抗增殖蛋白TOB1影响乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移的作用研究

目的研究抗增殖蛋白家族成员TOB1对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭与转移的生物学作用与机制。方法采用脂质体介导的质粒转染和G418筛选培养法获得稳定高表达TOB1的高转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过人工基底膜侵袭实验和划痕实验检测TOB1过表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力和转移能力的影响。采用super array基因芯片法检测TOB1引起的肿瘤转移相关基因表达的变化。结果与对照组相比,外源性TOB1高水平表达使MDA-MB-231的体外侵袭能力显著降低（P〈0.05）,同时抑制MDA-MB-231的体外迁移能力;TOB1表达水平的增加引起MDA-MB-231细胞中肿瘤转移抑制基因BRMS1表达的明显增加,同时显著抑制肿瘤转移相关基因HSP90、FXYD5、RHOC、S100A4等的表达（均P〈0.05）。结论 TOB1过表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外侵袭、转移,涉及的机制可能与TOB1对多种重要的肿瘤转移相关基因的表达调控有关。     

人组织激肽释放酶基因7与肿瘤侵袭转移的关系

人类组织激肽释放酶7（kalliklein 7,KLK7）最先从皮肤角化细胞文库分离出,并证明是一种丝氨酸蛋白。该基因是组织激肽释放基因家族成员之一,编码hk7蛋白,与其它组织激肽释放酶基因有相似的基因及蛋白结构。它主要在角质层上皮细胞中表达,参与皮肤脱屑、皮肤疾病等生理病理过程。近年研究发现它广泛存在于人体组织和体液中,并与肿瘤的生长、肿瘤细胞的脱落和转移存在密切的关系。     

JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响,探讨JAK-STAT3信号转导通路在乳腺癌侵袭转移调控中的作用。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,应用JAK激酶抑制剂AG490处理细胞,用MTT法检测细胞对人工基底膜的粘附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验;Western blot检测细胞中P-STAT3水平。结果JAK激酶抑制剂AG490可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3表达减弱,同时可使细胞粘附、侵袭、迁移能力下降。结论JAK-STAT3信号转导通路参与乳腺癌细胞侵袭转移调控,阻断通路活化可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。     

人激肽释放酶6,7,10在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨人激肽释放酶家族成员KLK6,7,10在卵巢癌组织中的表达及临床意义.方法:应用逆转录PCR方法检测KLK6,KLK7及KLK10 mRNA在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达水平.结果:KLK6,7,10基因在正常卵巢及良性卵巢肿瘤组织中弱表达.在卵巢癌组织中KLK6,10的表达明显高于正常...     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。     

乌司他丁抑制人乳腺癌细胞的侵袭和转移及其分子机制

目的通过测定不同浓度的乌司他丁(UTI)对体外乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和MDA-MB-231(雌激素受体阴性)干预后细胞中乙酰肝素酶(Hpse)、1型透明质酸酶(HYAL1)及细胞黏附分子CD44v6蛋白的表达情况,探讨其对癌细胞侵袭、转移抑制的分子机制。方法将体外培养的MCF-7及MDA-MB-231细胞分别随机分为:(1)对照组;(2)UTI低剂量干预组;(3)中剂量干预组;(4)高剂量干预组;(5)UTI中剂量+泰索帝(TXT)组。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞Hpse、HYAL1和CD44v6蛋白的表达;Matrigel穿膜侵袭实验检测细胞侵袭能力;Transwell小室细胞跨膜实验测定细胞的迁移能力。结果癌细胞中Hpse、HYAL1和CD44v6蛋白的表达随UTI浓度增加而降低,UTI与TXT联合用药抑制作用更加显著(P<0.05);乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力显著下降,UTI与TXT联合处理抑制作用更加明显(P<0.05)。结论 UTI抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移可能与Hpse、HYAL1、CD44v6蛋白的表达降低有关。     

乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移中JAK抑制对ERK的作用及意义

目的:研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响,探讨JAK激酶对ERK信号转导通路的作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义.方法:以JAK激酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,MTT法检测AG490对细胞的生长抑制作用;MTT法检测AG490处理后细胞对人工基底膜Matrigel的黏附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和迁移实验,检测AG490处理后细胞侵袭、迁移能力变化;Western印迹法检测AG490处理后细胞中磷酸化ERK(P-ERK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平变化.结果:应用JAK酶抑制剂AG490后MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效-量效依赖关系;MDA-MB-231细胞黏附、侵袭、迁移能力降低,同时细胞中P-ERK、MMP-9蛋白减少.结论:JAK激酶可以通过改变ERK的磷酸化水平影响ERK信号转导通路的活化.JAK激酶抑制对ERK信号转导通路的激活有阻断作用,可以抑制MMP-9的表达及乳腺癌细胞的侵袭转移.     

