外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53促进肝细胞癌的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。方法 选取吉安市中心人民医院2019年1月至2022年12月收治的39例肝癌(HCC)患者癌组织及癌旁组织,采用差速离心法提取外泌体并鉴定,qRT-PCR检测肿瘤组织及外泌体中miR-150-5p和p53表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与p53的互作;培养人肝癌细胞株(HCCLM3),给予癌组织及癌旁组织分离提取的外泌体处理(Exo^Nor和Exo^HCC),同时给予GW 4869抑制细胞本身分泌外泌体,激光共聚焦显微镜对外泌体与受体细胞结合内化进行追踪;同时采用脂质体3000向HCCLM3细胞转染miR-150-5p mimics和miR-150-5p inhibitor; Transwell检测肝癌细胞迁移及侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞miR-150-5p和p53表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和p53蛋白表达。结果 ...     

重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞，分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组，分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液，干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力（以细胞增殖活力表示），细胞划痕实验检测细胞迁移能力（以细胞迁移率表示），Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力（以侵袭细胞数表示），Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达，实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞，分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组，miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC，并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液，阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液，干预24 h，参照上法检测...     

miR-325-3p靶向CLDN1调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移

目的 探讨微小核糖核酸-325-3p(miR-325-3p)靶向紧密连接蛋白1(CLDN1)调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移的作用。方法 将对数生长期的人肝癌细胞株SMMC-7721分为四组：阴性对照组、上调组、下调组和正常组。荧光显微镜观察各组细胞转染效率;细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖活性;侵袭小室(Transwell)实验检测各组细胞侵袭和迁移活性;实时-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-325-3p、CLDN1、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测各组CLDN1、ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2蛋白表达及p-ERK1/2水平;双荧光素酶报告基因检测验证miR-325-3p对CLDN1的作用。结果 阴性对照组、上调组和下调组细胞转染效率分别为(91.38±16.21)%、(92.17±15.93)%...     

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

miR-138-5p通过靶向SETD6基因调控Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的探究miR-138-5p通过靶向赖氨酸甲基转移酶(SETD6)基因调控Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制。方法qRT-PCR、Western印迹检测正常肝细胞L02、肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7细胞中miR-138-5p、SETD6的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测转染后Hep3b细胞中CyclinD1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验及Western印迹检测miR-138-5p与SETD6的联系。结果与人正常肝细胞L02比较,肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7中miR-138-5p的表达水平显著降低,SETD6水平显著升高(P<0.05),选择Hep3b细胞进行后续实验;与NC、miR-con组比较,miR-138-5p mimics组miR-138-5p的表达水平显著升高,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2水平显著降低(P<0.05);与NC、si-con组比较,si-SETD6组中SETD6蛋白水平显著降低,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2水平显著减少(P<0.05);TargetScan生物信息学软件预测显示,miR-138-5p与SETD63'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,miR-138-5p与SETD63'UTR区域特异性结合,Western印迹进一步检测显示miR-138-5p与SETD6直接结合负向调控SETD6的表达;与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著升高(P<0.05);与miR-con组比较,过表达miR-138-5p后,miR-138-5p组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著降低,与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到miR-138-5p及SETD6的双重调控,miR-138-5p可能通过调节SETD6的表达调控Raf/MEK/ERK通路进而调节肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,可为肝癌患者分子靶向治疗研究提供思路。     

miR-485-5p通过靶基因FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-485-5p(miR-485-5p)靶向脂筏标记蛋白(FLOT)2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR与Western印迹分别检测不同甲状腺癌细胞及正常甲状腺上皮细胞中miR-485-5p与FLOT2 mRNA及蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测甲状腺癌SW579细胞转染miR-485-5p mimic、miR-NC、si-FLOT2、si-NC后的细胞增殖活性,并采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用双荧光素酶活性检测鉴定miR-485-5p与FLOT2的靶向关系。Western印迹检测SW579细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达。结果与TEC细胞相比,甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、KAT-18中miR-485-5p的相对表达量显著降低(P0.05),而FLOT2 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05);miR-485-5p过表达或抑制FLOT2表达后SW579细胞OD值、CyclinD1及Bcl-2蛋白表达均显著降低(P0.05),细胞凋亡率、p21、p27及Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达均显著升高(P0.05);双荧光素酶活性检测鉴定FLOT2是miR-485-5p的靶基因,miR-485-5p可负向调控FLOT2表达;FLOT2过表达可逆转miR-485-5p过表达对甲状腺癌SW579细胞增殖及凋亡的作用。结论 miR-485-5p通过负向调控靶基因FLOT2抑制甲状腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的调控作用

