Fmr1基因敲除小鼠的被动回避行为及海马GAD的表达变化

目的 探讨Fmr1基因敲除小鼠的学习记忆功能和海马的谷氨酸脱羧酶(GAD)表达变化的关系.方法 对4周龄和6周龄的基因敲除型(KO)鼠和野生型(WT)鼠分别连续进行2天的被动回避行为的避暗和跳台实验观察后使用免疫印迹技术检测海马GAD的表达变化,根据所获得的数据进行多因素方差分析处理.结果 避暗实验中,4周龄和6周龄KO鼠潜伏期比WT鼠明显少(P＜0.05);而KO鼠的错误次数比WT鼠明显多(P ＜0.05);4周龄和6周龄KO鼠或WT鼠的潜伏期、错误次数无差异(P＞0.05),同周龄WT鼠第一天的潜伏期和错误与第二天相比无差异(P＜0.05).跳台实验中,4周龄和6周龄KO鼠的潜伏期比WT鼠明显少(P＜0.05);而KO鼠的错误次数比WT鼠明显多(P＜0.05);4周龄和6周龄KO鼠或WT鼠的潜伏期、错误次数无差异(P＞0.05);同周龄第一天KO鼠的潜伏期和错误次数与第二天相比无差异(P ＞0.05);同周龄第一天WT鼠的潜伏期和错误次数与第二天相比有显著差异(P＜0.05).GAD65/67蛋白在KO鼠海马表达比WT鼠增多(P＜0.05);随着周龄的增加,6周龄KO鼠或WT鼠的GAD 65/67蛋白表达比4周龄表达增多(P＜0.05).结论 4周龄和6周龄Fmr1基因敲除小鼠存在认知功能障碍,海马的GAD的表达异常变化可能介导Fmr1基因敲除小鼠学习记忆障碍.     

Fmr1基因敲除对小鼠的痛觉敏感性的影响

目的探讨4周龄和8周龄Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)的痛觉敏感性的变化。方法分别挑选4周龄和8周龄的Fmr1基因敲除小鼠(KO)和野生型小鼠(Wild Type,WT)各20只,雌、雄各半,共80只,应用PL-200热刺痛仪测定小鼠后肢热痛阈值,进行统计分析。结果 4周龄和8周龄KO鼠的痛阈均比同周龄WT鼠的痛阈增高。结论 Fmr1基因敲除导致痛觉敏感性下降。     

4周龄Fmr1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为观察

目的对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为进行观察。方法采用SMART软件对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠(KO)和野生型小鼠(WT)进行高架十字迷宫行为观察,数据采用多因素方差分析处理。结果采用SMART软件分析发现:在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域活动时间,次数以及路程均明显高于WT组。结论 4周龄Fmr1基因敲除小鼠的行为异常,运动性和兴奋性较野生型小鼠增高。     

隔日禁食通过促进白色脂肪棕色化改善小鼠代谢

目的 利用Ctrp6基因敲除小鼠建立模型解析隔日禁食改善代谢的作用机制。方法 采用3月龄雌性的野生型（WT）小鼠和Ctrp6基因敲除（KO）小鼠进行隔日禁食实验，每种基因型分为两组：自由采食组（WT,n=9;KO,n=12）和隔日禁食组（WT-ADF,n=12;KO-ADF,n=12）。饲养实验持续14 w，期间所有小鼠自由饮水，每日记录采食量，每周称量体重。13 w进行葡萄糖耐受实验和小鼠行为学实验。14 w饲养实验结束后，取血清检测其中脂代谢相关因子含量，取小鼠皮下脂肪和棕色脂肪组织用RT-PCR检测其中棕脂标志性基因表达，利用蛋白印迹分析相关信号通路。结果 与自由采食组相比，隔日禁食组的WT和KO鼠的累积采食量均降低，体重增加减缓，体脂积累减少，葡萄糖耐受性增加，血脂降低，代谢得到改善。对皮下脂肪的基因表达分析，隔日禁食导致两种基因型小鼠皮下脂肪组织中的白色脂肪棕色化标志基因Ucp1和Pgc1α的mRNA和蛋白丰度均升高，其中KO鼠上升幅度更大；利用蛋白印记分析相关信号通路，隔日禁食组PKA磷酸化水平显著升高。结论 隔日禁食能够减缓小鼠体重增加，减少白色脂肪积累，改善小鼠代谢，这...     

