p14ARF在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨宫颈癌组织中p14ARF蛋白的表达及其与宫颈癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化S—P法检测41例宫颈癌和20例正常宫颈组织中p14ARF表达,计算阳性百分率。结果①p14ARF在宫颈癌阳性率为85．40％(35／41),正常宫颈组织中无表达;②p14ARF阳性表达与病理分级有关。结论p14ARF在宫颈癌中高表达与宫颈癌生物学行为有关;它可能是新的诊断宫颈癌与判断预后的肿瘤标志物。     

抑癌基因p14~（ARF）对慢性粒细胞白血病细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响机制研究

目的探讨抑癌基因p14ARF对慢性粒细胞白血病细胞的增殖、细胞周期及凋亡的的影响机制研究。方法应用慢病毒载体系统,将抑癌基因p14ARF导入慢性粒细胞白血病细胞系及患者来源的慢性粒细胞白血病细胞中,应用WST-8法检测细胞生长存活率,应用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果应用表达p14ARF的VSV-G假构型慢病毒载体可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对细胞周期没有明显的影响。结论利用p14ARF基因治疗可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞的增殖。     

HeLa细胞c-erbB2,c-H-ras,p15,p16的原位杂交检测

0 引言 宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤,死亡率居妇科肿瘤第2位.宫颈癌的发生是一个多因素、多步骤的复杂过程,是多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活共同作用的结果[1].目前,原癌基因和抑癌基因与宫颈癌关系的研究已成为分子生物学研究的热点.应用核酸原位杂交技术,研究宫颈癌细胞系HeLa细胞中c-erbB2,c-H-ras,p15,p16mRNA水平,以探讨宫颈癌发生的分子机制.     

Bmi-1基因研究进展

Bmi-1基因是多梳基因(Pc G)家族中重要的调控基因,参与调控细胞的增殖与分化,在维持正常干细胞的自我更新及多向分化的过程中起着重要作用。作为原癌基因,在人体的许多肿瘤中Bmi-1蛋白的表达水平是上升的,它可以阻断细胞周期蛋白p16INK4a和p14ARF抑制细胞增殖的作用,从而促进细胞转化和肿瘤形成。而Bmi-1与c-myc协同则可在多种肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。     

WAF1基因研究进展

WAF1(wild-type p53 activated fragment-1,WAF1)是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin-dependent kinase inhibitor, CDI)家族中最早被发现的成员,是细胞周期调控的主要分子之一,通过作用细胞周期的G1-S检测点(check point)使细胞周期停止在G1期[1,2],并诱导细胞凋亡.近年研究显示,WAF1在调控宫颈癌、乳腺癌细胞时,不引起细胞 凋亡.因此称为肿瘤调控基因更为合适.这一基因的调控十分复杂,除p53基因依赖途径和非p53基因依赖途径外,可 能还有其它的调控途径.WAF1在细胞周期的不同时期表达、在细胞内不同部位的表达具有各自的机理和生物效应. 尤其在大肠和乳腺肿瘤分子调控中起关键作用[3].     

P14ARF基因联合氟尿嘧啶对人结肠癌LOVO细胞的作用

目的观察p14ARF基因转染联合氟尿嘧啶对人结肠癌LOVO细胞的作用.方法采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后LOVO细胞中p14ARF基因的表达.四唑蓝比色法（MTT法）检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比在不同浓度的氟尿嘧啶作用下转染前后LOVO细胞的增殖情况.结果LOVO细胞呈现p14ARF基因缺失变异.RT-PCR和Western blot法证实转染后LOVO细胞中有p14ARF基因的表达.p14ARF基因转染后细胞增殖受抑,流式细胞仪显示p14ARF基因诱发凋亡.在氟尿嘧啶0.1 g/mL的作用下,未转染的LOVO细胞的增殖速度未受影响,而转染后LOVO细胞较未用药时的抑制率增加;氟尿嘧啶1、10、100 μg/mL时,对转染前后LOVO细胞均有增殖抑制作用,且呈剂量相关性.氟尿嘧啶对转染后LOVO细胞的抑制率明显高于未转染的LOVO细胞.结论p14ARF基因转染可抑制LOVO细胞增殖.p14ARF基因和氟尿嘧啶联合用于LOVO细胞能够加强氟尿嘧啶的增殖抑制作用,明显提高LOVO细胞对氟尿嘧啶的敏感性.     

