系统性红斑狼疮患者IRF5、TLR-9基因表达的研究

目的 研究IRF5、TLR-9基因表达水平与系统性红斑狼疮的相关性.方法 收集92例SLE患者与88名正常对照人群的外周血,提取总RNA并反转录为cDNA,以实时荧光定量聚合酶链反应方法检测患者组和对照组的IRF5、TLR-9的mRNA表达水平.结果 SLE患者外周血IRF5、TLR-9 mRNA的表达分别是0.232±0.076、0.189±0.054,与对照组相比,SLE患者IRF5、TLR-9 mRNA表达水平升高（P〈0.05,P〈0.05）.结论 SLE患者外周血IRF5、TLR-9表达异常,可能在SLE发病中起一定作用.     

CTLA-4基因CT60标记与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）基因CT60标记与系统性红斑狼疮（SLE）的相关性。方法利用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）对45例SLE患者和63名健康对照者进行CT60基因分型。采用荧光定量（FQ）-PCR法进行3＇-非翻译区（3’-UTR）微卫星阵列（AT）n多态性基因分型，对CTLA-4基因3’-UTR微卫星阵列（AT）n与-1722T／C、-319C／T、＋49A／G基因多态性进行分析，以求证CTLA-4单倍型与SLE的关系。结果在CT60A／G分型中，SLE患者AA基因型频率明显低于对照组（20．0％ vs 25．4％），P=0．003，校正后P（Pcorr）=0．009，优势比（oddsratio，OR）-0．58，95％CI 0．40-0．85。即病例组G基因表型频率高于对照组（80．0％ vs 74．6％），P=0．009，Pcorr=0．006，OR=1．71，95％CI 1．18～2．49。患者组与对照组的等位基因频率分布也明显不同（P=0．01），Pcorr=0．02，OR（等位基因G）=1．32，95％CI 1．06～1．65。结合不同基因多态性资料进行分析后，发现2个中性单倍型基因：＋49A；（AT）7；CT60A和＋49G；（AT）8～19；CT60G。此外，也发现易感性单倍型基因＋49A；（AT）〉19；CT60G。结论CTLA-4基因3＇-UTR为SLE易感性基因片段。     

IRF5rs2004640基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的研究山东地区汉族人群干扰素调节因子5（IRF5）基因rs2004640单核苷酸多态性,探讨其与系统性红斑狼疮易感性之间的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性等方法对92例系统性红斑狼疮患者和88名健康对照IRF5基因rs2004640G／T多态性进行分析,计算基因型和等位基因频率。结果SLE患者IRF5rs2004640GG、GT、TF基因型频率分别是0．198、0．521和0．281,与对照组有显著差异（x^2=8．73,P〈0．05）;SLE患者IRF5 rs2004640T、G等位基因的频率分别为0．402、0．598,与对照组有显著差异（x^2=7．41,P〈0．01）。结论山东汉族人群IRF5基因位点rs2004640的多态性,可能与山东地区汉族人群SLE的易感性有关。     

系统性红斑狼疮IRF-5和TLR-9mRNA的表达

目的 分析山东地区汉族人群IRF-5基因及TLR-9基因在系统性红斑狼疮患者体内的表达情况,以探讨其与系统系红斑狼疮的关系.方法 以实时荧光定量聚合酶链反应方法检测92例系统性红斑狼疮患者和88例健康对照者IRF5及TLR-9基因表达水平（以2-⊿⊿Ct表示）.结果 系统性红斑狼疮患者体内IRF5及TLR-9 mRNA明显高于健康对照者,且具有统计学意义（p〈0.05）.结论 IRF-5、TLR-9基因可能在SLE发病中起一定作用.     

IRF5 rs10954213基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的研究山东地区汉族人群干扰素调节因子5（IRF5）基因rs10954213单核苷酸多态性,探讨其与系统性红斑狼疮易感性之间的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性等方法对92例系统性红斑狼疮患者和88名健康对照IRF5基因rs10954213G/A多态性进行分析,计算基因型和等位基因频率。结果SLE患者IRF5rs10954213GG、GA、AA基因型频率分别是0.318、0.409和0.273,与对照组间有显著差异（χ2=6.36,P〈0.05）;SLE患者IRF5rs10954213A、G等位基因的频率分别为0.609、0.391,与对照组有显著差异（χ2=6.26,P〈0.05）。结论山东汉族人群IRF5基因位点rs10954213的多态性,可能与山东地区汉族人群SLE的易感性有关。     