背景miR-145-3p在头颈癌、肺癌和胃癌等肿瘤可发挥抑癌的作用,而其在肝癌中的表达和作用并不清楚.目的探讨miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法用RT-q PCR法检测肝癌组织、癌旁组织、肝细胞株(Hep3B、Huh-7、Hep G2和SMMC-7721)与正常肝细胞株L-02中miR-145-3p的表达水平;将miR-145-3pmimic或miR-145-3pinhibitor转入Hep3B细胞,用CCK-8法、流式细胞术、TUNEL法和Westernblot法分别检测细胞活力、细胞周期、细胞凋亡和4型黏蛋白(mucin4, MUC4)表达.用荧光素酶报告基因实验鉴定miR-145-3p的靶基因.将pc DNA-MUC4转入已转染miR-145-3p mimic的细胞,用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力与细胞凋亡.结果miR-145-3p在肝癌组织和细胞中呈低表达.过表达miR-145-3p能抑制细胞增值和G0/G1期到S期转换,促进凋亡和降低MUC4表达;而敲减miR-145-3p则作用相反. MUC4是miR-145-3p的靶基因.过表达MUC4能逆转miR-145-3p mimic对细胞存活的抑制作用.结论miR-145-3p在肝癌低表达,且其表达与T分期呈负相关.过表达miR-145-3p可抑制肝癌细胞存活与生长,而敲减miR-145-3p能促进肝癌细胞存活与生长.     

miR-138-5p通过调控自噬影响乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性的体外研究

目的 探讨miR-138-5p对乳腺癌细胞他莫昔芬(TAM)耐药性的影响及其机制。方法 体外培养乳腺癌细胞MCF-7和TAM耐药细胞株MCF-7/TAM,设置正常对照组(MCF-7细胞)、耐药对照组(MCF-7/TAM细胞)、LV-NC组(MCF-7/TAM细胞+慢病毒空载体)和LV-miR-138-5p mimics组(MCF-7/TAM细胞+miR-138-5p mimics慢病毒)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞miR-138-5p表达水平;通过MTT法检测各组细胞增殖抑制率;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率;通过MDC染色法检测各组细胞自噬小体数量;通过Western blot法检测各组细胞LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比较,耐药对照组、LV-NC组细胞miR-138-5p、增殖抑制率、凋亡率、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平及自噬小体数显著升高(P<0.05)。过表达miR-138-5p后,细胞增殖抑制率、凋亡率、蛋白Bcl-2表达水平显著升高...     

miR-556-3p通过调控PTEN/AKT信号通路影响肝细胞癌的转移活性

目的 通过探索miR-556-3p在肝癌细胞发生发展过程中的作用机制,以期为肝细胞癌的预防和治疗提供一个新思路。方法 取肝细胞癌组织和癌旁肝组织,采用PCR法检测miR-556-3p水平,采用免疫组化法检测磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)表达,采用荧光素酶法检测细胞作用靶点,应用miR-556-3p mimic、miR-556-3p NC、PTEN cDNA和PTEN siRNA转染HepG2细胞,采用Western blotting法检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell法检测细胞侵袭力,使用流式细胞术检测细胞凋亡。应用生物信息学法预测miR-556-3p对HepG2细胞PTEN/AKT通路的调控作用。结果 肝癌组织miR-556-3p水平显著低于癌旁组织(P<0.05),HepG2细胞miR-556-3p水平显著低于正常肝细胞(P<0.05);荧光素酶分析显示,PTEN是miR-556-3p的直接靶点;miR-556-3p处理的HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡率显著低于miR NC处理组(P<0.05)...     

LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

背景:LncRNA在胃癌中表达上调或下调,其在胃癌发生、发展中的作用机制尚未完全阐明。目的:探讨LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p表达来调控胃癌细胞增殖、迁移、凋亡的机制。方法:采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1和miR-497-5p的表达,Pearson法分析胃癌组织中DDX11-AS1与miR-497-5p的相关性。将胃癌HGC-27细胞随机分为NC组、si-con组、si-DDX11-AS1组、miR-con组、miR-497-5p组、si-DDX11-AS1+anti-miR-con组、si-DDX11-AS1+anti-miR-497-5p组。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告系统验证DDX11-AS1与miR-497-5p的靶向调节关系;蛋白质印迹法检测cyclin D1、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1表达显著升高(P 0.05),而miR-497-5p表达显著降低(P 0.05),DDX11-AS1与miR-497-5p呈负相关(r=-0.754,P 0.05)。干扰DDX11-AS1表达或上调miR-497-5p表达可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P 0.05),诱导细胞凋亡(P 0.05),cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达显著降低(P 0.05),cleaved caspase-3表达显著升高(P 0.05)。双萤光素酶报告实验证明DDX11-AS1可负向调控miR-497-5p的表达和活性。抑制miR-497-5p表达可逆转干扰DDX11-AS1表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论:干扰LncRNA DDX11-AS1表达能通过靶向结合并上调miR-497-5p的表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

miR-129-3p靶向LPAR3调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨miR-129-3p靶向LPAR3调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR和Western blotting检测正常肝细胞HL-7702和3种肝癌细胞SMMC-7721、Hep G2和BEL-7402中miR-129-3p和LPAR3的表达情况。构建过表达miR-129-3p的SMMC-7721细胞株,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blotting检测LPAR3、Cyclin D1、MMP-2、PI3K和AKT蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因法和Western blotting验证miR-129-3p和LPAR3的靶向关系。结果与正常肝细胞相比,肝癌细胞中miR-129-3p的表达显著降低,LPAR3的表达显著升高。过表达miR-129-3p可抑制SMMC-7721的增殖、迁移和侵袭。LPAR3是miR-129-3p的靶基因,miR-129-3p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可部分逆转miR-129-3p对SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-129-3p通过调控LPAR3抑制PI3K和AKT蛋白的表达。结论 miR-129-3p通过靶向下调LPAR3抑制PI3K/AKT信号通路活化,进而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA LINC02418通过调控miR-940表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景lnc RNALINC02418在非小细胞肺癌、肺腺癌和结直肠癌等肿瘤中表达上调,促进肿瘤的发展进程.但是, LINC02418对肝癌发生发展的影响和机制还未知.LncBase Predictedv.2靶基因预测显示,LINC02418可能靶向结合miR-940.本研究假设LINC02418可靶向调控miR-940影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡,进而影响肝癌发展进程.目的探讨lncRNA LINC02418对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制.方法RT-qPCR检测肝癌组织和对应癌旁组织中LINC02418和miR-940表达水平.分别转染LINC02418小干扰R N A、miR-940模拟物至肝癌细胞HCCL M3,RTq PCR检测转染效果,CCK-8、Transwell、流式细胞术和蛋白印迹法分别检测下调LINC02418表达或上调miR-940表达对HCCLM3细胞活性、迁移和侵袭、凋亡及Cyclin D1、p21、MMP-2、MMP-9、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-940与LINC02418调控关系.结果与癌旁组织比较,肝癌组织中LINC02418表达水平升高(P0.05), miR-940表达水平降低(P0.05).下调LINC02418或上调miR-940表达降低了HCCLM3细胞活性、迁移和侵袭数及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和Bcl-2的蛋白表达(P 0.05),而提高了细胞凋亡率、p21和Bax的蛋白表达(P0.05). LINC02418靶向负调控miR-940表达.下调miR-940表达逆转了下调LINC02418表达对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.结论LINC02418在肝癌组织中表达升高,下调其表达可能通过靶向上调miR-940抑制肝癌细胞的恶性生物学行为,可作为肝癌治疗的分子靶点.     

过表达miR-515-5p的视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化及其机制

目的 探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法 利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力（OD值）,TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 mi...     

miR-485-5p靶向CKS1B对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果 与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表...     

miRNA-425-5p促进胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭过程的分子机制

目的探讨microRNA-425-5p(miR-425-5p)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将miR-425-5p及对照分别转染入胰腺癌细胞系PANC-1进行CCK-8增殖实验、Transwell迁移和Matrigel侵袭实验,观察miR-425-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过查阅文献寻找可能参与调节细胞增殖、迁移或侵袭过程的miR-425-5p的靶蛋白,然后将该蛋白过表达进行上述功能学实验。结果 CCK-8增殖实验、Transwell迁移和Matrigel侵袭实验发现:与对照组相比,miR-425-5p能够促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。对过表达miR-425-5p的靶基因脑海绵状血管瘤3(CCM3)进行功能学实验发现,高表达的CCM3抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-425-5p可能通过靶向下调CCM3促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭过程。     

