高通量测序技术在无创性检测胎儿染色体非整倍性中的应用

目的 探讨应用高通量测序技术对孕妇血浆胎儿游离DNA进行无创性胎儿染色体非整倍性检测的可行性和准确性.方法 采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体的非整倍性信息.同时行羊水常规染色体核型分析.统计分析两种方法检测结果的一致性.结果 100名孕妇中,母体血浆游离DNA平行测序技术检测出8例胎儿染色体非整倍性高风险.采集的100份羊水标本均培养成功,成功率为100％.共检测出7例胎儿染色体核型异常,其中染色体非整倍体异常6例(3例47,XN,+21;1例47,XN,+18;1例47,XN,+13;1例47,XXY;1例47,XXX);嵌合体1例(46,XN[2]/47,XN,+13[33]/47,XN,+13,add(15) (p12) [15]).无创基因检测与羊水染色体核型分析两种方法的κ=0.928(P ＜0.05),检测结果具有一致性.无创基因检测技术的假阳性率1.01％,灵敏度100％,特异度98.9％,阳性预测值87.5％.结论 应用高通量测序技术在染色体非整倍性无创性检测具有很高的灵敏性,假阳性率很低,在胎儿染色体非整倍性疾病的产前检测中具有广泛的应用前景.     

无创性产前基因检测技术在未行血清学筛查的高龄孕妇中的应用

目的探讨应用无创性产前基因检测技术对孕妇血浆胎儿游离DNA进行染色体拷贝数检测的可行性。方法选择2011年10月至2015年8月于佛山市妇幼保健院行无创性产前基因检测的730例高龄孕妇(年龄≥35岁),孕周:12-24周,年龄:35-41岁,均为单胎。对无创性产前基因检测结果阳性的孕妇行羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺,行常规染色体核型分析和/或基因芯片检测。对所有高龄孕妇行电话随访,统计分析无创性产前基因检测的准确性。结果 730例孕妇中,母体血浆胎儿游离DNA产前基因检测技术发现21例胎儿染色体拷贝数异常者。其中15例通过羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺行有创性产前诊断,检出21三体7例,45,X[7]/46,i(X)(q10)[23]和45X[13]/46,XX[37]各1例,47,XXX1例,13号染色体微缺失1例,无一例假阴性。无创性非整倍体检测对常见染色体非整倍体的检出率100%,灵敏度100%,特异度99.43%,假阳性率0.57%,假阴性率为0,阳性预测值73.33%。结论无创性产前基因检测技术用于高龄孕妇检测胎儿染色体拷贝数异常具有高度敏感性和特异性优点,假阳性率很低,在对高龄孕妇的胎儿染色体拷贝数变异的产前检测中具有广泛的应用前景。     

Illumina 测序在无创性检测胎儿性染色体非整倍体的应用

目的：探讨应用 Illumina 测序技术对孕妇血浆胎儿游离 DNA 进行无创性胎儿性染色体非整倍性检测的可行性和准确性。方法对3200名传统产前筛查异常、既往有唐氏儿分娩史及高龄孕妇等采集外周血,采用Illumina 测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA ,分析胎儿性染色体的非整倍性信息。对测序提示胎儿性染色体数目异常的,进行遗传咨询,对其中自愿行介入性产前诊断的,行羊水常规染色体核型分析。结果3200例样本中测序方法共检出20例性染色体非整倍体,其中12例接受了羊膜腔穿刺术,7例与 G 带核型分析结果一致,包括1例45,X,4例47,XXX,1例47,XYY,1例45,X[13]／46,XX[37],其余4例 G 带核型正常,1例47, XN ,＋mar。结论孕母血浆游离 DNA Illumina 测序可对性染色体非整倍体胎儿进行无创性产前检测,但存在假阳性,还需要进一步完善检测技术和分析方法以提高检测准确率。     

