塞来昔布对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化的影响

目的 观察不同浓度的塞来昔布对rBMSCs的增殖、成骨诱导分化的影响,探讨塞来昔布影响rBMSCs成骨诱导分化的可能机制。方法 采用全骨髓贴壁法获得rBMSCs;使用不同浓度的塞来昔布（0、12.5、25、50、100μmol/L）干预培养rBMSCs,检测不同浓度的塞来昔布对rBMSCs增殖的影响;采用较高浓度的塞来昔布（100μmol/l）诱导rBMSCs 成骨分化,进行ALP、茜素红染色,应用real-time PCR扩增ALP、OCN。结果 细胞增殖抑制实验表明100μmol/L塞来昔布对rBMSCs增殖抑制明显（P<0.05）;12.5、25以及50μmol/L塞来昔布对rBMSCs增殖抑制无影响。ALP染色结果表明,成骨诱导3天对照组以及实验组ALP染色均为阴性;诱导7天对照组ALP染色为阳性,而实验组染色为阴性;诱导14天对照组ALP染色为阳性,实验组染色阴性。茜素红染色结果表明,成骨诱导3天、7天对照组以及实验组染色均为阴性;诱导至14天对照组染色阳性,实验组染色呈阴性。荧光定量PCR结果表明,成骨诱导3天对照组以及实验组ALP mRNA、OCN mRNA表达均较低;成骨诱导7天对照组ALP mRNA表达明显升高,实验组ALP mRNA表达升高趋势较弱,对照组OCN mRNA表达与第3天相比基本无差异,实验组OCN mRNA表达下降明显;诱导14天对照组ALP mRNA表达出现明显下降,实验组ALP mRNA 表达与第7天相比无明显差异,对照组OCN mRNA表达进一步升高,实验组OCN mRNA表达与第7天相比基本无变化。结论 本实验发现,高浓度的塞来昔布（100μmol/L）对rBMSCs增殖具有显著抑制效应。高浓度的塞来昔布（100μmol/L）能够抑制rBMSCs成骨诱导分化过程。高浓度的塞来昔布（100μmol/L）能够抑制rBMSCs成骨诱导分化过程中ALP以及OCN mRNA表达,表明较高浓度塞来昔布抑制rBMSCs成骨诱导分化的效应可能通过抑制ALP以及OCN的基因表达实现,提示在应用NSAIDs时应注意剂量等问题,尤其是应避免使用高剂量甚至是超高生理剂量进行药物镇痛治疗。     

高浓度葡萄糖对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的观察高浓度葡萄糖刺激下牙周膜干细胞(PDLSCs)的增殖能力和成骨分化能力。方法组织块法体外培养非糖尿病患者PDLSCs,分别用0mg/L(正常对照组)、1100mg/L(低糖组)、4500mg/L(高糖组)浓度葡萄糖刺激,MTT法检测PDLSCs增殖能力,矿化诱导后茜素红染色观察矿化结节形成,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runt相关转录因子2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)和I型胶原(Col-1)成骨相关基因表达。结果 MTT法检测显示高糖组OD值较低糖组和正常对照组低(P0.05);21天成骨诱导后,高糖组矿化结节面积少于低糖组和正常对照组(P0.05,P0.01);成骨诱导期间,高糖组ALP、Runx2和Col-1诱导前后相对倍增数低于低糖组和正常对照组(P0.05,P0.01)。结论高浓度葡萄糖抑制PDLSCs增殖能力和成骨分化能力。     

辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化

目的：观察辛伐他汀对骨髓基质细胞成骨分化的影响，探讨其刺激成骨的作用机制。方法：体外培养成年小鼠骨髓基质细胞，不同浓度的辛伐他汀作用72h后，RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin，OCN)mRNA水平的变化，Western blot检测OCN和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达水平的变化，细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)细胞化学染色及酶比活性测定。结果：辛伐他汀作用72h后，OCN的mRNA表达水平增高，OCN、OPN蛋白表达水平增高，呈剂量依赖关系，细胞ALP染色增强，ALP比活性显著增高。结论：辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化，辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关。     

不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 研究不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞（orofacial bonemesenchymal stem cells, OFMSCs）增殖和成骨分化的影响。方法 体外分离、培养OFMSCs,成骨、成脂、成软骨分化诱导及鉴定,并使用不同含糖量培养基（5.5、11、16.5、25、44 mmol/L）培养OFMSCs,以5.5 mmol/L基准糖浓度为对照组,其余组为实验组。采用CCK-8及流式细胞仪检测各组OFMSCs的增殖活性及增殖指数,OFMSCs成骨诱导后4、7 d检测碱性磷酸酶（ALP）活性,21 d进行茜素红染色及矿化定量分析,同时用RT-PCR检测3、7、14及21 d相关成骨基因Runx2、Osterix的表达。结果 培养的OFMSCs成骨诱导21 d后茜素红染色可见钙结节,成脂诱导14 d 后油红O染色可见红色脂滴,成软骨诱导14 d 后阿利新蓝染色可见蓝色胞浆;糖浓度在5.5～25 mmol/L促进OFMSCs的增殖,但随着糖浓度的继续增加（25～44 mmol/L）,OFMSCs的增殖活性受抑制;成骨诱导时,随着培养液糖浓度升高,ALP活性呈剂量依赖性降低（P Runx2、Osterix mRNA 表达量高于实验组（P Runx2、Osterix mRNA 表达量均出现先上调再下调的趋势。结论 在一定范围的糖浓度内,糖浓度升高可促进OFMSCs的增殖;而糖浓度升高对成骨分化呈抑制效应。     

20(S)-原人参二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其机制

目的：探讨20(S)-原人参二醇(PPD)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用,并阐明其成骨诱导机制。方法：采用全骨髓法提取SD大鼠BMSCs,分为对照组和不同剂量(2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mg·L^-1) PPD组,采用CCK-8法检测各组BMSCs增殖活性,采用Calcein/PI染色法观察各组BMSCs存活情况,筛选合适浓度PPD用于后续实验。将BMSCs分为对照组和PPD组,于成骨诱导第7天,采用BCIP/NBT比色法进行碱性磷酸酶(ALP)染色并定量检测各组BMSCs中ALP活性;成骨诱导第21天,采用茜素红染色检测各组BMSCs中矿化结节形成情况并定量分析细胞矿化活性;成骨诱导第7天,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组BMSCs中ALP、1型胶原蛋白(COL^-1)、骨钙素(OCN)和Runt相关转录因子2 (Runx-2) mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测各组BMSCs中Runx-2和OCN蛋白表达荧光强度。结果：PPD处理第1和3天,与对照组比较,40.0 mg·L     

氯化锂通过PI3K/Akt信号通路调控牙髓干细胞成牙本质向分化的研究

目的 探讨Wnt/β-连环素(β-catenin)通路激活剂氯化锂对牙髓干细胞(DPSCs)分化能力的影响及其相关分子机制。方法 体外培养DPSCs,通过茜素红染色评估不同浓度氯化锂(1和10 mmol/L)刺激DPSCs 1、2周后矿化结节的形成情况;采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测1 mmol/L氯化锂对DPSCs成牙本质标志基因[牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP1)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的mRNA]表达的影响;采用LY294002抑制磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路,通过茜素红染色和RT-qPCR验证其对DPSCs矿化结节形成及成牙本质标志基因表达的影响。进一步通过Western blot分析1 mmol/L氯化锂加或不加LY294002 (25μmol/L)刺激DPSCs对其下游Akt磷酸化表达的影响。结果 与0 mmol/L氯化锂相比,1 mmol/L氯化锂可明显促进DPSCs矿化结节形成和DSPP、DMP1、BSP、ALP mRNA的表达(P<0.05),而10 mm...     

