣ３和４Ｄ３（针对不同表位）混合ＭｃＡｂ建立了夹心ＥＬＩＳＡ法，并     

治疗性抗体的改造

市场上已有18个被FDA批准的单克隆抗体,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、病毒感染等人类疾病。治疗性抗体代表了生物制药业发展最快的领域之一。随着技术的发展,各种形式的工程抗体被构建来改善它们的特性和效能,包括:鼠抗体人源化,提高生物学活性,如亲和力成熟,改进效应功能,改善药代动力学。文章评述了这一领域的最新进展,同时也讨论了工程抗体的免疫原性和亲和力。     

Single-Domain Antibodies or Nanobodies: A Class of Next-Generation Antibodies

Nanobodies for the first time were identified in the sera of Camelidae. Single-domain antibodies or nanobodies are a class of next-generation antibodies that have specific features: small size (in nanoscale), high penetration in various tissues, high stability in hard situations and ease production process in microbial systems. In fact single-domain antibodies are the smallest fragment of the antibody with binding ability. Unique characteristics and features of nanobodies make them an appropriate candidate for further evaluation as the development of novel antibody-based therapeutics. In this regard single-domain antibodies are in the interest of many researchers as well as biopharmaceutical companies for diagnostic and therapeutic applications. Nowadays several single domain antibodies have been developed and evaluated in different clinical trials. Because of many advantages of single-domain antibodies over other formats of antibodies, they could be good replacement for other formats of antibodies in near future. Here, we review the biology, engineering platforms and application of nanobodies.     

A Solid-Phase Assay for the Detection of Anti-Sperm Antibodies

PROBLEM: ELISA is an ideal assay method for a large-scale screening of anti-sperm antibodies among a large number of infertile males. However, conventional ELISA with whole spermatozoa needs time-consuming steps of centrifugation. METHOD: A solid-phase assay used for detecting anti-sperm antibodies was established. This assay is suitable not only for detecting circulating anti-sperm antibodies of IgG, IgM, and IgA subclass simultaneously but also for screening hybridomas secreting anti-sperm monoclonal antibodies (mAbs). The microtiter plates, on which solubilized sperm antigens are fixed, can be stored at ? 80°C for up to six months without losing reactivity with anti-sperm antibodies. RESULTS: Using this assay, 53 sera (13 were proven positive and 40 were proven negative for sperm agglutination antibody) were tested. Although the false-negative rate was 0%, the false-positive rate was 32%. One thousand one hundred sixty-five supernatants from hybridomas constructed with splenocytes of mice who were hyperimmunized with human sperm and nonsecreting myeloma cells were tested by this solid-phase assay and two anti-sperm mAb secreting clones were selected and established. CONCLUSIONS: It is recommended that for research work this assay could be used for the first screening of the hybridoma secreting anti-sperm mAb, and for clinical use this assay might be suitable for the first screening of sera of infertile patients. However, conventional bioassays should follow to confirm the biological meaning of the positivity.     

自贡市自流井区从业人员健康体检ALT、HAV-IgM抗体和HEV-IgM抗体检测结果分析

目的 分析自贡市自流井区从业人员健康体检ALT、HAV-IgM抗体和HEV-IgM抗体检测结果,为卫生监督管理及疾病预防控制等工作提供数据依据。方法 对2013~2017年自贡市自流井区从业人员的预防性健康检查结果进行分析。结果 共检测26900人,检测出HAV-IgM抗体阳性1人,阳性率0.04‰;HEV-IgM抗体阳性7人,阳性率0.81‰;ALT异常人数485人,异常率1.80%。男性ALT异常率为3.37%,高于女性的1.05%,差异有统计学意义（P＜0.05）。不同年龄段ALT检测异常率比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,其中以21~30岁年龄段ALT异常率最高,占2.25%;≤20岁年龄段ALT异常率最低,占0.56%。 结论 自贡市自流井区从业人员HAV-IgM抗体和HEV-IgM抗体阳性率较低,但也应重视和加强从业人员定期健康检查,防控相关传染病的发生。     