大规模平行测序技术在产前无创检测胎儿染色体异常中的临床应用

目的评估孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序在检测胎儿染色体非整倍体异常中的应用及意义,以及探讨其在检测胎儿染色体缺失、重复中的应用。方法对象为我院产前筛查高风险单胎孕妇2120例。通过大规模平行测序技术(Massively Parallel Sequencing,MPS,又称高通量测序技术)进行无创产前检测,对检测结果为高风险者行介入性产前诊断术、胎儿染色体核型分析,随访至胎儿出生后或引产后。结果 2120例标本中无创性基因筛查共检出51例高风险,其中非整倍体高风险49例,包括21-三体21例,18-三体8例,13三体5例,45,X0 5例,47,XXX 5例,47,XXY 4例,8-三体1例,染色体结构异常包括染色体缺失、重复2例。对无创基因检测高风险孕妇行介入性产前诊断及羊水、脐血细胞染色体核型分析,结果1例21-三体高风险假阳性,47,XXY高风险者发现1例假阳性,45,X0高风险者发现1例假阳性;8-三体高风险者假阳性;3例染色体非平衡结构异常高风险与核型结果符合。结论孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序对于无创检测胎儿21-三体、18-三体、13三体准确度高,临床作为筛查价值明确,但因存在假阳性结果,对高风险孕妇仍需行染色体核型确诊。对10Mb以上染色体缺失重复检出率较高,对更小片段的染色体缺失重复的筛查效果仍需要更进一步的研究。     

孕期无创性产前胎儿染色体非整倍体基因检测技术在临床的应用价值

目的探究孕妇产前行无创性染色体非整倍体基因检测的临床价值。方法选取2016.1-2017.2期间入我院行产前检查的934名孕妇为本次研究对象,所有孕妇入院后取外周血,行无创性胎儿染色体非整倍体基因检查,并就结果对检测为高风险孕妇行羊水穿刺,对高风险孕妇进行染色体核型分析,判断胎儿基因是否出现问题,以羊水穿刺、染色体核型分析结果为金标准,观察无创性染色体非整倍体基因检测用于产前胎儿非整倍体基本诊断的准确性。结果 934名孕妇无创性产前基因检查共有10例为高风险,阳性率1.07%,其中13-三体综合征2例、21-三体综合征6例、18-三体综合征2例,高风险孕妇羊水穿刺染色体核型分析,结果13-三体综合征2例、21-三体综合征6例、18-三体综合征2例,本次胎儿染色体疾病(13-三体综合征2例、21-三体综合征6例、18-三体综合征2例)无创性产前基因检测检查准确率100%,基因检查低风险者胎儿随访至出生,未发现染色体疾病。结论无创产前基因检测对胎儿染色体非整倍体疾病诊断具有良好准确性,临床用于胎儿排畸筛查有重大意义,能有效减少畸形胎儿出生。     

无创产前基因检测在胎儿非整倍体筛查中的应用

目的探讨无创产前基因检测技术在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用价值。方法选择在医院行无创产前基因检测的单胎孕妇450例,对孕妇外周血中游离DNA进行高通量测序,对检测结果高风险者进行羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺行胎儿染色体核型分析,对检测结果低风险者行电话随访。结果 450例孕妇中,无创产前基因检测高风险9例。高风险孕妇均行介入性产前诊断,确诊唐氏综合症5例,18三体综合症2例,性染色体异常1例(47,XXX),染色体核型正常1例。低风险孕妇追踪随访未发现唐氏儿漏诊。其灵敏度为100%,特异度为99.77%,假阳性率0.23%,阳性预测值为88.89%,阴性预测值100%,Youden指数为0.9977。结论无创产前基因检测技术具有高灵敏性,低假阳性,对降低出生缺陷率是有效的,值得在临床上推广应用。     