非分泌型CXCL16在乳腺癌细胞系中的表达及对其生物学特性的影响

目的 通过检测非分泌型CXCL16在不同侵袭性乳腺癌细胞系(SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达,探讨非分泌型CXCL16表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响。 方法 采用RT-PCR检测CXCL16 mRNA在MCF-10A、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S细胞系的表达,将pEGFP-CXCL16真核表达质粒转染到低表达CXCL16的MDA-MB-231细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证CXCL16过表达,采用体外迁移、侵袭实验及甲基四唑蓝(MTT)法分别检测过表达CXCL16对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭和增殖活性的影响。 结果 CXCL16 mRNA在高侵袭性的MDA-MB-231细胞低表达,在低侵袭性的MCF-7细胞高表达,过表达CXCL16使得MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭减弱,而增殖未受到影响。 结论 非分泌型CXCL16表达与乳腺癌细胞系的侵袭性相关,其表达可以抑制乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭。     

辐射板强化喷管换热与红外抑制效果试验研究

目的 通过检测非分泌型CXCL16在不同侵袭性乳腺癌细胞系(SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达,探讨非分泌型CXCL 16表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 采用RT-PCR检测CXCL16 mRNA在MCF-10A、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S细胞系的表达,将pEGFP-CXCL16真核表达质粒转染到低表达CXCL 16的MDA-MB-231细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证CXCL16过表达,采用体外迁移、侵袭实验及甲基四唑蓝(MTT)法分别检测过表达CXCL16对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭和增殖活性的影响.结果 CXCL16 mRNA在高侵袭性的MDA-MB-231细胞低表达,在低侵袭性的MCF-7细胞高表达,过表达CXCL16使得MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭减弱,而增殖未受到影响.结论 非分泌型CXCL16表达与乳腺癌细胞系的侵袭性相关,其表达可以抑制乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭.     

SMC4对人乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的 探讨敲低染色体结构维持蛋白4(SMC4)基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响及其可能的机制.方法 用定量PCR(qPCR)法检测20例乳腺癌患者乳腺癌组织及对应癌旁组织中SMC4的表达情况,并用qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测人乳腺上皮细胞(MCF10A)及人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、T47D、SK-BR-3、MCF7、MDA-MB-468)中SMC4的表达情况.用小分子干扰RNA(siRNA)特异性干扰MDA-MB-231中SMC4的表达后,用qPCR及Western blot检测干扰效果,用CCK8及平板克隆实验检测其增殖与克隆形成能力,Transwell小室检测其迁移及侵袭能力,用Western blot检测可能影响的通路蛋白表达情况.结果 SMC4在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(t=3.265,P＜0.05).SMC4在乳腺癌细胞系中的表达明显高于MCF10A.在成功用siRNA干扰SMC4表达后,MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力均明显下降(P＜0.05),且磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)及磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)的表达同样明显降低(P＜0.05),而AKT及PI3K的表达则无明显影响.结论 干扰SMC4基因的表达可抑制MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活相关.     

红花黄色素对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用及其分子机制

目的 研究红花黄色素 (CY) 对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响以及相关的分子机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度和时间红花黄色素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用;采用流式细胞术检测不同浓度红花黄色素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的促凋亡作用;采用Transwell法检测不同浓度红花黄色素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移和侵袭的影响;在不同浓度的红花黄色素的干预后, 通过western blot技术检测凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3和生存相关蛋白p-Akt以及转移相关蛋白MMP2的表达.结果 (1) 红花黄色素对乳腺癌细胞的抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性; (2) 不同浓度的红花黄色素干预能显著促进乳腺癌细胞的凋亡 (P<0.01) ; (3) 不同浓度的红花黄色素干预能显著抑制p-Akt的表达并同时促进Cleaved-Caspase-3的表达; (4) 不同浓度的红花黄色素能够显著抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力 (P<0.01) , 并且能够抑制迁移相关蛋白MMP2的表达.结论 红花黄色素能在体外通过激活凋亡通路而促进凋亡, 并能通过抑制MMP2来抑制乳腺癌细胞的转移.红花黄色素是一种潜在的治疗乳腺癌的药物.     

RSRC2影响三阴性乳腺癌细胞增殖迁移及侵袭的初步研究

目的:探究富含精氨酸/丝氨酸卷曲螺旋2（RSRC2）对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:将RSRC2过表达、降表达和空载体质粒通过慢病毒包装转染至三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中,通过Western blot检测转染效果,通过Transwell 迁移实验、侵袭实验、划痕实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的影响,通过平板克隆形成实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。结果:Western blot结果显示RSRC2过表达和降表达质粒成功转染至MDA-MB-231细胞中,Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕实验、平板克隆实验显示,RSRC2过表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力减弱,RSRC2降表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力增强（均P<0.05）。结论:RSRC2在三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中起着重要的负调控作用。     