CTLA-4基因CT60标记与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)基因CT60标记与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)对45例SLE患者和63名健康对照者进行CT60基因分型。采用荧光定量(FQ)-PCR法进行3′-非翻译区(3-′UTR)微卫星阵列(AT)n多态性基因分型,对CTLA-4基因3-′UTR微卫星阵列(AT)n与-1722T/C、-319C/T、+49A/G基因多态性进行分析,以求证CTLA-4单倍型与SLE的关系。结果在CT60A/G分型中,SLE患者AA基因型频率明显低于对照组(20.0%vs25.4%),P=0.003,校正后P(Pcorr)=0.009,优势比(odds ratio,OR)=0.58,95%CI 0.40~0.85。即病例组G基因表型频率高于对照组(80.0%vs74.6%),P=0.009,Pcorr=0.006,OR=1.71,95%CI 1.18~2.49。患者组与对照组的等位基因频率分布也明显不同(P=0.01),Pcorr=0.02,OR(等位基因G)=1.32,95%CI 1.06~1.65。结合不同基因多态性资料进行分析后,发现2个中性单倍型基因:+49A;(AT)7;CT60A和+49G;(AT)8~19;CT60G。此外,也发现易感性单倍型基因+49A;(AT)>19;CT60G。结论CTLA-4基因3-′UTR为SLE易感性基因片段。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞干扰素诱导的蛋白10mRNA表达的临床价值

目的 探讨外周血单个核细胞（PBMCs）干扰素诱导的蛋白10（IP-10）mRNA表达与系统性红斑狼疮（SLE）活动的关系。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测46例SLE患者、20例类风湿关节炎（RA）患者、11例非SLE肾损伤患者及20名正常健康人PBMCSIP-10mRNA表达。结果 SLE活动组PBMCSIP-10mRNA表达水平与非活动组间的差异有统计学意义（P〈0．01），活动性狼疮肾炎（LN）组与无肾损伤组之间PBMCSIP-10mRNA表达水平的差异亦有统计学意义（P〈0．05），而RA组和非SLE肾病组患者与正常对照组水平相近似（P〉0．05）。血清IP—10水平与PBMCSIP-10mRNA表达高度正相关（r=0．8971，P〈0．01）。PBMCSIP-10mRNA表达水平与狼疮病活动指数（SLEDAI）评分呈正相关（r=0．6837，P〈0．01），与肾SLEDAI评分亦高度正相关（r=0．7260，P〈0．01）。结论 SLE活动时期PBMCSIP-10mRNA表达增加，与SLE疾病活动状况相关，尤其与LN的活动状况密切相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Brn-3a mRNA表达水平的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中Brn-3a mRNA 表达及其与疾病活动性的关系.方法 以β-actin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测92例SLE患者(活动期46例,缓解期46例)、其他结缔组织病(CTD)患者30例(疾病对照组)、健康体检者30例(正常对照组)外周血单个核细胞(PBMCs)中Brn-3a mRNA 的表达水平和含量.以ΔCt=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平明显高于缓解期SLE患者(P<0.01);活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平明显高于正常对照组与疾病对照组(P<0.01);缓解期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平与正常人及疾病对照组差异无统计学显著性意义(P>0.05).结论 活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示Brn-3a的表达与SLE的发生发展存在一定关联性,可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性有关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中ISGl5mRNA表达水平的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中ISG15mRNA表达及其与疾病活动性的关系。方法采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）的方法，在Light Cycler RealtimePCR检测仪上检测89例SLE患者（活动期50例、缓解期39例）、结缔组织病（CTD）患者34例（疾病对照组）、健康体检者35名（健康对照组）外周血PBMCs中ISG15mRNA的表达水平和含量。以△Ct=Ct（待测基因）-α（内参基因）来比较基因表达水平的变化。结果活动期SLE患者ISG15mRNA表达水平（ACt=2．04&#177;1．07）明显高于缓解期SLE患者（△Ct=5．48&#177;1．72，t=11．572，P〈0．01）；活动期SLE患者ISC15mRNA表达水平（△Ct=2．04&#177;1．07）明显高于疾病对照组（△Ct=5．90&#177;1．72，t=12．69，P〈0．01）和正常对照组（△Ct=5．66&#177;1．63，t=12．359，P〈0．01）；缓解期SLE患者ISG15mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无显著性（P〉0．05）。SLE患者FBMCs中ISGl5mRNA的表达水平与SLE疾病活动评分指数（SLEDAI）评分及抗双链DNA抗体呈显著正相关（均P〈0．n1），与补体C3、C4呈显著负相关（均P〈0．01）。结论活动期SLE患者ISG15mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期，提示ISG15的表达可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性显著相关。     