腺苷A2A受体基因对脓毒症肝损伤小鼠肝脏超微结构改变的影响

目的探讨A2A受体基因对脓毒症肝损伤小鼠肝脏超微结构的影响和意义。方法选用雄性清洁级C57BL/6腺苷A2A受体基因敲除小鼠为A2A受体基因敲除(KO)组,其同窝野生型C57BL/6小鼠,随机分别为野生型(WT)阳性组和WT阴性组。KO组和WT阳性组经腹腔注射热灭活大肠杆菌菌液,WT阴性组注射生理盐水。检测小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平;透射电镜观察肝脏超微结构的变化并对肝脏线粒体进行半定量评分。结果 WT阳性组ALT、AST水平比WT阴性组升高(P0.05)。结论腺苷A2A受体基因敲除小鼠正常线粒体数量减少,肝细胞结构破坏严重,肝功能下降明显。     

CYP1B1基因敲除对成年小鼠肝脏脂肪代谢的影响及可能机制

目的探讨CYP1B1对高脂膳食诱导的成年小鼠脂肪代谢的作用。方法 CYP1B1基因敲除(KO)和野生型(WT)雄性成年C57/BL小鼠(6 w龄)各16只,给予低脂(LFD,30%)、高脂肪(HFD,60%)饲料共6 w。小鼠处死后取血清、附睾脂肪和肝脏组织检测相应的生化和分子生物学指标。结果 6 w高脂膳食后,KO小鼠能量摄入总量稍高于WT小鼠,但其体重增量和附睾脂肪组织重量均显著低于WT小鼠;WT小鼠脂肪细胞直径明显大于KO小鼠,且血糖、血清及肝脏组织中甘油三酯(TG)水平亦明显高于KO小鼠;肝脏组织RT-PCR结果显示,CYP1B1基因敲除后,启动脂肪形成的核因子及脂肪合成相关基因如CD36、SREBP1c、SCD1等表达下降,而调控脂肪氧化分解的基因如CPT-1α,UCP-2表达显著上升;蛋白印迹结果显示,CYP1B1基因敲除增强腺苷-磷酸激酶(AMPK)的磷酸化。结论 CYP1B1基因敲除对成年小鼠营养性肥胖的保护作用可能与AMPK磷酸化增强并调控肝脏中脂肪代谢相关基因的表达有关。     

Fmr1基因敲除型小鼠肠道菌群结构分析

目的探讨Fmr1基因敲除型小鼠粪便肠道细菌群落的结构及多样性。 方法利用16S rRNA高通量测序技术对10份小鼠粪便样本进行测序分析并进行生物学分析。 结果两组样本测序共获得高质量序列325 280条，核心菌门为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门。Anosim分析表明基因敲除(KO)组与正常野生型(WT)组小鼠两组间具有显著差异，组内样品重复性满足数据分析要求，Adonis分析表明本次检验可信度高(P<0.05)。LDA值展现KO组与WT组小鼠肠道微生态菌群有明显差异，基于Unifrac距离，Amova分析表明KO和WT组组间差异显著(P<0.05)。 结论KO组与WT组小鼠肠道微生物群落的结构及多样性存在显著差异且具有统计学意义，提示孤独症与肠道微生态系统密切相关，肠道微生态系统可能通过微生物代谢的间接作用影响孤独症的发生发展，但具体的作用机制仍需进一步的研究。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及病理组织学观察

目的观察载脂蛋白E（ApoE-/-）基因敲除小鼠血脂及病理组织学变化。方法选择24只ApoE-/-基因敲除小鼠,雌雄各半,另选同龄的雌雄各半C57BL/6J小鼠24只为对照,观察小鼠血脂及心脏病理形态学变化。结果 ApoE-/-基因敲除小鼠组总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL）水平较对照组明显增高（P〈0.05）;ApoE-/-基因敲除小鼠组高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）与对照组相比无差异（P〉0.05）;ApoE-/-基因敲除小鼠组动脉粥样硬化斑块大小较对照组明显增高（P〈0.05）;ApoE-/-基因敲除小鼠心肌发生粥样硬化病变改变。结论 ApoE-/-基因敲除小鼠更容易引起动脉粥样硬化病灶形成。     

LIGHT在小鼠鹦鹉热衣原体呼吸道感染中的作用

目的探讨LIGHT分子在鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)呼吸道感染过程中的作用。方法 C57BL/6J野生型(Wild type,WT)和LIGHT基因敲除(Knock out,KO)小鼠经鼻内接种4.5×10~5 IFU Cps,每天观察记录小鼠的进食、活动、体重变化及生存情况。感染后第4、9、14 d分批处死小鼠,分离肺组织,检测肺组织中Cps载量、病理损伤程度。结果与WT小鼠相比,LIGHT KO小鼠出现更严重的呼吸道感染症状,死亡率更高,肺组织匀浆中Cps载量更高且带菌时间延长,肺部病理损伤程度也显著高于WT小鼠。结论 LIGHT基因缺失可促进Cps呼吸道感染。     

