荧光原位杂交技术及染色体核型分析在罗伯逊易位型21-三体检测中的应用

目的 通过对孕妇羊水进行染色体核型、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析,探讨两者联合检测在诊断罗伯逊易位型21-三体中的应用价值.方法 为2010年1月至2011年12月进行产前诊断的孕妇抽取羊水,经体外细胞培养后进行G显带染色体核型分析.对发现的5例罗伯逊易位采用FISH检测间期细胞13、18、21及X/Y的染色体数目,并分析孕妇及其丈夫外周血染色体核型.结果 两个胎儿父母外周血染色体核型正常,其中一个胎儿羊水染色体核型为46,XY,rob(21;21)(q10;q10),FISH检测提示其为21-二体,另一个胎儿核型为46,XY,rob(14;21)(q10;q10),FISH检测证实其为21-三体.另外3个胎儿母亲外周血染色体核型分别为45,XX,rob(14;21)(q10;q10)、45,XX,rob(15;21)(q10;q10)、45,XX,rob(21; 22) (q10; q10),其羊水染色体核型分别为46,XX,rob(14;21)(q10;q10)、46,XY,rob(15;21) (q10;q10)、46,XX,rob(21;22)(q10;q10).FISH检测证实其均为21-三体.结论 染色体核型分析结合FISH检测有助于明确罗伯逊易位型21-三体的诊断,但FISH检测同源罗伯逊易位型21-三体征有一定局限性.     

临沂地区58例罗伯逊易位携带者的遗传学分析北大核心CSCD

目的探讨临沂地区各种罗伯逊易位携带者异常妊娠的几率,计算各种核型的比例,统计罗伯逊易位携带者和罗伯逊易位型21三体患者的性别比,为遗传咨询提供依据。方法采用外周血淋巴细胞培养技术制备染色体,通过G显带进行核型分析,对异常核型者进行家系调查和遗传学分析。结果在10339例进行遗传咨询的人群中,共检出58例罗伯逊易位携带者和22例罗伯逊易位型21三体患者,罗伯逊易位携带者中der（13;14）和der（14;21）所占比例分别为50．00％和17．24％;易位型21三体患者只有der（14;21）和der（21;21）两种核型,分别占54．55％和45．45％。罗伯逊易位携带者男女之比为0．57：1（21／37）,与正常人群差异极为显著（P〈0．05）;易位型21三体中男女之比为1．75：1（14／8）,与正常人群无显著差异（P〉0．05）。53例非同源罗伯逊易位携带者中有7例男性因精子质量极差不育,4例未到生育年龄,其余42例平均流产率为92．86％（39／42）,平均流产（或其他异常妊娠）2．26次（95／42）,非同源罗伯逊异位携带者异常妊娠和正常妊娠的比例为7．4：1（96／13）。夫妇一方为同源罗伯逊易位携带者的异常妊娠率为100％,平均异常妊娠2．8次。结论罗伯逊易位是造成反复流产及生育易位型21三体患儿的主要遗传学原因之一,不同核型的个体在临床表现上有很大的差异。针对不同核型的罗伯逊易位携带者在遗传咨询时应有所侧重。对这些患者进行染色体检查、遗传咨询和生育指导非常必要。     

男性性腺发育不全患者外周血淋巴细胞永生细胞系的建立

目的建立男性性腺发育不全患者外周血永生细胞系以保存性腺发育不全患者特有的基因组资源,为进一步探讨性腺发育不全的发生机理提供材料.方法收集40例男性性腺发育不全患者的外周血样品,采用EB病毒转化技术,把患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系;用遗传学方法检测其建系前后的遗传稳定性.结果建系成功40例,所有建成的细胞系冻存后复苏成功率100%,核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的.结论性腺发育不全患者永生细胞系的建立,为进一步研究性腺发育不全导致的不育症分子水平发病机理提供随时可取的实验材料.     

易位型21三体的临床及细胞遗传学分析

21三体综合征,又称Down综合征（Down’s syndrome）,属常染色体畸变,是儿科最常见的一种严重的先天性智力发育不全性遗传疾病,该病在新生儿的发病率为1／500—1／800。90％-95％的先天愚型为单体型,而易位型的只占6％-8％。     

肺动脉瘘伴t（1；3）易位家系永生细胞库的建立与保存

[摘要]目的 建立肺动脉瘘伴t（1;3）易位家系永生细胞库,为肺动脉瘘发病及遗传机制的研究提供永久的研制材料。方法 用EB病毒（Epstein-Barr virus)转染肺动脉瘘患者外周血B淋巴细胞,采用20％FBS RPMI1640培养液,配合环胞霉素A和PHA,置37℃5％CO2培养箱内培养,及时加液或少量换液,当细胞增长到一定数量时分瓶传代,分瓶传代到16瓶及以上予以冻存,之后复苏以证明冻存成功情况,结果 成功地对肺动脉瘘伴t（1;3）易位家系中6个个体建立了永生细胞株,其中,肺动脉瘘患者2株,患者家属正常对照4株。结论 所有建成的细胞冻存后复苏的成功率为100％,经染色体G显带分析未见异常,表明建立细胞株的方法稳定。     

罗氏易位伴21-三体一例

病例：患者,女,4岁,因说话语音不清,不会走路来我院就诊。体检：身高85cm,眼距宽,外眦上斜,塌鼻,常张口弄舌,上腭高尖,心肺检查无异常。父母正常,母亲孕2产2,一个哥哥发育正常,母亲孕育该患儿时23岁,孕时未服用药物,无有害毒物接触史,无家族遗传病史。     

肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系永生细胞系的建立与保存

目的 建立肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系永生细胞系,为肺动脉瘘发病及遗传机制的研究提供永久的研究材料.方法 用EB病毒(Epstein-Barr virus)转染肺动脉瘘患者外周血B淋巴细胞,在37℃ 5%CO_2培养箱内培养(培养液成分:20%FBS、RPM11640、环胞霉素A和PHA),当细胞增长到汇合状态时传代及冻存.结果 所有建立的细胞系冻存后复苏的成功率为100%,经染色体G显带分析未见异常,表明建立细胞系的方法稳定.结论 成功地对肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系中6个个体建立了永生细胞系.其中2个为肺动脉瘘患者,4个为患者家属正常对照.     

67例染色体罗伯逊易位携带者的细胞遗传学分析

目的通过对7816例因反复流产、不孕不育、生长发育迟缓等患者进行外周血染色体检查结果统计分析,进一步探讨染色体罗伯逊易位的临床意义及指导临床治疗。方法采用外周血淋巴细胞染色体培养技术,通过G显带,核型分析。结果外周血染色体检查共计检测出67例染色体罗伯逊易位,其中以Rob(13q14q)和Rob(14q21q)为主,分别占65.6%(44/67)和13.4%(9/67)。结论染色体罗伯逊易位是导致反复流产、不良孕产史、不孕不育和身材矮小等的重要遗传因素。同时染色体罗伯逊易位可遗传给后代,应做好产前诊断。     

1例由D／G易位21三体综合征的家系调查

常染色体的平衡相互易位，由于总的遗传物质没有增加或丢失，故绝大多数个体不表现明显异常，仅在极少数情况下．有的会表现精神发育迟缓。现将一病例及家系调查报告如下。     

21-三体嵌合型母亲二次妊娠21-三体患儿

目的报告1例嵌合型母亲连续2次孕育单纯型21-三体患儿。方法对21-三体患儿、21-三体胎儿和其父母的血标本、父亲精子进行了DNA多态性检测,选择2个SRTR多态性位点,即D21S1412和D21S11,进行荧光定量PCR检测以确定额外21号染色体的起源。对父亲和母亲的外周血染色体和母亲皮肤染色体也进行了分析。结果对2个患儿与双亲的STR结果进行比较,显示2个患儿的额外21号染色体都来自母亲。双亲的STR检测中仅发现有2个微卫星标志物,外周血淋巴细胞染色体也均为正常。但母亲皮肤成纤维细胞检测到21-三体的细胞存在,占4%。结论母亲是21三体细胞/正常细胞的嵌合体,推测母亲生殖细胞中存在21三体细胞与正常细胞的嵌合,这可能是导致连续2次孕育21-三体患儿的原因。     

Meiotic segregation of a 21;22 Robertsonian translocation.

In-vitro fertilization of hamster oocytes with human spermatozoa has been used to study heterozygotes for structural chromosome abnormalities. To date only four men heterozygous for Robertsonian translocations have been examined. In this study, 150 sperm chromosome complements from a 21;22 translocation were investigated. There was no evidence of an interchromosomal effect since the frequency of abnormalities unrelated to the translocation was within the range of normal donors. The frequency of unbalanced complements was 3.4%, which is similar to other Robertsonian translocations. As expected, an equivalent number of normal (n = 74) and balanced (n = 70) karyotypes was observed.     

