miR-15-5p靶向调控SMAD5表达抑制子宫内膜腺癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨miR-15-5p抑制人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-A)上皮间质转化(EMT)的机制。方法构建SMAD53'-UTR-荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶报告基因检测,观察miR-15-5p对SMAD53'-UTR荧光素酶活性的影响,鉴定SMAD5是否为miR-15-5p的靶基因。将miR-15-5p模拟物(agomir)与miR-15-5p抑制物(antagomir)及其对应的对照组分别转染至HEC-1-A细胞中,并进行EMT诱导培养,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot检测各组细胞SMAD5在mRNA及蛋白水平的相对表达量;了解miR-15-5p对EMT标志物的表达影响。结果双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-15-5p可以结合在SMAD5的3'-UTR区域,而不能结合在SMAD3的3'-UTR区域,表明miR-15-5p的靶基因应为SMAD5。正常HEC-1-A细胞转染miR-15-5p的模拟物或抑制物后,SMAD5表达显著下调或上调,也表明miR-15-5p的靶基因是SMAD5。结论SMAD5是miR-15-5p的靶基因,miR-15-5p可通过靶向调控SMAD5的表达抑制人子宫内膜腺癌HEC-1-A细胞的EMT。     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

miR-218对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨上调miR-218基因表达对子宫内膜癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法以Lipofectamine TM2000为载体,将miR-218模拟物(mimics)及阴性对照(Scramble)转染人子宫内膜癌HEC-1B细胞,未转染的细胞作为空白组,转染48 h,qRT-PCR检测miR-218 mRNA表达; MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率; Western blotting检测HMGB1、β-catenin、cyclin D1、Bax蛋白表达。以转染miR-218 mimics后的HMGB1表达及双荧光素酶报告实验验证HMGB1与miR-218的靶向关系。结果转染miR-218 mimics的HEC-1B细胞miR-218 mRNA表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics组与空白组比较细胞活力降低,凋亡率升高,HMGB1、β-catenin和cyclin D1表达降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics可明显抑制野生型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性,而对突变型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性无影响。结论 miR-218可能通过靶向HMGB1抑制Wnt/β-catenin信号降低子宫内膜癌细胞活力,诱导细胞凋亡。     

miR-335-3p通过靶向FOXD1发挥对骨肉瘤细胞肿瘤生物学行为的抑制作用

目的 探讨miR-335-3p通过靶向调控FOXD1基因抑制骨肉瘤(osteosarcoma, OS)细胞的增殖和迁移的作用及机制。方法 使用RT-PCR法评估miR-335-3p在OS组织和临近组织，正常人成骨细胞系(hFOB1.19f)和OS细胞系(SAOS2、U2OS、MG63)中的表达；使用细胞增殖实验测定研究miR-335-3p过表达对U2OS、MG63的活力的影响；EDU染色和DAPI染色评估miR-335-3p过表达对U2OS、MG63迁移和侵袭的影响；荧光素酶报告基因测定法确定miR-335-3p靶向调控FOXD1编码基因发挥作用；蛋白质免疫印迹法检测OS细胞中FOXD1蛋白表达；pcDNA-FOXD1转染OS细胞，并评估细胞增殖、迁移和侵袭的水平。结果 miR-335-3p在OS癌组织和细胞中低表达；利用miR-335-33p mimic转染细胞后，可在体外抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭；miR-335-3p通过直接结合FOXD1 mRNA的3′-UTR发挥抑制作用，从而负面调节FOXD1的表达；miR-335-3p通过靶向调节FOXD1的表达，进而抑制OS癌细胞的增殖...     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-142-3p抑制甲状腺癌细胞增殖的研究

目的 研究甲状腺癌细胞株中miR-142-3p的表达水平,探讨miR-142-3p不同表达水平对甲状腺癌细胞增殖能力的影响.方法 采用RT-PCR检测人甲状腺癌细胞K1、TPC-1、BCPAP和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-142-3p的表达水平.观察K1细胞分别转染miR-142-3p mimics,...     