P14ARF、突变型p53基因表达与H101治疗头颈部鳞癌疗效的关系

目的:通过对肿瘤组织P14ARF、突变型p53基因蛋白表达状态与E1B-55K缺陷型腺病毒(简称H101)治疗头颈部鳞癌疗效关系研究,进一步探讨H101基因治疗的作用机制.方法:应用免疫组化法对36例H101治疗的晚期头颈部鳞癌病例进行肿瘤组织P14ARF、突变型p53基因蛋白进行检测,分析肿瘤组织P14ARF、突变型p53基因蛋白表达与H101临床疗效的关系.结果:突变型p53和P14ARF基因蛋白在36例头颈部鳞癌中总阳性表达率分别为55.6%(20/36)和44.4%(16/36).突变型p53- P14ARF (即P14ARF基因蛋白无缺失)患者均无有效病例;突变型p53- P14ARF-(即P14ARF基因蛋白有缺失)患者8例中有4例有效(P＞0.05).结论:对于p53基因无突变的恶性肿瘤,P14ARF基因异常可能是H101能在肿瘤细胞内有效复制并杀死肿瘤细胞的一个重要影响因素.     

p53家族新成员—p63基因的类型、功能及应用

p5 3是研究得最为广泛和深入的肿瘤相关基因 ,分为野生型和突变型 ,野生型 p5 3为肿瘤抑制基因 ,而突变型具有致癌作用 ,其家族成员直至 1 997年才陆续被发现 ,分别是 p73和 p63。此两种基因与p5 3具有较大的同源性 ,而且全长表达的蛋白可激活 p5 3相关靶基因 ,诱发细胞周期停滞及细胞凋亡 ,因而可能是候选的肿瘤抑制基因。但某些蛋白的与p5 3具有截然不同的功能 ,在肿瘤的发生和细胞凋亡的研究中受到瞩目。本文 p63的类型、功能及应用作一综述。1　 p63基因和蛋白的结构及功能　　p5 3肿瘤抑制基因在细胞周期调节和细胞凋亡方面有极其重要…     

p16INK4a在宫颈病变中的研究进展

宫颈癌严重威胁女性健康和安全,是导致女性死亡的主要恶性肿瘤之一。近年来我国宫颈癌的发病率正以每年2%～3%的速度增长,因此早期诊断对于预防和治疗宫颈癌具有决定性的意义。p16INK4 a是近年来发现的肿瘤抑制基因,是一种细胞周期蛋白D依赖性激酶的抑制剂,研究表明p16INK4 a的表达与宫颈癌的发生发展密切相关。目前宫颈癌筛查中的细胞学检查及hr-HPV检测方法都具有一定的局限性,寻求新的筛查方法已成为研究热点。p16INK4 a的检测技术易于普及、操作简便,不仅能提高宫颈癌的早期诊断率、预测宫颈癌的发生发展,且较HC-Ⅱ检测更能区分是否存在病变,从而降低传统宫颈癌筛查的假阳性率及假阴性率,提高筛查的灵敏度和特异度,为宫颈癌的筛查开辟了新途径,值得进一步深入研究。     

p16^INK4a在宫颈病变中的研究进展

宫颈癌严重威胁女性健康和安全,是导致女性死亡的主要恶性肿瘤之一。近年来我国宫颈癌的发病率正以每年2%～3%的速度增长,因此早期诊断对于预防和治疗宫颈癌具有决定性的意义。p16INK4 a是近年来发现的肿瘤抑制基因,是一种细胞周期蛋白D依赖性激酶的抑制剂,研究表明p16INK4 a的表达与宫颈癌的发生发展密切相关。目前宫颈癌筛查中的细胞学检查及hr-HPV检测方法都具有一定的局限性,寻求新的筛查方法已成为研究热点。p16INK4 a的检测技术易于普及、操作简便,不仅能提高宫颈癌的早期诊断率、预测宫颈癌的发生发展,且较HC-Ⅱ检测更能区分是否存在病变,从而降低传统宫颈癌筛查的假阳性率及假阴性率,提高筛查的灵敏度和特异度,为宫颈癌的筛查开辟了新途径,值得进一步深入研究。     

p14ARF基因功能性恢复对人肺癌细胞放射敏感性的影响

目的 了解专职调控细胞周期的ｐ１４ＡＲＦ蛋白功能恢复或增强能否影响体外肺癌细胞的放射敏感程度。方法 选择了４株具有不同基因背景的肺癌细胞系,为综们引入人野生型ｐ１４ＡＲＦ基因。用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹和免疫组化检测外源性、ｐ１４ＡＲＦ人主使ＲＮＡ及蛋白表达,并筛选出阳性克隆,以母细胞系和转染空载体的阴性细胞为对照,分析转染ｐ１４ＡＲＦ的细胞在周期分布、放射存活分数及放射诱导的凋亡比例     

p14ARF upregulation of p53 and enhanced effects of 5-fluorouracil in pancreatic cancer

