采用组织芯片技术研究宫颈癌中HPV与细胞周期调控因子p27表达的关系

目的研究宫颈癌组织中HPV感染与细胞周期调控因子p27表达的关系及意义。方法采用组织芯片技术制作60例宫颈癌组织芯片，同时用S—P免疫组织化学和原位分子杂交方法检测宫颈癌组织芯片中HPV、p27、p27mRNA的表达。结果60例宫颈癌组织中HPV、p27、p27mRNA的阳性率分别为48．3％、38．3％、51．7％。淋巴结转移阳性宫颈癌中p27和p27mRNA阳性率明显低于淋巴结转移阴性宫颈癌（P〈0．01）。淋巴结转移阳性宫颈癌中HPV阳性率明显高于淋巴结转移阴性宫颈癌（P〈0．05）。宫颈癌和CINⅢ级宫颈上皮内瘤变组织中HPV阳性率明显高于CINⅠ级和CINⅡ级（P〈0．05）。而p27和p27mRNA阳性率明显低于CINⅠ级和CINⅡ级宫颈上皮内瘤变组织（P〈0．05）。宫颈癌中HPV与p27及p27mR—NA表达呈明显负相关（r=-0．574，P〈0．05；r=-0．612，P〈0．01）。结论HPV感染和细胞周期调控因子p27低表达与宫颈癌密切相关。HPV感染与p27低表达有关。HPV和p27可作为评估宫颈癌预后的参考指标。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点。     

泛素、Skp2、p27在胃癌组织中的表达

1 材料和方法 1．1 材料 从我院病理科及江西省人民医院病理科档案材料中选取2000-2002年间石蜡包埋胃癌标本60例，男性38例，女性22例。年龄34-69岁，平均54．6岁。所有切片按全国胃癌协作组标准复检，组织学类型：乳头状腺癌6例、管状腺癌33例、粘液腺癌8例、印戒细胞癌9例、未分化癌4例。其中淋巴结转移阳性42例。     

Cks1在P27蛋白泛素化降解过程中的作用

在细胞分裂周期中，Cks1蛋白参与并促进P27蛋白泛素化降解，从而解除其对细胞周期蛋白激酶的抑制作用，促使细胞通过G1／S转折期。在大部分肿瘤细胞中Cks1蛋白表达上调，P27蛋白过多泛素化降解，Cks1蛋白参与并促进P27蛋白泛素化降解与细胞周期调控和肿瘤发生发展关系密切。本文综述了Cks1蛋白参与P27蛋白泛素化降解的基础和临床研究进展。     

Survivin、p27在宫颈癌组织中的表达及其与侵袭、转移的关系

目的：探讨生存素（Survivin）、027蛋白在人宫颈癌中的表达水平与宫颈癌组织侵袭、转移能力的关系。方法：采用免疫组织化学S-P法和图像分析系统检测Survivin、p27在10例正常宫颈、10例宫颈原位癌、40例官颈鳞癌、11例宫颈腺癌组织中的表达，分析表达结果与临床病理特征的关系。结果：从正常宫颈上皮一原住癌一浸润癌，Survivin阳性表达量显著升高，p27表达量显著降低（P〈0．05）。官颈癌Survivin表达量与盆腔淋巴结转移、局部侵袭、组织学类型、患者年龄有关（P〈0．05），而与FIGO分期、组织学分级无关（P〉0．05）；宫颈癌p27阳性表达量与盆腔淋巴结转移、局部侵袭、组织学分级有关（P〈0．05），而与FIGO分期、组织学类型、患者年龄无关（P〉0．05）。有盆腔淋巴结转移、脉管和（或）间质侵袭患者的Survivin阳性表达量增多，而p27的表达量与之相反（P〈0．05）。结论：Survivin、p27蛋白异常表达在宫颈癌中的恶化、侵袭、转移中起重要作用，检测Survivin、027蛋白表达水平，对判断宫颈癌的恶性程度、侵袭转移潜能，评估患者预后度制定优化治疗方案有一定参考价值。     

p27与造血调控的研究

p27是一种对细胞周期起重要负向调控作用的Cip/Kip家族分子.p27基因定位于12p12.0-12p13.1,编码198个氨基酸,主要通过基因转录后泛素-蛋白体酶途径调节.在正常造血过程中,p27的表达涉及到复杂的系列特异性,与巨核细胞的细胞周期终末退出有关.p27可调控造血祖细胞的增殖周期而对干细胞无明显影响;p27基因敲除使得利用小部分p27-/-的干细胞生成大量祖细胞和成熟血细胞成为可能,为提高干细胞移植成功率提供一条新的途径;同时还可提高p27-/-.干细胞被基因转染的敏感性,以期更好地发挥治疗性干细胞的作用.     