昆明鼠腹腔注射甲苯急性中毒的行为学实验研究

目的研究昆明鼠腹腔注射甲苯急性中毒的行为学表现,探讨甲苯急性毒性神经损伤。方法昆明鼠随机分成6组,8 000mg/kg,4 000mg/kg,2 000mg/kg,1 000mg/kg,500 mg/kg等不同剂量甲苯小鼠腹腔注射制作急性中毒模型,生理盐水对照组,染毒后观察24h一般行为学改变和4d、6d、8d、10d、12d、14d运用程控自主活动箱检测神经兴奋性变化,运用寇氏法公式计算药物半数致死剂量LD50。结果甲苯染毒各组都有急性中毒的表现,主要表现为抑制;甲苯急性毒性对小鼠有严重损伤,其自主活动表现为短暂的兴奋后迅速转为抑制。LD50=1782.38?/?,S lg LD50=0.0602(LD50的标准误),LD5095%C I(可信区间)=(1358.31 2338.84)?/?。自主活动明显降低(P<0.05),2 000 mg/kg与1 000 mg/kg、500 mg/kg比较有差异(P<0.05)。结论小鼠腹腔注射甲苯发现具有急性毒性,LD50=1782.38?/?;中毒小鼠自主活动性降低(P<0.05)。     

采用PCR方法检测Fmr1基因敲除小鼠的基因型

目的为Fmr1基因敲除小鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。方法设计两对引物扩增野生型Fmr1基因和Fmr1缺陷突变基因的DNA片段,用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度,并将所得基因型结果与经典的western blot方法比较。结果野生型仅在800bp处有一条条带,突变纯合子仅在500bp处有一条条带,杂合子则在500bp和800bp处出现两条条带。用PCR方法获得的Fmr1基因分析结果与经典的western blot方法获得的结果完全一致。结论用PCR方法分析Fmr1基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。     

β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2的影响

目的：探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法：经过敞箱实验选取得分相近的2-3个月龄SD大鼠80只,按随机数字表法分为四组,每组20只,结合孤养并给予慢性轻度不可预见刺激,复制抑郁模型,于造模成功第2天开始,分别给予氟西汀组和β-细辛醚组1.2 mg/（kg·d）氟西汀和25 mg/（kg·d）β-细辛醚灌胃,模型组与正常组给予等体积生理盐水。于第21天对大鼠处死取脑,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白相对含量。结果：模型组大鼠海马组织神经元数目减少,散在排列,细胞核发生固缩变形,CA1区,CA3区变化显著。与模型组比较,β-细辛醚组、氟西汀组Bax蛋白表达均显著降低（P〈0.01）。结论：β-细辛醚可以降低大鼠海马组织Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达。     

上皮钙通道基因在维生素D受体和Calbindin-D28k双基因敲除鼠中的变化

目的研究上皮钙通道TRPV5和TRPV6基因与维生素D受体(VDR)和钙结合基因Calbindin-D28k的关系,以及肾钙的重吸收减少是否与TRPV5和TRPV6基因表达减少有关。方法制备VDR和CaBP-D28k双基因敲除小鼠,普通和高钙食物喂养下,检测野生型鼠(WT),CaBP-D28(-/-),VDR(-/-),和VDR(-/-)/CaBP-D28k(-/-)鼠的体重、摄食量及血尿参数值,用实时RT-PCR的方法检测各种鼠肾脏TRPV5和TRPV6的mRNA水平。结果普通饮食下,双基因敲除小鼠尿钙的分泌和血清甲状旁腺激素水平更高。TRPV5和TRPV6两者的表达在CaBP-D28k敲除鼠中均无变化,而在VDR敲除鼠和双基因敲除鼠中下调的幅度相当。高钙饮食下,VDR及双基因敲除小鼠的血离子钙水平正常。所有小鼠这两个基因的表达普遍降低,而在VDR和双基因敲除鼠中的表达更低。结论这些结果证实了上皮钙通道基因受钙和维生素D的调节,CaBP-D28k的缺失对两者无影响。肾钙的重吸收减少与TRPV5和TRPV6基因表达无明显关系。     

