丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

红景天苷对缺氧缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察红景天苷对神经细胞系SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位和凋亡的影响.方法:四唑盐比色实验(MTT)检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率.结果:缺氧/缺糖损伤2h可诱导SH-SY5Y细胞凋亡和坏死,分别为18.59%(P＜0.01)和4.94%(P＜0.01),形态学观察也发现SH-SY5Y细胞的染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,线粒体膜电位和活性分别降低29.17%(P＜0.01),38.80%(P＜0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多,线粒体膜电位和活性进一步下降;红景天苷能显著降低SH-SY5Y细胞凋亡及坏死的百分率,提高线粒体膜电位和活性,其作用随剂量增加而作用增加.结论:红景天苷可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生.     

参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞损伤的影响

目的探讨参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞凋亡及胞浆内游离钙的影响,阐明参麦注射液治疗缺血性中风急性期的脑保护作用机制.方法用孕17～18 d的SD胎鼠大脑皮层作原代神经细胞培养,制作缺氧/缺糖/复氧致神经细胞损伤模型,采用AnnexinV/PI双染色法以流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率;FIuo-3负载,流式细胞仪定量分析胞浆内游离钙的变化.结果参麦注射液能降低缺氧/缺糖/复氧原代培养神经细胞的凋亡率和胞浆内游离钙浓度.结论参麦注射液治疗急性缺血性中风的疗效机制与提高神经细胞耐缺血缺氧能力,抑制细胞内钙超载,从而减轻凋亡有关.     

黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷治疗脑缺血-再灌注损伤的作用机制。方法选用SH-SY5Y神经细胞,采用缺氧-复氧结合缺糖-复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血-再灌注损伤,观察黄芩苷对此损伤的治疗作用。结果缺氧、缺糖8h结合复氧、复糖12h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞线粒体的活性下降,凋亡率明显上升;而黄芩苷可以显著减轻上述损伤。结论黄芩苷对缺氧、缺糖-再灌注损伤的神经细胞有保护作用。     

丹参素对缺糖-缺氧损伤神经细胞的保护作用

研究表明脑组织缺血性损伤过程中存在着神经细胞凋亡。且神经细胞凋亡在缺血性脑损伤中起十分重要的作用。药物可通过干预神经细胞凋亡过程阻止缺血性损伤的进一步发展，而发挥对神经细胞损伤的保护作用。细胞内Ca^2 超载是缺血性脑损伤的发病机制之一，在缺血后神经元凋亡发生中也     

红景天苷对缺氧 缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的：观察红景天苷对神经细胞系SH—SY5Y细胞缺氧／缺糖损伤时线粒体膜电位和凋亡的影响。方法：四唑盐比色实验（MTT）检测线粒体活性，流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果：缺氧／缺糖损伤2h可诱导SH—SY5Y细胞凋亡和坏死。分别为18．59％（P〈0．01）和4．94％（P〈0．01），形态学观察也发现SH—SY5Y细胞的染色质凝聚。核碎裂，凋亡小体产生，线粒体膜电位和活性分别降低29．17％（P〈0．01），38．80％（P〈0．01），随着缺氧／缺糖时间的延长，细胞凋亡的发生也越来越多，坏死的细胞也增多，线粒体膜电位和活性进一步下降；红景天苷能显著降低SH—SY5y细胞凋亡及坏死的百分率，提高线粒体膜电位和活性，其作用随剂量增加而作用增加。结论：红景天苷可抑制缺氧／缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低，从而具有稳定线粒体膜电位的作用，抑制神经细胞凋亡的发生。     

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.     

黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的 观察黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷、栀子苷治疗脑缺血/再灌注损伤的作用机制。方法 选用SH-SY5Y细胞,采用缺氧、复氧结合缺糖、复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血再灌注损伤,观察黄芩苷、栀子苷对此损伤的治疗作用。结果 缺氧、缺糖8 h结合复氧、复糖12 h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞突起皱缩、变圆,可见有部分细胞漂起,细胞轮廓不清,凋亡率明显上升,线粒体的活性下降;而黄芩苷、栀子苷可以显著减轻上述损伤。结论 黄芩苷、栀子苷对缺氧缺糖/再灌注损伤的神经细胞有保护作用。     

