血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定综合性实验的创新与实践

为改革生物化学实验,提高实验教学水平,对"血清γ-球蛋白的分离与提纯"实验进行改进和重新整合.建立了综合性实验"血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定",实现实验内容和生化技术的综合与创新.经过4年的医学本科生教学实践,实验方法 稳定,结果 重复可靠,适合实验教学,有利于提高大学生的综合实验技能.     

开展血清γ—球蛋白的分离、提纯与鉴定的综合性实验的做法与体会

随着学院的不断发展和多层次多元化办学模式的出现 ,我们生物化学实验室的一些实验已不能满足多层次教育的需要。生物化学是重要的医学基础课程 ,是成人教育、专科生及本科生的必修课。搞好实验教学同样非常重要 ,应付不得。为此 ,我们依据最新教学大纲 ,结合实验室现有的条件 ,在实验课的内容安排上进行了即有保留又有创新的重新调整。以适应新局面的教学任务。考虑到重点章节 ,考虑到实验基本技术的均衡运用 ,我们保留了部分传统的优秀的实验项目 ,如转氨基作用 ,邻甲苯胺法测定血糖含量 ,酶的催化特异性及影响酶作用因素等 ,用于各层次的…     

兔血清白蛋白和IgG的分离纯化与鉴定

目的：以兔血清白蛋白和IgG的分离纯化与鉴定实验为例，阐述了血清蛋白制备与分析的过程。方法：使用了硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、DEAE离子交换层析、亲和层析、醋酸纤维薄膜电泳、SDS—PAGE、HPLC等分离纯化鉴定蛋白质的方法。结果：制备了兔血清白蛋白和γ-球蛋白（IgG），测定被分离物质的相对分子量，鉴定纯化产品的均一性。结论：该实验作为一门生物综合性大型实验，非常有利于培养学生掌握蛋白质制备与分析的综合技能。     

血清γ-球蛋白与Child-Pugh肝功能分级在肝脏储备功能评估中的价值

目的探讨血清γ-球蛋白与Child-Pugh肝功能分级在术前评估肝脏储备功能的价值。方法选取我院72例肝癌肝切除病人和12例终末期肝病行肝移植病人为研究对象,测定手术前后血清γ-球蛋白的水平、肝硬化百分比、Child-Pugh肝功能分级,用统计学方法分析三指标之间的关系。结果血清γ-球蛋白测定值与纤维化百分比呈直线相关趋势（r=0.862,P〈0.001）;随着肝功能级别的升高,肝纤维化面积百分比逐级随肝功能损害加重而升高,在Child-Pugh A、B、C三者间,两两比较亦有显著差异（P〈0.05）;术后Child-Pugh分级下降的患者术前的血清γ-球蛋白明显高于术前同一级别的患者,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论血清γ-球蛋白检测可作为临床术前评价肝脏储备功能的手段之一,并且可以弥补Child-Pugh肝功能分级的不足。     

血清γ-痕迹蛋白对早期糖尿病肾病的诊断价值

目的 探讨血清γ-痕迹蛋白（SCysC）在糖尿病肾病早期诊断中的临床价值.方法 采用免疫比浊法测定65例糖尿病患者的SCysC浓度,同时测定尿白蛋白排泄率（UAE）、β2-微球蛋白（β2-MG）作为对照.结果 UAE升高组（早期糖尿病肾病组）SCysC浓度明显高于UAE正常组（P〈0.01） ,并与UAE及血清β2-MG浓度呈显著正相关.结论 SCysC与UAE具有相同的临床意义,可以作为诊断早期糖尿病肾病的一项更简便、快速的敏感指标.     

啮齿类小鼠γ-干扰素原核表达、纯化及功能鉴定

目的：构建γ-干扰素的高效原核表达载体，进行γ-干扰素表达、纯化和鉴定，并探索优化啮齿类γ-干扰素的制备工艺。方法：用RT-PCR技术，从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFN-γcDNA，与原核表达载体pET30a（＋）重组，表达和纯化重组蛋白His6-mIFN-γ，并用Western Blot检测该重组蛋白的生物学活性。结果：构建了啮齿类γ-干扰素的高效原核表达载体，并实现了γ-干扰素的可溶性表达，且验证该γ-干扰素具有生物学活性。结论：成功优化了生产干扰素的工艺，为国内外进行γ-干扰素研究奠定基础。     

哺乳动物中枢神经系统γ-氨基丁酸转运体的研究进展

γ-氨基丁酸转运体(GAT)是一种位于突触前膜、神经胶质细胞膜或囊泡膜上的糖蛋白,它能高选择性地与突触间隙的γ-氨基丁酸(GABA)相结合,将其转运入细胞内或囊泡内,从而终止GABA的抑制性作用,进而参与突触间信息传递的调控.本文就国外对哺乳动物中枢神经系统中GAT的研究,从GAT的分型、各亚型在中枢神经系统的分布及细胞定位、GAT的结构及功能、GAT表达及功能的调控、GAT异常与癫痫、GAT抑制剂的药理学研究等方面作一概要综述.     

γ-氨基丁酸、γ-氨基丁酸受体、γ-氨基丁酸受体基因在脑梗死中的作用

近年来脑梗死的研究已成为当今医学研究中急需突破的重要领域。本文从中枢神经系统中重要的抑制性氨基酸GABA及其受体与受体基因方面进行综述。     

γ-干扰素诱导蛋白-10融合蛋白的表达纯化及其生物学活性测定

目的 表达大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10 (IP-10) 融合蛋白,并测定其生物学活性.方法 从大鼠脾细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法得到IP-10cDNA.双酶切将其插入pET-32 (a) +载体中.重组质粒pET-32a (+) -IP10经测序证实.将pET-32a (+) -IP10转化大肠杆菌BL21 (DE3) 中进行表达,目的蛋白经镍离子亲和层析柱纯化.微室跨膜迁移实验测定其生物学活性.结果 测序表明,所构建的重组质粒pET-32a (+) -IP10序列完全正确,诱导表达的蛋白的相对分子量同预期分子量相同,微室跨膜迁移实验测定出IP-10融合蛋白对激活的T淋巴细胞具有良好的趋化活性.结论 成功在大肠杆菌中表达了IP-10融合蛋白,并具有生物学活性.     

重组大鼠14-3-3γ蛋白在大肠杆菌中的融合表达与分离纯化

目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化.方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γ cDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物.结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的27.08%,相对分子质量为56 000左右.能与抗鼠14-3-3γ多克隆抗体特异性结合.结论:表明成功构建了GST-14-3-3γ融合蛋白载体,在大肠杆菌中有高效表达,并具有良好的免疫反应性.     

γ-羟基丁酸治疗急性毒鼠强中毒小鼠的实验研究

目的观察γ-羟基丁酸在治疗急性毒鼠强中毒小鼠治疗中的解毒疗效。方法将30只小鼠均分为对照组、治疗组（每组15只）,用一次性口服毒鼠强染毒小鼠的方法建立动物实验模型。给予对照组生理盐水,治疗组γ-羟基丁酸腹腔注射,观察两组小鼠中毒惊厥潜伏期、1小时内抽搐间隔时间、死亡小鼠数、平均死亡时间和病死率等指标。结果γ-羟基丁酸在延长中毒动物惊厥潜伏期（9.6±3.5min）、平均死亡时间（58.7±17.6min）和降低死亡小鼠数、病死率（60.0%）上都明显优于对照组（分别为4.4±2.8min,12.8±4.8min,100%）,统计有显著差异（P〈0.05）。结论γ-羟基丁酸能明显缓解毒鼠强中毒后的惊厥,减轻抽搐,降低病死率,可作为一种新的毒鼠强中毒解毒剂试用于临床。     

γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

目的对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化。方法根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白。结果γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白。经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础。     

溶菌酶分离纯化综合性实验的开设

介绍溶菌酶分离纯化综合性实验开设的背景、课程改革的思路以及实施过程。通过开设综合性实验,对生物工程下游技术课程中分散的实验教学内容进行改革,极大地激发了学生的学习兴趣,对其他医药院校改革生物工程下游技术实验教学有一定的参考意义。     