p27与造血调控的研究

p27是一种对细胞周期起重要负向调控作用的Cip／Kip家族分子。p27基因定位于12p12.0-12p13．1，编码198个氨基酸，主要通过基因转录后泛素一蛋白体酶途径调节。在正常造血过程中，p27的表达涉及到复杂的系列特异性，与巨核细胞的细胞周期终末退出有关。p27可调控造血祖细胞的增殖周期而对干细胞无明显影响；p27基因敲除使得利用小部分p27^-/-的干细胞生成大量祖细胞和成熟血细胞成为可能，为提高干细胞移植成功率提供一条新的途径；同时还可提高p27^-/-干细胞被基因转染的敏感性，以期更好地发挥治疗性干细胞的作用。     

造血分化与细胞周期调控

造血干/祖细胞增殖分化的调控为一涉及多因素、多水平的复杂网络调控,近年来发展迅速的细胞周期调控介入其机制的研究颇多,本文就该领域的研究发展作一综述。     

细胞周期抑制蛋白p27^kipl和周期蛋白表达与大肠癌发生预后

目的 探讨细胞周期调控抑制因子p27^kipl蛋白和周期蛋白E（cyclinE)在大肠腺癌发生发展中的作用。方法 采用免疫组化技术SP法，检测p27^kipl和cyclinE蛋白在37例大肠腺癌和26例正常大肠黏膜组织中的表达。结果 p27^kipl蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为45.9%，显著低于正常大肠黏膜组织（x^2=4.590,P&;lt;0.05) ,并与大肠癌组织分化程度和淋巴结转移均有关（x^2=9.653,x^2=6.838,P&;lt;0.05)；cyclinE蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为64.9% ,显著高于正常大肠黏膜组织（x^2=4.285,P&;lt;0.05) ,并与大肠腺癌组织分化程度和淋巴结转移有关（x^2=8.397,x^2=5.261,P&;lt;0.05) ;p27^kipl蛋白阳性表达组cyclinE蛋白阳性表达率低于p27^kipl蛋白阴性表达组，但两者无相关（r=-0.1133,P&;gt;0.05)。结论 p27^kipl蛋白的低表达和/或cyclinE蛋白的高表达在大肠腺癌发生中发挥重要作用，并可能有助于预测其恶性程度及淋巴结转移，可能对大肠腺癌的治疗和生活质量的改善有指导作用。     

胃球样异型增生细胞周期素和p21^WAF1、p53蛋白表达的组织芯片观察

目的：使用组织芯片探讨cyclin A、cyclin D1．cyclin E和p21^WAF1、p53蛋白在胃球样异型增生中表达的意义。方法：采用微波修复免疫组织化学S-P法和组织芯片技术，检测cyclinA、cyclinD1、cyclinE和p21^WAF1、p53蛋白在41例正常胃黏膜、86例低级别异型增生胃黏膜、21例高级别异型增生胃黏膜和124例胃癌组织中的表达，并进行比较分析。结果：cyclinA、cyclinD1、cyclinE和p53蛋白的表达由正常胃黏膜、轻度球样异型增生、重度球样异型增生到癌阳性率逐渐增高，cyclinA、cyclinD1和p53在重度球样异型增生与胃癌中的表达无显著差异（X^2=3．08．X^2=2．18．X^2=0．80，P〉0．05），与正常胃黏膜有显著差异（X^2=12．26，X^2=11．29，X^2=19．89，P〈0．01）。重度球样异型增生中p21^WAF1蛋白的表达比正常胃黏膜为低，差异有显著性（X^2=5．32，P〈0．05），与胃癌比较差异无显著性（X^2=1．39，P〉0．05）。cyclinD1与p21^WAF1的表达呈负相关（rs=-0．5326，P〈0．01）。结论：重度胃球样异型增生cyclinA、cyclinDl、cyclinE呈高表达，p21^WAF1蛋白失表达，显示与胃癌的发生关系密切。     

