米诺环素对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的抑制作用

目的 观察米诺环素对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响.方法 30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组、氯化钠溶液组、预处理组、大剂量组、小剂量组,每组6只.采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学、Hoechst染色、磁共振T2加权像等方法,了解米诺环素对缺血后细胞凋亡的影响.结果 假手术组可见少量半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3阳性细胞,氯化钠溶液组缺血灶周围可见大量caspase-3阳性细胞.与假手术组相比,氯化钠溶液组的caspase-3光密度值显著升高(P＜0.01);与氯化钠溶液组相比,预处理组、大剂量组、小剂量组的caspase-3光密度值均显著降低(P值分别＜0.05、0.01).假手术组大鼠大脑皮层只有少量凋亡细胞,氯化钠溶液组大鼠脑缺血灶周围可见大量凋亡细胞.与假手术组相比,氯化钠溶液组的细胞凋亡率显著降低(P＜0.01);与氯化钠溶液组相比,预处理组、大剂量组、小剂量组的细胞凋亡率均显著升高(P值均＜0.01).与氯化钠溶液组相比,预处理组、大剂量组、小剂量组的相对脑缺血体积均显著缩小(P值分别＜0.05、0.01).与假手术组相比,氯化钠溶液组白细胞介素-1β转化酶(ICE)的表达显著升高(P＜0.05);与氯化钠溶液组相比,预处理组、大剂量组、小剂量组ICE的表达均显著降低(P值均＜0.05).结论 米诺环素能抑制缺血后细胞凋亡.     

米诺环素对脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响

目的 探讨米诺环素对局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响.方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.设定假手术组,生理盐水组,米诺环素预处理组、30 min组、4 h组.用免疫组织化学法、逆转录聚合链式反应技术、放射免疫法和核磁共振T2WI扫描等方法,观察米诺环素对缺血再灌注大鼠脑组织环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素-1β转化酶(ICE)的表达,前列腺素E2(PGE2)的含量及脑缺血体积的影响.结果 米诺环素能降低缺血再灌注大鼠脑组织中PGE2的含量,减少COX-2、ICE的表达,缩小脑梗死体积.结论 米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应有抑制作用.     

米诺环素对脑缺血再灌注损伤后炎性反应影响

目的 探讨米诺环素对局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响。方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。设定假手术组、生理盐水组、米诺环素预处理组、30min组、4h组。用免疫组织化学法、逆转录聚合链式反应技术（RT-PCR）、放射免疫法和核磁共振T2WI扫描等方法,观察米诺环素对缺血再灌注大鼠脑组织COX-2、ICE的表达、PGE2的含量及脑缺血体积的影响。结果 米诺环素能降低缺血再灌注大鼠脑组织中PGE2的含量,减少COX-2、ICE的表达,缩小脑梗死体积。结论 米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应有抑制作用。     

低剂量米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 探讨静脉用低剂量米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及其潜在的机制。方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠72只,随机分为假手术组,缺血再灌注组和米诺环素组。缺血再灌注2天,采用TTC染色法测定脑梗死体积,伊文思蓝(EB)法评估血脑屏障的通透性,Western blot法检测缺血侧脑组织内高迁移率族蛋白(HMGB1)及Ibca1的表达。术后第2、7和14 天,采用改良的神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能。结果 缺血再灌注第2天,模型组大鼠脑梗死体积明显增大,缺血侧脑组织内EB的渗出量[(4.40±0.73) μg/g], HMGB1(0.862±0.058)和Iba1(0.325±0.041)蛋白表达较假手术组明显增加(P<0.05)。同缺血再灌注组相比,米诺环素组大鼠脑梗死体积明显减小(P<0.05),EB的渗出量明显降低[(2.71±0.68) μg/g,P<0.05],HMGB1(0.353±0.036)和Iba1(0.137±0.030)蛋白表达明显降低(P<0.05)。米诺环素组大鼠神经功能评分显著下降(P<0.05)。 结论 米诺环素可以通过降低大鼠脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积,血脑屏障的通透性及小胶质细胞的激活等方面发挥神经保护作用。     