出生后早期接触速灭威对小鼠空间学习记忆能力的影响

目的观察出生后早期有限次数速灭威染毒对ICR小鼠青春期和成年早期神经行为和空间学习记忆能力的影响以及自主活动能力、感觉运动能力和焦虑情绪是否影响空间学习记忆能力,并探明其影响的发生时间。方法小鼠出生后随机分为5组,即速灭威高、中、低剂量组（5 mg/kg、0.5 mg/kg、0.05 mg/kg,）,溶剂对照组（DMSO）和生理盐水对照组（NS）,于出生后第3、5、7、9、11、13天进行腹腔注射染毒。观察一般生理发育情况,并选用成组的神经行为学实验在青春期（～PND60）和成年早期（～PND90）进行测试。结果青春期小鼠平衡木得分与染毒剂量呈负相关关系（rs=-0.418,P〈0.05）;青春期和成年早期的洞板实验和旷场实验中各指标在同期各组间均无统计学意义;青春期Morris水迷宫空间探索实验中,定位航行结束后和次日的两次穿越平台位置次数与染毒剂量之间均呈负相关关系（rs分别为-0.361和-0.277,P〈0.05）;成年早期Morris水迷宫空间探索实验中,第四象限时间百分比与染毒剂量之间呈负相关关系（rs=-0.390,P〈0.05）;主成分分析发现,反映空间学习记忆能力与自主活动能力、感觉运动能力及焦虑情绪的指标出现在不同的主成分中。结论出生后早期有限次数接触速灭威可能在青春期时已经开始影响到小鼠的空间记忆能力,这可能是成年后空间学习记忆能力损害的重要线索。     

H12、RS13和RL6在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达研究

目的 探讨组蛋白H1变体(H12)、核糖体蛋白S13(RS13)和核糖体蛋白L6(RL6)在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达变化。方法(1)自行繁育miR-199b-5p敲除(Knockout, KO)和野生型(Wild-type, WT)C57BL/6小鼠,分别记录两组雌鼠产仔情况(2)基因型鉴定验证分组,取性成熟期小鼠(鼠周龄为11～13周)卵巢用于验证实验。(3)用实时荧光定量PCR(qPCR)检测每组小鼠(n=10)卵巢组织中H12、RS13和RL6的mRNA表达水平变化。(4)用蛋白免疫印迹法(WB)检测每组小鼠(n=3)卵巢组织中H12、RS13和RL6的蛋白表达水平变化。结果 (1)共统计半年内两组雌鼠产仔情况：WT组生产27窝,平均每窝产仔数为(8.15±0.41)只;KO组生产28窝,平均每窝产仔数为6.43±0.32只,与WT组比较,KO组雌鼠产仔数显著下降(P=0.004),差异有统计学意义。(2)qPCR结果示：与WT组比较,KO组卵巢组织中H12(P=0.038)、RS13(P=0.011)和RL6(P=0.009)的mRNA表达水平显著升高,差异均...     

邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯对雌性小鼠子宫内膜 雌激素受体α表达影响的研究

目的 研究邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯(DEHP)对雌性小鼠子宫内膜雌激素受体(ER)α表达的影响。方法 将健康成年清洁级雌性ICR小鼠60只随机分为4组,即对照（大豆油）组和低（125 mg/kg）、中(500 mg/kg)、高剂量(2000 mg/kg)DEHP染毒组,每组15只。于早晨采用灌胃方式进行染毒,染毒...     

UCH—L1基因敲除小鼠的饲养、繁殖及鉴定

目的饲养、繁殖和鉴定泛素羧基末端水解酶L1（UCH．L1）基因敲除小鼠,获得UCH—L1基因敲除纯合子小鼠,为深入研究UCH．L1的生物学功能奠定基础。方法从美国购进的UCH．L1基因敲除小鼠经适应性饲养1周后,将1只雌性杂合子和1只雄性杂合子小鼠合笼饲养并繁殖,剪取子代小鼠尾尖部0．5cm组织,提取基因组DNA,PCR方法鉴定其基因型。雄性杂合子与雌性杂合子交配生产后代中,野生型和UCH—L1基因敲除纯合子小鼠用于后续的生物学功能研究：杂合子小鼠用于繁殖。观察UCH—L1基因敲除纯合子小鼠的表型变化,并利用免疫印迹法验证UCH—L1基因敲除的效果。结果小鼠成功繁殖后,利用杂合子交配共生产370只小鼠,其中UCH．L1＋/-占34．1％、UCHL1＋/-占50．5％、UCH．L1-/-占15．4％,成功获得UCH-L1基因敲除纯合子小鼠,并建立了饲养、繁殖和鉴定方法。结论采用雌性和雄性UCH—L1基因敲除杂合子小鼠交配．不仅可以获得UCH—L1基因敲除纯合子小鼠,而且有利于长期饲养与繁殖。     