人精浆中γ－精浆蛋白的分离纯化研究

通过离心，透析分离正常人精浆，再经二次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，成功的纯化了γ－精浆蛋白。等电聚焦电冰法测其等电点约为ｐＩ６．５，凝胶过滤层析法测其分子量约为２８０００。免疫电泳结果证明其纯度较高，并与人血清、唾液、初乳等无交叉抗原。在法医物征实践及临床诊断方面均具有重要意义。     

血清γ-谷氨酰转移酶与缺血性脑血管病的关系

目的 探讨γ-谷氨酰转移酶(GGT)与缺血性脑血管病(ICVD)的关系.方法 155例ICVD患者(ICVD组),其中脑梗死(CI)96例,短暂脑缺血发作(TIA)59例,分别采用酶速率法、酶法检测其血清GGT、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,并与60例体检健康者(对照组)进行比较.结果 ICVD组GGT、TC、TG 、LDL-C水平均高于对照组(P均＜0.01),HDL-C水平低于对照组(P＜0.01);CI组上述指标均高于TIA组(P＜0.01).结论 GGT与缺血性脑血管病的发生、发展密切相关.     

优化组合生物化学实验 提高学生综合能力

在本科生的生物化学教学中,对生物化学实验进行优化组合,采用问卷调查的形式获得信息。从统计结果可见:改革后的生物化学实验教学,能很好地以学生为主体,提高了学生的综合能力、思维能力和分析问题的能力,对培养学生的综合素质,全面提高实验教学质量有着重要意义。     

临床生物化学综合性实验对培养学生综合素质的探讨

本文就本教研室今年开展的一次综合性实验对培养学生的综合素质的作用进行了探讨,认为在临床生物化学实验教学中开展综合性实验不但激发了学生的学习兴趣,而且对学生综合素质的培养起到了一定的作用。     

血清γ-谷氨酰转移酶与高血压的相关性研究

目的 探讨人群中血清γ-谷氨酰转移酶(-GGT)和高血压发病的相关性.方法 选取2006年在该院体检的1 487名未患有高血压疾病的人群为研究对象,按照γ-GGT水平分成两组,经过5年的随访,观察2011年高血压的发病情况.检测研究对象的血清谷氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖等指标和人体测量学结果.结果 5年的随访观察发现,高γ-GGT组的高血压发病率高于低γ-GGT组,差异有统计学意义(P＜0.05).校正性别和基线各代谢指标后,γ-GGT变化值与高血压的发病率存在相关性[RR=1.012,95％CI(1.004,1.019)],校正性别和各代谢指标5年的变化值后,γ-GGT变化值引起高血压发病的RR=1.013,95％CI(1.005,1.020),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 γ-GGT与高血压发病密切相关.     

γ-维生素E对哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液干扰素γ的影响

探讨γ-维生素E对哮喘的治疗作用及机制.将40只雄性Balb/c小鼠按随机分组原则分为正常组、哮喘组、地塞米松组及γ-维生素E组,采用ELISA法测定各组血清及肺泡灌洗液中干扰素γ的含量.结果发现,γ-维生素E促进哮喘小鼠干扰素γ上调,γ-维生素E可能是有用的抗哮喘药物.     

血清γ-谷氨酰转移酶水平与原发性高血压病早期肾损害的相关性探讨

目的 探讨血清γ-谷氨酰转移酶水平与原发性高血压病患者早期肾损害的相关性.方法 依据高血压患者病程、分级,将原发性高血压病患者分为A1组（≤10年组）、A2组（＞10年）;B1组（高血压1级）、B2组（高血压2级）、B3组（高血压3级）,另选50例健康者作为对照组,分别测定血清γ-谷氨酰转移酶（γ-GGT）、尿微量白蛋白（mALb）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）.结果 （1）高血压病患者γ-GGT、mALb、Cr、BUN水平与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.O1）,不同组间γ-GGT、mALb、Cr、BUN水平差异亦有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.（2）高血压病早期肾损害时γ-GGT呈升高趋势,并且γ-GGT水平与mALb、高血压病程、高血压水平呈正相关.结论 高血压早期肾损害时,γ-GGT水平与mALb密切相关,两者联合检测对诊断高血压早期肾损害具有重要意义.