基于高通量测序的无创产前诊断研究

目的应用高通量测序技术对胎儿染色体非整倍体进行无创产前诊断。方法对2014年8月～2015年5月之间在扬州市妇幼保健医院产前诊断中心就诊的2124例孕妇外周血浆中的游离胎儿DNA进行Hiseq?2000测序,对检测结果为染色体非整倍体高风险的,用羊水细胞染色体核型分析验证。对无创产前染色体非整倍体诊断进行敏感性和特异性分析,对年龄与染色体非整倍体发生与孕妇年龄的关系进行logistic回归分析。结果共检出染色体异常16例,其中21-三体7例,18-三体1例,XO型1例,XXX?2例,XXY?3例,XYY?2例。羊水细胞核型分析验证9例,其中21-三体5例,18-三体1例,XO型1例,XXX?0例,XXY?2例,XYY?0例;高通量测序无创产前诊断染色体非整倍体的敏感性为100%,特异性为99.34%;logistic回归结果显示孕妇年龄与胎儿染色体非整倍体发生率的关系不显著(P0.05),T21,T18,XO,XXY发病率与产妇年龄逻辑回归P值均大于0.05。结论基于高通量测序和母体血浆游离胎儿DNA进行无创产前然色体非整倍体检测具有无创性、敏感性高、特异性高的特点,具有较高的临床应用价值。Logistic回归分析显示,孕妇年龄与胎儿非整倍体发生率并无显著性关系。     

产前无创DNA检测在诊断胎儿非整倍体染色体病中的应用

目的探讨新一代测序技术胎儿游离DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的临床价值及意义。方法2013年5月1日至2014年1月31日在金华市妇幼保健院接受孕妇外周血中游离胎儿DNA检测者1283例,按照年龄及血清学筛查等因素分为高龄组、高危组、高危临界组及其他组四组,进行高通量基因测序,对检测结果阳性者进行羊水或者脐血穿刺及染色体核型分析;对检测结果阴性者进行电话跟踪随访。结果 14组孕妇共计1283例完成游离胎儿DNA检测,检测结果为阳性者共14例,包括10例21-三体,1例18-三,1例13-三体和2例性染色体异常。214例无创基因检测结果异常的孕妇中,11例接受进一步羊水或脐血染色体诊断,其中7例21-三体提示阳性者中,有5例确诊为47,XN,+21,2例为46,XN;1例18-三体提示阳性者,确诊为47,XN,+18;1例13-三体提示阳性者显示为46,XN;2例提示性染色体异常者中1例确诊为47,XXX,1例为46,XN。结论孕妇外周血中游离胎儿DNA检测对染色体非整倍体的检出率高,但存在一定的假阳性,可以根据其优缺点,再结合其他产前检测手段,合理分配医疗资源为广大的孕妇提供最佳的产前诊断方案,对提高人口素质有重大意义。     

NIPT-plus在产前筛查中的应用研究

目的探讨应用孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术在无创性产前筛查中的临床应用及价值。方法选取2016年8月至2017年1月在洛阳市妇女儿童医疗保健中心因血清学产前筛查高风险、血清学筛查临界风险、高龄及超声软指标异常的孕妇780例行无创胎儿染色体非整倍体基因检测,对于无创阳性孕妇抽取羊水细胞进行染色体核型分析。结果780例孕妇中游离胎儿DNA高通量基因测序技术检测出12例染色体高风险胎儿,羊水核型分析证实其中9例为染色体异常,分别为5例21-三体、1例18-三体及3例性染色体非整倍体。21-三体检出率为100%,18-三体检出率为100%,性染色体非整倍体的检出率为60%。结论无创产前基因检测技术是一种筛查胎儿染色体非整倍体的有效方法,其在胎儿染色体异常疾病的产前检测中具有广泛的应用前景。     

