急性髓性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群及CD56+细胞的临床意义的分析

目的:检测急性髓性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及CD56+细胞比例的临床意义。方法:选取确诊但未治疗的急性白血病30例为初治组;确诊并经化疗达完全缓解的急性白血病30例为复治组;健康志愿者30例为正常对照组。用流式细胞仪检测初治组、复治组及对照组人群的外周血T淋巴细胞亚群及CD56+细胞的比例,检测初治组中不同CD56+细胞组间患者血红蛋白及白蛋白水平。结果:初治组的CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值较复治组及对照组均有显著性下降(P<0.05),而复治组与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。初治组AML的CD56+细胞比例超过25%患者为40%(12/30),而复治组仅10%(3/30),差别具有统计学意义(P<0.05)。初治组中CD56+细胞高表达组的血红蛋白(Hb)及白蛋白(Alb)显著性低于正常表达组(P<0.05)。结论:初治组急性髓性血病患者的T淋巴细胞亚群变化明显,说明细胞免疫与白血病的发生、发展及转归有关;急性髓性白血病患者CD56高表达提示临床状况较差,生活质量低,可能与预后不良有关。     

CD3-CD56+NK细胞及CD3+CD56+NKT样淋巴细胞在急性白血病患者中的变化

目的 通过分析急性白血病患者发病时以及缓解时外周血CD3-CD56+NK细胞及CD3+CD56+NKT样淋巴细胞的数量以及功能变化,进一步了解急性白血病患者免疫功能状态。方法 使用流式细胞分析外周血CD3-CD56+NK细胞及CD3+CD56+NKT样淋巴细胞的数量,同时分析上述两群细胞内的干扰素表达水平来评估细胞的功能。结果 CD3+CD56+NKT样淋巴细胞数量在急性白血病发病时显著增加,经化疗获得完全缓解后数量又下降到正常健康人水平,并且无论在发病时还是缓解时CD3+CD56+NKT样淋巴细胞内干扰素水平均明显下降。CD3-CD56+NK细胞的变化有所不同,在发病时数量以及功能改变均不明显,而在疾病缓解时,急性淋巴细胞白血病患者CD3-CD56+NK细胞的数量下降明显,急性髓系白血病患者CD3-CD56+NK细胞的功能下降明显。结论 急性白血病患者发病时可能产生免疫反应,但免疫细胞功能缺陷可能参与疾病的发生进展,其中CD3+CD56+NKT样淋巴细胞的变化可能与疾病的关系更密切,且急性髓系白血病患者免疫细胞功能异常更明显。     

169例急性白血病免疫表型分析

目的探讨急性白血病的免疫表型特征，为急性白血病的诊断提供依据。方法收集169例初治急性白血病患者骨髓或外周血标本，采用流式细胞仪对其白血病细胞进行免疫表型分析。结果95例急性髓细胞白血病（acute myeloblasticl eukemia，AML）患者中59例为纯髓系抗原表达，34例伴淋系抗原（CDl9、CD7）表达。64例急性淋巴细胞白血病（acut elymphoblastic leukemia）患者中62例表达淋系抗原，纯T系抗原表达8例，纯B系抗原表达44例，6例伴有髓系抗原（CD33）表达；1例ALL—L2为纯髓系（CD33、CD34）表达，1例ALL—L2八个抗原检测均为阴性。10例急性混合型白血病（mixedacuteleukemia，MAL）同时表达两种以上淋系和髓系抗原标志。结论免疫分型能助诊一些特殊类型的白血病（如minimally differentiated acute mydoid leukemia，AML-M0；MAL）；免疫分型是对白血病细胞形态学诊断的重要补充。     

