内皮细胞信息反馈下丘脑-垂体条件培养液对内皮细胞丙二醛代谢和一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察内皮细胞信息反馈下丘脑-垂体条件培养液对内皮细胞丙二醛(MDA)代谢和一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨下丘脑-垂体轴对动脉粥样硬化形成的调控方式。方法：将有、无联胺刺激的内皮细胞信息反馈下丘脑-垂体后的条件培养液作用于正常和受损内皮细胞,硫代巴比妥酸法检测其MDA含量,免疫细胞化学法观察NOS的表达。结果：下丘脑-垂体条件培养液(HP、HP-、HP )对正常内皮细胞MDA代谢、NOS表达的影响无明显变化;而作用受损内皮细胞后,HP 能使其MDA含量下降,NOS表达显著增强。结论：下丘脑一垂体轴对内皮细胞MDA代谢、NOS的表达有反馈调控作用。     

氧化型低密度脂蛋白作用下丘脑-垂体条件培养基对内皮细胞丙二醛代谢和NOS表达的影响

目的：观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下丘脑垂体后条件培养液对内皮细胞丙二醛(MDA)代谢和NOS表达的变化,探讨下丘脑血管中枢对动脉粥样硬化形成的影响。方法：按ox-LDL诱导下丘脑一垂体(ox-HP)条件培养液,培养正常及受损内皮细胞。收集上清液检测MDA含量,细胞用免疫细胞化学法检测NOS表达。结果：(1)MDA含量：实验组对正常内皮细胞下调;而对受损内皮细胞ox-H和ox-HP组的下调作用明显减弱。(2)NOS表达：ox-H和ox-HP组对正常内皮细胞上调;对受损内皮细胞下调。结论：ox-LDL作用下丘脑垂体后条件培养液对正常内皮细胞起抗损伤作用和保护调节作用;对受损内皮细胞的抗损伤作用和保护机制减弱。     

体外培养人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮合酶

为了证实人脐静脉内皮细胞是否具有合成一氧化氮的能力，用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学法和原位杂交对体外的人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮合酶进行了观察。结果显示，体外培养人脐静脉内皮细胞的ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学的阳性百分率为６２％，诱生型一氧化氮合酶的原位杂交的阳性百分率为７４％。阳性反应产物分布在核周及细胞突起中。本研究首次证明体外培养的人脐静脉内皮细胞能表达诱生型一氧化合酶，即人脐静脉内皮细胞在体     

下丘脑、垂体条件培养基对内皮细胞NOS和ICAM-1表达的影响

动脉粥样硬化(AS)早期病变的形成包括两个重要环节：一是血液中单核细胞与内皮细胞(EC)粘附，继而迁移到内皮下转变为巨噬细胞(MP)；二是MP或平滑肌细胞(SMC)摄取脂质后转变为泡沫细胞^[1]。因而，研究EC功能对AS早期防治极为重要。我们以前的工作证实：毁损弓状核可诱发AS早期病变，如内皮变性、核肿胀、内皮下层增生出现许多大小不等的空泡、     

离体下丘脑-垂体对内皮细胞的保护性调节作用

最近研究表明：氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用于下丘脑-垂体后的条件培养基对正常内皮细胞起抗损伤作用；对受损内皮细胞的抗损伤作用减弱。但下丘脑-垂体在受到其它损伤性刺激后对内皮细胞的影响还不清楚。本研究应用联胺作为脂质过氧化刺激，诱导离体下丘脑-垂体，观察其对内皮细胞代谢及功能的作用。     

大鼠下丘脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的分布

观察大鼠下丘脑各核团NOS阳性神经元的分布。采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH－d）法，结果显示，大量NOS阳性神经元见于下丘脑外侧区、视上核（SO）和室旁核（Pa）；出现较多NOS阳性神经元的部位是视前大细胞核，见到少量NOS阳性神经元的部位是室周核、视前内侧区、视前外侧区和下丘脑前区。结论：NOS阳性神经元分布于下丘脑的许多核团。     