系统性红斑狼疮患者干扰素诱导基因IFITM1、IFITM2和IFITM3表达的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中3个干扰素(IFN)诱导基因(IFITM1,IF-ITM2和IFITM3)的表达及其与SLE疾病活动度的相关性。方法运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测30例SLE患者与25名健康对照者的IFITM1、IFITM2、IFITM3mRNA表达水平,并且分析它们与补体C3、C4、抗dsDNA抗体及SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分的相关性。结果 (1)SLE组与正常对照组相比,IFITM1、IFITM2、IFITM3mRNA表达显著增高(分别为P<0.0001,P=0.003,P=0.002);(2)IFITM1、IFITM2、IFITM3mRNA表达水平之间呈显著正相关;(3)SLE组IFITMl、IF-ITM3mRNA表达水平均与补体C3、C4呈显著负相关(r<-0.5,P<0.05),与dsDNA、SLEDAI积分不相关。IFITM2与补体C3、C4、dsDNA及SLEDAI积分均无相关性。结论 SLE患者IFITM1、IFITM2、IFITM3的表达水平在SLE患者中显著增高,并且IFITMl、IFITM3与补体C3、C4呈显著负相关,对SLE患者的诊断和病情评估可能有一定价值。     

Pdcd5基因在多发性骨髓瘤患者中的异常表达

本研究探讨骨髓瘤患者骨髓细胞中pdcd5基因的表达。应用ELISA方法和实时定量逆转录．聚合酶链反应（real—time quantitative RT-PCR,RQ—RT-PCR）技术,检测多发性骨髓瘤（MM）患者及正常人PDCD5蛋白和基因的表达,比较pdcd5基因的表达与患者临床特征的关系。结果表明：45例初治及难治复发MM患者血浆PDCD5蛋白水平显著低于20例健康人和20例治疗有效患者,分别为（16．91±0．28）ng／ml,（19．11±0．29）ng／ml,（17．94±0．154）ng／ml（P均〈0．05）。45例初治及难治复发MM患者骨髓细胞pdcd5基因表达量显著低于正常人,分别为0．64±0．47和1．28±1．21,P〈0．05。结论：多发性骨髓瘤患者低表达PDCD5,pdcd5基因可能参与了MM的发病机制。     

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞与U266细胞中ICSBP/IRF8基因表达沉默的初步研究

本研究旨在探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266和MM患者骨髓单个核细胞(MM-BMMNC)中干扰素调节因子8(ICSBP/IRF8)的表达,及DNA甲基化与ICSBP/IRF8表达沉默的关系。选取U266细胞株及10例MM患者MM-BMMNC,同时提取10例正常人骨髓单个核细胞(N-BMMNC)为对照。用荧光定量PCR测定ICSBP/IRF8的表达(利用2-ΔΔCT进行计算);利用甲基化特异性PCR检测ICSBP/IRF8启动子序列甲基化程度(以目的基因ICSBP/IRF8与内参照β-actin表达量的比值作为结果)。结果发现,与N-BMMNC相比,ICSBP/IRF8在U266细胞和MM-BMMNC中表达低下,且ICSBP/IRF8启动序列CpG岛甲基化程度明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:MM-BMMNC和U226细胞中ICSBP/IRF8基因表达沉默,ICSBP/IRF8启动序列CpG岛甲基化程度较正常显著增高,说明DNA甲基化可能造成了ICSBP/IRF8表达沉默。结果初步提示ICSBP/IRF8与MM的发生和发展机制可能有密切联系。     

多发性骨髓瘤病人骨髓细胞中Cmtm5基因异常低表达

本研究检测cmtm5(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing member5)基因在多发性骨髓瘤(MM)骨髓细胞中的表达水平,并探索其与临床特征的关系。应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative RT-PCR,RQ-RT-PCR)技术检测MM患者骨髓细胞、MM细胞系及正常人骨髓细胞cmtm5基因的表达。以cmtm5拷贝数与abl拷贝数的比值表示cmtm5基因的相对表达水平。结果表明,51例初治及难治复发MM患者骨髓细胞cmtm5表达量(0.047±0.062)显著低于20例正常人骨髓细胞cmtm5表达量(0.255±0.333,p0.01)。ISSