附子多糖调控miR-135b-5p对脂多糖诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨附子多糖对脂多糖(LPS)诱导血管平滑肌细胞增殖和转移的影响及分子机制。方法将血管平滑肌细胞分为对照组(未经任何处理)、模型组(10μg/mL LPS)、附子多糖-1、2、3实验组(2.5、5、10 ng/mL附子多糖和10μg/mL LPS)、阳性对照组(10μmol/L辛伐他汀和10μg/mL LPS)、miR-NC组(转染miR-135b-5p阴性对照质粒载体)、miR-135b-5p组(转染miR-135b-5p过表达载体)、附子多糖-3+miR-NC组(转染miR-135b-5p阴性对照质粒载体+10 ng/mL附子多糖+10μg/mL LPS)、附子多糖-3+miR-135b-5p组(转染miR-135b-5p过表达载体+10 ng/mL附子多糖+10μg/mL LPS)。蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞周期;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-135b-5p蛋白表达。结果 LPS可诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,附子多糖处理后Ki67、N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,细胞活性降低,迁移细胞数降低,G_0/G_1期细胞占比升高,S期细胞占比降低(P0.01),G_2/M期细胞占比无统计学差异(P0.05),miR-135b-5p蛋白表达降低(P0.01)。过表达miR-135b-5p促进LPS诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。且过表达miR-135b-5p逆转了附子多糖对LPS诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移的抑制作用。结论附子多糖可通过下调miR-135b-5p抑制脂多糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和转移。     

扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠微小RNA-29家族表达的影响

目的通过观察扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠微小RNA-29家族(microRNA-29,miR-29)的表达影响,探讨其抗心肌纤维化的可能作用机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎术制备大鼠急性心肌梗死模型,随机分为模型组、扶正化瘀组和卡托普利组,假手术组只穿线不结扎,每组6只,连续8周灌胃给予相应药物或去离子水。采用HE染色、心脏指数评分、Masson染色的方法评价心脏整体形态结构、重构程度及纤维化程度,并运用实时荧光定量PCR法检测miR-29家族表达水平。结果 (1)与假手术组相比,模型组大鼠心脏指数比值、胶原容积分数升高(P0.01);与模型组相比,扶正化瘀组、卡托普利组大鼠心脏指数比值、胶原容积分数均降低(P0.01)。(2)与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死边缘区组织中miR-29a-3p、miR-29b-3p、miR-29c-3p、miR-29b-5p、miR-29c-5p表达显著下调(P0.05)。与模型组比较,扶正化瘀组miR-29b-3p、miR-29a-5p、miR-29b-5p、miR-29c-5p表达上调(P0.05);卡托普利组miR-29a-5p、miR-29b-5p、miR-29c-5p表达水平显著升高(P0.01),miR-29a-3p、miR-29b-3p、miR-29c-3p表达水平进一步下调(P0.01)。结论扶正化瘀胶囊可改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化,其作用机制可能与上调部分miR-29家族成员的表达有关。     

左归丸对去卵巢致骨质疏松症模型大鼠破骨细胞活性及miR-133b-3p/RhoA表达的影响

目的研究左归丸对去卵巢致骨质疏松症大鼠破骨细胞中miR-133b-3p、RAS同源基因家族成员A(RhoA)表达的影响, 探讨其作用机制。方法将SD雌性大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、左归丸组, 每组6只。模型组、左归丸组采用卵巢切除术构建大鼠骨质疏松症模型。左归丸组灌胃左归丸水煎液10 g/kg, 连续灌胃12周。采用比色法测定大鼠血清钙、磷水平, ELISA法检测ALP水平;骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度。培养各组破骨细胞, 采用Western blot法检测RANKL、RUNX2蛋白表达。对各组大鼠骨组织进行miRNA测序及差异表达分析。采用miR-133b-3p类似物及其对照处理破骨细胞, 采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)方法检测破骨细胞增殖活力, 采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞活性, 双荧光素酶报告基因实验检测miR-133b-3p与RhoA的靶向关系, 采用miR-133b-3p类似物及RhoA共表达的"挽救"实验研究左归丸影响破骨细胞活性的分子调控机制。结果与模型组比较, 左归丸组骨密度增加(P<0.05或P<0.01), 血清钙、...     

