人精子甘露糖受体对地鼠卵母细胞超微结构的影响

目的 研究人精子甘露糖受体(MR)在精卵融合中的作用.方法 去透明带金黄地鼠卵经不同浓度的纯化人精子MR作用后,用透射电子显微镜观察卵母细胞超微结构的变化.结果 MR作用卵母细胞后,卵母细胞内的皮质颗粒(CG)减少,并伴随有CG胞吐现象,同时卵母细胞表面的微绒毛数量减少.结论 MR作用于卵母细胞表面后,可触发CG胞吐,并促使卵母细胞表面微绒毛减少,提示MR在介导精子与卵母细胞识别与融合中起作用.     

人精子甘露糖受体纯化及其对受精能力的影响

目的　探讨人精子甘露糖受体 (MR)对受精能力的影响。　方法　采用改良的亲和层析法分离纯化 MR,L owry法测定其蛋白质浓度 ,在精子穿透试验 (SPA)模型中定量研究其对精卵融合能力的影响并检测其细胞生物学活性 ;以已知浓度的纯化甘露糖受体 (p MR)干预精子半透明带试验 ,观察用 p MR预处理半透明带对精子与透明带结合的影响。　结果　 (1) MR分子量为 6 7.8± 1.6 k D,1× 10 6 个精子中可分离纯化到 p MR 19.6± 7.1ng;(2 )人精子 p MR作用浓度为 0 .95μg/ m L能抑制人精子穿透金黄地鼠卵母细胞 (P <0 .0 5 ) ,浓度 >2 .86μg/ m L时完全抑制 (P<0 .0 5 ) ;(3)用浓度为 2 .84μg/ m L的人精子 p MR预处理透明带半膜 ,不能抑制精子与透明带的结合 (t=1.2 5 ,P<0 .0 5 )。　结论　人精子 MR在精子与透明带识别结合中可能不起介导作用 ,其对精卵融合能力可能具有影响。     

甘露糖及其相关分子对小鼠精子与透明带结合的影响

为探讨甘露糖及其受体在小鼠精子－透明带结合中的作用，小鼠附睾尾精子经Ｍ１６工作液获能培养２ｈ后，分别用ＤＭＡ（甘露糖基化的牛血清白蛋白）、Ｄ－甘露糖处理１５ｍｉｎ，然后与未作处理的带透明带卵子共培养３０ｍｉｎ；另２组卵子分别用甘露糖苷酶、Ｃｏｎ Ａ（植物凝集素）处理１５ｍｉｎ后分别与未作处理的获能精子共培养３０ｍｉｎ。卵子固定，在相差显微镜下计数各组卵子的精子结合数。结果表明：ＤＭＡ、Ｄ－甘露糖、     

甘露糖受体在小鼠精子中的表达及其在受精中的作用

为研究小鼠精子甘露糖受体的表达及其对受精的影响,采用FITC-DMA作为探针,对精子甘露糖受体(MR)进行定位,获能精子分别用DMA、D-甘露糖处理后和卵子共培养;或卵子分别用甘露糖苷酶、Con A处理后与获能精子共培养.在相差显微镜下计数各组卵子的精子结合数.结果显示小鼠精子头部呈现2种荧光标记:①整个精子头部有荧光标记:②赤道后区有荧光标记.DMA、D-甘露糖、甘露糖苷酶、con A对精子-透明带结合有显著抑制作用,而对精子-卵膜结合没有影响.说明甘露搪受体在精子-透明带相互作用中具有调节作用.     

受精前后地鼠卵母细胞皮质颗粒的变化

为观察人精子与地鼠卵异体受精前后,卵母细胞内皮质颗粒的变化,采用罗丹明偶联的兵豆凝集素标记受精前、受精30 min和3 h后金黄地鼠的去透明带卵母细胞,用激光共聚焦显微镜观察皮质颗粒的分布情况,结果显示,受精前卵母细胞内的皮质颗粒散在于卵质膜下和皮质区,受精后皮质颗粒数量减少,并发生边集.说明人精子与金黄地鼠卵异体受精时,可引起皮质颗粒向卵质膜靠拢并胞吐.     

纤连蛋白抗血清对人精子受精能力的影响

采用体外异种穿卵试验的方法，研究纤连蛋白抗血清对人精子受精能力的影响，统计不同浓度的纤连蛋白抗血清作用下的穿卵率变化。结果发现：低浓度的纤连蛋白抗血清能使人精子穿透去透明带金黄地鼠卵的穿卵率有所提高；高浓度的纤连蛋白抗血清则对人精子的穿卵率无影响。     

人精子甘露糖受体的表达及其与精子—透明带相互作用的关系

目的（1）探讨人精子甘露糖受体（MR）的表达与精子所处生理状态的关系。（2）研究MR在精子－透明带相互作用的作用。方法：（1）用人卵泡液（hFF)作为诱导获能和顶体反应（AR）的介质，继而以异硫氰酸荧光素（FITC）偶联的甘露糖基化牛血清白蛋白（DMA）为探针检测精子甘露糖受体的表达，同时用金霉素（CTC）荧光染色试验监测精子在受hFF作用后所处的获能和AR状态，并分析MR的表达与精子获能和AR的关系。（2）以MR的配基－DMA预先处理经过获能培养的精子，通过半透明带试验（HZA）观察DMA对精子－透明带结合的精子－透明带相互作用的关系。（3）在精子－透明带作用一段时间后加入DMA以进一步了解MR在精子－透明带识别与结合中的作用。结果：（1）hFF处理后，与体外获能6h组相比，两组间精子的获能（B型）率差别无意义（P＞0．05），AR率与MR表达率差别有意义（P＜0．05），（2）MR的表达与CTC监测的精子获能状态无关（P＞0．05），而与顶体反应状态呈正相关关系（P＜0．05），（3）DMA不能抑制精子与透明带的结合，却可以使初步与透明带结合的精子解除结合而脱落。（4）MR的表达率与透明带上的精子结合数无关（P＞0．05），结论：（1）hFF的诱导精子AR的同时促进精子表达MR。（2）MR的表达并非获能的本质及标志，而是AR贩．的结果：（3）MR的表达与精子－透明带的初次识别无关，而可能是在二次识别和和结合中作用。     

精子穿透试验技术改良（小管法体外授精及其效果评价）

精子穿透试验技术改良（小管法体外授精及其效果评价）江一平，余庆亮，李晓光，魏红红，谢美蓉，陈国华关键词：体外受精，方法学，金黄地鼠，人异种体外受精技术即人精子─金黄地鼠卵穿透试验（ＳＰＡ）是临床诊断不育症、男性生育力鉴定和生殖医学研究的优异手段，已得...     

Ca^2＋对人精子穿透无透明带金黄地鼠卵的影响

应用人精子穿透无透明带金黄地鼠卵（SPA）技术，在BWW培养液中分别以不同浓度的Ca^ （1．71mmol,3.42mmol,5.13mmol,1.71mmol和ETA0．50mmol,1.71mmol和EGTA1．71mmol),对10例人精液标本进行分析，研究Ca^ 对人精子体外获能和穿透无透明带金黄地鼠卵的生物学效应，同时用透射电镜观察精子的亚细胞结构变化。结果表明：对照组（Ca^ 1．71mmol)穿透率为82．2％，而试验组的穿透率显著降低（P＜0．01），分别为9．5％，0，17．2％，0。Ca^ 对人精子亚微结构的影响主要发生在精子的顶体和颈部。本试验初步表明Ca^ 与人精子获能和顶体反应存在着一定的依存关系，Ca^ 浓度过高（＞1．71mmol）或过低（＜1．71mmol)，对精子获和穿透能力都有明显的抑制作用。     

FVB小鼠精子冷冻及体外受精的研究

目的：探索FVB小鼠及FVB遗传工程小鼠种系保存的新途径.方法：用孕马血清和人绒毛膜促性腺激素（HCG）超排FVB小鼠,并分别用复苏精子和新鲜精子进行体外受精并将受精卵移植到假孕雌鼠输卵管中,比较两种精子的受精率;对注射HCG后13,15,17h不同时间采集FVB小鼠的卵母细胞进行体外受精,比较其受精率及体外培养至2细胞情况.结果：新鲜精子的受精率（62.4%）略高于冷冻复苏精子的受精率（58.1%）;在注射HCG 13～15 h后取FVB小鼠卵母细胞其受精率效果较好,受精率（60.2%、61.6%）显著高于17h取卵的受精率（51%）,但13,15,17 h采集卵母细胞体外受精后胚胎发育至2细胞及异常卵数无显著性差异.结论：本研究将为FVB小鼠及FVB遗传工程小鼠的种系保存、繁殖提供了基础.     