党参皂苷L1抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参皂苷L1对神经细胞凋亡的抑制作用.方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earles液进行缺氧/缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst 33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2 浓度,评价药效.结果:(1)细胞存活率(%):与模型组(29.89±6.28)比较党参皂苷L1 1.0mg/L组(46.05±8.92)、0.1mg/L组(46.83±6.76)、0.01mg/L组(41.05±9.18)均能显著提高细胞存活率(P<0.01和P<0.05);(2)细胞坏死率(%):与模型组(44.99±12.81)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(19.45±2.31)、0.1mg/L组(18.78±4.95)和0.01mg/L组(22.37±4.44)能显著降低细胞坏死率(P<0.001);(3)原位双染法细胞凋亡率(%):与模型组(17.44±4.82)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(8.75±1.88)、0.1mg/L组(9.73±1.76)能显著降低细胞凋亡率(P<0.01和P<0.05);(4)流式细胞术检测细胞凋亡率(%):与模型组(8.55±3.84)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(4.21±2.31)、0.1mg/L组(3.83±2.95)能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);(5)细胞内Ca2 平均荧光值,与模型组(47.37±9.68)比较,党参皂苷L1 1.0mg/L组(28.67±11.12)、0.1mg/L组(27.34±8.57)能显著降低细胞内Ca2 平均荧光值(P<0.05),表明党参皂苷L1能明显降低细胞内Ca2 浓度.结论:党参皂苷L1对缺血再灌注损伤后神经细胞的坏死和凋亡过程均具有抑制作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2 浓度有关,提示党参皂苷L1是党参治疗脑卒中急性期的主要效应成分.     

苯海索对培养大鼠神经细胞缺氧/缺糖性损伤的保护作用

目的 观察苯海索对缺血／缺氧培养所致大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞，以缺氧加缺糖培养建立神经细胞“缺血”性损伤模型，观察苯海索对培养神经细胞”性损伤的保护作用。结果 苯海索能显著减少细胞死亡，降低乳酸脱氢酶（LDH）漏出量、一氧化氮（NO）含量及丙二醛（MDA）生成，提高超氧化物歧化酶（SOD）活性。结论 苯海索对培养神经细胞“缺血”性损伤具有显著的保护作用，其机制可能与苯海索降低NO含量、抗过氧化作用有关。     

Neuroprotective effects of the Chinese Yi-Qi-Bu-Shen recipe extract on injury of rat hippocampal neurons induced by hypoxia/reoxygenation

Objective

To explore the protective effects of the Chinese Yi-Qi-Bu-Shen recipe (YB) against neuronal injury induced by hypoxia–reoxygenation, which has shown beneficial effect in improving the brain function of type 2 diabetics likely through its antihyperglycemic, antioxidant activity, and investigate its mechanisms.

Methods

The bilateral hippocampus was collected from newborn rats to establish single cell suspension. On the 10th day, the primarily cultured hippocampal neurons were randomly divided into five groups: the normal group (NG), the hypoxia/reoxygenation group (HG), and groups protected with small, medium and large dosages of YB (SG, MG and LG, respectively). The YB-protected groups were treated with different concentrations of YB containing serum before reoxygenation. The metabolic rate of MTT, the malondialdehyde (MDA) content, and the activity of superoxide dismutase (SOD) and lactate dehydrogenase (LDH) were measured with assay kits. The apoptosis rate of hippocampal neurons were tested using flow cytometry analysis. RT-PCR was used to evaluate the mRNA expressions of bcl-2 and bax genes.

Results

The SOD activity, the cell survival rate, the bcl-2/bax ratio, and the bcl-2 mRNA expression in the HG group were significantly lower (all P<0.01), but the levels of MDA and LDH, the apoptosis rate, and the bax mRNA expression were higher (all P<0.01) than those in the NG group. The SOD activity, the cell survival, the bcl-2 mRNA expression, and the bcl-2/bax ratio were significantly higher in all of the YB-protected groups (all P<0.01), but the level of MDA and LDH, the apoptosis rate, and the bax mRNA expression were lower (P<0.01, P<0.05) than those in the HG group in a dose dependent manner.

Conclusion

The YB extract has a protective effect on hippocampal neurons against injury induced by hypoxia/reoxygenation, through its antioxidant activity and the regulation of apoptosis.     