丹参酮IIA通过抑制miR-376b-5p降低急性心肌梗死大鼠致炎细胞因子分泌并减轻心肌损伤研究

目的 研究丹参酮Ⅱ_A改善大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)作用机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参酮Ⅱ_A(5 mL/kg)组、miR-376b-5p mimics+丹参酮Ⅱ_A组和miR-376b-5p inhibitor+丹参酮Ⅱ_A组,每组10只。除假手术组外,其他各组采用大鼠冠状动脉前降支结扎法建立AMI模型,给予药物干预12周后,qRTPCR检测大鼠心肌组织中miR-376b-5p基因表达;采用苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察心肌组织病理变化和纤维化程度;ELISA检测血清炎症因子水平;免疫组化检测心肌组织中I型胶原蛋白(collagen type I,Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Col3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;Western blotting检测心肌组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β...     

补肾活血汤通过抑制Wntβ-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠疗效及血管形态、VEGF的影响

目的:探究补肾活血汤通过抑制Wntβ-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠疗效及血管形态、血管内皮生长因子受体(VEGF)的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型组和干预组。通过臀肌下注射醋酸泼尼松龙建立模型组模型。干预组在建模后使用补肾活血汤灌胃。HE染色被用于检测股骨头组织学情况。CT扫描股骨头血管情况。Western Blot检测股骨头组织中Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平。结果:建模后骨小梁稀疏变细,并出现明显的断裂和缺损,骨细胞数目少;干预组骨小梁缺损显著轻于模型组。模型组骨小梁面积显著降低而空骨陷窝率显著增加(P0.01),干预组的骨小梁面积显著高于模型组而空骨陷窝率显著低于模型组(P0.01)。Sham组大鼠股骨头血管呈现网状,分布较为均匀,结构清晰;模型组大鼠股骨头内血管明显减少,微结构不清晰;干预组股骨头内血管呈现网状,部分呈网状。模型组血管体积分数和血管厚度显著低于sham组(P0.01),干预组血管体积分数和血管厚度显著高于模型组(P0.01)。模型组的Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平显著低于Sham组(P0.01),干预组的Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平显著高于模型组(P0.01)。结论:补肾活血汤具有上调Wntβ-catenin信号通路以及VEGF表达的作用,进而促进骨骼组织血管的生成,治疗模型组。     

木棉花提取物通过调控miR-30b-3p/PDCD5的表达对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其机制研究

目的:研究木棉花提取物对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及潜在的作用机制。方法:用浓度分别为15、30、60 mg/L的木棉花提取物处理骨关节炎软骨细胞作为木棉花提取物组,以无木棉花提取物处理的细胞作为对照组;将miR-NC、miR-30b-3p、anti-miR-NC、anti-miR-30b-3p、si-NC、si-PDCD5质粒转染至骨关节炎软骨细胞中,分别记为miR-NC组、miR-30b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-30b-3p组、si-NC组、si-PDCD5组;将anti-miR-NC、anti-miR-30b-3p质粒转染至骨关节炎软骨细胞后再用60 mg/L的木棉花提取物处理48 h,记为木棉花提取物+anti-miR-NC组和木棉花提取物+anti-miR-30b-3p组;转染均采用脂质体法。qRT-PCR检测骨关节炎软骨细胞中miR-30b-3p、PDCD5 mRNA表达;Western blot检测Bcl-2、Bax、PDCD5蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-6、IL-1β含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测荧光活性。结果:与对照组比较,随着木棉花提取物浓度的升高,培养上清中IL-6、IL-1β含量及骨关节炎软骨细胞的凋亡率逐渐降低;miR-30b-3p、Bcl-2表达水平逐渐升高,PDCD5、Bax表达水平逐渐降低(P0.05)。miR-30b-3p过表达和抑制PDCD5表达可显著降低培养上清中IL-6、IL-1β含量,降低骨关节炎软骨细胞的凋亡率(P0.05)。miR-30b-3p靶向调控PDCD5的表达,抑制miR-30b-3p表达逆转了木棉花提取物对骨关节炎软骨细胞的凋亡抑制作用。结论:木棉花提取物可抑制骨关节炎软骨细胞IL-6、IL-1β的分泌及其凋亡,其机制可能与调控miR-30b-3p/PDCD5的表达有关。     