Meiotic segregation patterns and ICSI pregnancy outcome of a rare (13;21) Robertsonian translocation carrier: a case report

t(13;21) is an uncommon Robertsonian translocation (RT) with limited information in the literature. Hereby, we assessed the meiotic segregation and interchromosomal effect (ICE) in sperm nuclei from a t(13;21) carrier. The pregnancy outcome following ICSI was also included as reference for physicians and patients. Dual-colour fluorescent in situ hybridization (FISH) was carried out to analyse the segregation pattern of chromosomes 13 and 21, while triple-colour FISH was used to investigate the possible concurrence of ICE. With respect to chromosomal constitutions of 13 and 21, 88.39% of the spermatozoa were normal or balanced due to alternative segregations, and 11.08% showed nullisomy or disomy as a result of adjacent segregations. However, for chromosome 18 and sex chromosomes, the proportion of normal haploids was 98.79%. The rate of disomy was not significantly higher than the controls for either chromosome 18 or X/Y. The rare t(13;21) case exhibited a similar pattern of meiotic segregation as in the common RTs. ICEs were not observed in the current case.     

中孕期超声筛查胎儿21-三体与18-三体综合征的结果分析

目的探讨中孕期超声筛查胎儿21-三体综合征与18-三体综合征的价值。方法 2011年1月~2013年6月在我院行羊水穿刺及脐血穿刺1562例病例,产前均在我院至少接受过一次超声检查,诊断21-三体儿22例,18-三体儿6例。孕妇年龄23~45岁,对其超声图像进行回顾性分析。结果本研究28例胎儿,除了7例21-三体儿超声未见明显异常外,另外15例21-三体儿与6例18-三体儿超声提示至少一个或一个以上的解剖结构异常或超声软指标。结论中孕期超声发现胎儿解剖结构畸形与超声软指标对于筛查21-三体与18-三体综合征具有重要的临床价值。     

Concurrence of ring 21 and trisomy 21 in children of normal parents

We present a case of two siblings with different chromosome 21 abnormalities that are both de novo [r(21)/i(21p13) mosaicism and rob(14;21)]. Molecular studies using polymorphic markers have shown that these two aberrations had a common maternal origin. However, the parents were cytogenetically and phenotypically normal. This unusual association has not been reported and is considered to be a unique case that should be addressed.     

反复妊娠21三体综合征胎儿的相关研究

随着产前诊断技术的发展,国内陆续有了连续妊娠21三体综合征胎儿的病例报道,但国内相关总结性研究很少,为更好地进行遗传咨询,本文就国外不同地区人群反复妊娠21三体综合征的发生率,可能的形成原因,其它相关问题进行了综述。     

利用双色实时荧光定量PCR法快速进行产前诊断

目的利用双色实时荧光定量PCR法进行21-三体与18-三体的快速产前诊断。方法分别以21号的APP基因与18号染色体的TYMS基因为目的基因设计引物和不同荧光标记的Taqman探针,以相对定量指标△CT值判断21号与18号染色体的数目;并将其检测结果与传统染色体核型分析方法进行对比。结果60例羊水细胞区分出了4例21-三体,3例18三体标本,正常人的△CT值为-0．89±0．22,21-三体患者及18-三体患者的ACT值分别-0．04±0．17和-1．55±0．24,患者与正常人标本组之间无交叉重叠,均有明显差异（P〈0．001）。结论实验建立的双重实时荧光定量PCR能用于快速诊断羊水细胞的21-三体和18-三体等非整倍体。     

Biparental inheritance of chromosome 21 polymorphic markers indicates that some Robertsonian translocations t(21; 21) occur postzygotically

Robertsonian translocations between acrocentric chromosomes are the most common structural chromosomal rearrangements in humans and many other organisms, and several mechanisms for their formation have been proposed. We have analyzed highly informative DNA polymorphisms in a family with a non-mosaic de novo Robertsonian translocation 21q; 21q, to determine the parental origin of the two 21q arms of the rearranged chromosome. The genotypes indicated a biparental origin, i.e. one 21q was paternal and the other maternal. These results imply that in some cases the formation of the rob (21q; 21q) occurs in the zygote or in the first few postzygotic mitotic divisions. © 1994 Wiley-Liss, Inc.     

带有ring(13)的B淋巴母细胞株JMSR13的建立

经微量全血EB病毒转化法建立了-Ring（13）染色体B淋巴母细胞株（JMSR13），该细胞呈悬浮生长，核型为2n=45，XY／46，XYring（13）。细胞群体倍增时间为54hr／代。Ring（13）染色体在复制时的交换次数是构成ring（13）染色体倍性改变的原因，Ring（13）衍生染色体的随机断裂和其在有丝分裂中的不分离是其产生遗传学效应的主要根源。