促红细胞生成素在人乳腺癌细胞株中的表达及作用

目的: 通过检测重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rh-EPO）对乳腺癌细胞株增殖、凋亡及转移等生物学行为的影响,探讨EPO/EPO-R在乳腺癌发生发展中的作用。方法： 运用RT-PCR、免疫细胞化学Envision法及蛋白质印迹法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中EPO、 EPO-R mRNA含量及蛋白表达;采用MTT比色试验、原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记DNA链断端分析法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dutp-Biotin nick end-labeling assay,TUNEL)、Transwell小室法观察不同浓度rh-EPO 对这两种细胞增殖、凋亡和转移能力的影响。结果：MCF-7和MDA-MB-231细胞中均表达EPO及EPO-R;MTT比色试验和Transwell小室法显示,rh-EPO能增强两种细胞株的增殖活性和迁移侵袭能力,而且具有时间剂量依赖性;TUNEL法显示rh-EPO并没有抑制两株细胞凋亡的作用。rh-EPO对于MCF-7的作用效果强于MDA-MB-231细胞。结论：在不影响癌细胞凋亡的情况下,rh-EPO能够促进MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖活性,提高癌细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的 探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA -MB -231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照.通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-606模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimemin和Slug蛋白表达的变化.荧光素酶报告基因分析实验检测M DA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响.结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P＜0.01).miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P＜0.01).MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达.Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性.结论 在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一.     

MiR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移

目的 探讨miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1对乳腺癌侵袭和转移的影响。方法 生物信息学数据库查询miR-204在乳腺癌患者中的表达情况和 miR-204对乳腺癌患者生存率的影响;RT-qRCR检测miR-204在乳腺癌细胞系中的表达情况;利用 GV369-miR-204过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中的miR-204;Transwell实验检测miR-204对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响;生物信息学方法确定miR-204的关键基因（Hub基因）;双荧光素酶实验检测miR-204和HNRNPA2B1的靶向关系;Western blot实验检测过表达miR-204后HNRNPA2B1的表达情况;Transwell实验检测MDA-MB-231/miR-204+NC、MDA-MB-231/miR-204+HNRNPA2B1细胞的侵袭和迁移能力的变化。结果 miR-204在乳腺癌组织中表达降低（P<0.05）,低表达水平的miR-204与患者不良预后相关（P<0.05）;miR-204在乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞系中表达量低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达（P<0.0001）。通过过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中miR-204的表达,结果显示上调miR-204可抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力（P<0.05）;HNRNPA2B1为miR-204的Hub基因,starbase网站发现miR-204-5p 和HNRNPA2B1表达呈负相关且HNRNPA2B1在乳腺癌患者中表达升高（P<0.05）;生存分析证明高表达HNRNPA2B1的乳腺癌患者预后不良（P<0.05）;双荧光素酶实验证明miR-204和HNRNPA2B1可靶向结合（P<0.05）。Western blot和Transwell实验证明,miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和迁移,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-204在乳腺癌组织和细胞中表达降低,且miR-204可通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移。     

MicroRNA-134通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2表达抑制乳腺癌细胞迁移及侵袭

目的  探讨microRNA-134（miR-134）在乳腺癌中的表达及其影响乳腺癌迁移、侵袭能力的分子机制。方法  选取2013年1月-2015年2月于本院乳腺病科行手术切除并经病理检查证实的乳腺导管内原位癌组织30例、乳腺浸润性导管癌组织35例及正常乳腺组织15例。通过实时定量聚合酶链式反应法分别检测miR-134在肿瘤和正常乳腺组织中的表达,统计分析miR-134表达与患者临床特征间的相关性;通过miR-134模拟物转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用细胞划痕愈合试验评价过表达miR-134对细胞迁移能力的影响,采用Transwell侵袭小室试验评价过表达miR-134后MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化。通过免疫组织化学染色检测miR-134与下游潜在靶点叉头框蛋白M1蛋白表达关系,实时定量聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹检测转染miR-134模拟物后其下游潜在靶点叉头框蛋白M1及下游效应分子人基质金属蛋白酶2的表达变化。结果  miR-134在正常乳腺组织、乳腺导管内原位癌组织及乳腺浸润性导管癌组织中的表达量依次降低（P <0.05）。乳腺癌组织中低水平的miR-134与肿瘤淋巴结转移及高TNM分期显著相关（P <0.05）;在体外试验中,过表达miR-134能够显著降低MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力（P <0.05）;免疫组织化学染色结果证实miR-134与叉头框蛋白M1蛋白的表达呈负相关关系（P <0.05）;实时定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印记结果显示,过表达miR-134后可显著抑制乳腺癌细胞中叉头框蛋白M1及人基质金属蛋白酶2的表达水平（P <0.05）。结论  miR-134在乳腺癌组织中表达下调,miR-134可能通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2的表达来抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭。

     

葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭及转移中的作佑

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在乳腺癌细胞(231)侵袭、转移过程所起的作用。方法构建GRP78真核反义表达载体,转染入231细胞,利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况;并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化。结果转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞;反义GRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用。结论GRP78是乳腺癌的一个促癌基因,下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。