miR-515-5p通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭

目的旨在研究miR-515-5p在调控胃癌进展过程中的作用及机制。方法通过qRT-PCR实验检测胃癌患者标本和胃癌细胞系中miR-515-5p的表达情况。将miR-515-5p模拟物转染至人MGC-803和SGC-7901细胞系。采用CCK-8和transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot实验检测相关mRNA和蛋白表达情况。荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p和Wnt3的靶向关系。结果 miR-515-5p在人胃癌组织和细胞系中的表达水平下调。过表达miR-515-5p可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素报告实验证明Wnt3是miR-515-5p在胃癌细胞中的直接作用靶点。同时,拯救实验证明过表达Wnt3可以逆转miR-515-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的能力。结论 miR-515-5p可以通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭。     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。     

LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-202-5p影响结直肠癌细胞生物学行为的实验研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)可通过调控miRNA的表达来参与肿瘤发生、发展过程,但lncRNA在结直肠癌发展和转移中的分子机制尚未阐明。目的:探讨lncRNA SOX21-AS1通过调控微小RNA-202-5p(miR-202-5p)的表达影响结直肠癌细胞生物学过程的分子机制。方法:以SOX21-AS1小分子干扰RNA(si-SOX21-AS1)、miR-202-5p模拟物及其抑制剂转染结直肠癌HCT116、SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株SOX21-AS1、miR-202-5p mRNA表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,双萤光素酶报告实验检测SOX21-AS1与miR-202-5p的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、MMP-2、cleaved caspase-3蛋白表达。结果:结直肠癌细胞中SOX21-AS1 mRNA表达显著高于人正常结肠黏膜上皮细胞(P 0. 05),miR-202-5p mRNA表达显著降低(P 0. 05)。沉默SOX21-AS1或上调miR-202-5p表达可显著抑制HCT116、SW480细胞增殖、迁移和侵袭,细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),并可抑制cyclin D1、MMP-2蛋白表达(P 0. 05),促进cleaved caspase-3蛋白表达(P 0. 05)。SOX21-AS1可靶向结合miR-202-5p,并可负向调控miR-202-5p的表达和活性;抑制miR-202-5p表达可逆转沉默SOX21-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:沉默SOX21-AS1表达可通过上调miR-202-5p的表达从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。     

lncRNA SNHG8负调控miR-411-5p影响神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)、小核仁RNA宿主基因子8(SNHG8)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测31例NB病人NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p表达水平。体外培养NB细胞系SK-N-SH,双荧光素酶报告基因实验验证SNHG8和miR-411-5p调控关系。将SK-N-SH细胞分为对照组、si-NC组、si-SNHG8组、si-SNHG8+anti-miR-NC组和si-SNHG8+anti-miR-411-5p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:与瘤旁组织比较,NB组织中SNHG8表达水平升高(P<0.05),miR-411-5p表达水平降低(P<0.05)。SNHG8在S...     

沉默DCR3表达增加卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的实验研究

目的研究沉默诱骗受体(DCR)3对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法以靶向DCR3慢病毒干扰载体感染卵巢癌细胞ES-2,用Realtime PCR和Western印迹检测干扰效果。用不同浓度的紫杉醇处理ES-2细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞存活情况,用紫杉醇处理沉默DCR3的ES-2细胞,CCK-8检测细胞增殖,细胞克隆实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(C-Caspase)-12、C-Caspase-3、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)水平。结果靶向DCR3慢病毒干扰载体下调ES-2细胞中DCR3 mRNA和蛋白水平。不同浓度的紫杉醇抑制ES-2细胞增殖,10~(-6) mol/L的紫杉醇处理后的卵巢癌细胞存活率为(53.26±4.15)%,选用10~(-6)mol/L的紫杉醇处理沉默DCR3的ES-2细胞。沉默DCR3后的ES-2细胞增殖能力显著降低,细胞克隆形成能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中C-Caspase-12、C-Caspase-3、CHOP蛋白水平显著升高。紫杉醇处理沉默DCR3后的ES-2细胞增殖和克隆形成能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,C-Caspase-12、C-Caspase-3、CHOP蛋白水平显著升高,与未沉默DCR3的ES-2细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论沉默DCR3协同紫杉醇抑制卵巢癌细胞增殖,诱导卵巢癌细胞凋亡,增加卵巢癌细胞紫杉醇敏感性。