紫草素对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响

目的探讨紫草素调控HNF1A-AS1/miR-20b-5p轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响。方法将子宫内膜癌细胞HEC-1B分为对照组、紫草素低、中、高剂量组、si-NC组、si-HNF1A-AS1组、miR-NC组、miR-20b-5p组、pcDNA-NC+紫草素组、pcDNA-HNF1A-AS1+紫草素组、pcDNA-HNF1A-AS1+miR-NC+紫草素组、pcDNA-HNF1A-AS1+miR-20b-5p+紫草素组。CCK-8检测细胞存活率和顺铂对HEC-1B细胞的半抑制浓度值(IC_(50));流式细胞术检测凋亡;RT-PCR检测HNF1A-AS1和miR-20b-5p的表达;Western blot检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、MRP1表达。双荧光素酶报告基因实验和RT-PCR验证HNF1A-AS1对miR-20b-5p的靶向调控作用。结果低、中、高剂量紫草素处理后HEC-1B细胞存活率降低,细胞凋亡率升高(P0.05,P0.05),HNF1A-AS1、CyclinD1、MRP1表达降低,miR-20b-5p和Cleaved-caspase-3表达升高,IC_(50)值降低(P0.01)。干扰HNF1A-AS1表达或过表达miR-20b-5p后,HEC-1B细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,CyclinD1、MRP1蛋白表达降低,Cleaved-caspase-3表达升高,IC_(50)值降低(P0.01)。HNF1A-AS1靶向负调控miR-20b-5p表达。过表达HNF1A-AS1可以逆转紫草素对子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响(P0.01)。过表达miR-20b-5p可以逆转pcDNA-HNF1A-AS1对紫草素处理的子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响(P0.01)。结论紫草素可抑制子宫内膜癌细胞存活,诱导细胞凋亡,提高其顺铂敏感性,其机制与调控HNF1A-AS1/miR-20b-5p轴有关。     

左归丸防治去卵巢骨质疏松模型大鼠骨流失的实验研究

目的基于中医"肾主骨,生髓"理论,探讨滋阴补肾代表方左归丸对去卵巢骨质疏松模型大鼠的防治作用。方法40只雌性未生育SD大鼠,随机分为正常组(Control)、假手术组(Sham)、去卵巢模型组(OVX)、阳性对照补佳乐组(BJL)、左归丸组(ZGW),每组8只。造模7 d后给药12周,取材检测。双能X线检测大鼠股骨近端、远端1/3骨密度,ELISA法检测大鼠血清β-CTX含量,比色法检验大鼠血清ALP,Ca,Pi含量,HE染色观察大鼠骨组织结构变化。RTPCR和Western blotting法检测大鼠股骨RUNX2,Col-Ⅰ,BGP基因和蛋白表达。结果与正常组相比,模型组大鼠骨密度,血清钙含量,RUNX2、Col-Ⅰ、BGP基因和蛋白表达明显下降,(P0.05);血清β-CTX、ALP、Pi含量上升(P0.05);骨小梁间距增大,数量减少,结构紊乱。与模型组相比,左归丸组和补佳乐组能明显提高骨密度,血清钙含量,RUNX2,Col-Ⅰ,BGP基因和蛋白表达,(P0.05);降低血清β-CTX,ALP,Pi含量,(P0.05);同时防止骨小梁退化和成骨细胞数量减少。结论左归丸能有效预防卵巢切除后骨质疏松症模型大鼠的骨流失,促进骨形成。     

补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠BMP2/Smad/RUNX2信号通路及钙沉积的影响

目的:观察补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠BMP2/Smad/RUNX2信号通路及钙沉积的影响。方法:6月龄SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、补肾组和补肾化痰方组,每组10只。补肾组予补肾方灌胃,0.51 g/mL;补肾化痰组予补肾化痰方灌胃,0.94 g/mL,模型组和假手术组予等体积生理盐水灌胃,1 mL/100 g,持续灌胃8周。采用micro CT检测大鼠的骨密度(BMD),采用ELISA检测血清骨形态发生蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、胎球蛋白(Fetuin-A)、基质gla蛋白(MGP)含量,Western blot法检测骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A、MGP蛋白的表达。结果:模型组、补肾组、补肾化痰方组大鼠骨密度、血清及骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A的含量、血清MGP水平均低于假手术组,骨组织MGP水平高于假手术组,差异均有统计学意义(P0.05);补肾组和补肾化痰方组大鼠骨密度、血清及骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A含量、血清MGP水平均高于模型组,骨组织MGP水平低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。补肾化痰方组血清BMP2、RUNX2、Fetuin-A、MGP高于补肾组(P0.05);补肾组骨组织BMP2、RUNX2高于补肾化痰方组(P0.05);补肾组和补肾化痰方组骨密度、骨组织Fetuin-A、MGP比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:补肾化痰方能够提高骨质疏松大鼠的骨密度及血清Fetuin-A的含量,影响BMP2/Smad/RUNX2信号通路。     

鹿蓉补肾生骨汤治疗股骨头坏死疗效观察

目的：探讨鹿蓉补肾生骨汤治疗股骨头缺血性坏死的临床疗效.方法将我院2004年6月-2009年6月收治的股骨头坏死患者238例,进行随机为分治疗组与对照组,治疗组119例给予鹿蓉补肾生骨汤口服；对照组119例给予健骨生丸（国药准字Z10970030北京匡达制药厂）,4.5g/次,3次/日口服.均为3个月为一疗程.结果治疗组治愈率为54.6％,显效率为26.9％,有效率为10.9％,总有效率达92.4％.对照组治愈率为21.0％,显效率为36.1％,有效率为21.2％,总有效率为78.3％.治疗组疗效明显优于对照组（P＜0.01）.结论鹿蓉补肾生骨汤治疗股骨头缺血性坏死效果显著,治愈率高,不良反应少,无毒副作用,值得进一步推广.     

葱白提取物对大鼠心梗后室性心律失常疗效评价及miRs表达的影响

目的:探讨葱白提取物对心肌梗死大鼠室性心律失常的疗效及对miRNA表达的影响。方法:将60只大鼠随机分为4组,每组15只,分为假手术组、空白模型组、葱白提取物组和胺碘酮片组。后3组结扎前降支建立心梗模型,随机选取10对葱白提取物组和非葱白提取物治疗,治疗4周后评价疗效,随后处死大鼠,分离心肌细胞,用miRNA芯片筛选出上调最明显的miR-21及下调最明显的miR-15b-5p样本作为后续验证对象,QRT-PCR进一步验证上述可逆性差异性表达的miRNAs。结果:与空白模型比较,葱白提取物组和胺碘酮片组均可延长室性心律失常发生时间,减少持续时间和发生率(P 0. 01),miRNAs芯片筛选出葱白提取物处理组大鼠心肌细胞中可逆性恢复的67个具有显著表达差异的miRNAs(FC 1. 5,P 0. 05)。在qRT-PCR对15组样本的验证中,与未使用葱白提取物的对照组相比,葱白提取物组大鼠心肌细胞中miR-15b-5p表达均显著减少(p 0. 05),miR-21表达均显著增加(p 0. 05)。结论:葱白提取物可通过影响大鼠模型心梗后室性心律失常的发生类型、发生及持续时间、发生率和ST段抬高程度进而改善心梗后室性心律失常的发生发展,作用机制主要与调节miR-15b-5p及miR-21的表达有关。     