甲苯对小鼠某些行为学指标的影响

目的通过吸入甲苯对小鼠神经的行为学影响,探讨其神经毒性及成瘾性的效果和机制。方法吸入染毒,用1.21,2.42,4.84,9.68,19.36 mg/L 5个不同浓度下的甲苯染毒5 d,20 min/d,观测染毒后小鼠自主活动次数、水迷宫潜伏期和盲端数、条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)的变化。结果吸入2.42,4.84 mg/L浓度甲苯的小鼠,自主活动次数与对照组比较,明显增加(P<0.05);而吸入19.36 mg/L浓度甲苯的小鼠,自主活动次数与对照组比较,明显减少(P<0.05)。仅有吸入19.36 mg/L浓度组的小鼠,水迷宫潜伏期与对照组比较,明显延长(P<0.05),盲端数无明显变化。吸入2.42,4.84,9.68 mg/L浓度甲苯的小鼠,对甲苯产生了CPP(P<0.05)。结论吸入甲苯的小鼠,在低浓度下,能明显增强自主活动性;在高浓度下,能明显减弱自主活动性。仅在高浓度下明显降低小鼠的学习记忆功能;并在一定浓度下,使小鼠对甲苯产生精神依赖。     

褪黑素对锰致小鼠运动障碍及纹状体损伤的影响

目的探讨褪黑素对锰致小鼠运动障碍及纹状体损伤的影响。方法小鼠84只,均分为6组,分别为对照组及低、中、高Mn组,褪黑素(MT)对照组和MT+高Mn组。第5、6组提前皮下注射给予5 mg/kg MT,2 h后,第2~4和6组分别腹腔注射给予12.5、25、50和50 mg/kg MnCl2,连续2周。观察小鼠的自主活动情况,检测纹状体GSH-Px、SOD和γ-GCS的活力、表达及蛋白水平。结果随着锰浓度的升高,自主活动和站立次数逐渐减少;纹状体γ-GCS、GSH-Px和SOD活力、蛋白表达水平逐渐下降,并呈剂量-效应关系。与高锰组比较,MT干预组自主运动和站立次数增加明显(P<0.05,P<0.01);γ-GCS、GSH-Px和SOD活力、阳性表达及蛋白水平均显著升高。结论本实验结果提示过量锰暴露可导致运动障碍及纹状体氧化损伤,褪黑素可能通过激活抗氧化酶GSH-Px、SOD和γ-GCS发挥对它的拮抗作用。 更多还原     

UCH-L1对急性低压低氧小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平的调控作用

目的探讨急性低压低氧条件下UCH-L1基因敲除对小鼠海马中α-突触核蛋白(α-Syn)表达水平的影响及其机制,为治疗α-Syn蛋白相关的神经系统疾病提供依据。方法采用UCH-L1基因杂合子(UCH-L1~(+/-))小鼠雌雄交配的方式获得UCH-L1基因敲除纯合子(UCHL1~(-/-))小鼠和野生型小鼠(UCH-L1~(+/+)),PCR法鉴定小鼠的基因型。将UCH-L1~(+/+)小鼠和UCH-L1~(-/-)小鼠放入低压氧舱模拟海拔8000 m高度,持续低氧8 h,建立急性低压低氧模型。采用Western Blot法检测小鼠海马中UCH-L1、α-突触核蛋白及LC3蛋白表达水平的变化,观察UCH-L1基因敲除对α-突触核蛋白表达水平及其相关细胞自噬降解通路的影响。结果与对照组(0.702±0.121)相比,急性低压低氧可诱导野生型小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平(1.310±0.096)显著升高(P0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ的比值轻度升高,而对UCH-L1蛋白的表达水平没有影响。当敲除UCH-L1基因的小鼠经急性低压低氧处理后,小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平(0.952±0.093)明显低于野生型对照组(1.490±0.074)(P0.05),同时LC3Ⅱ/Ⅰ的比值也显著升高(P0.05)。结论UCH-L1基因敲除降低了急性低压低氧诱导的α-突触核蛋白表达水平升高,其机制之一可能与小鼠在急性低压低氧时因敲除UCH-L1基因而进一步促进细胞自噬通路的活化有关。