宫颈癌细胞USP22表达水平及其与顺铂化疗敏感性的关系研究

目的 研究宫颈癌细胞泛素特异性蛋白酶22(USP22)表达水平及其与顺铂化疗敏感性的关系。方法采集宫颈癌细胞系Si Ha,以人永生化表皮细胞系Ha Ca T为对照,通过实时荧光定量聚合酶链反应比较USP22 mRNA在两种细胞中的表达情况。将宫颈癌细胞系Si Ha分为对照组(转染USP22)和实验组(转染USP22-siRNA),采用CCK-8实验比较两组细胞增殖能力和细胞存活率,通过流式细胞仪检测细胞细胞周期和细胞凋亡率;采用裸鼠荷瘤实验,对照组给予磷酸盐缓冲液,实验组给予顺铂,检测宫颈癌肿瘤体积以评价顺铂化疗敏感性。结果 相比人永生化表皮细胞系Ha Ca T,宫颈癌细胞系Si Ha中USP22 mRNA相对表达量明显升高(P 0. 01)。CCK-8实验结果显示,实验组宫颈癌Si Ha细胞增殖能力和存活率较对照组明显下降(P 0. 01)。流式细胞仪检测结果显示,相比对照组,实验组宫颈癌Si Ha细胞G1期比率明显升高,S期细胞比率明显下降(P 0. 01);两组G2期细胞比率的比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。实验组宫颈癌Si Ha细胞凋亡率较对照组明显升高(P 0. 01)。裸鼠荷瘤实验结果发现,实验组肿瘤体积增长速度明显减缓(P 0. 01)。结论 USP22高表达于宫颈癌细胞,可有效诱导肿瘤细胞增殖,促使其对顺铂化疗的敏感性下降;沉默USP22在宫颈癌Si Ha细胞中的表达,具有明显抑制肿瘤细胞增殖、减少细胞存活、干扰细胞周期、促进细胞凋亡和缩小肿瘤体积的作用,同时可增强肿瘤细胞对顺铂化疗的敏感性。     

miRNA-21siRNA对宫颈癌Hela细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨microRNA-21(miR-21)siRNA对宫颈癌Hela细胞周期和细胞凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR检测Hela细胞转染后siRNA干扰组及阴性对照组中miR-21的表达量。流式细胞仪分析Hela细胞周期及凋亡率的变化。结果转染siRNA干扰载体后,实时荧光定量PCR检测Hela细胞中miR-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05),空白对照组与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);siRNA表达载体可明显增加细胞凋亡率,并显现出G_0/G_1期阻滞作用。结论miR-21siRNA干扰载体可以高效地抑制宫颈癌Hela细胞miR-21基因的表达,增强细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G_0/G_1期。     

细胞周期调控因子p21和cyclinD1与胃癌相关性研究的进展

抑癌基因p2l是一个广谱的细胞周期依赖性激酶(CDK)制剂和细胞周期的负调控因子,具有阻止细胞通过GI/S期的作用;癌基因cyclinDl参与G1/S期转换的调控,是细胞周期重要的正性调控因子;p2l的低表达和cyclinDl的高表达与胃癌的发生、发展有关.本文就p21和cyclinDl与胃癌的相关性研究作一介绍.胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一,其发生与治疗方面的基因研究已越来越引起人们的关注.近年来肿瘤学研究发现,肿瘤是由于细胞进行无限制的自主分裂和增殖引起,而细胞周期的演进是肿瘤发生的"最后通路".     

小泛素类蛋白对低氧诱导因子-1调控作用的研究进展

低氧诱导因子-1的表达和调节对肿瘤的发生、生长、血管形成、转移、凋亡、糖代谢及耐药性产生重要影响。小泛素类蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一类结构与泛素类似的小分子蛋白,在低氧应激等状态下表达增加,SUMO通过与泛素竞争HIF-1结合位点增强HIF-1的稳定性,包括SUMO化和去SUMO化及增强SENP活性和抑制pVHL作用等机制。这对寻找新的肿瘤干预靶点具有非常重要的意义。     

细胞周期素D2和p27在BCR/ABL调节细胞周期中的作用

BCR/ABL在慢性粒细胞白血病 (CML)的发病中有重要作用 ,现在认为细胞周期的失控与癌症的发生密切相关。本文综述了BCR/ABL对细胞周期调控的影响 ,细胞周期素D2 (cyclinD2 )和p2 7在其中发挥的重要作用和机制及可能在治疗方面的应用前景。     

p16基因与细胞周期调节

p16基因是近年来被认识的抑癌基因，在细胞增殖调控途径中发挥重要作用。本文对P16基因蛋白构造及功能、p16基因参与的细胞周期调节途径以及P16基因变异与肿瘤的关系进行了综述。     