MicroRNA miR-34a-5p通过靶向MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的研究

目的 探究MicroRNA miR-34a-5p通过靶向MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的机制。方法 本研究内容为MicroRNA miR-34a-5p能通过MDM4抑制ox-ldl诱导的巨噬细胞凋亡和氧化应激,将其分为空白对照组(THP-1人单核细胞组)、AS对照组(ox-ldl),miR-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+oxldl,采取RT-qPCR检测microRNA miR-34a-5p和mRNA MDM4表达,采取TUNEL染色检测巨噬细胞的凋亡,采取western blot检测MDM4、ROS、MDA和SOD蛋白,采取红油O染色法评价巨噬细胞内脂质沉积,评价mi R-34a-5p是否靶向调控MDM4、MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤诱导的凋亡、ox-ldl诱导巨噬细胞内脂质沉积变化情况。结果 mi R-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+ox-ldl的microRNA miR-34a-5p表达、mRNA MDM4表达高于空白对照组、AS对照组(P<0.05);miR-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+ox-ldl下miR-34a-5p表达、ROS水平、MDM4水平、MDA水平、SOD水平高于空白对照组、AS对照组(P<0.05);油红O染色法检测中,5ug/mL LDL下细胞内红染脂滴轻度增加,200mg/mL LPS细胞内红染颗粒显著增多,加入10ng/mL RPMI-1640能明显减少脂质聚集。结论 MicroRNA miR-34a-5p能通过MDM4抑制ox-ldl诱导的巨噬细胞凋亡和氧化应激,为调控AS的发生发展提供基础研究证据,为AS诱发的心脑血管疾病诊断和治疗方面提供依据。     

LINC00943靶向调控miR-125a-5p对幽门螺杆菌诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响

目的 探讨LINC00943对幽门螺杆菌(Hp)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响及其分子机制。方法 将GES-1细胞分为Control组、Hp组、Hp+si-NC组、Hp+si-LINC00943组、Hp+miR-NC组、Hp+miR-125a-5p组、Hp+si-LINC00943+anti-miR-NC组和Hp+si-LINC00943+anti-miR-125a-5p组,实时荧光定量PCR检测LINC00943和miR-125a-5p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫蛋白印迹检测凋亡蛋白表达;酶联免疫吸附法检测白细胞介素-8(IL-8)和IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)水平;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00943和miR-125a-5p靶向关系。结果 与Control组比较,Hp组LINC00943表达、凋亡率、Bax蛋白、IL-8、IL-1β、LDH升高,miR-125a-5p表达、Bcl-2蛋白降低(P<0.05);敲减LINC00943或过表达miR-125a-5p可减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤;LINC00943靶向调控miR-125a-5p...     

hsa-circ-0015382通过miR-330-3p/SP4轴调控子痫前期的发生

目的 探讨环状核糖核酸中hsa-circ-0015382通过调控miR-330-3p/SP4轴参与妊娠期孕妇子痫前期的发生。 方法 取子痫前期孕妇及正常孕妇顺产胎盘组织和产前静脉血提取总RNA。采用qRT-PCR检测hsa-circ-0015382和miR-330-3p的表达。采用Western Blotting检测特异性蛋白4（Specificity protein 4,SP4）的表达。原代培养子痫前期产妇胎盘滋养层细胞（PPC）,采用双荧光素酶报告基因检测SP4是miR-330-3p的直接靶基因。采用MTT法检测hsa-circ-0015382和miR-330-3p对胎盘滋养层细胞增殖能力的影响,用Transwell法和细胞划痕实验检测hsa-circ-0015382和miR-330-3p对PPC细胞侵袭迁移能力的影响。 结果 hsa-circ-0015382在子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中异常高表达,SP4是miR-330-3p在PPC细胞中的直接靶基因。在PPC细胞中抑制hsa-circ-0015382表达后,miR-330-3p的表达升高,hsa-circ-0015382和SP4的表达显著降低,同时细胞增殖能力和侵袭迁移能力增强,差异具有统计学意义（P＜0.05）。在PPC细胞中转染miR-330-3p mimics后,细胞增殖能力和侵袭迁移能力增强,差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 hsa-circ-0015382通过调控miR-330-3p/SP4轴参与子痫前期的发生。     