免疫组化染色在白血病诊断分型中的应用

目的探讨免疫组化染色在白血病诊断分型中的应用价值。方法选取2015年1月至2018年1月本院收治的白血病患者120例。对入选患者初诊或接受化疗治疗前的骨髓和外周血细胞涂片进行抗生物素蛋白复合物(ABC-AP)免疫组化二步法检测,将检查结果与患者的临床症状、细胞组织化学染色及骨髓细胞形态学结果结合,诊断疾病并确定分型。结果本组初发患者中54例为急性髓细胞白血病,36例为急性B淋巴细胞白血病,12例为慢性淋巴细胞白血病,10例为急性T淋巴细胞白血病,4例为慢性粒细胞白血病。另4例患者为慢性髓细胞白血病急性淋系变。急性髓系细胞白血病患者中,髓细胞系相关抗原表达程度存在差异,其中阳性率最高为CD68。急性B淋巴细胞白血病患者中有22例CD19阳性,20例CD10阳性,8例CD20阳性。急性T淋巴细胞白血病患者中,4例患者CD7阳性,6例患者CD3阳性,2例患者CD5阳性。4例慢粒急变患者过氧化物酶阳性率为0~1%,非特异酯酶全部表现为阴性,同时糖原染色阳性率>40%,存在CD10阳性表达,不存在髓系相关抗原表达。结论免疫组化染色在白血病诊断分型中的应用价值较高,可为疾病诊断提供有效的依据。     

灵芝孢子粉增强免疫力模型的建立及流式细胞术检测的研究

目的:探讨环磷酰胺建立的免疫低下动物模型应用于保健食品增强免疫力检验的研究,并试图应用流式细胞术研究小鼠自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+和T淋巴细胞分化抗原CD69+/CD3+检测在免疫低下动物模型评价中的应用。方法:以环磷酰胺一次较大剂量造模、适时强化建立免疫低下模型,灌胃给予灵芝孢子粉,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+和外周血T淋巴细胞CD69+/CD3+亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果:灵芝孢子粉可使环磷酰胺降低的小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性增强。结论:灵芝孢子粉可有效增强小鼠细胞免疫功能,流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值。     

鼻咽癌患者外周血T细胞亚群及活化T淋巴细胞的检测及放疗后对其变化的影响

目的:探讨用流式细胞仪检测鼻咽癌(NPC)患者外周血T细胞亚群及活化T淋巴细胞的检测及放疗后对其变化的影响。方法:用双色直标的免疫荧光试剂,采用流式细胞术检测30例正常人,128例NPC患者外周血在细胞膜受体上的表达。结果:126例NPC患者外周血T细胞亚群中的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值明显下降,CD8+升高,导致NPC患者免疫功能紊乱,特别是细胞免疫功能明显低下,放疗后肿瘤有复发或转移者CD4+、CD4+/CD8+也有明显的下降。NPC患者的活化淋巴细胞CD3+/HLA—DR、CD8+/HLA—DR的含量明显高于正常对照组活化T淋巴细胞的含量(P<0.01)。结论:用流式细胞术检测T细胞亚群及活化T淋巴细胞,对NPC患者的免疫功能状况,放疗对免疫功能的影响,对NPC放疗后复发及转移的可能性判断有一定的临床意义。     

环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的 建立环磷酰胺致免疫低下模型,应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)细咆分化抗原CD69 /自然杀伤细胞G2D受体(NKG2D )和T淋巴细胞分化抗原CD69 /CD3 评价其免疫低下动物模型中的应用.方法 以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69 /NKG2D 和外周血T淋巴细胞CD69 /CD3 亚群,同时进行脾NK细胞活性测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细咆转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响.结果 环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和牌的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细咆转化增殖能力、脾NK细胞活性降低.结论 环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立长期免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

MicroRNA-31对 HIV感染者CD4+ T细胞CD69表达的影响及机制

目的　探讨微小RNA（microRNA, miR）-31对HIV感染者CD4+ T细胞表面CD69表达的影响及作用机制。方法　通过流式细胞仪分析健康对照与HIV感染者的CD4+ T细胞活化后CD69表达情况。在健康人外周血单个核细胞中转染antagomir-miR-31抑制miR-31表达,观察CD4+ T细胞活化后CD69表达情况。采用生物信息学方法预测miR-31靶基因及相关通路,并在293T细胞系中过表达和抑制miR-31,通过实时荧光定量PCR检测相关靶基因的表达。结果　与健康对照相比,HIV感染者CD4+ T细胞在抗-CD3/CD28抗体刺激活化后CD69表达更低。抑制miR-31表达后,CD4+ T细胞活化时CD69的表达与对照相比显著下降。miR-31低表达后T细胞活化信号通路KSR2和DUSP7表达升高。结论　miR-31可以有效调节CD4+ T细胞表面CD69的表达,对HIV感染者早期免疫活化起重要作用。     