低剂量米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 探讨静脉用低剂量米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及其机制。方法 成年雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和米诺环素干预组(I/R+MC组)。I/R组行大脑中动脉阻塞再灌注术;S组行假手术操作;I/R+MC组在再灌注术后,尾静脉注射3 mg/kg米诺环素,每日2次,持续14 d。缺血再灌注后2 d,采用TTC染色法测定脑梗死体积,伊文思蓝(EB)法评估血脑屏障的通透性,蛋白质印迹法检测缺血侧脑组织内高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)及离子钙接头蛋白(ionized calcium-binding adaptor molecule 1,Iba1)的表达。分别于再灌注后2、7、14 d,采用改良的神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能。结果 缺血再灌注后2 d,I/R组大鼠脑梗死体积较S组增大,缺血侧脑组织内EB的渗出量、HMGB1和Iba1蛋白表达均较S组明显增加(P<0.05)。与I/R组比较,I/R+MC组大鼠脑梗死体积减小(P<0.05),EB的渗出量、HMGB1和Iba1蛋白表达量降低(P<0.05)。I/R+MC组大鼠的神经功能缺损评分较I/R组下降(P<0.05)。结论 米诺环素可能通过降低大鼠脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积、血脑屏障的通透性及小胶质细胞激活等发挥神经保护作用。     

米诺环素对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨米诺环素对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法:72只SD雄性大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组),缺血再灌注组(Ir组),米诺环素组(M组),每组各4个时相(6h、12h、24h、72h).采用切除右肾,夹闭左肾动脉45min后恢复灌流建立缺血再灌注损伤模型.测定髓过氧化物酶(NPO)活性及血清肌酐(Scr)水平,以反映中性粒细胞活化及肾功能损害的程度.观察肾组织病理学改变及超微结构变化.结果:缺血再灌注组MPO活性和Scr水平升高,米诺环素组明显低于缺血再灌注组,2组比较差异有显著性意义(P＜0.05,P＜0.01).缺血再灌注组出现明显的肾组织病理学及超微结构损害,米诺环素组上述变化轻于缺血再灌注组.结论:米诺环素对大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用.     

米诺环素抑制脑缺血再灌注后小胶质细胞激活的机制研究

【摘要】 目的 观察米诺环素对大鼠脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤后小胶质细胞的激活及神经炎症的影响,探讨腺苷A_{2A受体（adenosine A2A}receptor,A_2AR）在米诺环素调节小胶质细胞活化中的作用机制。 方法 采用线栓法阻塞大脑中动脉制作大鼠I/R损伤模型,将30只SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及米诺环素组〔I/R造模时,米诺环素按体质量3 mg/kg（质量浓度为100 g /1 mL）尾静脉注射,每日2次〕。再灌注24 h后,处死大鼠,取大鼠缺血侧脑组织,采用小胶质细胞特异性标记抗体CD11b/c染色、抗A_2AR抗体免疫荧光以及双标染色检测缺血灶周围活化的小胶质细胞和A_2AR蛋白的表达。Western blot法检测缺血脑组织内白介素-1β、-6（IL-1β、IL-6）及A_2AR蛋白的表达。结果 I/R模型组CD11b阳性的小胶质细胞数明显多于假手术组;与I/R模型组相比,米诺环素组IL-1β、IL-6及A_2AR蛋白表达下降（P <0.05）,活化的小胶质细胞数目明显减少。结论 米诺环素可抑制局灶性脑I/R损伤所致的小胶质细胞激活及神经炎症反应,其机制可能与下调A_2AR蛋白的表达有关。     

米诺环素对局灶性脑缺血大鼠脑可塑性的影响

目的 观察米诺环素对大鼠脑缺血再灌注（I/R）损伤后皮质神经元结构及突触素（synaptophysin, SYN）蛋白表达的影响。 方法 将36只大鼠随机分为假手术组（Sham组）、I/R模型组（I/R组）及米诺环素组（Min组）,每组12只。Sham组不进行I/R处理,不给药。I/R组及Min组均采用线栓法阻塞大脑中动脉制作大鼠MCAO模型,再尾静脉注射PBS或米诺环素（3 mg/kg,2次/d）14 d后,采用Montoya楼梯实验评估3组大鼠前肢运动功能,HE染色观察皮质神经元的形态结构,免疫荧光法观察缺血灶周围神经突的生长,Western blot法检测缺血脑组织内SYN蛋白的表达。结果 假手术组大鼠无明显神经功能缺损,皮层神经元细胞形态正常,微管相关蛋白-2（microtubule-associated protein-2, MAP-2）阳性神经元排列整齐,神经突较长;同模型组相比,米诺环素组大鼠的前肢运动功能改善,MAP-2及SYN蛋白表达增加,两组差异有统计学意义（P<0.05）。结论 米诺环素能促进大鼠缺血皮层神经元神经突的生长、突触素的表达及神经功能的恢复,发挥对脑组织可塑性的调节作用。     

米诺环素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨米诺环素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。方法：54只雄性SD大鼠随机 分成假手术对照组、缺血再灌注组和米诺环素组,每组18只。米诺环素组在缺血再灌注模型的基础上,自手术前 36 h开始给予米诺环素灌胃给药(45 mg/kg),以后每12 h给药1次(22.5 mg/kg)。再灌注后2,6,24 h检测血清谷丙转 氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平;肝组织行HE染色,观察病理组织学改变并计算评分(根据Suzuki标准);肝组织匀浆检测丙二醛 (malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平;real-time PCR检测肝组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β) mRNA的表达;Western印迹测定Dickkopf-1(DKK-1)和β-连 环蛋白(β-catenin)的表达。结果：再灌注2,6,24 h后,与缺血再灌注组比较,米诺环素处理组血清ALT,AST,LDH 水平,以及肝组织病理学半定量评分、肝组织中TNF-α和IL-1β mRNA水平的表达均降低(均P<0.05);氧化损伤指标 MDA和MPO在肝组织中的含量减少(均P<0.05);米诺环素组DKK-1的蛋白表达下调(P<0.05),β-catenin蛋白表达上调 (P<0.05)。结论：米诺环素可减轻缺血再灌注对肝的损伤,其机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而减轻肝氧 化应激,并抑制促炎性细胞因子的释放。     

雷公藤甲素对糖尿病脑大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察雷公藤甲素（Triptolide,TPL）对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞凋亡的影响。方法通过HE染色、TUNEL、RT-PCR、免疫组化等方法,观察TPL对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑组织形态学改变、细胞凋亡及survivin基因mRNA和蛋白的表达。结果 TPL可以明显改善糖尿病大鼠脑组织病理形态改变。与模型组相比,TPL可显著减少大鼠脑组织凋亡细胞,survivin基因的表达明显增加。结论 TPL对糖尿病脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控survivin基因的表达有关。     

益气活血方对脑缺血大鼠脑组织Glu、GABA及NR1表达的影响

目的观察益气活血方对急性脑缺血再灌注大鼠缺血脑组织谷氨酸（glutamate,Glu）、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyrate acid,GABA）含量及神经受体1（neuroreceptor1,NR1）表达的影响。方法采用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血汤组。采用高效液相色谱法和链霉亲合素-生物素酶复合物（streptavidin-biotinidase complex,SABC）染色法,分别检测Glu、GABA含量和NR1表达水平。结果脑缺血2h再灌注各时间点与假手术组比较,模型组Glu、GABA含量和NR1表达均显著升高（P〈0．05,P〈0．01）;与模型组比较,治疗组脑缺血后6,48,72hGlu、NR1水平显著降低;72h GABA含量显著提高（P〈0．01）。结论益气活血方可能通过调节兴奋性氨基酸Glu和抑制性氨基酸GABA含量的平衡,及减少NR1表达防止脑缺血再灌注损伤。     

西洛他唑通过P38 MAPK信号途径对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨西洛他唑对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法将75只成年雄性SD大鼠按数字表法随机分成假手术组、模型组、西洛他唑低剂量（10mg／kg）组、西洛他唑中剂量（20mg／kg）组和西洛他唑高剂量（40mg／kg）组,每组15只,通过大脑中动脉阻塞法建立起脑缺血再灌注模型。按照LongaEZ法评估动物神经功能;Tunel染色法检测大鼠脑神经细胞凋亡,采用Westernblot法检测半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路相关蛋白的表达。结果与假手术组相比较,模型组神经功能评分和细胞凋亡率均升高,差异有统计学意义;西洛他唑组的神经功能评分和细胞凋亡率较模型组均降低（P〈0．05）;与模型组相比较,caspase-3和MAPK信号转导通路中P—P38的表达水平均随西洛他唑剂量的增加而逐渐降低（P〈0．05）,而西洛他唑对MAPK信号转导通路中其他成员P—ERK和P—JNK的表达无明显影响。结论西洛他唑对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用与抑制神经细胞凋亡有关,其抗凋亡作用机制可能与抑制P38MAPK信号转导通路途径有关。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c-fos表达和神经元的凋亡

