衢州市食品中单核细胞增生性李斯特氏菌的检测

单核细胞增生性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes．以下简称单增李斯特菌）是一种强致病性的食源性病原菌,主要侵袭孕妇、新生儿、免疫功能低下成人,特别是老年人。该菌广泛分布于自然界,多种食品均可受到污染。为了解衢州市食品中单增李斯特菌的污染状况,我们对2002～2004年衢州市市区菜市场、超市的食品进行了单增李斯特菌的监测,现将结果报告如下。     

利用商品DNA探针对食品中单核细胞增生李斯特菌的快速检测评估

用商品核酸探针 (AccuProbe)对 10 0份市售食品中单核细胞增生李斯特菌进行检测和验证 ,并以酶联免疫荧光分析技术 (VIDAS)和常规培养分离物做生化鉴定 (API)做平行测试比较 ,最终证实基因探针 (AccuProbe)对食品中单增李氏菌的检测具备正确、灵敏、快速、简便等优点 ,适于推广应用     

动物性食品中单核细胞增多性李氏杆菌检验方法的建立及其应用

1、在国内首次建立了动物性食品中单核细胞增多性李氏杆菌检测的常规检验方法,同时研制了自己的增菌培养基吖啶橙增菌液与分离培养基七叶苷琼脂,填补了国内空白。其优点主要表现在单增李氏菌在增菌培养基中生长速度快,抗杂菌干扰能力强。在分离培养基上分离效果好,菌落具有特征性易于辩认.生化鉴定实验快速简捷,整个检测时间仅需5d,1000余份实际样品检测表明,该方法不但适合肉、乳等动物性食品的检测,同时也可用于其它食品检测。     

乌鲁木齐市部分食品中单核细胞坛生李斯特氏菌污染的调查

目的调查单核细胞坛生李斯特氏菌在我市部分副食品市场所供应的六类食品污染状况,以预防该菌的传播和食物中毒而提供科学依据. 方法参照GB4789.30-94<单核细胞坛生李斯特氏菌的检验>方法进行. 结果所测460份食品中,单核细胞坛生李斯特氏菌的阳性检出率为4.8%,其中以肉类食品污染较高(7.5%). 结论乌鲁木齐市售食品中存在单核细胞坛生李斯特氏菌的污染,在食品带菌及食物中毒调查时应考虑到该菌污染的可能性.     

用PCR检测六类食品中单核细胞增生李斯特氏菌

目的　调查福建省食品中李斯特氏菌的污染状况。方法　用GB4789 30 - 94单核细胞增生李斯特氏菌 (Listeriamonocytogenes简称Lm)的检验方法分离菌株 ,用PCR检测李斯特氏菌的两种致病因子。结果　从福建采集 2 6 5份样品中分离出 17株李斯特氏菌 ,其中 ,2株Lm含有李氏溶血素O (ListerialysinO ,Hly)和内化素基因 (Internalin Inl) ,15株英诺克李斯特氏菌 (Listeria innocua)中 8株含有内化素基因 ,7株两种基因均为阴性。结论　从生鸡肉和生牛肉检出 2株Lm ,表明我省存在李斯特氏菌病的可能性 ,有必要进行深入研究。     

武汉市食品中单核细胞增生性李斯特氏菌污染状况调查

单核细胞增生性李斯特氏菌 (LM) ,是重要的食源性疾病的病原菌 ,在自然界分布广泛。该菌致病性强 ,可引起人类菌血症 ,脑膜炎等症状 ,不易被寒冷日晒等强烈因素所杀灭。国外对该菌高度重视 ,WHO将其列为九十年代食品中四大致病菌之一〔1〕。我国虽未报道单核细胞增生性李斯特氏菌食物中毒 ,但此次食品污染状况调查初步了解了单核细胞增生性李斯特氏菌在武汉市食品污染状况 ,为制定食源性致病菌的预防措施提供了依据。1　材料和方法1 1　样品来源和品种　采自武汉三镇市售生肉、熟肉、乳制品 (酸奶、果奶 )、冷饮 (冰淇淋 )、乳 (生奶、消…     