补肾方对激素性股骨头坏死大鼠的骨修复作用

目的:观察补肾方对激素性股骨头坏死(SONFH)大鼠股骨头骨修复的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,补肾方高、中、低剂量组和阳性药健骨生丸组。除正常组外其余各组臀肌注射21 mg·kg-1甲泼尼龙琥珀酸钠,1 d 1次,连续3 d,建立单纯性糖皮质激素股骨头坏死模型。各给药组从第4天开始,分别给予5.3,10.6,21.2 g·kg-1的补肾方和1.68 g·kg-1健骨生丸,给药6周后取血和股骨头,HE染色观察股骨头组织的病理学改变,Micro-CT扫描观察股骨头骨形态变化并进行骨计量学分析,ELISA检测血清骨形成标志物骨钙素(BGP)和降钙素(CT)含量。结果:模型组大鼠股骨头表现出大量空骨陷窝和脂肪细胞、骨小梁变窄或断裂、骨髓腔内血细胞减少、可见大量坏死区等组织病理学改变;还可见股骨头塌陷、骨质减少、骨小梁稀疏等影像学改变,骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁模式因子、骨小梁数量、骨密度等骨计量学参数降低而骨小梁分离度升高,血清BGP和CT含量也显著降低;与模型组比较,补肾方中、高剂量组能明显改善大鼠股骨头组织病理学改变程度,补肾方高、中、低剂量组均显著抑制骨坏死程度,中、高剂量组还显著升高血清BGP和CT的含量(P0.05,P0.01);健骨生丸组的作用与补肾方中剂量组的作用相当。结论:补肾方组能明显改善SONFH大鼠股骨头组织病理学和影像学改变,增加血清中BGP及CT的含量,这一促进骨修复的作用可能是其防治激素引起的股骨头骨坏死的机制之一。     

针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织miR-29a-3p、miR-29b-3p表达的影响

目的 观察针刺干预72 h后脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠缺血侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p的表达,探讨针刺促CIRI修复的机制。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组10只,造模组大鼠使用线栓法制备CIRI模型,假手术组只剥离血管不插入线栓;假手术组和模型组只捆绑不针刺,针刺组捆绑后针刺“大椎”“百会”“水沟”穴,一天治疗两次,共治疗7次。采用Garcia评分法对神经功能进行评定,TTC染色法检测脑梗死面积比,qRT-PCR法检测缺血侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p的表达。结果 干预前与假手术组比较,造模组Garcia评分显著降低(P<0.01),脑梗死面积比显著增加(P<0.01),患侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p表达量降低(P<0.05,P<0.01);干预72h后与模型组比较,针刺组Garcia评分明显上升(P<0.01),脑梗死面积比显著下降(P<0.01),患侧海马组织miR-29a-3p、miR-29b-3p的表达量明显增加(P<0.01)。结论 针刺...     

肾元颗粒影响糖尿病小鼠肾脏中miR-199b-5p与钙磷代谢的研究

目的:探讨肾元颗粒对糖尿病小鼠肾脏中miR-199b-5p/Klotho/FGFR-1/EGR-1通路及钙磷代谢的影响。方法:链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导小鼠糖尿病模型,模型成功后随机分为肾元颗粒组[4.55 g/(kg·d)]10只和模型对照组10只,另设空白对照组10只。给予相应药物灌胃8周,给药前后检测血糖以及血清中肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、钙(Ca)和磷(P),采用RT-q PCR检测肾脏组织中miR-199b-5p、Klotho、FGFR-1和EGR-1核糖核酸表达情况,采用western-blot(WB)法检测Klotho、FGFR-1和EGR-1蛋白表达情况,检测小鼠右下肢平均骨密度。结果:用药后与空白对照组相比,模型对照组P、SCr升高(P0.05),Ca、骨密度明显降低(P0.05),同时miR-199b-5p和EGR-1表达上调(P0.05),Klotho和FGFR-1表达下调(P0.05)。用药后与模型对照组比较,肾元颗粒组P、SCr降低(P0.05),Ca升高(P0.05),miR-199b-5p、EGR-1表达下调(P0.05),Klotho、FGFR-1表达上调(P0.05)。结论:肾元颗粒缓解糖尿病肾损害和改善钙磷代谢异常的作用机制,或与miR-199b-5p/Klotho/FGFR-1/EGR-1通路有关。     

