反义MAPK寡核苷酸对精氨酸加压素诱导下心肌成纤维细胞一氧化氮合成增加的抑制作用

目的：探讨反义丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase）寡核苷酸对精氨酸加压素（AVP）诱导下心肌成纤维细胞（CFs）一氧化氮（NO）合成增加的抑制作用。方法：分离培养SD仔鼠CFs，采用分光光度法和硝酸还原酶法测定CFs一氧化氮合酶（NOS）活性和NO含量。结果：AVP显著提高CFs NOS活性和NO含量；反义MAPK寡核苷酸剂量依赖性地抑制AVP诱导下CFs NOS活性增高和NO含量增加，其中0．2μmol／L和0．3μmol／L反义MAPK寡核苷酸可将AVP诱导下CFs NOS活性和NO含量抑制到与对照组近似水平。结论：MAPK参与了AVP诱导下CFs NOS活性增高和NO含量增加，MAPK激酶有可能成为阻断或逆转心肌纤维化新的作用靶点。     

醛固酮刺激心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨醛固酮在致心肌纤维化中的作用。方法以培养的FBs为模型，观察醛固酮刺激FBs增殖，螺内酯阻断醛固酮的作用，用^3H-亮氨酸及^3-胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果醛固酮呈浓度依赖性的促FBs蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异显著（P〈0．01）；螺内酯能明显抑制醛固酮介导的FBs蛋白核酸合成速率增高，与醛固酮刺激组相比差异显著（P〈0．01）。结论螺内酯抑制醛固酮刺激的FBs增殖。     

离体热损伤成纤维细胞所涉及的细胞信号通路

利用已建立的成纤维细胞热损伤诱导凋亡模型观察离体培养的成纤维细胞热烫伤后信号通路的活化情况。首先将原代培养的人成纤维细胞经5～6传代后，45℃水中孵育10min，造成单纯热损伤刺激，加入5％小牛血清继续培养，分别在伤后0、30、60和180min 4个时相点冻存细胞，运用Western blot进行MAPKs信号通路磷酸化蛋白印迹检测，同时采用荧光显微镜检测热损伤成纤维细胞caspase3蛋白的表达情况。结果显示，经过热损伤刺激的成纤维细胞，c-jun N末端激酶(JNK)首先开始表达，并在60min达到高峰，能持续至180min。细胞外信号调节激酶(ERK)的表达高峰在伤后30min，随后迅速消退。损伤早期，成纤维细胞内caspase3阳性标记的细胞数较少，至伤后60min，caspase3的表达明显增强。研究表明，ERK和JNK信号通路在热损伤诱导成纤维细胞生物学特性变化过程中具有重要意义。     

丝裂原活化蛋白激酶通路对成纤维细胞内游离钙的影响

为观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对离体热烫伤后成纤维细胞内钙离子的作用以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通过对胞内游离钙的影响，将培养的人成纤维细胞进行热损伤刺激后分成4组：（1）bFGF处理组（10ng/ml);(2)预先加ＰＤ９８０５９（10μmol/L)阻断剂３０min，再行bFGF(10ng/ml)刺激；（３）预先加入ＳＢ２０３５８０（１０μmol/L)阻断剂30min，再行bFGF刺激（10ng/ml)；（4）同时加入PD98059（10μmol/l)和SB203580（10μmol/L)2种阻断剂30min，再加入bFGF(10ng/ml)，应用特异性Ca^2 荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞，激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的浓度，结果：显示，受热刺激的成纤维细胞荧光强度较弱，加入bFGF后可促使成纤维细胞中游离Ca^2 浓度升高，分别预先加入PD98059和SB203580损坏抗剂的成纤维细胞，再加入bFGF，胞内钙离子浓度出现不同的钙振荡现象，同时加入2种阻断剂后胞内钙离子浓度则迅速降低，表明bFGF引起热损伤后的成纤维细胞中游离Ca^2 浓度的增加，MAPK信号通路对胞内钙离子有反馈调节的作用。     

模拟失重环境碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨在模拟失重环境下碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响. 方法 试验分对照组、模拟失重组和模拟失重加hPDLF组3组.采用酶消化组织块培养法分离、培养原代hPDLF.应用噻唑蓝比色法,检测模拟失重条件下,不同时间和不同浓度的bFGF对hPDLF增殖的影响. 结果 在模拟失重12h、24h组hPDLF增殖较对照组没有显著差别,在48h、72h模拟失重组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=7.303、8.668,P<0.01).模拟失重48 h时bFGF浓度在50～100μg/L范围内加bFGF组hPDLF增殖高于模拟失重组,差异有统计学意义(P<0.05),而bFGF浓度为1～10μg/L时,两组没有显著差别. 结论 模拟失重在48 h、72 h对hPDLF的增殖有抑制作用,模拟失重环境bFGF浓度在50～100μg/L范围内具有促进hPDLF增殖的效应.     