沙门菌、产单核细胞李斯特菌多重PCR检测方法的建立及应用

目的建立沙门菌、产单核细胞李斯特菌多重PCR检测方法,提高检测效率和敏感性。方法选择沙门菌组氨酸转运操纵子基因、产单核细胞李斯特菌溶血素基因序列设计引物,在单一PCR方法基础上,建立检测两种病原菌的多重PCR技术。结果在495bp和850bp处分别出现预期的特异性DNA扩增条带,敏感性试验显示该体系能检测出32pg的沙门菌DNA和274pg的李斯特菌DNA,样品检测表明该方法与单一PCR和国标方法的符合率达100%。结论本研究建立了能同时检测沙门菌和产单核细胞李斯特菌的多重PCR技术,为主要食源性病原菌快速检测提供了新方法。     

漳州市首次分离出单核细胞增生李斯特氏菌

单核细胞增生李斯特氏菌(简称LM),是李斯特菌属中唯一能引起人类和动物患菌血症、脑膜炎、流产等高病死率的病原菌,也是造成目前国内外食品污染的食源性致病菌之一。LM在自然界分布广泛,可污染蔬菜和多种食品,欧美国家由LM引起的食物中毒不断发生,其发生率在全球大幅度上升,引起世界各国卫生部门的高度重视。我市以往对LM的污染调查尚属空白,为预防它发生和流行,近年来我们对市区居民消费的六大类食品进行采样检测,现将调查结果报告如下:1　材料和方法1.1　样品来源　324份样品采自市区主要14个菜市场、3家大超市和15家食品商店,其中生…     

2007～2011年甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌监测分析

目的对食源性致病菌单核增生李斯特菌进行监测,了解甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况及分布,并确定高危即食食品的种类。方法按中国疾病预防控制中心营养与食品安全所建立的全国食品污染物监测网的食源性致病菌监测部分操作,2007～2011年从甘肃省14个市(州)农贸市场、超市及酒店餐馆采样,并监测十大类(生食水产、熟肉制品、凉拌菜、即食非发酵豆制品、冰激凌、速冻熟制米面、生食蔬菜、地方特色米面食品、鲜榨果蔬汁、糕点饼干)食品,共计4 447份。结果 4 447份十大类产品中共检出单核细胞增生李斯特菌88株,总检出率为1.98%;糕点饼干未检出,冰激凌检出率达8.33%,其次是凉拌菜(3.14%)、非发酵豆制品(2.56%)、生食蔬菜(1.80%)、地方特色米面(1.73%)、速冻米面制品(1.52%)、熟肉制品(1.35%)、生食水产品(1.09%)、鲜榨果汁(0.70%);不同季节无显著性差异;全省14个市(州)检出率最高的是嘉峪关市,为5.45%,其次为定西、白银,分别为4.55%,2.91%,检出率最低的是陇南市为0.46%;单核细胞增生李斯特菌定量检测,菌落数在0.3～10 MPN/g占72.41%,10～100 MPN/g占20.69%,100～200 MPN/g占9.52%。结论甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌的污染严重,14个地(市)中嘉峪关、定西、白银检出率较高;十大类食品中冰激凌、凉拌菜、非发酵豆制品污染单核增生李斯特菌严重。     

食品中单核细胞增生性李斯特氏菌检测及污染现状分析

单核细胞增生性李斯特氏菌（L．m）是一种能引起人畜共患病,又是致病性强的食源性病原菌后其临床症状为人类脑膜炎、菌血症、孕妇流产等。该菌在自然界分布广泛,不易被寒冷、日晒等因素杀灭,多种食品均有不同程度的污染。该菌所致疾病多次在世界上引起爆发,且死亡率在30％左右．它是20世纪90年代的主要致病菌之一。由于近年来不断从食品中分离到致病性李斯特氏菌,在我国也引起了高度重视．在2000年我国启动的全国污染物监测课题中,浙江省绍兴市作为成员之一对近2年市售食品中李斯特氏菌污染状况进行了初步调查。     

杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别研究

目的研究杭州地区单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)食品分离株的分子分型情况,了解当地流行株的型别特征。方法用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)的方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型。PFGE结果进行聚类分析,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 6个血清型组成的133株杭州食品分离株共获得19个MLST型别,并发现1个新的ST型ST767。ST9和ST121是数量最多的型别。用AscI和ApaI酶切分别获得33和45个PFGE带型。结论杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别分布广泛,大部分菌株是可引起人李斯特菌病的Lineage I和Lineage II菌株。食品中单核细胞增生李斯特菌的污染比较严重,应加强监测与管理以防食源性疾病的发生。     