壮药生骨汤治疗激素性股骨头坏死的实验研究

目的:观察壮药生骨汤治疗激素性股骨头坏死的疗效。方法:36只新西兰白兔随机分成空白组(n=10)和造模组(n=26)。造模组肌注醋酸泼尼松龙注射液6周,在第7周分别随机处死两组动物各2只观察造模结果,将造模组动物随机分为三组:壮药生骨汤组(A组)、仙灵骨葆组(B组)及阳性对照组(C组),空白组剩余的动物为空白对照组(D组)。在第9周,A组给予壮药生骨汤煎液灌胃,B组给予仙灵骨葆混悬液灌胃,C组和D组分别给予生理盐水灌胃。治疗4周后,采血用酶联免疫法(ELISA)测定血清中骨钙素(BGP)和降钙素(CT)的水平,同时取实验动物股骨头进行病理观察。结果:治疗4周后,壮药生骨汤组和仙灵骨葆组的BGP高于阳性对照组而低于空白组对照组,差异均有统计学意义(P0.05),CT低于阳性对照组(P0.05)且与空白对照组相当(P0.05),空骨陷窝率低于阳性对照组(P0.05),而高于空白对照组(P0.05)。结论:壮药生骨汤可提高在股骨头坏死微环境中成骨细胞的活性并抑制破骨细胞,对兔实验性SONFH有治疗作用,甚至部分逆转SONFH的病理变化。     

益骨汤对去卵巢大鼠骨密度骨钙素及成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾中药益骨汤对去卵巢大鼠成骨功能的影响。方法:取12周龄W istar雌性大鼠40只,随机分为A(模型组)、B(治疗组)、C(阳性对照组)、D(正常对照组)4组,每组10只,前3组行完整双侧卵巢摘除术,D组行假手术,术后常规饲养12周,再分别予以生理盐水、益骨汤水提液、α-D3水溶液及生理盐水灌胃治疗12周,处死大鼠,取血清用放免法测定血清中BGP水平;以双能X线密度仪测定大鼠右股骨上干骺端骨密度;取右胫骨上端做病理切片,通过HE染色对成骨细胞进行观察比较。结果:治疗组血清BGP、骨矿含量、骨密度明显高于模型组,HE染色发现其成骨细胞数量明显增加。结论:益骨汤能促进成骨细胞增殖,提高血清BGP水平,加快骨形成,具有治疗OP的作用。     

袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的差异表达miRNA的实验研究

目的:成骨细胞和骨细胞凋亡学说是激素性股骨头坏死的机制之一,袁氏生脉成骨片已被证实在临床治疗激素性股骨头坏死有一定疗效,但两者具体作用机制有待深入,实验研究袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的差异表达miRNA,预测其靶基因以推测作用机制。方法:取乳鼠(大鼠)的成骨细胞进行培养、传代,将第三代成骨细胞分为空白组,激素组,中药组;分别提取总RNA并进行质检;采用RNA标记与芯片杂交,采集数据及标准化,找出三组间的差异表达miRNA并对其表达谱进行分析。利用miranda、microcosm、mirdb 3个靶点预测软件对最明显的miR-672-5p进行靶基因预测。结果:和空白组相比,激素组中倍数>2.0倍的miRNA共有6个(4个miRNA表达上调,2个miRNA表达下调);和空白组相比,中药组中倍数>2.0倍miRNA共有63个(19个miRNA表达上调,44个miRNA表达下调);和激素组相比,中药组中倍数>2.0倍的miRNA共有56个(11个miRNA表达上调,45个miRNA表达下调)。在激素组与空白组对照中上调,在中药组与激素组对照中相对应下降的倍数>2.0倍的miRNA共4个(miR-672-5p、miR-3559-3p、miR-98-3p、miR-92a-1-5p),并预测出Angptl4、Ccdc51、RGD1306991、Ssbp3作为miR-672-5p的靶基因。结论:袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的miRNA表达发生了明显变化,以miR-672-5p最为显著。这表明了它有可能参与了成骨细胞的凋亡,为袁氏生脉成骨片治疗激素性股骨头坏死提供理论依据。     