胎儿游离DNA在染色体非整倍体疾病无创产前筛查中的应用

目的讨论母体外周血液中胎儿游离DNA在染色体非整倍疾病无创产前筛查中的意义。方法选取2015年6月1日至12月31日在我中心接受无创产前诊断的孕妇共1452例。根据血清学筛查,超声诊断结果,以及分娩年龄,将孕妇分为5组,其中唐筛高风险组277例,唐筛临界风险组278例,高龄妊娠组401例,超声异常组121例,自愿孕期筛查组375例。对所有孕妇抽取外周血,并利用高通量测序的方法进行胎儿游离DNA检测。无创DNA检测结果为阳性的孕妇,建议进行羊水染色体核型分析以确定胎儿染色体是否存在异常;无创DNA检测结果为阴性的孕妇进行电话随访。结果 5组孕妇共计1452例均完成了胎儿游离DNA检测,共检测出染色体异常胎儿23例,检出率为1.58%。其中21-三体阳性10例,18-三体阳性6例,13-三体阳性1例,性染色体异常6例。共有13例无创DNA检出结果异常的孕妇进行了羊水染色体核型分析,其中10例无创21-三体阳性的孕妇中,9例染色体核型分析结果为47,XN,+21,1例为46,XN;1例无创18-三体阳性的孕妇染色体核型分析结果为47,XN,+18;2例性染色体提示异常的,染色体核型分析结果均为正常。电话随访未发现染色体异常患儿。利用母血中胎儿游离DNA筛查染色体非整倍体胎儿的灵敏度为100%(10/10),特异度为99.79%(1429/1432)。结论利用母血中胎儿游离DNA对胎儿染色体非整倍体进行无创产前筛查具有较高的灵敏度及特异性,具有广泛意义和推广价值。但是仍存在一定的假阳性,且对性染色体异常的检测准确性仍然较低,应进一步结合其他产前诊断方法做出准确的判断。     

无创性产前基因测序技术在染色体非整倍体中的应用

目的探讨高通量并行测序技术在胎儿染色体非整倍体检测中的应用价值。方法2012年10月至2013年4月,生化血清学筛查唐氏高危或高龄孕妇,采用高通量测序技术对胎儿染色体非整倍体进行无创性产前检测,评估患病风险率,提示高危孕妇进行核型分析确诊。结果813例无创检测高危孕妇,13例提示异常高危,异常率为1．59％,其中4例21三体,3例18三体,6例性染色体。核型确诊4例均为21三体,准确度100％;2例18三体;1例47,XXY和1例47,XXX。结论基于高通量测序技术的方法能快速、准确、无创检测唐氏综合征,相对18三体和性染色体检测准确度和稳定性有待优化与提高。     

4636例高龄孕妇羊水细胞染色体分析

目的探讨高龄孕妇（≥35岁）与胎儿染色体异常的关系。方法通过对4636例高龄孕妇羊水染色体结果进行回顾性分析,计算胎儿染色体异常的发生率,对比35-37岁、38-40岁和≥41岁3组孕妇胎儿染色体异常发生率。结果4636例高龄孕妇发现胎儿染色体核型异常174例,染色体异常发生率为37．53‰,包括136例非整倍体（含嵌合体）和38例染色体结构异常。非整倍体包括77例47,＋21（16．61‰,77／4636）、26例47,＋18（5．61‰,26／4636）、2例47,＋13（0．43‰,2／4636）、8例47,＋mar（1．73‰,8／4636）、20例性染色体非整倍体（4．31‰,20／4636）。在35-37岁孕妇中胎儿染色体异常发生率为28．76‰（67／2330）,在38～40岁孕妇中胎儿染色体异常发生率为42．50‰（70／1647）,在≥41岁孕妇中胎儿染色体异常发生率为56．15‰（37／659）,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论随着孕妇年龄增长,胎儿染色体异常风险增高,高龄孕妇有必要行产前诊断。     