人未受精及受精未分裂卵母细胞超微结构研究

目的 应用透射电子显微镜观察人未受精及受精未分裂卵母细胞的超微结构,分析卵母细胞受精失败、受精后不分裂的原因.方法 分别将收集的体外受精(in vitro fertilization,IVF)及卵胞浆内精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)时受精失败、受精未分裂的卵母细胞进行固定、脱水、包埋、超薄切片,透射电子显微镜下观察超微结构.结果 常规IVF受精失败成熟卵母细胞主要呈现的超微结构:①透明带正常,但卵膜下未见皮质颗粒,精核呈浓缩状态,周围未见线粒体、滑面内质网(SER)泡等细胞器围绕;②透明带为异常紧密状结构,卵膜下有一层线形排列皮质颗粒,线粒体为其主要的细胞器,缺少SER集合管、SER泡等细胞器,有时可见透明带内存在顶体完整的精于.ICSI时未受精的第二次减数分裂中期(metaphaseⅡ,MⅡ)卵母细胞呈现的超微结构:①可见卵膜下一层线形排列皮质颗粒,SER集合管、SER泡常与线粒体相连;注射的精子已褪去核膜,部分染色质已去浓缩;②皮质颗粒极少或分散存在,未在卵黄膜下排列;缺乏线粒体、SER集合管等细胞器或者线粒体孤立存在.受精未分裂卵母细胞呈现的超微结构:卵周隙内可见皮质颗粒排放的皮质内容物,线粒体数量少,胞质内有许多小脂滴填满的脂褐体;环纹片层(annulate lamellae,AL)异常聚集且成丛分布于胞浆中.结论 常规IVF卵胞质中细胞器异常分布导致卵母细胞胞质不成熟影响其受精能力;透明带结构异常及诱导顶体反应缺陷可导致精子穿透障碍;卵母细胞激活失败与ICSI受精失败有关;脂褐体的出现及AL异常聚集与受精卵不分裂有关.     

人精子甘露糖受体表达的细胞生理状态

目的 探讨人精子甘露糖受体（MR）的表达与精子所处生理状态的关系。方法 对人精子进行体外获能和诱导顶体反应处理。以FITC－DMA为探针检测获能前后和诱导顶体反应精子的MR表达率，以CTC染色监控精子的生理状态，对MR表达的分类百分率与CTC染色的精子分类百分率作线性回归分析。结果 MR－Ⅱ、Ⅲ型表达率变化均与CTC监控的精子顶体反应率变化高度正相关，MR－Ⅱ型与获能负相关。结论 MR的表达反映了精子的顶体反应状况而非获能状况，MR表达不是精子获能的标志而是部分发生顶体反应精子的伴随现象。     

蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的影响

目的研究蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的影响。方法用人精子穿透经不同浓度的蛋白水解酶抑制剂处理过的去透明带蛙卵,观察对穿卵率的影响。结果(1)在人精子获能期,1.0×10-3mol.L-1天花粉抑制剂可使人精子的穿卵率明显下降(P<0.01),而同样浓度的慈姑抑制剂,作用不明显。(2)去透明带蛙卵用抑制剂预处理0.5 h,被获能精子的穿卵率和未用抑制剂处理的卵子相似。(3)在获能后的人精子和去透明带蛙卵孵育期,两种抑制剂的浓度为0.5×10-3mol.L-1或1.0×10-3mol.L-1时精子的穿卵率明显下降。(4)在人精子获能期及人精子/去透明带蛙卵孵育期,两种抑制剂的浓度为1.0×10-3mol.L-1时,均使精子的穿卵率下降(P<0.01),而抑制剂浓度为1.0×10-4mol.L-1时,作用不明显。结论蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的穿透能力有显著影响,但不影响精子的活力,提示精子穿透卵子的酶体系受蛋白酶抑制剂的影响。     

二硫化碳对人精子染色体畸变率的影响

本文报道了人精子在体外经二硫化碳染毒后，与去透明带金黄地鼠卵受精，体外培养，然后制各人精子染色体。作者观察和分析了人精子染色体的畸变率。结果表明染毒组（２５０μｇ／ｍｌ）染色体畸变率为１４．００％，与阴性对照组（５．３０％）比较，虽有升高，但无显著统计学差异（Ｐ＞０．０５）。     

应用FITC—PSA荧光标记法检测人精子顶体结构及功能的初 …

目的：测定人类精子顶体结构及功能来探讨人精子的授精能力。方法：应用络合异硫氰酸荧光素的豌豆凝集素（ＦＩＴＣ－ＰＳＡ）进行精子顶体荧光票标记，分别测定５６例不育患者及３８例正常生育男子的精液标本，比较两组间精子顶体完整率，精子－透明带结合的差异。结果：正常生育组的顶体寒带率及精子－透明带结合率均显著高于不育组（Ｐ〈０．０１）。结论：ＰＩＴＣ－ＰＳＡ荧光标记法操作简便，技术结果可靠，特异性强，具有良好     