长链非编码RNA核富含丰富的转录本1对癫痫模型海马神经元凋亡的影响和作用机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)对癫痫细胞模型海马神经元凋亡的影响及作用机制,以期为NEAT1成为癫痫治疗的新靶点提供依据。方法 于2019年8月—2020年10月期间,体外培养大鼠海马神经元细胞,无镁诱导制备癫痫海马神经元模型,实验分为:对照组(正常细胞外液)、模型组(无镁细胞外液)、转染对照组(转染非特异性siRNA+无镁细胞外液)和转染组(转染NEAT1特异性siRNA+无镁细胞外液)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测NEAT1和miR-29b-3p的表达变化,双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1是否靶向调控miR-29b-3p,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测海马神经元细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果 与对照组相比,模型组海马神经元凋亡率及NEAT1、Bax、TLR4和NF-κB的表达水平升高(F＝50.980、73.668、65.635、13.203、10.292,P＜0.05),IL-1、IL-6和TNF-α的含量增多(F＝33.107、33.857、51.129,P＜0.05),miR-29b-3p和Bcl-2的表达水平降低(F＝145.023、67.655,P＜0.05);而抑制NEAT1的表达能够降低神经元凋亡,抑制Bax、TLR4和NF-κB的表达,促进miR-29b-3p和Bcl-2的表达,减少IL-1、IL-6和TNF-α的分泌。双荧光素酶报告基因实验证实NEAT1和miR-29b-3p的靶向关系。结论 lncRNA NEAT1靶向下调miR-29b-3p的表达阻断TLR4/NF-κB信号通路来抑制癫痫模型海马神经元的凋亡。     

miR-212-3p在乙肝病毒感染诱导的巨噬细胞激活中的作用机制

目的 探究miR-212-3p在乙肝病毒感染诱导的巨噬细胞激活中的作用及其机制。方法 CCK-8法检测不同浓度乙型肝炎E抗原(HBeAg)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力,分别转染miR-212-3p mimic和miR-212-3p inhibitor,检测miR-212-3p mRNA相对表达量、细胞活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平及mRNA相对表达量,采用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂预处理细胞后再用HBeAg刺激,检测PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路蛋白表达。结果 RAW264.7细胞活力随HBeAg浓度增加而上升(P<0.05),HBeAg浓度为2 000 ng/ml时细胞活力最高,miR-212-3p mRNA相对表达量上调,24 h时达到峰值,随后降低(P<0.05); HBeAg刺激后,转染miR-212-3p mimic的细胞中miR-212-3p的mRNA相对表达量上调(P<0.05),且IL-6、TNF-α水平和mRNA相对表达量上升(P<0.05);渥曼青霉素预处理RAW264.7细胞后m...     

MicroRNA-582-5p在HBV感染中的作用及分子机制研究

目的　探究微小RNA-582-5p（microRNA-582-5p, miR-582-5p）在HBV感染中的作用及分子机制。方法　通过miRNA芯片筛选出miR-582-5p作为研究对象。分别通过过表达和抑制内源性miR-582-5p表达的方法,研究其对HBV DNA、HBV RNA、HBeAg、HBsAg等HBV复制和表达相关指标的影响。在分子机制研究中,双荧光素酶报告基因检测miR-582-5p对HBV启动子和增强子的影响,生物信息学预测miR-582-5p的靶基因,分别使用实时定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）和Western blot检测miR-582-5p对靶基因NOTCH1 mRNA和蛋白表达的影响。最后检测HBV相关蛋白表达对miR-582-5p的影响。结果　qRT-PCR结果表明miR-582-5p随着HBV复制水平升高而逐渐降低。miR-582-5p抑制HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBsAg的表达。miR-582-5p能抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性,miR-582-5p能直接靶向HBV促进因子NOTCH1,抑制其mRNA和蛋白表达。HBx蛋白抑制miR-582-5p的表达。结论　miR-582-5p通过抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性或靶向抑制HBV促进因子NOTCH1而抑制HBV复制和表达;同时,HBV的复制与表达抑制miR-582-5p的表达。     