792例血清学高危行无创产前基因检测研究

目的探讨无创产前基因检测联合血清学产前筛查在产前诊断胎儿染色体非整倍体中的应用价值。方法选择2013年5月至2013年12月血清学筛查高危单胎孕妇792例,采用无创产前基因检测的方法评估胎儿染色体非整倍体的患病风险率,对患病风险率提示高危的孕妇进行核型分析以确诊结果。结果检出高风险14例,占调查资料总数1.77%,其中21-三体6例,18-三体3例,性染色体5例,染色体核型分析确认6例21-三体,3例18-三体,1例47,XXY。结论无创产前基因检测的方法能早期、快速、准确、无创地检测21-三体、18-三体,可避免很多不必要的介入性有创检查。无创产前基因检测联合血清学筛查是目前产前筛查最为实用和有效的方法之一。     

唐氏综合征血清学筛查联合无创基因检测技术的临床研究

目的探讨唐氏综合征血清学筛查联合无创基因检测技术在增加唐氏综合征的检出率,降低假阳性率的意义。方法应用时间分辨荧光免疫分析技术,对11 748例孕妇进行血清标志物（PAPP-A/freeβ-h CG或者AFP/freeβ-h CG/u E3）联合筛查,使用Multical软件筛查高风险对象,血清学高风险孕妇抽取静脉血10ml,提取游离DNA,采用新一代高通量测序技术,结合生物信息分析,得出胎儿唐氏综合征的风险率。结果共筛查出高风险孕妇1024例,其中21三体高风险891例,18三体高风险133例,无创基因检测21三体高风险13例,18三体高风险4例,16例高风险孕妇经介入性产前诊断细胞培养均确诊为染色体异常,1例高风险孕妇染色体核型正常。结论无创基因检测在临床工作中可以改善血清学筛查结局,可以在临床工作中建立一套快速无创性产前诊断的有效模式。     

Triple marker screening for fetal chromosomal abnormalities in Korean women of advanced maternal age

The purpose of this article is to assess the value of maternal serum triple marker screening of alpha-fetoprotein (AFP), human chorionic gonadotropin (hCG), and unconjugated estriol (uE3) for the prenatal diagnosis of fetal chromosomal abnormalities in Korean women of advanced maternal age. Maternal sera were collected from 458 pregnant Korean women aged 35 between 15 and 20 weeks gestation before amniocentesis. A patient- specific second trimester risk for fetal Down's syndrome was calculated using the median values for AFP, hCG, uE3 and maternal age. Twelve fetal chromosomal abnormalities were identified. These included six cases of trisomy 21, one case of 46,XY/47,XY,+21, two cases of trisomy 18, one case of trisomy 13, and two cases of 45, X. A cutoff level of 1:200 detected 85.7% (6/7) of the cases of Down's syndrome and 20% (1/5) of the other aneuploidies, with a 27.3% false positive rate. However, a cutoff level of 1:270 did not result in any gains in detecting Down's syndrome or other aneuploidies at the expense of a false positive rate of 34.3%. Second trimester triple marker testing is an effective screening tool for detecting fetal Down's syndrome in Korean women > or = 35 years old. However, it is not an effective screening tool for non-Down's chromosomal abnormalities.     

27例唐氏综合征患儿产前筛查的临床意义

目的收集27例血染色体确诊唐氏综合征患儿产妇的产前筛查资料,探讨中期血清三联筛查和妊娠中期超声筛查胎儿唐氏综合征的临床意义。方法回顾性分析2010年至2013年在我院分娩,单胎孕妇在妊娠14＋1~19＋6周行血清三联筛查,在妊娠18＋1~23＋6行超声筛查的孕妇及其新生儿的资料。结果在确诊唐氏综合征的患儿母亲中,产妇年龄大于35岁7例,血清三联筛查3例大于1：380。超声筛查异常8例,其中单发畸形1例,单独超声软标记5例,小于胎龄儿2例。结论建议在对血清三联筛查高危产妇密切随访的同时,应注重超声筛查显示的超声软标记,提高筛查效率,建议对高危产妇积极开展孕早期唐氏筛查。     