李斯德氏杆菌病的研究进展

<正> 产单核细胞李斯德氏杆菌(下称李氏杆菌)是引起人类,特别是免疫功能障碍人的脑膜炎、败血症、流产、迟产的病原微生物,致死率高达33％。尽管早在1926年Murray等就已提出本菌对人、畜的致病性,但只是近几年来才真正认识该菌是一重要的食源性致病菌。从所暴发的几起李氏杆菌病传播媒介看,动物性食品是主要的传播源,但目前国内尚未见这方面的报道。本文对李氏杆菌的生物学特性,流行特点以及检验方法等作一综述。     

李斯特氏菌动力鉴定培养基——TTC半固体

<正> 李斯特氏菌(Listeria)尤其是单核细抱增生李斯特氏菌(L.monocylogenes,简称单增李氏菌)可引起人畜共患病。该菌在22～25℃有动力,动力试验是李氏菌鉴定的主要项目之一。但李氏菌动力试验一股需要在室温下观察2～5d,而半固体动力培养基对一些动力尚差的细菌则结果较难判定。为此,我们应用TTC 半     

双重PCR法检测冷冻淡水水产品中单核细胞增生性李斯特菌的研究

目的建立一种快速有效地检测出口冷冻淡水水产品中单核细胞增生性李斯特菌的方法。方法以李斯特菌属特异性iap基因和种特异性hly基因为靶序列,建立双重PCR方法;比较和优化3种提取模板的方法;通过干扰实验、模拟污染实验等验证了所建方法的稳定性、特异性、敏感性;并与SN0184-93方法和mini-VIDAS方法进行比较。结果建立的方法稳定性强、特异性和敏感性好,检测限度为3cfu/25g样品,检测结果与SN0184-93方法和mini-VIDAS方法的一致性为100%;该方法可直接使用单核细胞增生性李斯特菌菌液作为模板进行扩增。结论建立的双重PCR方法可快速、敏感,特异地检测出口冷冻淡水水产品中单核细胞增生性李斯特菌。     

单核细胞增生性李斯特菌PCR快速检测方法建立及应用

目的　通过扩增hly基因PCR法建立快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌 (Lm )方法。 方法 :用PCR法扩增hly基因来检测标准菌株及临床分离的Lm的纯培养物和模拟污染的生猪肉、水和牛奶 ,并应用于实际食品检验工作中进行验证。结果　 34株Lm的PCR结果呈阳性 ,而其它李斯特菌 ,包括英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌、西尔李斯特菌、威儿李斯特菌和格氏李斯特菌以及非李斯特菌均未出现特异性的片段。表明所扩增的hly基因 3’末段 82 7bp的DNA片段对Lm具有较高的特异性。PCR法对Lm纯培养物的检测限达 10 5CFU/ml,对模拟污染生猪肉、水和牛奶的 30℃ 16h改良LEB增菌培养液用PCR法检测 ,结果检测限达 10CFU/ 2 5 g(ml)。进一步研究表明该PCR扩增体系能检测出 6 .5pg的LmDNA ,整个检测过程只需 2 4h。采用该法对扬州市区 16 9份食品样品检测 ,8份样品Lm呈阳性且结果与传统的生化鉴定方法完全一致。结论　扩增hly基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点 ,可用于食品的Lm的分离     

2014-2019年阜阳市食品和病人分离单增李斯特菌的分子特征分析

目的 比较分析阜阳市食品和病人分离单增李斯特菌的毒力基因、分子型别,建立阜阳市单增李斯特菌分子特征信息数据库,为防控单增李斯特菌病提供科学依据。方法 对阜阳市2014-2019年分离自食品和病人的55株单增李斯特菌,用聚合酶链反应(PCR)检测其毒力基因prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行分子分型及同源性分析;用多位点序列分型(MLST)技术进行分子分型和聚类分析。结果 55株单增李斯特菌全部携带prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA基因;PFGE将其分为21个带型,相似度60.3%~100%;MLST将其分为14个ST型,ST9型为优势型别;3株病人分离菌株的PFGE带型和ST型互不相同,其中2株病人来源菌株分别与食品分离株具有相同PFGE带型和ST型。结论 阜阳市食品和病人中分离的单增李斯特菌均携带6个毒力基因,食品分离菌株的分子型别呈现出多样性,其中存在同型别单增李斯特菌持续性污染现象,病人分离菌株具有与食品来源菌株相同的PFGE带型和ST型,提示食源性感染的风险较高。     