抗MPO抗体的ELISA检测和应用

本文应用Ｍａｔｈｅｓｏｎ方法从人白细胞中提取髓过氧化物酶ＭＰＯ，建立ＥＬＩＳＡ法检测６３份血清标本中抗ＭＰＯ抗体，同时与间接免疫荧光法（ＩＩＦ）作比较，结果是：１９例结节性多动脉炎（ＰＡＮ）患者中６例抗ＭＰＯ抗体阳性（３２％），较ＩＩＦ法阳性率提高（１９例中１例），而２２例正常人及２２例其他肾脏病患者血清均为阴性。提示ＥＬＩＳＡ法既可从分子水平鉴定系统性血管炎致病的特异性抗体，又是系统性血管炎敏感的诊断方法。     

原发性胆汁性肝硬化患者血清抗线粒体抗体与抗核抗体分析及其临床意义

目的 探讨线粒体抗体(AMA)阴性和阳性的PBC患者抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)阳性率及其相伴抗核抗体(ANA)核型,抗核抗体谱的不同免疫球蛋白抗体分布频率.方法 收集北京地坛医院2014年12月至2016年2月就诊的122例AMA阳性(AMA+)和46例AMA阴性(AMA-)PBC患者及224例非PBC患者(48例自身免疫性肝炎(AIH)、83例慢性乙型肝炎(CHB)、80例慢性丙型肝炎、13例酒精性肝病),采用间接免疫荧光法检测抗核抗体,免疫印迹法检测抗核抗体谱,免疫斑点法检测AMA-M2.结果 122例AMA(+)PBC患者中AMA-M2阳性率96.7％;46例AMA(-) PBC患者中AMA-M2阳性率17.4％.AMA阳性PBC患者的核膜型,核点型,着丝点型,核颗粒型阳性率分别是20.5％,7.4％,21.3％,40.2％;高于非PBC组的1.8％,0.8％,2.2％,13.8％(P均＜0.01);AMA阴性PBC患者的核膜型,核点型,着丝点型,核颗粒型阳性率分别是17.4％,10.8％,19.5％,45.6％;高于非PBC组的1.8％,0.8％,2.2％,13.8％(P均＜0.01).结论 AMA与AMA-M2及ANA部分核型的检测有助于PBC特别是AMA阴性PBC患者的诊断.     

人群中腺病毒中和抗体调查

对北京、南京、成都、海口四市１２５３份不同年龄组人群中４，７型腺病毒中和抗体进行了调查。结果，人群中４，７型腺病毒总阳性率分别为３１．０，２２．２％。不同城市人群腺病毒抗体阳性率不一，北京地区高于其他地区。７型腺病毒抗体阳性率有由南往北逐渐增高的现象，表明北方７型腺病毒感染多于南方。     

抗核抗体核型分布及核型与特异性抗体相关性分析

目的通过对ANA核型分布及核型与特异性抗体相关性分析,为临床对ANA和ANA谱检测结果判读提供参考。方法用间接免疫荧光法检测ANA,免疫印迹法检测ANA谱,对449例ANA或ANA谱阳性的结果进行核型和特异性抗体分析。结果 ANA核型分布以核颗粒型为主,占78.2%;核型与特异性抗体有一定的相关性,但同一种自身抗体可出现不同的荧光核型。结论 ANA和ANA谱同时检测能提高AID的检出率,有助于准确的判断特异性抗体,对AID的诊断、病情监测、预后判断有十分重要的作用。     

用抗-(抗HBc)抗体在同系小鼠中诱导抗-抗Id抗体

用单克隆抗-(抗HBc)抗体(抗-Id)免疫BALB/c鼠,诱生出具有与抗-HBc相同反应性的抗-抗Id抗体(Ab_3)。这种抗体在ELISA试验中可与HBc-Ag特异性反应,并能抑制单克隆抗-HBc与HBcAg的结合。表明我们建立的抗-H-Bc的抗Id能模拟HBcAg刺激小鼠产生免疫反应。     

抗GPI抗体和抗CCP抗体对RA诊断价值的比较分析

目的:评价抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定RA患者42例、其他风湿病患者32例以及健康对照者30例血清中的抗CCP抗体和抗GPI抗体,并应用R0C曲线比较两者对RA的诊断价值.结果:RA组血清抗CCP抗体水...