大鼠下丘脑内的一氧化氮合酶与雌激素受体双标神经元

目的:探讨一氧化氮合酶(NOS)和雌激素受体(ER)在下丘脑诸核团的分布及共存,为揭示雌激素与一氧化氮之间的内在联系提供形态学依据。方法:采用NADPH-d组织化学法并结合免疫组织化学技术,观察雌性大鼠下丘脑内NOS阳性神经元、ER阳性神经元以及NOS/ER双染神经元的形态及分布。结果:NOS阳性神经元主要分布在下丘脑室旁核、视上核、下丘脑外侧区和室周核;ER阳性神经元在下丘脑诸核团的表达不及NOS阳性神经元广泛;NOS与ER双染神经元主要分布在下丘脑的室旁核、视上核、下丘脑外侧区及室周核;其他区域可见散在分布的双染神经元。结论:NOS与ER双染神经元主要集中分布在视上核的背内侧和背外侧部及室旁核小细胞部腹内侧区,在下丘脑外侧区分布较广但比较分散,室周核呈散在分布。     

下丘脑-垂体-肾上腺轴与糖尿病

1型和2型糖尿病患者表现为糖皮质激素分泌过多和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能改变。糖尿病HPA轴功能障碍在中枢和外周水平都有发生,且与长期慢性应激、胰岛素抵抗等相关,另外一些脂肪细胞产物及调节因子也可能参与其中。HPA轴功能异常可能促使糖尿病发生,但也可能是糖尿病造成的后果,不管因果如何糖皮质激素的增加对糖尿病控制是不利的。     

卡维地洛对氧自由基诱导的内皮细胞内源性一氧化氮合酶抑制物代谢的影响

目的： 观察卡维地洛对氧自由基（OFR）培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶 (DDAH)活性及表达的影响，以探讨卡维地洛对不对称二甲精氨酸（ADMA）代谢机制的影响。 方法： 采用改良的Jaffe法培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），取生长良好的3-6代HUVECs用于实验，分为①空白对照组：加DMEM培养液；②OFR组:加入OFR（0.01 mmol/L,0.1 mmol/L）；③OFR+卡维地洛组: 同时加入0.1 mmol/L OFR及卡维地洛（10 μmol/L）共孵24 h后, 检测上清液中一氧化氮（NO）、内皮素（ET）、ADMA含量、L-胍氨酸(L-cit)浓度及一氧化氮合酶（NOS）活性。用Western blotting法测定细胞裂解液中二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶 (DDAH)的蛋白表达。 结果： OFR条件培养下,内皮细胞的代谢产物ADMA、ET的量均高于空白对照组,而NO的量及NOS的活性少于空白对照组;反映DDAH酶活性的L-cit浓度显著降低,且有浓度依赖性，而DDAH的表达无明显变化。卡维地洛干预组的ADMA、ET的量均低于OFR组，NOS活性及NO、L-cit浓度明显高于OFR组。 结论： OFR培养下，内皮损伤ADMA的增加与DDAH的活性减弱有关，而与DDAH的表达无关。卡维地洛通过增加DDAH活性促进ADMA代谢，使NOS活性增加，抑制OFR对内皮功能的损伤。     