内质网分子伴侣Grp94的表达与细胞周期的关系

目的进一步分析正常组织来源的细胞系ＣＶ１和人大肠癌细胞系ＣＣＬ２２９的Ｇｒｐ９４的表达及其与细胞周期的关系。方法对细胞中ＤＮＡ和内质网分子伴侣Ｇｒｐ９４进行同时染色,进行双参数流式细胞术分析。结果两种细胞的Ｇｒｐ９４的表达情况相似,在细胞周期各时相中内质网分子伴侣Ｇｒｐ９４均有表达,Ｇ０＋Ｇ１期表达量较少,Ｓ期的表达量无明显增加,Ｇ２＋Ｍ期的表达量最高。结论Ｇｒｐ９４在细胞周期各时相的表达呈渐增的趋势,但在Ｓ期增加不明显,表明Ｇｒｐ９４的表达与细胞周期各时相的变化存在着密切的关系。     

N-Myc下游调节基因1和p27在宫颈癌中的表达及临床意义

目的：探讨N-Myc下游调节基因1（N-Myc downstream regulated gene1,NDRG1）蛋白和p27蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化SP法检测54例宫颈癌组织,32例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织和28例正常宫颈组织中NDRG1蛋白和p27蛋白的表达,并分析它们与宫颈癌临床病理因素的关系。结果：宫颈癌组织中NDRG1的阳性表达率（77.8%）明显高于CIN组（46.9%）和正常宫颈组（28.9%）,P〈0.0125;表达水平与间质浸润、有无淋巴结转移有关（P〈0.05）;与临床分期、组织病理分级、组织类型无关（P〉0.05）。p27蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率（33.3%）明显低于CIN组（62.5%）和正常宫颈组（92.9%）,P〈0.0125;其表达水平与组织病理分级、间质浸润、淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论：NDRG1蛋白过表达、p27蛋白低表达与宫颈癌的发生发展有关,联合检测NDRG1与p27蛋白对于早期诊断宫颈癌以及判断其侵袭转移潜能及预后有一定参考价值。     

泛素结合结构域与泛素化信号的识别

泛素化(Ubiquitylation,UB)是目前最为复杂最为多元的翻译后修饰,几乎参与胞内所有的生物学过程。其通过改变底物的分子景观(landscape)、三维结构、位置、活性、影响底物蛋白与其他蛋白的相互作用等方法,从时间和空间上调节底物所参与的生物学过程。而泛素化底物功能的发挥依赖于特异性的泛素结合结构域(Ubiquitin binding domains,UBDs)。UBDs的表面功能基团特异性识别具有不同修饰类型的泛素化底物,并决定其功能的特异性。已知的20多种UBDs超家族对泛素化信号网络的有序调节是人们开启泛素化网络的一把钥匙,同时了解UBD-ubiquitin的特异性识别是认识泛素化蛋白质组学“ubiquitome”的基础。     

p14ARF、p73和p53在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的探讨宫颈癌组织p14ARF、p73和p53蛋白的表达及其临床意义.方法应用免疫组化方法检测p14ARF和p73、p53基因在41例宫颈癌及20例正常宫颈组织中的表达.结果p14ARF、p73、p53在宫颈癌中阳性率分别为85.4%(35/41)、73.2%(30/41)和39.0%(16/41),与正常宫颈组织相比,有显著差异.p14ARF和p73阳性率均随病理分级增高而增加,而与其它临床病理参数无关.p53表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.05).在宫颈癌中,p14ARF与p73表达密切相关(P＜0.01),p14ARF与p53表达不相关(P＞0.05).结论p14ARF与p73在宫颈癌中同时高表达有一定诊断和预测价值,可能是宫颈癌新的肿瘤标志物.p53与宫颈癌的发生发展有关.     

人泛素-核糖体蛋白27a原核表达载体构建及表达

目的构建并表达携带谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签的人泛素-核糖体蛋白S27a(UBRPS27a)原核表达载体。方法利用反转录聚合酶链反应从HL-60细胞中扩增RPS27A基因全长,克隆至pMD-19T载体中,酶切回收后插入原核表达载体pGEX4T-1,构建重组表达载体pGEX4T1-RPS27A,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达GST-UBRPS27a融合蛋白。结果经测序与酶切鉴定,重组质粒pGEX4T1-RPS27A构建正确;经重组质粒转化的BL21细菌诱导4h后可高效表达UBRPS27a融合蛋白。结论成功构建UBRPS27a原核表达载体,为进一步研究其结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。