精子形态学、精子-透明质结合试验与体外受精率的相关性研究

目的探讨精子形态学、精子-透明质结合试验（hyaluronan binding assay,HBA）与体外受精率的相关性。方法对体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transportation,IVF-ET）中精子形态学155例和精子-透明质结合试验38例进行分析,分别观察女方MⅡ卵子1509个和327个,记录受精和未受精卵的数目,并分析精子正常形态率、精子-透明质结合试验结合率和受精率的相关性。结果精子正常形态率≤5%、6%～14%、≥15%对应的MⅡ卵子受精率分别为48.05%、72.25%、81.79%,各组间相比较,差异有显著性（P〈0.05）。精子-透明质结合试验的结合率≤40%、41%～69%、≥70%对应的MⅡ卵子受精率分别为55.17%、72.07%、75.31%,≤40%组和其它两组间相比较,差异有显著性（P〈0.05）,另两组间相比较,差异无显著性（P〉0.05）。结论在体外受精过程中,精子正常形态率与卵子的受精率有明显的相关性,而精子-透明质结合试验的结合率与卵子受精率有一定程度的相关性,此两项参数可作为选择不同的辅助生殖技术[体外受精（in vitro fertilization,IVF）或胞浆内单精子显微注射术（intracytoplasmic sperm injec-tion,ICSI）]的依据。     

部分卵子单精子注射在体外受精中的必要性探讨

目的探讨在体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中特殊情况下对部分卵子实行卵胞浆内单精子显微注射（Half ICSI）的必要性。方法回顾性分析2004年1月～2007年12月间在我院行Half ICSI的31个周期并将其作为研究组，将31个周期所有的卵子417个分为两个亚组，A组：行常规IVF-ET组214个卵子；B组：ICSI组203个卵子。分析两组受精率、卵裂率、优质胚胎获得率（优质胚胎彩卵子数），并且将同期在我院接受常规体外受精-胚胎移植（IVF-ET）连续427个周期及卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）连续102个周期作为对照组。结果A组受精率、卵裂率及优质胚胎获得率显著低于B组，其中有7例完全不受精，11例受精率≤30％；研究组A组受精率、卵裂率、优质胚胎获得率明显低于对照组，但研究组（A组＋B组）妊娠率与对照组相比无显著性差异。结论在体外受精胚胎移植中如精子数量及质量在IVF—ET及ICSI指征的临界值之间或取卵日精液与术前检查不符等特殊情况，选择部分卵子行单精子显微注射可以有效地预防因完全不受精及受精率过低导致的无胚胎移植及妊娠率下降。     

精子受精机能的实验研究

本实验应用 Balb/c 小鼠卵代替仓鼠卵作人精子穿透试验;用 ConA-Au 探针显示精子和卵表面的 ConA 受体。实验表明人精子穿透率,能育者为14.8%,不育者为10.32%,经抗精子抗体处理的为5.5%。小鼠精子表面 ConA-Au 标记主要分布在头部,特别是顶体前端和顶体后区,当获能和顶体反应时,前者标记减少;在此相当时期,人精子顶体外膜、内膜及顶体后区也出现标记。结果提示顶体后区在受精中具有重要意义。经 D-甘露糖或抗精子抗体处理及免疫不育者的精子均未被 ConA-Au 标记。小鼠卵透明带表面见有少量 ConA-Au 标记,去透明带后,卵膜上未见标记。本文对精子与卵识别机制作了讨论。     

多精受精对人精子核发育和染色体制备的影响

对人精子与去透明带金黄地鼠卵受精后的570个异合卵进行了分析，实验结果表明，随着进入异合卵中精子数目的增加，精子核停留在肿大精子头和原核阶段的比例逐渐增高，发育至第1次卵裂的比例逐渐减少，可分析核型形成率亦逐渐降低。研究结果提示在人精子染色体研究中，为了获得更多可分析核型，应当尽可能地避免4精和4精以上的多精受精并想法提高1精、2精和3精在异合卵中的比例。     

游离细胞甘露糖受体的亲和细胞化学电镜观察

目的 对小鼠腹腔巨噬细腻及人精子的甘露糖受体（ＭＲ）进行超微结构定位。方法 采用甘露糖基化牛血清白蛋白（ＤＭＡ）结合１０ｎｍ胶体金制备探针ＤＭＡ－Ｇ１０,以此探针标记小腹腔巨噬细胞和获能前后的人精子,并用疼爱 射电子显微民制备的ＤＭＡ－Ｇ１０具有基露糖基结合特性。小鼠腹腔巨噬细胞可分为明、暗中类型。“暗细胞”不含ＭＲ,“明细胞”细胞膜表面含ＭＲ,该受体与ＤＭＡ－Ｇ１０结合后内化入细胞内。人 子发生