OX-LDL诱导内皮细胞的条件培养基对内皮细胞LPO、NO和iNOS的影响

为了探讨受损内皮细胞的自分泌和旁分泌对受损内皮细胞本身的影响 ,本文收集正常内皮细胞条件培养基和用氧化型低密度脂蛋白 (OX-L DL )诱导内皮细胞的条件培养基分别作用于正常内皮细胞和氧化受损内皮细胞 ,检测其脂质过氧化物和一氧化氮代谢及诱导型一氧化氮合酶表达的变化。得到的结果是 :(1)正常内皮细胞的条件培养基和 OX-LDL 诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞和受损内皮细胞脂质过氧化代谢有明显下调作用 (P<0 .0 5 ) ,但 OX-LDL 诱导的内皮细胞条件培养基的下调作用更为明显 (P<0 .0 1)。 (2 )正常内皮细胞的条件培养基和 OX-LDL 诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞 NO的代谢表现为抑制作用 (P>0 .0 5 ) ,而对受损内皮细胞有轻微上调作用 (P>0 .0 5 )。 (3 )正常内皮细胞的条件培养基和 OX-L DL诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞诱导型一氧化氮合酶的表达表现出抑制作用 ,而对受损内皮细胞诱导型一氧化氮合酶的表达有上调作用 (P>0 .0 5 )。本文结果提示 :正常和受到氧化损伤内皮细胞的自分泌和旁分泌作用对正常和受损内皮细胞的脂质过氧化物的代谢均有下调作用 ,对 NO的代谢和诱导型一氧化氮合酶的表达则起抑制作用 ,而对受损内皮细胞有轻微上调作用。这种调节作用可能是内皮     

狗视网膜内一氧化氮合酶的表达

目的：探索狗视网膜内ＮＯＳ阳性细胞的分布和类型。方法：应用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组化方法。结果：视网膜内含两种ＮＯＳ阳性细胞,一种胞体较大,圆形成三角形,着色深,直径为１２～１５μｍ,大闰地节细胞层,由胞体发出２～３支突起伸向内网层,另一种胞体上,圆形成卵圆形,着色浅,直径为６～８μｍ、胞突短,伸向内网层,胞体主要位于内核层近内网层处,少数位于内核层中部。两种ＮＯＳ阳性细胞分布和反应度均不同。结论：大     

束缚应激大鼠下丘脑内一氧化氮合酶与c-fos蛋白的共存

为了探讨下丘脑内一氧化氮与应激之间的关系，本实验应用NADPH-d组化法和C-fos免疫组化技术相结合的方法，对束缚应激大鼠下丘脑内一氧化氮合酶（NOS）和c-fos蛋白的分布以及两者的共存关系进行了观察。结果表明，大鼠在束缚应激4h后，（1）室旁核大细胞部和视上核可见密集深染的NOS阳性大细胞；（2）室旁核小细胞部、背内侧核、穹窿周核、环状核、腹内侧核腹外侧部、结节内侧核、外侧区、室周区、乳头体前核和内侧核的外侧区等核团出现疏密不等和深浅不一的NOS阳性细胞；（3）C-fos蛋白以室旁核表达最为强烈，视前区、背内侧核、弓状核和外侧区亦有较强的表达；（4）在外侧区、室旁核小细胞部及其附近的室周区、背内侧核及乳头体前核腹侧部约有10％～15％的中、小型NOS阳性细胞同时表达C-fos蛋白，室旁核大细胞部则仅有较少的NOS阳性大细胞表达C－fos蛋白，在结节区、结节内侧核和视上核视交叉后部则偶见双标细胞。结果提示上述下丘脑核团内的部分一氧化氮能神经元与束缚应激反应有关。     

不同免疫状态下穹窿下器的一氧化氮合酶细胞的变化

目的：实验通过对不同免疫状态下的穹窿下器处的一氧化氮酶细胞变化的研究,以期证明穹窿下器可能参与脑内的免疫调节。方法：应用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酸组化方法。结果：（1）穹窿下器的一氧化氮合酶阳性细胞的面密度值较高,明显高于一般脑区;（2）一氧化氮合酶细胞的表达即可随着大肠杆菌内毒素剂量的增大而增多,也可随着地塞米松剂量的增大而增多。结论：提示穹窿下器可能为血携免疫信息进入脑内的部位之一;一氧化氮可能是脑内免疫状态的双向调节介质。     

INHIBITORY EFFECT OF RETINOIC ACID ON EXPRESSION OF INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE GENE IN L929 CELLS

Inflammation has been known to be associated with excess synthesis of nitric oxide (NO) by inducible NO synthase (iNOS). Retinoids have been reported to have anti-inflammatory activity, but the mechanism by which they can elicit this activity is poorly understood. The effects of retinoids on NO synthesis and iNOS gene expression in murine fibroblast L929 cells were examined. Treatment of the cells with interferon-γ resulted in excess NO synthesis and iNOS gene expression. All-trans-retinoic acid significantly inhibited NO synthesis and iNOS gene expression in a dose-dependent manner. Similarly, 9-cis-retinoic acid also inhibited NO synthesis, but retinol did not show any inhibitory effect on NO synthesis. These findings suggest that the modulation of iNOS gene expression is another possible pathway by which retinoids may function as anti-inflammatory agents.     