自发性高血压大鼠心肌肥大与心肌MAPK及AngⅡ的实验研究

通过观察高血压心肌肥厚与心肌丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＤＫ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的关系，探讨高血压心肌肥厚的可能细胞内信息传递机制，４个月的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和Ｗｉｓｔａｑｒ－ＫｙｏｔｏＷＫＹ）大鼠各８只。采用放地因主心肌组织ＡｎｇⅡ含量，凝胶内磷酸化法心肌ＭＡＰＫ活性，以心脏重／体重的比值表示心肌肥厚程度，与ＷＫＹ大鼠比较，ＳＨＲ心肌ＭＡＰＫ活性增加１０７．０％，血浆及心肌组织Ａｎ     

精氨酸升压素对心肌成纤维细胞增殖和一氧化氮合成的影响

目的探讨精氨酸升压素(AVP)对心肌成纤维细胞(CFs)增殖和一氧化氮(NO)合成的影响。方法采用胰酶消化法分离培养新生SD大鼠CFs,MTT法测定CFs细胞增殖数目,硝酸还原酶法测定CFsNO含量。结果在不同浓度AVP干预下,CFs的MTT光密度值(OD值)随AVP浓度的增加而增高,其中10^-6mol／L AVP组的MTT OD值显著高于对照组,在10^-7mol／L AVP干预下CFs的MTT OD值随培养时间延长而增高,其中36h组的显著高于6h组;在不同浓度AVP干预下CFs的NO含量随AVP浓度的增高而增加,其中10^-7mol／L AVP组和10^-6mol／L AVP组的NO含量显著高于对照组、10^-9mol／L AVP组和10^-8mol／L AVP组,在10^-7mol／L AVP干预下CFs的NO含量随培养时间延长而增加,其中24h组和36h组的NO含量显著高于6h组和12h组。结论AVP能促进CFs增殖和NO合成,NO含量增加能够拮抗AVP的促CFs增殖作用,延缓心肌纤维化发生。     

心肌局部血管紧张素Ⅱ激活MAPK参与运动性心肌肥大

在长期游泳训练的大鼠心肌组织中，观察了ＡＲⅡ（心肌局部血管紧张素Ⅱ）的促细胞肥大效应与ＭＡＰＫ（丝裂素活化蛋白激酶）活性的关系，以探讨ＡＴⅡ促进运动心肌肥大的信息传递机制。结果表明：运动组心系数增加了２３．８％，心肌局部ＡＴⅡ和ＭＡＰＫ活性分别增加了４８．７６％和４４５．４％，二者显著相关，相关系数ｒ＝０．７８７，提示心肌局部ＡＴⅡ通过激活ＭＡＰＫ参与运动性心肌肥大的发生。     

脉冲Nd∶YAG激光照射对人牙周膜成纤维细胞增殖力的影响

目的探讨Nd∶YAG激光照射对牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响。方法离体培养的第5代人牙周膜成纤维细胞分为5组。A～D组细胞用Nd∶YAG激光照射,其参数分别为A组:80mJ/p,20pps,照射5min;B组:80mJ/p,20pps,照射10min;C组:100mJ/p,20pps,照射5min;D组:100mJ/p,20pps,照射10min。E组细胞不予激光照射作为对照组。全部的样本细胞均作PI染色后用流式细胞仪检测DNA时相比例,分析细胞增殖情况。结果A至E组细胞增殖指数分别为22.97±0.94、24.12±0.96、29.61±1.47、42.52±4.61、20.76±0.74,其中仅D组较E组明显为高(P<0.05)。结论在适当能量和时间作用下,Nd∶YAG激光照射可以促进牙周膜成纤维细胞的增殖。     