南京地区9453例孕妇唐氏综合征产前筛查结果分析

目的探讨孕中期双联法在产前筛查唐氏综合征中的价值。方法采用时间分辨免疫荧光技术检测9453名15w-20＋6w孕妇血清中AFP和f-βHCG的浓度,使用Multicalc软件评估风险。建议唐氏综合征或爱德华综合征高风险孕妇行胎儿羊水/脐带血染色体检查,神经管开放性缺损高风险者接受高分辨度超声检查,并对高风险妊娠跟踪随访至胎儿出生后。结果共筛查出高风险343例,其中经产前诊断确诊唐氏综合征2例、爱德华综合征3例、其他染色体异常1例。通过随访发现其他异常4例。结论使用孕中期母血清AFP/f-βHCG双联法筛查出唐氏综合征等高风险妊娠进而行产前诊断是减少患儿出生的有效方法。     

无创DNA检测技术在产前筛查中的临床应用

目的 探讨无创DNA基因检测技术应用于产前筛查中的临床价值及意义。方法 回顾性分析在我院2015年1月~2017年1月针对553例孕妇包括预产期年龄≥35岁的高龄产妇、唐筛结果为高风险、临界风险或单项指标异常、超声软指标等孕妇。在充分知情同意,进行遗传咨询后选择胎儿无创DNA产前检测,对检测结果为高风险孕妇进一步进行染色体核型分析,对低风险孕妇进行电话追踪随访。结果 553例孕妇外周血中,541例低风险,12例高风险,在高风险病例中7例提示21三体异常;2例提示18号染色体异常;1例提示13三体异常;2例提示胎儿性染色体异常;无创DNA检测结果为高风险的12例孕妇,均进行了羊水或脐血穿刺,7例21三体高风险中7例为47,XN,+21;2例18三体高风险者中1例为47,XN,+18,1例为46,XN;1例13三体高风险者中1例为47,XN,+13;2例性染色体异常中,1例为XXY,1例为45X。并对无创DNA检测阴性的出生新生儿进行随访,未诉明显异常。应用无创DNA检测技术诊断胎儿染色体疾病的敏感度为100.00%,特异度为99.91%,假阴性率为0,假阴性率为0.09%,无创DNA产前检测对21三体,13三体和性染色体的符合率为100.00%,对18三体的符合率为50.00%。结论 无创DNA检测技术在产前筛查中准确性高,假阳性和假阴性低的优点,可提高产前筛查效率,减少染色体疾病患儿的出生,是快捷、安全、较介入性产前诊断易于接受、值得推广的安全可靠的产前筛查方法,是今后发展的必然趋势。但无创DNA检测出的高风险孕妇,也必须进行羊水穿刺进一步确诊。     

Cell-free fetal DNA and intact fetal cells in maternal blood circulation: implications for first and second trimester non-invasive prenatal diagnosis

Both intact fetal cells as well as cell-free fetal DNA are present in the maternal circulation and can be recovered for non-invasive prenatal genetic diagnosis. Although methods for enrichment and isolation of rare intact fetal cells have been challenging, diagnosis of fetal chromosomal aneuploidy including trisomy 21 in first- and second-trimester pregnancies has been achieved with a 50-75% detection rate. Similarly, cell-free fetal DNA can be reliably recovered from maternal plasma and assessed by quantitative PCR to detect fetal trisomy 21 and paternally derived single gene mutations. Real-time PCR assays are robust in detecting low-level fetal DNA concentrations, with sensitivity of approximately 95-100% and specificity near 100%. Comparing intact fetal cell versus cell-free fetal DNA methods for non-invasive prenatal screening for fetal chromosomal aneuploidy reveals that the latter is at least four times more sensitive. These preliminary results do not support a relationship between frequency of intact fetal cells and concentration of cell-free fetal DNA. The above results imply that the concentration of fetal DNA in maternal plasma may not be dependent on circulating intact fetal cells but rather be a product of growth and cellular turnover during embryonic or fetal development.