miR-21在黄芪甲苷保护ox-LDL诱导的内皮细胞炎症损伤过程中的作用

目的探讨miR-21在黄芪甲苷保护氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症损伤中的作用及其机制。方法将体外培养的HUVEC分为对照组(未干预)、模型组(以100μmol/L ox-LDL作用24 h)、治疗-低剂量(L)组、治疗-中剂量(M)组和治疗-高剂量(H)组,其中治疗-L、M和H组细胞以100μmol/L ox-LDL作用24 h后,分别加入10、20和40 mg/L的黄芪甲苷作用2 h。MTT法检测细胞的存活率,ELISA法检测细胞上清液中炎症相关因子TNF-α、IL-6和NF-κB的含量,RT-PCR检测细胞内miR-21和TLR4 mRNA的表达,Western blot检测TLR4蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-21和TLR4的靶向关系。转染miR-21模拟物和抑制剂构建miR-21过表达和低表达的HUVEC株,观察miR-21对HUVEC炎症因子分泌和TLR4表达的影响;同时,在给予40 mg/L的黄芪甲苷治疗的基础上,观察转染miR-21抑制剂下调miR-21表达对黄芪甲苷作用下HUVEC炎症因子的影响。结果与对照组相比,模型组、治疗-L组、治疗-M组和治疗-H组细胞存活率和细胞中miR-21表达显著降低,而细胞上清液中TNF-α、IL-6和NF-κB的含量以及细胞中TLR4 mRNA、蛋白的表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,治疗-L组、治疗-M组和治疗-H组细胞存活率和miR-21表达逐渐升高,而TNF-α、IL-6和NF-κB的含量以及TLR4 mRNA、蛋白的表达逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实TLR4是miR-21的潜在靶基因。miR-21过表达降低HUVEC内炎症因子的分泌和TLR4的表达,反之,则促进HUVEC内炎症因子的分泌和TLR4的表达;下调miR-21表达后可逆转黄芪甲苷对HUVEC炎症因子的调控。结论黄芪甲苷可减轻ox-LDL诱导的HUVEC炎症损伤,其作用机制可能与上调miR-21靶向抑制TLR4表达有关。     

miR-181a对耳蜗毛细胞c-fos表达调控的研究

目的 探讨在耳蜗毛细胞氧化损伤中表达异常的miR-181a对原癌基因c-fos的生物学调控作用.方法 采用叔丁基过氧化氢(t-BHP)染毒,设50、100、200μmol/L 3个浓度组和未染毒对照组对HEI-CO1细胞染毒12h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用荧光定量PCR(qPCR)检测miR-181a/-181d表达;选择表达异常的miR-181a为研究对象,检索生物信息学网站,对c-fos 3'端非翻译区域(3'-UTR)上miR-181a可能的作用靶序列进行预测分析;用脂质体转染入miR-181a的mimics,qPCR检测转染效率;qPCR观察c-fos mRNA水平表达量的改变;免疫印迹(Western blotting)法观察毛细胞中c-fos蛋白表达量的改变;构建野生型的融合c-fos-3' UTR的重组pGL3质粒(pGL3-c-fos-3' UTR-WT),利用双荧光素酶报告基因检测系统检测在高表达miR-181a后荧光素酶活力的改变情况.结果 qPCR结果显示,miR-181a在100、200 μmol/L染毒浓度组表达下调,低表达倍数分别为0.744和0.766,差异均有统计学意义(P＜0.01);而miR-181d在50 μmol/L浓度组表达升高,高表达倍数为1.29,差异亦有统计学意义(P＜0.01),在100、200 μmol/L 2个染毒浓度组中的表达变化的差异无统计学意义(P＞0.05);通过预测显示,在人类和小鼠中,c-fos均受miR-181a的调控,在种子区域完全互补,靶序列在物种之间也十分保守;脂质体转染入miR-181a mimics 24h后,qPCR结果显示,在miR-181a mimics转染组中miR-181a升高892.979倍;与对照组相比,在miR-181a mimics转染组的耳蜗毛细胞中c-fos mRNA的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blotting观察结果显示,与对照组相比,c-fos蛋白在miR-181a mimics转染组中表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01);成功构建pGL3-c-fos-3' UTR-WT的重组质粒,双荧光素报告基因检测系统结果显示,在高表达miR-181a时,野生型pGL3-c-fos-3' UTR-WT报告载体的荧光素酶活力并未受到抑制,反而增强.结论 miR-181a对c-fos mRNA和蛋白的表达无直接抑制作用.c-fos可能不是miR-181a的靶基因,生物信息学预测结果可能是假阳性的.     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中 LncRNA PTPRG-AS1 和 miR-5590-3p 表达。分别转染 si-LncRNA PTPRG-AS1、miR-5590-3p mimics、共转染si-LncRNA PTPRG-AS1与anti-miR-5590-3p至乳腺癌MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p的调控关系。结果与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),miR-5590-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲减LncRNA PTPRG-AS1或过表达miR-5590-3p后,MCF-7细胞增殖活性、迁移数、侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA PTPRG-AS1靶向负调控miR-5590-3p。敲减miR-5590-3p逆转了敲减LncRNA PTPRG-AS1对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 LncRNA PTPRG-AS1可能靶向下调miR-5590-3p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭影响的机制研究