钙剂对肌松药药效的影响

观察了静脉滴注氯化钙对去极化肌松药琥珀胆碱和非去极化肌松药维库溴铵肌松作用的影响。结果发现 ,两组病人于注钙后 2～ 5min ,血压升高 (17 5± 2 18)mmHg ,脉搏增加 (9 83± 1 2 70 ) /min ,随后自行恢复 ,10min后基本正常 ;静滴 2 0ml 5 %氯化钙 5min后 ,血浆总钙和游离钙浓度均升高 ,持续至 10min后逐渐降低 ,但 30min至 1h仍未降至基础值水平 ;给钙后琥珀胆碱的起效时间无明显改变 ,最大阻滞时间缩短约 1min ,恢复过程加快 ,作用持续时间亦缩短近 2min ;给钙后维库溴铵肌松效应的各项时间均缩短 ,尤以最大阻滞时间缩短明显 ,从 (13 92± 2 35 )min缩短至 (7 0 4± 2 0 0 )min (49% )。提示钙对琥珀胆碱的肌松作用有所拮抗 ,并能明显缩短维库溴铵的作用时间     

hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响

为了探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞 (hEFs)端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响 ,采用基因重组技术构建hTERT全长cDNA正义荧光真核表达载体 ,并采用脂质体法将正义重组质粒pIRES2 EGFP hTERT及空载质粒pIRES2 EGFP分别转染原代培养hEFs,检测转染细胞端粒长度、端粒酶活性及端粒酶亚单位的变化。结果显示 ,外源性hTERT基因转染细胞 (hEF hTERT)端粒酶活性较未转染细胞 (hEFs)及空载体转染细胞 (hEF EGFP)显著增加 (P <0 0 1) ,hEF hTERT、hEFs及hEF EGFP端粒长度分别为 6 0kb、5 3kb及 5 4kb ,端粒酶亚单位中除hTERT在mRNA和蛋白水平表达均增加外 ,hTR和TP1mRNA无明显变化。以上结果提示 ,外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEFs端粒酶活化 ,端粒长度不再继续缩短 ,hTERT在mR NA和蛋白水平表达增加     

抑肽酶在体外循环心脏直视术中的临床应用

本文对60例进行心内直视手术的非紫绀型先心病患者的临床资料加以分析,其中30例予以国产抑肽酶作为用药组,另外30例作为对照组。对两组患者术前及术后不同时间所测得的血小板数,心包内外引流量及输血量进行统计学分析。结果表明:用药组术后的血小板数目的减少明显低于对照组,且回升较快,其失血量及输血量亦明显少于对照组,说明国产抑肽酶对体外循环术后的血小板数及功能均有良好的保护作用,并明显减少术后心包内外引流量及库血的应用。     

透析液钙浓度对血液透析病人QT间期及QT间期离散度的影响

探讨透析液钙浓度变化对血液透析病人QT间期及QT间期离散度的影响。对15例慢性肾衰长期维持性血液透析病人先后应用钙浓度为1．25mmol／L（dCa^2 ＋1．25）、1．5mmol／L（dCa^2 ＋1．5）及1．75mmol／L（dCa^2 ＋1．75）的透析液各连续进行5次血液透析，分别于第5次透析时观察透析前后有关临床及实验室指标，测量并计算QT间期（QT）及QT间期离散度（QTd）。结果显示，采用dCa^2 ＋1．25血液透析时，血总钙血清Ca^2 明显下降（P＜0．05），QT明显延长、QTd明显增大（P＜0．05）；采用dCa^2＋1．5及dCa^2＋1．75血液透析时，血总钙及血清Ca^2 明显升高（P＜0．05），QT在dCa^2＋1．5透析时有缩短趋势，但差异无显著性意义（P＞0．05），而在dCa^2＋1．75透析时明显短（P＜0．05），QTd在dCa^2＋1．5及dCa^2＋1．75透析时虽有增大趋势，但差异无显著性意义（P＞0．05）。提示不同钙浓度的透析液进行血液透析引起QTd增大，但只有低钙血液透析时在引起QT明显延长的同时，QTd才明显增大，从而增加发生心律失常，尤其是发生室性心律失常的可能性。     

预处理对缺血再灌注心肌细胞即刻早期基因c-fos、c-jun表达的调控

为探讨即刻早期基因在预处理中的作用机制，将培养心肌细胞分别经短暂缺血及佛波酯，去甲肾上腺素，腺苷预处理，行模拟缺血再灌注，采用Northern杂交技术对心肌细胞c-fos,c-jun mRNA含量进行检测。结果发现，缺血预处理组c-fos,c-jun mRNA明显上升，其他药物预处理组c-fos,c-jun基因均有不同程度的表达增强，H7能明显抑制预处理对c-fos,c-jun mRNA的诱导。表明预处理可能通过激活PKC，进而诱导c-fos,c-jun基因的转录表达增强，PKC可能在缺血预处理中起着关键的作用。     