清开灵和生脉注射液联合用药对油酸型急性肺损伤家兔的治疗作用

目的:观察静脉注射清开灵、生脉注射液(生脉)及其联合用药对油酸型急性肺损伤(ALI)家兔的影响。方法:家兔随机分为11组:对照组,油酸组,治疗组分别包括清开灵和生脉以及清开灵+生脉小、中、大剂量组。iv油酸(0.05mL·kg^-1)复制家兔ALI模型后,立即iv上述药液,观察给予油酸前及以后30,60,120min时的呼吸频率和幅度,于各时间点测定动脉血气含量;实验后处死家兔取肺组织,测定肺组织LDH,CAT,MDA的含量及观察病理变化。结果:与油酸组比较,清开灵、生脉及清开灵+生脉的小、大剂量组的呼吸幅度均显著升高;清开灵+生脉小剂量组PaO₂显著升高(P<0.05),清开灵、生脉及清开灵+生脉小剂量组的PaCO₂均显著降低(P<0.05);清开灵、生脉各剂量组的MDA均显著降低,清开灵+生脉小剂量组的MDA显著降低、CAT显著增加;清开灵、生脉及清开灵+生脉小剂量组可以减轻油酸引起的病理改变。结论:清开灵+生脉小剂量对油酸型肺损伤家兔的疗效优于同剂量下的单独用药。     

清开灵注射液的抗血栓作用及其机制研究

目的:探讨清开灵注射液(QKL)的抗血栓作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、QKL 2.5,5.0,10.0 mL·kg~(-1)组.QKL各剂量组均ip给药,每天1次×4 d.除正常对照组外,其余各组均于末次给予QKL前16 h ip 角叉菜胶(ca)5 mg/只(0.5 mL).于末次给予QKL后30 min,除了正常对照组iv生理盐水1 mL·kg~(-1)外,其余各组均iv给予内毒素(LPS)50μg·kg~(-1)(1mL·kg~(-1)),以注射LPS时作为造模0h.于造模后2h取血测定血浆TNF-α,IL-6含量和白细胞黏附分子CD11b/CD18表达;4,24 h测定外周血白细胞和血小板数量和测量尾部血栓长度(cm);120 h测定血小板聚集率.结果:清开灵注射液可明显抑制血栓形成,缩短尾部血栓长度;明显抑制体内炎性因子TNF-α和IL-6产生,降低白细胞黏附分子CD11b/CD18的表达水平;减轻由于血栓形成而导致的血小板消耗;降低血小板聚集率.结论:清开灵注射液的抗血栓作用与其抑制白细胞的激活和黏附,降低炎症反应和炎性因子产生,抑制血小板聚集等有关,这些作用机制与其清热解毒功效一致.     

清开灵注射液中黄芩苷在大鼠体内代谢动力学的研究

目的：研究清开灵注射液中黄芩苷在大鼠体内的代谢动力学,为探索清开灵注射液的体内效应物质基础提供依据。方法：大鼠尾静脉注射清开灵粉针剂后,于不同时间点取血、肝、肺组织,采用高效液相质谱联用法测定样品中黄芩苷含量,并用3P87拟合求算药代动力学参数。结果：静脉给药后,黄芩苷在大鼠体内符合二室模型。45 min时肝组织中分布达峰值,接着肝中浓度急剧下降,120 min后开始缓慢回升,呈现双峰现象。肺组织中黄芩苷浓度远高于肝组织中浓度,且消除较肝脏慢,但达峰时间同肝脏。结论：静注清开灵后,黄芩苷迅速分布至效应器官肺、肝中,黄芩苷为清开灵注射液的肝肺效应物质基础之一。黄芩苷在大鼠体内可能存在一定程度的肝肠循环。     

川芎内酯A预处理对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察川芎内酯A预处理对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:单纯低氧/再给氧为心肌细胞低氧2小时、复氧1小时。低氧预处理为心肌细胞低氧25min/复氧30min后,再低氧2小时、复氧1小时。川芎内酯A预处理为心肌细胞经药物孵育55min后,低氧2小时,复氧1小时。实验结束后取上清液测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);β液体闪烁计数仪测心肌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:川芎内酯A预处理可使上清液中LDH漏出明显减少,MDA含量降低,SOD活性提高。还可降低心肌细胞内MAPK活性与H/R组比较。结论:川芎内酯A预处理对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,MAPK信号传导途径可能参与这一保护作用。     

精制清开灵干预缺血性脑损伤药理作用机制研究进展

缺血性脑血管病严重威胁人类健康,而且其病理机制非常复杂,涉及兴奋性氨基酸毒性、氧自由基产生、钙超载、炎症反应等多个方面。中药清开灵注射液对脑血管病具有较好的临床疗效,因此对其药理作用机制的研究具有重要意义。该文综述了近年来新型复方中药——精制清开灵注射液治疗脑缺血的药理作用的相关研究,从调节炎症反应、神经营养因子、血脑屏障和血管保护及其他4个方面阐述了其单一有效组分及组分配伍治疗缺血性脑损伤的药理作用机制,为进一步研究提供参考。     