PancreaticcancerisaleadingcauseofcancerdeathamongChinese Only 5 %ofpatientsdiagnosedwithpancreaticcancersurvivefor5years Atthetimeofdiagnosis ,in 85 %ofpatientswithpancreaticcancer,thediseaseisnolongerconfinedtothepancreas 1　Thedevelopmentofnewtreatmentsis,therefore ,ofgreatimportance Severalgenetherapystrategieshavebeenexaminedfortheirtherapeuticpotentialinthetreatmentofthecancer 2 6Chromosome 9p2 1demonstratesahighrateoflossofheterozygosityinpancreaticcancer,suggestingthatthisregionharbor…     

乙型肝炎病毒X蛋白和p14ARF依赖性、非依赖性途径对肝癌细胞生长的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否通过p14ARF途径影响肝癌细胞生长及其作用机制.方法 将HBx及p14ARF单转染及共转染含野生型p53但不表达p14ARF脚的肝癌细胞株HepG2.实验分为pcDNA3、pcDNA3HBx、pcDNA3p14ARF、pcDNA3HBx+pcDNA3p14ARF4组.通过流式细胞仪比较各转染组HepG2细胞凋亡、细胞周期的变化情况.用含p53结合位点p21WAF1胴启动子荧光素酶活性检测和Western blotting观察各转染组细胞p14ARF、MDM2、p53、p21WAF1蛋白表达水平的变化.结果 HBx及p14ARF脚单转染及共转染含野生型p53但无p14\ARF表达的HepG2细胞,单转染HBx及p14ARF组其细胞凋亡率(14.11%、13.72%)、G0/G1期阻滞细胞数(63.62%、61.75%)、p21WAF1启动子荧光素酶活性(1.25±0.05、1.09±o.06)及p53、p21 WAF1蛋白的表达较对照组(10.66%、57.42%、0.77±0.03)明显升高,而共转染组与单转染p14ARF组相比其p14ARF蛋白表达及上述各项指标(18.61%、66.74%、3.53±0.43)又进一步升高.结论 HBx通过依赖及非依赖p14ARF途径诱导p53表达从而导致激活p21WAF1,进而引起细胞周期G0/G1期的阻滞及细胞凋亡的增加.     

非小细胞肺癌患者肿瘤和癌旁组织p14ARF的甲基化状态检测及临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌中的 p14ARF基因启动子甲基化状态及其在非小细胞肺癌癌变中的作用。方法收集非小细胞肺癌及配对的癌旁组织各107例,采用改良巢式 MSP（methylation specific PCR, MSP）检测肺癌患者肿瘤标本以及配对的癌旁组织中 p14ARF基因外显子 CpG岛的启动子甲基化情况。结果p14ARF甲基化在107例肺癌中肿瘤组织中表达率为33.6%;而在配对的癌旁组织中表达率为12.1%;两组之间差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）,并且两者相关性极差。结论肺癌的癌组织及配对的癌旁组织中p14ARF启动子甲基化存在明显差异,结合其他辅助检查可提高肺癌诊断的阳性预测值。     

非小细胞肺癌中p14ARF和mtp53蛋白表达与临床病理参数的关系

目的探讨p14ARF和mtp53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测15例正常肺组织、18例癌旁组织和98例NSCLC组织标本中p14ARF和mtp53的表达。结果(1)在正常肺组织、癌旁组织和NSCLC中p14ARF蛋白的阳性表达率分别为93.3%、83.3%、55.1%,mtp53蛋白的阳性表达率分别为6.7%、44.4%、79.6%;p14ARF蛋白和mtp53蛋白在NSCLC中的表达与正常肺组织和癌旁组织比较均有显著性差异(P<0.01);p14ARF蛋白表达与临床病理分期、有无淋巴结转移、有无脉管浸润无关(P>0.05),而与病理分化程度有关(P<0.01);mtp53蛋白表达与临床病理分期、病理分化程度(P<0.01)及有无脉管浸润(P<0.05)有关,而与有无淋巴结转移无关(P>0.05);(2)在NSCLC中,pl4ARF与mtp53蛋白共表达为36.7%,一致性为38.8%,二者表达呈负相关(r=-0.3553,P<0.001)。结论p14ARF表达下调及mtp53表达上调在NSCLC的发生、发展中发挥着一定的作用;联合检测p14ARF和mtp53有助于判断NSCLC的分级和转移情况。     

小细胞肺癌p14ARF、p16INK4a蛋白表达及其临床意义

目的研究p14ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学S-P方法检测24例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达.结果 24例标本中,15例p14ARF蛋白表达阴性(62.50%),4例p16INK4a蛋白表达阴性(16.67%),3例p14ARF、p16INK4a蛋白表达均阴性(12.50%).p14ARF、p16INK4a蛋白阴性率均与患者性别、年龄、临床分期及淋巴结转移无显著性差异(P＞0.05).结论 SCLC中p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性是各自独立的事件,可能与SCLC的发生有关,其中p14ARF表达阴性占主要地位.     