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c fos表达和神经元的凋亡。方法wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭 30min ,造成全脑缺血 ,松开动脉夹再灌注。动物均于再灌注 1h行c fos原位杂交 ,再灌注 4 8h行TUNEL染色 ,观察海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注后 ,大鼠海马CA1区c fos基因表达增强 ,缺血再灌注大鼠的TUNEL染色可见CA1区有大量阳性细胞 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论脑缺血再灌注后导致海马c fos基因的表达显著增强 ,细胞凋亡明显增加。     

中风康对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响

目的 探讨中风康对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响。方法 采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型，以步长脑心通为对照，于脑缺血6、12、24、48h动态观察中风康对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响。结果 与假手术组比较，大鼠局灶性脑缺血6h，模型组出现明显脑水肿（P〈0．01），随缺血时间延长，水肿逐渐进展，至24h水肿达到高峰（P〈0．01），与同时点模型组比较，各治疗组脑水肿均有不同程度减轻，以中风康高剂量组减轻最为显著（P〈0．01）。结论 中风康可减轻脑水肿，有效维护血脑屏障的完整性，减轻局灶性脑梗死引起的缺血性损伤。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血梗死体积及微血管新生的影响

目的:探讨亚低温对局灶性缺血脑组织梗死体积和微血管新生的影响。方法:采用改良的线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型(MCAO),将模型成功大鼠随机分为对照组和亚低温治疗组,并在术后2 h,7 d及14 d进行神经功能评估。术后14 d观察亚低温治疗对脑梗死体积及梗死灶周围区微血管密度的影响。结果:对照组和亚低温组在术后2 h神经功能评分没有统计学差异,术后7 d及14 d亚低温组神经功能评分明显低于对照组,差异具有统计学意义。术后14 d亚低温组和对照组脑梗死体积分别为(81.9±17.7)mm3和(110.6±22.5)mm3,微血管密度分别为(373.10±68.81)/mm2和(208.90±61.38)/mm2,差异均具有统计学意义。结论:亚低温对缺血脑组织具有保护作用,促进血管新生可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注Bcl-2、c-fos、Caspase-3的影响

目的:探讨川芎嗪干预脑缺血再灌注损伤后对Bd-2蛋白、C-fos蛋白、Caspase-3蛋白的表达影响及其保护大脑损伤的作用机制.方法:将SD大鼠30只,随机分为3组,即假手术组、模型组和治疗组,每组10只.建立脑缺血再灌注模型.治疗组用川芎嗪干预,采用免疫组化法测定川芎嗪干预大鼠脑缺血24 h后对Bd-2蛋白、C-fos蛋白、Caspase-3蛋白表达的变化.结果:在脑缺血再灌注损伤24 h后,治疗组脑组织Bcl-2蛋白阳性神经元数较模型组明显增多,差异有显著性意义(P＜0.01);治疗组C-fos蛋白和Caspase-3蛋白表达阳性神经元数较模型组明显减少,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:川芎嗪能上调Bcl-2蛋白和下调C-fos蛋白和Caspase-3蛋白表达,川芎嗪可能通过抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡机制,从而对脑脑缺血再灌注损伤有保护作用.     

麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的影响

目的观察麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元内Caspase-3和神经元凋亡的影响。方法大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,应用免疫印迹法和流式细胞计数法分别检测Caspase-3和细胞凋亡。结果再灌注72h后海马Caspase-3表达升高,凋亡细胞增多,麦芽醇组Caspase-3表达和凋亡细胞明显减少。结论麦芽醇对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的观察麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经元型NOS(nNOS)的影响。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌流模型,应用免疫组织化学方法检测脑组织中nNOS的表达。结果脑缺血再灌注损伤后,脑组织中nNOS表达明显增强,给予麦芽醇后,nNOS表达减弱。结论麦芽醇可抑制nNOS表达,对脑缺血再灌注损伤有保护作用。