白细胞介素-2联合化疗对急性髓系白血病T淋巴细胞亚群影响的研究

目的 探讨急性髓系白血病患者化疗后应用白细胞介素-2(IL2)治疗对细胞免疫功能的影响及其临床意义.方法 将54例急性髓系白血病患者按随机数字表法分为IL-2联合化疗组(治疗组,28例)和单纯化疗组(对照组,26例),治疗组于化疗后每天加用IL-2 40万U静脉滴注,连用2周,检测两组治疗前后T淋巴细胞亚群的变化.结果 治疗组治疗后CD3(0.6026±0.2275)、CD4(0.4972±0.1224)、CD56(0.3016±0.1053)明显高于治疗前(分别为0.3926±0.2010、0.2264±0.1190、0.1729±0.1226)及对照组治疗后(分别为0.4352±0.1930、0.2738±0.1362、0.1937±0.1268),差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IL-2联合化疗能明显提高急性髓系白血病患者T淋巴细胞亚群的水平,对提高机体的免疫功能有积极的作用.

Abstract：

Objective To investigate the influence and the clinical significance of interleukin-2 (IL-2) on T lymphocyte subgroup after chemotherapy in acute myeloid leukemia patients. Methods Fiftyfour acute myeloid leukemia patients were divided into treatment group (chemotherapy combined with IL-2,28 cases) and control group (pure chemotherapy,26 cases) by radom digits table. In treatment group, IL-2400 000 U was dripped after chemotherapy for 14 days. Then the T lymphocyte subgroup change before and after treatment was examined. Results After 14 days' treatment, the levels of CD3 (0.6026±0.2275 ),CD4(0.4972±0.1224),CD56(0.3016±0.1053 ) in treatment group were significantly higher than those before treatment(0.3926±0.2010,0.2264±0.1190,0.1729±0.1226) and in control group (0.4352±0.1930,0.2738±0.1362,0.1937±0.1268)(P< 0.05). Conclusion IL-2 treatment can obviously raise the levels of T lymphocyte subgroup and can raise the immunologic function.     

恶性肿瘤患者化疗前后免疫学指标的变化及临床应用探讨

目的观察恶性肿瘤患者化疗前后外周血免疫学指标的变化,并探讨其临床应用。方法应用流式细胞仪检测100例恶性肿瘤患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群（CD3＋、cD4＋、CD8＋）,B淋巴细胞（CDl9＋）及NK细胞（CD3-／CDl6＋56＋）的表达率。结果所有患者化疗后CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋表达高于化疗前,NK细胞明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;B淋巴细胞（CDl9＋）化疗前后的变化差异无统计学统计学意义（P〉O．05）。结论有效的化疗能够改善恶性肿瘤患者的T淋巴细胞免疫功能。     

卵巢癌细胞对CD8~+ T细胞活化分子CD69表达的影响

目的:探讨卵巢癌细胞对CD8+T细胞活化分子CD69表达的影响。方法:采用流式细胞术检测3株卵巢癌细胞(OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+T细胞表达早期活化分子CD69表达的百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ的水平。结果:与对照组比较,3株卵巢癌细胞培养上清液可对CD8+T细胞CD69的表达产生明显的抑制作用(F=29.90,P<0.01),CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平显著降低(F=16.31,P<0.01)。结论:卵巢癌细胞早期就能抑制CD8+T细胞的活化,CD69可作为评价免疫效应细胞功能的指标。     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达及临床意义

目的:研究上皮性卵巢癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量及其相关基因Foxp3 mRNA的表达特点,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法:采用流式细胞术检测卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血PBMC中Foxp3 mRNA表达水平。结果:卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量均明显升高(P<0.05);Foxp3 mRNA在卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血PBMC中表达明显增高(P<0.05)。结论:CD4+ CD25+调节性T细胞可能在卵巢癌免疫耐受中发挥重要作用。     