INK4/ARF基因座甲基化协同调控与非小细胞肺癌的关系

目的 分析INK4/ARF基因座甲基化状态与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性及探讨基因座内各编码基因甲基化协同调控的可能性。 方法 临床收集81例非小细胞肺癌患者手术切除的配对癌灶及癌旁石蜡组织标本;采用甲基化特异性PCR（MSP）对石蜡组织标本DNA进行p16INK4a、p15INK4b及p14ARF基因甲基化检测并与临床病理特征进行相关性分析。结果 癌灶组织中的p16 INK4a基因甲基化在鳞状细胞癌中的分布明显高于腺癌（P<0.01）,并与肿瘤大小密切相关（P<0.05）。癌灶组织中p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态密切相关（P<0.05）;结论 INK4/ARF基因座启动子区甲基化与非小细胞肺癌发生、发展相关;p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态的关联提示INK4/ARF基因座可能存在表观协同调控方式。     

p14ARF、p53抑癌基因与胰腺癌发生、发展的相关研究

目的:研究抑癌基因p14ARF、p53在胰腺癌组织中的表达和胰腺癌细胞株PC-3转染p14ARF基因前后的生长状况,探讨它们对胰腺癌发生、发展的影响.方法:采用免疫组织化学法检测10例正常胰腺组织、42例胰腺癌组织中p14ARF蛋白、p53蛋白的表达.将外源性p14ARFcDNA重组质粒pCI-neo-p14ARF和空载体质粒pCI-neo分别转染入胰腺癌PC-3细胞中,观察转染后胰腺癌PC-3细胞株的生长状况.结果:正常胰腺组织中p14ARF的表达率为90%,胰腺癌组织中为35.7%;正常胰腺组织中p53的表达率为0,胰腺癌组织中为45.2%.胰腺癌PC-3细胞的p14ARF基因呈缺失变异.外源性野生型p14ARF基因和空载体质粒pCI-neo成功转染入PC-3细胞,转染p14ARF基因的胰腺癌细胞株第1天生长抑制率为22%,第5天为26%.结论:抑癌基因p14ARF蛋白在胰腺癌中低表达,突变型p53蛋白在胰腺癌中呈高表达;转染p14ARF基因的胰腺癌细胞株生长受到抑制;抑癌基因p14ARF、p53对胰腺癌的发生、发展可能产生影响.     

Relationship between alterations of p16INK4a and p14ARF genes of CDKN2A locus and gastric carcinogenesis

Objective To investigate the relationship between alterations of p16INK4a and p14ARF genes and gastric carcinogenesis. Methods The tumors and neighboring gastric tissues from 48 patients with gastric cancer were studied. The homozygous deletion, mutation, methylation of the CpG islands, and mRNA expression of p16INK4a and p14ARF genes were assessed by PCR, PCR-SSCP, PCR based methylation assay, and RT-PCR. Results ① The homozygous deletion rate of p16INK4a and p14ARF was 35.4% （17/48）, and no homozygous deletion was examined in any gastric tissue neighboring the tumor. ② There was no point mutation of p16INK4a and p14ARF in 31 gastric cancers without homozygous deletion or in the matched gastric tissues adjacent to the tumor. ③ Methylation of the CpG islands of p16INK4a and p14ARF was detected in 47.9% (23/48) of gastric cancers, while methylation was observed only in 2 of 48 gastric tissues neighboring the cancer with a significant difference (P&lt;0.01). ④ The loss rate of p16INK4a mRNA was 47.9% (23/48) in gastric cancer, and the patients of the combined methylation of exons 1α and 2 had a higher loss rate (100%, 6/6) of p16INK4a mRNA than those of the methylation of the other exons (11.8%, 2/17, P&lt;0.01); the loss rate of p14ARF mRNA was 45.8%(22/48) in gastric cancer, and patients with the combined methylation of exons 1β and 2 had a higher loss rate (100%, 3/3) of p14ARF mRNA than those of the methylation of the other exons (15%, 3/20, P&lt;0.05). ⑤ The combined loss of p16INK4a and p14ARF mRNAs was examined in 1 (5.6%) of 18 patients of well and moderately-differentiated carcinomas, and 11 (36.7%) of 30 patients of poorly and not-differentiated carcinomas with a significant difference (P&lt;0.05). Conclusion p16INK4a and p14ARF genes are frequently inactivated by homozygous deletion and methylation of the 5’CpG islands in gastric cancer, which may play an important role in the carcinogenesis of gastric cancer.