目的探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础。方法不同浓度的异丙酚[(0μM (μmol/L)、0.125μM、0.25μM、0.5μM和1.0μM]作用SKOV3细胞48 h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测miR-212-5p、TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达变化。同时,构建抑制miR-212-5p表达的SKOV3细胞株,进行上述实验检测相应指标。双荧光素酶实验和Western blot验证miR-212-5p和TRPV6的靶向关系。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达,促进miR-212-5p的表达。抑制miR-212-5p表达可减轻异丙酚处理对SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。TRPV6是miR-212-5p的靶基因,miR-212-5p可负性调控TRPV6的表达。沉默TRPV6可部分逆转抑制miR-212-5p表达对异丙酚处理的卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭的影响。结论异丙酚通过上调miR-212-5p表达,抑制TRPV6表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

丙泊酚调控miR-133a/SOX4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖凋亡的影响

目的探讨丙泊酚对结直肠癌HCT116细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法以1、5和10μg/mL丙泊酚处理HCT116细胞后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞检测细胞凋亡,real-time PCR检测细胞中miR-133a的表达,Western blot检测细胞中SOX4蛋白的表达。采用双荧光素酶基因报告实验检测miR-133a与SOX4的靶向关系。将HCT116细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+anti-NC组和丙泊酚+anti-miR-133a组,采用脂质体法将miR-133a inhibitor转染至HCT116细胞后,观察miR-133a低表达对10μg/mL丙泊酚作用下HCT116细胞增殖、凋亡和SOX4蛋白表达的影响。结果丙泊酚呈浓度-时间依赖性抑制HCT116细胞增殖,丙泊酚显著促进HCT116细胞凋亡和miR-133a表达并抑制SOX4蛋白的表达,且表现为浓度依赖性。双荧光素酶基因报告实验证实SOX4是miR-133a的靶基因。与对照组相比,丙泊酚组、丙泊酚+anti-miR-NC组和丙泊酚+anti-miR-133a组细胞中miR-133a表达显著升高,而SOX4蛋白的表达水平显著降低,细胞增殖能力显著受到抑制,而细胞凋亡显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与丙泊酚组相比,丙泊酚+anti-miR-133a组中miR-133a表达水平显著降低,而SOX4蛋白的表达水平显著升高,细胞的增殖能力显著增强,而细胞凋亡能力显著减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);而丙泊酚+anti-miR-NC组细胞中miR-133a和SOX4蛋白的表达以及细胞的增殖和凋亡能力均无显著改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚可通过调控miR-133a/SOX4表达抑制HCT116细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子的作用

目的 通过检测microRNA-146a-5p(miR-146a-5p)、microRNA-9-3p(miR-9-3p)对HepG2细胞白介素受体相关激酶-1(interleukin receptor-associated kinase-1,IRAK-1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding gassette transporter A1,ABCA1)蛋白水平表达的影响，探讨miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子作用。方法 以HepG2细胞为试验对象，分别进行miR-146a-5pmimics转染及miR-9-3pmimics转染，采用Westernblot检测miR-146a-5p对HepG2细胞IRAK-1蛋白表达的影响及miR-9-3p对HepG2细胞ABCA1蛋白水平表达的影响。结果 miR-146a-5p转染组IRAK-1蛋白水平显著低于对照组；miR-9-3p转染组ABCA1的蛋白水平显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P=0.001）。结论 miR-146a-5p能够显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白表达，miR-9-3p能...     

miR-96-5p靶向IRS1对麦芽酚铝致PC12细胞凋亡的影响

目的探讨miR-96-5p在麦芽酚铝致PC12细胞凋亡中的影响及其作用机制。方法于2021年1月, 取对数生长期的PC12细胞, 分为空白对照组和低、中、高剂量组, 分别采用0、100、200、400 μmol/L的麦芽酚铝处理24 h, 收集各组细胞, 采用流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT-PCR检测miR-96-5p和胰岛素受体底物1(IRS1)mRNA表达水平, Western blotting检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、IRS1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p和IRS1的靶向结合关系。采用miR-96-5p inhibitor转染PC12细胞24 h构建miR-96-5p抑制细胞和阴性对照细胞, 将细胞分为空白对照组、阴性对照组、铝染毒组、铝染毒+阴性对照组、铝染毒+miR-96-5p抑制组、miR-96-5p抑制组, 采用miR-96-5p inhibitor和IRS1 siRNA转染PC12细胞24...