细菌内毒素对枯否细胞丝裂原活化蛋白激酶家族的影响

为阐明LPS诱导全身炎症反应失控的信号转导机制，采用Western blot检测LPS刺激对枯否细胞ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平的影响。结果显示，LPS刺激后，枯否细胞内ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达无明显变化，但其磷酸化水平均发生了显著变化，刺激后5min即明显升高，并分别于30、45、20min达到高峰，然后逐渐下降，2h后基本恢复至正常水平，其中以p38MAPK变化最快且变化幅度最大。LPS浓度在10pg/ml-100ng/ml范围内时，ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平与LPS刺激浓度呈明显的剂量依赖性。提示ERK、JNK、p38MAPK均是LPS信号转导途径中的重要信号分子，其中p38MAPK在LPS所介导的枯否细胞早期反应中可能较ERK和JNK有着更为重要的作用。     

针刺对骨骼肌损伤过程中细胞内钙分布的影响及其机制

本文利用电刺激诱发爪蟾腓肠肌结构损伤模型及电子探针微区分析技术测定细胞内钙、钠、镁、氯浓度，对针刺促进肌肉损伤恢复的作用机制进行了探讨。结果发现，针刺在体或离体的损伤肌肉均能使肌纤维胞浆内增加的钙浓度迅速降至对照组水平。与此同时，肌浆网钙含量无明显改变；而胞浆钠则进一步上升，不仅高于对照组，也高于同体蛙未针刺肌。这证实了针刺具有有效的降钙作用。这一作用与肌浆网摄钙无关，主要通过细胞膜Ｎａ~＋－Ｃａ~（２＋）交换迅速完成。超微结构观察表明，随胞浆钙下降，肌肉结构变化显著缓解，提示针刺的降钙作用很可能是抑制运动性肌肉损伤，加快结构恢复。     

高胆固醇饮食诱导的心肌纤维化及其发生机制

目的　探讨高胆固醇饮食诱导心肌纤维化及其可能的发生机制。方法　取 8周龄Wister大鼠 19只 ,随机分成正常对照组、高胆固醇组和螺内酯治疗组 ,以羟脯氨酸法测得左心室心肌胶原蛋白含量 ;以放免法分别测得左心室心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮 (Ald)含量及血浆AngⅡ、Ald浓度 ;以Griess法测得血清亚硝酸盐 (NO-2 )浓度 ;以核素标记法测得丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性。结果　高胆固醇饮食喂养 8周后 ,大鼠左心室心肌胶原蛋白、Ald含量及血浆AngⅡ浓度分别升高 1 2、1 1和 3 0倍 ;血清NO-2 浓度显著下降 ;用螺内酯治疗后 ,心肌胶原蛋白含量、血浆、组织AngⅡ水平和心肌MAPK活性下降(与高胆固醇组比较 ,P <0 0 5 )。结论　高胆固醇饮食诱导心肌纤维化 ,可能与循环和心肌醛固酮有关 ;MAPK可能是醛固酮介导心肌纤维化的重要的细胞外信号传递因子。     

FGF10及其受体对胎儿皮肤附件形成的诱导作用

探讨成纤维细胞生长因子10(FGF10)及其受体(Bek)在胎儿皮肤附件(SA)形成中的表达特征及其生物学意义。采用病理学技术和免疫组化方法检测FGF10、Bek、细胞角蛋白-19((CK19)、Bcl-2和细胞增殖核抗原(PCNA)在130块分别来自26例不同胎龄(8～31周)胎儿5个不同部位(头、下颌、耳垂、肩和胸骨柄)的皮肤组织中的表达水平。结果显示，除胎龄(E)8周胎儿缺乏FGF10和Bek蛋白表达外，所有蛋白在E11周以后的皮肤内都有阳性表达。在E11周，表皮下成团分布的间质细胞过表达FGF10、PCNA和Bcl-2，表皮细胞和周皮细胞则所有蛋白均呈强阳性表达；在E13周时表皮细胞局灶性增殖形成SA胚芽，并逐渐向真皮内生长、分化和迁移。提示问质细胞旁分泌的FGF10与上皮细胞膜Bek特异性结合，是诱导胚胎SA上皮细胞生长及其形态发生的重要信号。