针刺“百会”透“曲鬓”对大鼠脑出血后脑水肿及炎症反应影响的研究

目的：探讨针刺“百会”透“曲鬓”治疗大鼠脑出血后脑水肿程度与炎症反应的影响以及miR-34a-5p在针刺治疗脑出血中的作用。方法：采用自体血注入尾壳核的方法制备脑出血大鼠模型，将60只造模成功的大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(ICH)、模型+针刺治疗组(ICH+acupuncture)、模型+针刺治疗+agomir阴性对照组(ICH+acupuncture+agomir-NC)、模型+针刺治疗+miR-34a-5p agomir组(ICH+acupuncture+miR-34a-5p agomir),每组12只，每组随机分D1、D7两个时间点。建模12 h后针刺治疗，于相应时间点分别处死大鼠收集脑组织及血液，测算大鼠脑出血后脑组织的含水量、检测脑组织及血清中IFN-γ、IL-4的浓度水平变化。结果：脑含水量结果显示，与ICH组相比，ICH+acupuncture组各时间点脑干湿比均显著降低(P<0.01);与ICH+acupuncture组相比，ICH+acupuncture+miR-34a-5p agomir组脑干湿比显著升高(P<0.01);与ICH+acup...     

黄芪-丹参药对通过下调miR-466b-5p改善高血压肾损害

目的：探讨黄芪-丹参药对通过调节微小核糖核酸-466b-5P（miR-466b-5p）改善高血压肾损害的机制。方法：基于微RNA（miRNA）测序寻找自发性高血压大鼠与Wistar-京都鼠（WKY）的差异基因,构建腺相关病毒转染小鼠,24只C57BL/6小鼠,随机选取12只尾静脉注射小鼠腺相关病毒miR-466b-5P（rAAV-miR-466b-5P）构建miR-466b-5p过表达组,余12只作为空白对照组注射腺相关病毒-9（AAV-9）空载体,转染6周后再各随机分为2组,每组6只,A组（黄芪-丹参+miR-466b-5P过表达组）和C组（黄芪-丹参+空白对照组）以黄芪配方颗粒：2.036 g/kg+丹参配方颗粒：0.255 g/kg灌胃;B组（miR-466b-5P过表达组）和D组（空白对照组）以相同体积生理盐水灌胃;灌胃28 d后观察各组小鼠尿β2-微球蛋白（β2-MG）、N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）、微量白蛋白（mALB）,血清胱抑素C（Cys-C）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、C反应蛋白（CRP）水平和肾脏病理,进行实时荧光定量(RT-qPCR)与蛋白质印迹法(Western Blotting)寻找其靶基因。结果：1）基于前期miRNA测序选定了miR-466b-5p;2）与D组比较,B组小鼠尿β2-MG、NAG、mALB、血清Cys-C、AngⅡ、CRP均显著升高（P<0.01）;与B组比较,A组小鼠血清Cys-C、CRP明显升高（P<0.05）,尿β2-MG、NAG、mALB、血清AngⅡ无明显改变（P>0.05）;3）与D组比较,B组小鼠出现明显肾小球硬化、小管纤维化,A组较B组有明显改善;4）与D组比较,B组小鼠透明质酸酶2（HAS2）明显下调,而经黄芪-丹参干预后有所回调。结论：miR-466b-5p的过表达会导致高血压肾损害的发生,黄芪-丹参药对通过靶向HAS2下调miR-466b-5p改善高血压肾损害。     

补肾活血接骨汤对骨质疏松骨折愈合过程中凝血相关因子及VEGF水平的影响

目的:分析补肾活血接骨汤联合西药治疗骨质疏松骨折愈合过程中凝血相关因子及血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法:选择我院收治的骨质疏松性骨折患者83例为研究对象,按照治疗方式不同随机分为对照组(40例)与观察组(43例),其中对照组予以常规西药治疗,观察组在对照组用药基础上加用补肾活血接骨汤,比较两组患者骨折愈合过程中的凝血相关因子及VEGF水平变化。结果:治疗后,两组凝血相关因子PLT(血小板计数)、FIB(纤维蛋白原)及D-二聚体含量均显著上升,且观察组上升幅度显著低于对照组(P0.05),凝血酶类先关指标,APTT(活化部分凝血活酶时间)、PT(凝血酶原时间)及TT(凝血酶时间)均显著高上升,且观察组上升幅度显著高于对照组(P0.05);比较VEGF水平,治疗后两组VEGF水平较治疗前显著升高,且观察组上升显著高于对照组(P0.05)。结论:补肾活血接骨汤联合西药在骨质疏松骨折愈合过程中降低骨折患者血液高凝状态,改善气血淤积症状,促进骨折愈合,可临床推广。