外周血CD4~+CD25~+Tr细胞比例的变化在宫颈癌及其癌前病变中的意义

目的:研究外周血CD4+CD25+Tr细胞的比例变化,探讨CD4+CD25+Tr细胞在宫颈癌患者外周血中的表达特点及临床意义。方法:应用流式细胞术检测30例宫颈鳞癌,60例宫颈上皮内瘤变及30例正常妇女外周血中CD4+CD25+Tr细胞的比例。结果:30例宫颈癌患者外周血中CD4+CD25+Tr细胞比例明显高于健康对照组(P<0.01);随着疾病进展,宫颈癌患者外周血中CD4+CD25+Tr细胞比例升高,分别高于CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期;CINⅢ期患者外周血中CD4+CD25+Tr细胞比例明显高于CINⅠ期患者、CINⅡ期和健康对照组(P<0.05);CINⅠ期患者外周血CD4+CD25+Tr细胞比例与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:宫颈癌患者外周血CD4+CD25+Tr细胞表达水平可能是一个较好的反映宫颈癌患者免疫功能状态的参考指标,其在外周血的升高程度与肿瘤临床分期有关,可能参与了宫颈癌的发生发展过程。     

Randomized, double-blind, controlled study of glycyl-glutamine-dipeptide in the parenteral nutrition of patients with acute leukemia undergoing intensive chemotherapy

OBJECTIVE: Glutamine has stimulatory effects on lymphocytes and mucosa cells in vitro and, when given with parenteral nutrition, has been shown to improve the clinical course of patients after bone marrow transplantation and in the critically ill. This study investigated the clinical and immunologic effects of parenteral glycyl-glutamine supplementation in patients with acute leukemia receiving intensive conventional chemotherapy without bone marrow transplantation. METHODS: A randomized, double-blind, controlled study compared a standard glutamine-free parenteral nutrition with a glycyl-glutamine-supplemented parenteral nutrition (Glamin, Baxter, Erlangen, Germany) containing 20 g of glutamine in adult patients with acute myeloid leukemia undergoing myelosuppressive chemotherapy. Clinical end points included the duration of neutropenia and the incidence and duration of neutropenic fever. To analyze the effects of glutamine on immunocompetent cells, CD4+ and CD8+ T cells and HLA-DR expression on monocytes were assessed by flow cytometry throughout the treatment course. RESULTS: Fifty-four adult patients entered the study and were randomized. In 45 of 127 chemotherapy cycles, parenteral nutrition was given, and 40 cycles (20 with and 20 without glutamine) were evaluated for comparison. The median durations of neutropenia were 18 d (range, 9-29 d) in the glutamine group and 22.5 d (range, 13-48 d) in the control group (P = 0.052), whereas the median durations of neutropenic fever were 5.5 d (range, 0-13 d) and 5 d (range, 0-31 d), respectively (P = 0.74). Using Kaplan-Meier analysis and controlling for the type of chemotherapy, we found a significantly faster neutrophil recovery in patients receiving glutamine than in the control group (P = 0.040) in patients receiving a high-dose cytarabine regimen. There was no significant difference in the recovery of CD4+ or CD8+ lymphocytes or monocyte activation between groups. CONCLUSION: In patients with acute myeloid leukemia requiring parenteral nutrition, glycyl-glutamine supplementation could hasten neutrophil recovery after intensive myelosuppressive chemotherapy. However, no impact of glutamine on neutropenic fever or other criteria of immunologic recovery was detected.     