重组溶血素蛋白用于单增李斯特菌快速检测的效果

目的制备单增李斯特菌的溶血素重组蛋白,获得溶血素的诊断用抗原和单克隆抗体。方法以PCR法扩增单核细胞增多性李氏杆菌hly基因,构建原核表达载体,获得重组溶血素蛋白,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体。结果运用杂交瘤技术成功得到3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株即2F5、5H1和8F9,并获得免疫球蛋白,测定2F5、5H1和8F9单克隆抗体亚型分别为IgG2b、IgG3和IgGM。结论本研究克隆和表达单增李斯特菌的hly基因,研制基于溶血素的诊断用抗原和单克隆抗体,为检验分析单增李斯特菌及制备基因工程疫苗奠定基础。     

免疫磁分离-荧光PCR应用在肉类单增李斯特氏菌的检测

目的建立适用于肉类产品中单核增生李斯特氏菌的荧光PCR检测方法。方法根据单增李斯特氏菌溶血素基因hlyA,设计合成引物和荧光探针,结合免疫磁珠筛选,选择简便的DNA提取方法,建立适用于检测肉类制品中单增李斯特氏菌的荧光PCR方法。对该方法进行特异性、灵敏度及模拟样品检测效果的研究。结果对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株,及混合菌液的检测,结果显示该方法具有良好的特异性。对染菌模拟样本的检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h。结论免疫磁分离荧光PCR方法为快速、简便和准确检测肉类制品中单增李斯氏菌提供了一个新的途径。     

单增李斯特氏菌国家标准检验方法的验证与探讨

目的验证、探讨并分析食品中单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特氏菌)的检验方法。方法按照《食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》GB 4789.30-2010方法,首先对实验样品进行前增菌,然后用选择性培养基进行分离培养,利用糖发酵试验、溶血及协同溶血试验、API Listeria生化板条、全自动微生物生化鉴定仪等方法进行鉴定。结果在李斯特氏菌显色培养基上,单增李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌菌落周围有白色晕圈,实验样本及3种李斯特氏菌标准菌株的葡萄糖、麦芽糖、MR-VP、甘露醇、七叶苷等生化反应一致,英诺克李斯特氏菌与其他李斯特氏菌的溶血反应结果不同,为阴性;伊氏李斯特氏菌鼠李糖反应结果为阴性,其余均为阳性,只有伊氏李斯特氏菌的木糖反应结果为阳性,VITEK 2 COMPACT全自动微生物生化鉴定仪结果均为李斯特菌属。结论根据对单增李斯特氏菌国家标准检验方法的验证,建议先通过李斯特氏菌显色培养基和木糖、鼠李糖糖发酵试验,将单增李斯特氏菌与其他李斯特氏菌进行区分,再用API Listeria生化板条进行验证,可缩短检测时间同时提高检测的准确性。     

2016年福建省单核细胞增生李斯特菌临床病例及食品来源菌株的分子特征分析

目的 研究福建省单核细胞增生李斯特菌感染病例的临床特征及分离菌株的分子型别,为食源性疾病溯源和防控提供参考依据。方法 通过监测网报告的感染病例进行个案访谈调查;对2016年临床病例和即食食品来源的单核细胞增生李斯特菌分离株进行血清分型和PFGE分子分型。结果 感染病例均为免疫力低下的孕妇和新生儿,3株病例分离株血清型为2株1/2a和1株4b。8株食品分离株血清型为5株1/2a、2株4b和1株1/2b。11株PFGE分为10个型别。结论 2016年福建存在散发的单核细胞增生李斯特菌病例,PT型各异,无同源性。应加强监测、流行病学调查和饮食卫生宣教,保护孕妇和新生儿等高危人群。