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

【目的】探讨补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨细胞分化的能力。【方法】用不同浓度的补肾活血汤含药血清干预BMSCs,7 d后应用4-硝基苯基磷酸二钠盐(PNPP)偶氮法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,21 d后行茜素红染色(ARS)观察钙盐沉积情况判定成骨能力,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测Runx相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的基因表达以评估成骨能力。【结果】与空白血清组比较,补肾活血汤低、中、高剂量血清组BMSCs的ALP活性、茜素红染色面积及Runx2、OCN、OPN基因表达水平均升高(P 0.05或P 0.01)。【结论】补肾活血汤可促进BMSCs向成骨细胞分化,其机制可能与上调Runx-2、 OCN、OPN表达有关。     

新型自组装多肽水凝胶对成骨细胞前体细胞作用的体外研究

目的 观察新型自组装肽TRSAWmx水凝胶对在体外小鼠成骨细胞前体细胞MC3T3-E1细胞粘附效果、增殖能力及成骨分化能力的影响.方法 通过原子力显微镜观察新型水凝胶的自组装性能;以倒置显微镜对贴壁细胞计数,比较不同材料细胞的粘附;以CCK-8检测和评价不同材料上细胞的增殖;通过激光共聚焦显微镜观察细胞在材料表面的生长;茜素红-S染色观察钙结节形成;检测材料上培养的细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及细胞ALP、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等基因的表达.结果 TRSAWmx能自组装成纳米纤维结构;在接种30、60、90 min时,TRSAWmx组细胞粘附数明显高于空白组(P＜0.05);3、5、7d时TRSAWmx组细胞有着更佳的增殖活力(P＜0.05);在成骨诱导培养3、7、14 d时,TRSAWmx组ALP活性明显高于RADA16-Ⅰ组(P＜0.05);培养14 d后,TRSAWmx组茜素红-S染色可见钙结节形成多,成骨相关基因ALP、OCN、VEGF表达水平更高(P＜0.05).结论 新型自组装多肽纳米水凝胶TRSAWmx在体外能有效提高MC3T3-E1细胞粘附、增殖和成骨分化能力.     

老鹳草素对炎性微环境中人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探究老鹳草素(geraniin, GER)对炎性微环境中人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化及核因子-κB(NF-κB)的影响。方法 将从人牙周膜组织中分离鉴定的hPDLSCs分为对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、0.1μmol/L老鹳草素组(0.1GER组)、1μmol/L老鹳草素组(1GER组)、10μmol/L老鹳草素组(10GER组)和100μmol/L老鹳草素组(100GER组)。对照组hPDLSCs用成骨诱导培养液培养,TNF-α组hPDLSCs用含有10 ng/mL TNF-α的成骨诱导培养液培养,0.1GER组、1GER组、10GER组和100GER组hPDLSCs分别用含有10 ng/mL TNF-α以及0.1,1,10,100μmol/L的老鹳草素的成骨诱导培养液培养。培养21 d,采用可见光比色法检测各组细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性。采用茜素红染色观察钙化结节形成。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、osterix(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA相对表达量。通过West...     

甲基强的松龙对SD大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性的影响

目的 观察不同浓度的甲基强的松龙(甲强龙)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学特性的影响.方法 全骨髓培养法获得MSCs,通过表面抗原和多能分化能力鉴定.不同浓度的甲强龙分别处理MSCs,流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率;MTS/PMS法检测各组细胞的增殖率;不同浓度的甲强龙加抗坏血酸和β-甘油磷酸诱导MSCs成骨分化,茜素红染色(AR-S)、ALP染色检测各组细胞的成骨分化能力.结果 10-6mol/L及以上浓度的甲强龙可明显促进MSCs的凋亡(P＜0.01)并明显抑制MSCs的增殖(P＜0.01),10-7 mol/L及以下浓度的甲强龙对MSCs的凋亡率和增殖抑制作用的影响与对照组差别没有统计学意义(P＞0.05);10-7及10-6mol/L甲强龙加抗坏血酸和β-甘油磷酸组茜素红染色和ALP染色阳性,10-R及10-5mol/L组茜素红染色和ALP染色阴性.结论 高浓度的甲强龙(10-6mol/L及以上)能抑制MSCs的增殖并促进凋亡,而低浓度的与对照组差别不大.适当浓度(10-7及10-6mol/L)的甲强龙可以诱导MSCs的成骨分化,而过高或过低浓度(10-8及10-5mol/L)的甲强龙则没有这种作用.     