INHIBITORY EFFECT OF RETINOIC ACID ON EXPRESSION OF INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE GENE IN L929 CELLS

Inflammation has been known to be associated with excess synthesis of nitric oxide (NO) by inducible NO synthase (iNOS). Retinoids have been reported to have anti-inflammatory activity, but the mechanism by which they can elicit this activity is poorly understood. The effects of retinoids on NO synthesis and iNOS gene expression in murine fibroblast L929 cells were examined. Treatment of the cells with interferon-γ resulted in excess NO synthesis and iNOS gene expression. All-trans-retinoic acid significantly inhibited NO synthesis and iNOS gene expression in a dose-dependent manner. Similarly, 9-cis-retinoic acid also inhibited NO synthesis, but retinol did not show any inhibitory effect on NO synthesis. These findings suggest that the modulation of iNOS gene expression is another possible pathway by which retinoids may function as anti-inflammatory agents.     

一氧化氮合酶和5-羟色胺在体外培养的胚鼠脑干神经元内的共存研究

采用 NADPH-d组织化学和 5 -羟色胺免疫组织化学双重反应技术 ,探讨在体外培养条件下 E14 d SD胚鼠脑干神经元中5 -羟色胺与一氧化氮合酶阳性神经元的体外生长发育过程以及 5 -羟色胺与一氧化氮合酶的共存。将 E14 d SD胚鼠脑干细胞悬液接种于 2 4孔培养板 ,实验按培养龄分 4组分别在接种后 5 d、10 d、15 d和 2 1d终止培养 ,先进行 NADPH-d组织化学反应 ,再行 5 -羟色胺免疫组织化学反应。结果显示 :各实验组均可观察到三种神经元 ,即 5 -羟色胺免疫阳性神经元、一氧化氮合酶阳性神经元和两者的双重阳性神经元 ,其中双重阳性神经元占多数 ,并以梭形神经元为主 ,胞体呈三角形、多角形、梭形或卵圆形。 10 d组的双重阳性神经元突起最长可达 60 0μm以上 ,末端可见明显的生长锥 ,轴突终末分支上分布有大量的膨体 ,并与其它神经元的胞体或突起之间形成接触。本研究结果证明一氧化氮合酶和 5 -羟色胺可以在体外培养的胚鼠脑干神经元内共存 ,提示一氧化氮合酶可能与 5 -羟色胺共同参与胚脑的发育。     

金属硫蛋白对培养神经细胞迟发性损伤的作用和一氧化氮的表达

本文以新生大鼠原代培养皮质神经元为实验材料，造成迟发性神经元损伤模型．在不同时程内，测试培养液中的细胞乳酸脱氢酶漏出量和用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核着苷酸脱氢酶染色反应，观察培养细胞中一氧化氮合酶的表达水平．结果表明，缺血组在缺血与再灌流中，细胞乳酸脱氢酶漏出量明显高于对照组，差异显著（Ｐ＜０．００１）．一氧化氮合酶阳性神经元数量在缺血组的缺血时即明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），再灌流后一氧化氮合酶表达仍然强烈，与对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）．当损伤细胞再灌流时，同时加入金属硫蛋白后，显示一氧化氮合酶表达减弱，和缺血组相比有显著差异（Ｐ＜０．０５～０．００１），细胞乳酸脱氢酶漏出量在再灌流后的早期近似于对照组．结合文献和本实验结果提示：在迟发性神经元损伤形成过程中一氧化氮起着重要作用；金属硫蛋白对脑缺血后迟发性神经元损伤有一定保护作用，是一种细胞保护剂，可望用于临床，控制缺血再灌流损伤。