HBV感染者外周血T细胞亚群的研究

目的分析乙型病毒肝炎（HBV）感染者外周血T细胞亚群的特征及病程不同阶段的变化及意义。方法采用流式细胞仪对112例HBV感染者的外周血T细胞亚群进行检测,与正常对照组相比较。结果慢性乙肝、肝硬化患者的外周血CD4＋T细胞、CD8＋T细胞百分比及CD4＋TA2D8＋T较急性肝炎组及正常对照组明显减少;HBV—DNA阳性组、HBeAg阳性组外周血CD4＋T细胞、CD8＋T细胞百分比及CD4＋T／CD8＋T较正常对照组明显减少。结论HBV感染者体内存在T淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱。外周血T淋巴细胞亚群与乙肝病毒感染的慢性化及肝病的临床发生、发展有关。     

乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群和穿孔素-颗粒酶变化

目的探讨HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞亚群分布频率及穿孔素和颗粒酶B表达的变化。方法通过细胞表面标记和细胞内细胞因子染色技术,采用流式细胞术分析HBV感染者PBMC中CD4+、CD8+T细胞的分布以及穿孔素和颗粒酶B的表达。结果与正常对照相比,急性和慢性乙肝患者CD4+T细胞百分率无明显改变,CD8+T细胞以及穿孔素和颗粒酶B表达均显著增高(前者P<0.01,后者P<0.05)。HBV携带者CD4+T细胞显著降低(P<0.05),CD8+T无明显改变。三组CD4+/CD8+T比例均显著降低(P<0.05)。结论与HBV携带者不同,急性和慢性乙肝患者CD8+T细胞频数及穿孔素和颗粒酶B表达均明显增高,提示细胞毒T细胞的数量及细胞毒颗粒表达与病毒清除和肝损害相关;急性和慢性患者在增高程度上的差异提示慢性乙肝的细胞免疫和细胞毒反应的不完全。     

乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群和穿孔素-颗粒酶变化

目的探讨HBV感染者外周血单个核细胞（PBMC）中T淋巴细胞亚群分布频率及穿孔素和颗粒酶B表达的变化。方法通过细胞表面标记和细胞内细胞因子染色技术．采用流式细胞术分析HBV感染者PBMC中CD4^＋、CD8^＋T细胞的分布以及穿孔素和颗粒酶B的表达。结果与正常对照相比,急性和慢性乙肝患者CD4^＋T细胞百分率无明显改变,CD8^＋T细胞以及穿孔素和颗粒酶B表达均显著增高（前者P〈0．01,后者P〈0．05）。HBV携带者CD4^＋T细胞显著降低（P〈0．05）,CD8^＋T无明显改变。三组CD4^＋／CD8^＋T比例均显著降低（P〈0．05）。结论与HBV携带者不同,急性和慢性乙肝患者CD8可细胞频数及穿孔素和颗粒酶B表达均明显增高,提示细胞毒T细胞的数量及细胞毒颗粒表达与病毒清除和肝损害相关;急性和慢性患者在增高程度上的差异提示慢性乙肝的细胞免疫和细胞毒反应的不完全。     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞及C反应蛋白在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的变化及临床意义

目的 探讨COPD急性加重期患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞及CRP水平的变化及意义.方法 以36例COPD急性加重期患者(COPD组)和36例COPD稳定期患者(对照组一)及36例健康人(对照组二)作为研究对象,采用流式细胞技术检测三组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平,并常规检测血清CRP水平.结果 COPD组外周血中CD4+CD25+占CD4+T细胞的百分比为(2.56±1.83)%,明显低于对照组一和对照组二(P均<0.01);COPD组CRP水平为(55.7±14.8)mg/L,明显高于对照组一和对照组二(p均<0.01).CD4+CD25+调节性T细胞表达水平与CRP水平呈负相关(r=-0.312,P<0.05).结论 CD4+CD25+调节性T细胞比例减少导致COPD急性加重期患者细胞免疫失调,CRP参与了炎性反应激活过程,可能为COPD急性加重期免疫治疗提供理论依据.     

雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响

目的：初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。方法：将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为空白（蒸馏水）对照组、纳米雄黄低中高剂量组,每天灌胃一次,分别在不同时间点采集血清和称重;在实验结束后,取外周淋巴结分离T细胞并体外培养;放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平;并计算各个观察点的小鼠死亡率。结果：雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长,差异有统计学意义（P〈0.05）;雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组,其中高剂量与低剂量比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化,从而减少抗ds-DNA抗体的分泌,减轻小鼠自身免疫反应损伤,延缓SLE疾病发展进程。