不同浓度淫羊藿苷对大鼠脂肪干细胞成骨分化相关因子的体外研究

目的 探究淫羊藿苷对大鼠脂肪干细胞成骨分化的影响。方法 分离、培养SPF级SD雌性大鼠脂肪干细胞后,流式细胞术进行表面标志物检测,然后通过茜素红、油红O染色观察脂肪干细胞的成骨分化及成脂分化。将第3代脂肪干细胞分为空白组、白藜芦醇组(100μmol/L)、淫羊藿苷Ⅰ～Ⅳ组(1、10、50、100μmol/L),培养21 d后对脂肪干细胞LIM结构域蛋白Ajuba(Ajuba)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)进行荧光定量RT-PCR、Western-blotting检测。结果 培养至第3代的脂肪干细胞表面标志物表现为CD90(95%)、CD34(9.26%)。成骨诱导21 d时茜素红染色可见橘红色钙化结节,成脂诱导21 d时油红O染色可见红色脂滴。白藜芦醇与100μmol/L淫羊藿苷均能促进脂肪干细胞Runx2、ALP基因及蛋白表达,且与白藜芦醇比较,同浓度的淫羊藿苷呈现出显著的促进效应(P<0.01,P<0.05)。白藜芦醇及各浓度淫羊藿苷均可抑制Ajuba基因及蛋白表达,且与100μmol/L白藜芦醇比较,50、100μmol/L淫羊藿苷抑制A...     

原花青素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化作用的研究

目的 探讨原花青素(PAC)对人牙髓干细胞(hDP-SCs)增殖及成骨分化能力的影响.方法 改良组织块消化法分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色鉴定分化潜能.不同浓度的PAC(0、4、8、16、32 μmol/L)刺激hDPSCs后,通过CCK-8法检测hDPSCs的增殖,细胞骨架染色检测hDPSCs的细胞形态,碱性磷酸酶(ALP)活性检测hDPSCs的ALP活性,荧光定量PCR(q-PCR)检测成骨相关基因核心转录因子2 (Runx-2)、骨形成蛋白2(Bmp-2)和Ⅰ型胶原(Col-1)的mRNA表达水平.结果 体外成功培养hDPSCs并进行鉴定;CCK-8检测和细胞骨架染色结果显示,0～16 μmol/L PAC对hDPSCs形态和增殖没有影响,32μmol/L PAC对hDPSCs增殖有抑制作用;ALP染色和定量检测均显示8 μmol/L PAC组ALP活性较对照组(PAC 0μmol/L)高;q-PCR结果显示,与对照组相比,8μmol/L PAC诱导7d后,成骨相关基因Runx-2、Bmp-2、Col-1的表达均升高.结论 PAC对hDPSCs的成骨分化有促进作用.     

7,8-二羟基黄酮通过Wnt/β-catenin信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化

目的 探究7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化的影响和机制。方法 将从健康人牙周膜组织中分离培养的hPDLSCs用不同浓度的7,8-二羟基黄酮(0,0.5,1,5,10,20,40μmol/L)处理，通过MTT法检测hPDLSCs活性。将hPDLSCs分为5组：对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和XAV939(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组。各组hPDLSCs均用成骨诱导液培养，对照组的成骨诱导液不添加药物，低剂量组、中剂量组和高剂量组的成骨诱导液中分别添加0.5,1,5μmol/L的7,8-二羟基黄酮，XAV939组的成骨诱导液中同时添加5μmol/L的7,8-二羟基黄酮和10μmol/L的XAV939。各组hPDLSCs共培养21 d,每2 d更换培养基，检测碱性磷酸酶(ALP)活性。通过茜素红染色观察钙化结节形成(OD_{590 nm})。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Wnt-3a、β-catenin和糖原...     