清开灵和甲基强的松龙注射液联合用药对油酸型急性肺损伤家兔的治疗作用

目的:观察静脉注射清开灵、甲基强的松龙(MP)注射液及其联合用药对油酸型急性肺损伤(ALI)家兔的影响。方法:家兔随机分为11组:对照组,油酸组,治疗组分别包括清开灵和MP注射液以及清开灵+MP注射液小、中、大剂量组。iv油酸(0.05mL·kg^-1)复制家兔ALI模型后,立即iv上述药液,观察给予油酸前及以后30,60,120min时的呼吸频率和幅度,于各时间点测定动脉血气含量;实验后处死家兔取肺组织,测定肺组织LDH,CAT和MDA的含量,及观察病理变化。结果:与油酸组比较,清开灵和MP注射液小、中、大剂量组的呼吸幅度显著升高、呼吸频率显著降低(P<0.05);治疗30min时,清开灵+MP注射液小、大剂量组的PaO₂显著升高(P<0.05),120min时,清开灵、MP及清开灵+MP注射液小、中和大剂量组的PaCO₂显著降低(P<0.05);清开灵、MP注射液中、大剂量组的LDH显著升高、CAT和MDA显著降低(P<0.05);清开灵+MP小、中剂量组可以减轻由油酸引起的病理改变。结论:清开灵+MP小剂量对油酸型肺损伤家兔的疗效优于同剂量下 的单独用药;而清开灵或MP大剂量单独给药的疗效优于同剂量下的联合用药。     

复方灯盏花滴丸对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的:探讨复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠原代海马神经了亡凋亡的保护作用及其作用机制.方法:采用中药血清药理学方法,制备含药血清;实验分为空白对照组、模型组、尼莫地平组(0.05 g·kg~(-1)),复方灯盏花滴丸高、低剂量组(5.00,1.25 g·kg~(-1)).原代培养大鼠乳鼠大腑海马神经元,以谷氨酸(终浓度为500μmol·L~(-1))作用20 min复制损伤模型,以5%含药皿清干预,MTT法测定细胞存活率,榆测细胞内Ca~(2+)浓度,Hoechst33342和PI双染法荧光显微镜观察神经细胞形态学变化和细胞坏死和凋亡百分率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:谷氨酸对原代培养的海马神经元有损伤作用,荧光显微镜观察到细胞核皱缩、碎裂及凋亡小体,海马神经元的存活率下降,坏死、凋亡明显高于对照组,复方灯盏花滴丸高、低剂量组和尼奠地平组能明显对抗谷氨酸引起的神经细胞形态改变,海马神经元存活率明显提高;复方灯盏花滴丸含药血清组细胞凋亡率较谷氨酸损伤组显著降低,细胞内钙超载明显减轻.结论:复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠海马神经元的凋亡具有保护作用,其作用机制可能与其能降低细胞内Ca超载有关.     

参麦注射液对大鼠脑出血后迟发性神经细胞损伤的保护作用

目的:观察参麦注射液对大鼠脑出血后迟发性神经细胞损伤的保护作用。方法:采用Rosenberg法复制大鼠脑出血模型,观察脑出血后大鼠海马CA1区神经细胞病理形态结构、神经细胞线粒体DNA缺失、C-myc基因、PDGFA基因表达及参麦注射液的防治作用。结果:参麦注射液减少大鼠脑出血后海马CA₁区锥体细胞凋亡数目,抑制血肿周围脑组织线粒体DNA片段缺失,参麦注射液对出血早期C-mycmRNA的表达无明显影响,但可使PDGFAmRNA表达明显下调并时限延长。结论:参麦注射液可能通过调节PDGF表达对脑出血后迟发性神经细胞损伤修复有保护作用。     

清开灵注射剂及其生产过程各中间体中氮的存在形式及含量分析

目的：确定清开灵注射液及其各中间体中氮的存在形式及含量。方法：使用日立L-8500氨基酸自动分析仪，填充分析柱(2.6 mm×50 mm)，日立2622 SC树脂，缓冲液流速0.4 mL·min^-1，茚三酮显色液流速0.3 mL·min^-1，柱温程序升温：57 ℃(0 min)~65 ℃(36 min)~57(50 min)，反应温度130 ℃。结果：清开灵注射液及其各中间体中的氮主要以游离型或结合型氨基酸的形式存在，其质量分数分别为水解液59.56%，板蓝根提取液24.88%，四混液41.84%，六混液13.49%，八混液14.63%；清开灵注射液及其各中间体中均含有结合型氨基酸，其质量分数分别为水解液9.33%，板蓝根提取液15.07%，四混液16.85%，六混液19.94%，八混液19.55%，清开灵注射液18.73%。结论：清开灵注射液中总氮主要来自水牛角和板蓝根。