浓缩生长因子提取液对牙龈间充质干细胞增殖及成骨分化的促进作用

目的 探讨浓缩生长因子提取液(CGFe)对人牙龈间充质干细胞(GMSCs)增殖以及成骨分化的影响。方法 体外培养GMSCs,实验组采用含CGFe的α-MEM(含10%的胎牛血清)培养细胞,对照组使用不含CGFe的α-MEM(含10%的胎牛血清)培养细胞。MTT法测定GMSCs细胞的增殖情况,成骨诱导1、3、5、7 d检测碱性磷酸酶(ALP)的活性,14 d和21 d进行茜素红染色检测细胞形成钙结节的情况,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架形态。结果 与对照组相比,实验组在第1、3、5天的吸光度有显著提高,P<0.05。在评价GMSCs的ALP活性时,实验组在第1、3、5、7 d的吸光度显著高于对照组,P<0.05或<0.01。评价成骨分化活性,采用茜素红(Sigma)染色检测矿化结节。实验组在第7、14 d钙结节整体吸光度明显高于对照组,P<0.01。结论 CGFe能够促进GMSCs增殖以及成骨分化。     

全反式视黄酸抑制大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及其机制

目的：探索全反式视黄酸（all-trans retinoic acid,at-RA）对大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs）成骨分化的影响及其机制。方法：成骨诱导培养基诱导rBMSCs,加入不同浓度（0.1、1.0、5.0 μmol/L）at-RA,诱导第7天用组织化学染色法和检测试剂盒检测各组碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,第21天用茜素红染色后倒置显微镜观察并经提取法后检测钙盐沉积。于诱导第7、14、21天采用real-time PCR检测骨钙素（osteocalcin,OCN）、骨桥素（osteo－pontin,OPN）,在上述时间点的基础上,再增加第1、3天2个时间点检测Runx2、Osterix以及视黄酸受体RARs（?琢、?茁）mRNA表达。结果：rBMSCs在成骨培养基诱导下经形态和茜素红染色观察证实能分化为成骨细胞,加入at-RA后培养7 d,ALP活性较对照组增加（F=107.177,P=0.000）,与对照组比较,at-RA为1.0、5.0 μmol/L 2组明显升高（P<0.05）。然而经茜素红染色测定,ALP升高组其钙盐沉积与对照组比较反而减少（F=57.554,P=0.000）。选at-RA浓度5.0 μmol/L做real-time PCR检测,与对照组相比在上述3个时间点OCN（F=211.145,P=0.000）、OPN（F=30.835,P=0.005）表达均降低,Runx2（F=106.536,P=0.000）、Osterix（F=452.546,P=0.000）、RAR?琢（F=253.159,P=0.000）的表达在第21天均下降,除Osterix表现为全程下调外,其他2个基因也在多个时间点有统计学差异;而RAR?茁表达则全程明显上升（F=2 294.377,P=0.000）。结论：at-RA抑制rBMSCs成骨分化,其机制可能与RAR?琢的下调和RAR?茁的上调,进而影响Runx2、Osterix的表达有关。     

Bmp2影响脂肪干细胞成骨能力的研究

目的 探究在大鼠脂肪干细胞内过表达骨形态发生蛋白2(Bmp2)后成骨基因的表达情况以及成骨能力的变化。方法 通过电转染Bmp2至大鼠脂肪干细胞内，以空白组作为对照，分为空白对照组(Control组)、空载组(Vector组)、成骨诱导组(Inducement组)、过表达组(Bmp2组),采用Western blot、qRT-PCR及免疫荧光对比成骨基因表达情况，采用碱性磷酸酶染色与茜素红染色观察硫化钴沉淀及钙盐沉积情况。结果 Western blot与qRT-PCR检测显示，与Control组相比，Bmp2组的Bmp2、Bmp4、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)、矮小相关转录因子2(Runx2)、磷酸化大鼠信号转导分子1/5(P-Smad1/5)、远端缺失同源框2(Dlx2)、骨涎蛋白(BSP)表达显著增高(P<0.05),而Smad1/5的表达情况差异无统计学意义；免疫荧光检测显示，与Control组相比，Bmp2组的OPN、Runx2荧光强度显著增高(P<0.05);茜素红染色及碱性磷酸酶染色结果显示，与Control组相比，Bmp2组细胞周围钙盐沉积增多，硫化钴...     

人参皂苷Rg1促进人牙周膜干细胞增殖与成骨分化

目的 观察人参皂苷Rg1对体外培养的人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和成骨分化的影响.方法 选取第3代PDLSCs,采用MTT法和细胞周期检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4μmol/L)人参皂苷Rg1对PDLSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)活性、实时荧光定量RT-PCR和放免法检测人参皂苷Rg1对PDLSCs成骨分化的影响;采用ELISA方法检测人参皂苷Rg1对PDLSCs碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.结果 与对照组比较,浓度为0.5、1、2μmol/L的人参皂苷Rg1能明显提高PDLSCs的增殖能力(P＜0.05),其中浓度为1μmol/L的促增殖作用最强,S+G2/M期细胞百分率明显高于对照组(P＜0.05);浓度为1μmol/L的人参皂苷Rg1组ALP活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)和bFGF的表达水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1对体外培养的PDLSCs有促进增殖和成骨分化的作用.     

胡椒碱对成骨细胞成骨分化的影响

目的探讨胡椒碱对成骨细胞成骨分化的影响以及机制。方法分离、培养胎鼠颅骨成骨细胞,分别给予不同浓度的胡椒碱处理,采用MTT法检测胡椒碱对成骨细胞毒性的影响;采用碱性磷酸酶（ALP）染色和ALP活性检测试剂盒检测ALP活性;采用茜素红S染色评估成骨细胞成骨及矿化水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ALP、I型胶原蛋白α1（COL1A1）、成骨相关转录因子蛋白（OSX）、骨桥蛋白（OPN）、runt相关转录因子2（Runx2）的mRNA表达水平;采用Western blot检测Wnt 1和β-catenin蛋白水平;采用免疫荧光检测β-catenin分布与表达;采用Wnt/β-catenin信号途径特异性拮抗剂IWR-1验证胡椒碱对成骨细胞成骨分化的信号通路。结果在0～60μmol·L-1浓度范围内,胡椒碱对成骨细胞活力无明显影响（P>0.05）。在0～40μmol·L-1浓度范围内,胡椒碱呈剂量依赖性促进成骨细胞ALP活性（P<0.01或P<0.001）和矿化结节形成（P<0.05或P<0.01）,促进ALP、COL1A1、OSX、OPN和Runx2的mRNA表达水平（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,促进Wnt 1和β-catenin蛋白的表达水平（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。用IWR-1预处理后,由胡椒碱诱导的成骨细胞的基质矿化受到明显抑制（P<0.01）。结论胡椒碱可通过增强Wnt/β-catenin信号促进成骨细胞的成骨分化。     

他克莫司对小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的:研究他克莫司对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖及成骨分化的影响。方法:取小鼠BMSC分为3组,低、高剂量他克莫司组分别用含不同浓度(50、500 nmol/L)他克莫司的成骨诱导培养基培养,空白对照组用不含他克莫司的成骨诱导培养基培养。培养3 d,通过CCK-8法检测细胞的增殖能力;培养5、10 d,采用qRT-PCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、锌指结构转录因子(Osterix)、碱性磷酸酶(Alp)、骨钙蛋白(Ocn)mRNA的表达水平;培养10、14 d,用ALP染色和茜素红染色检测细胞的成骨分化能力。结果:与空白对照组相比,低、高剂量他克莫司组BMSC增殖能力增强,成骨分化相关基因Runx2、Osterix、Alp、Ocn表达上调,ALP活性增强,矿化结节形成增多(P<0.05)。结论:他克莫司可促进小鼠BMSC的增殖和成骨分化。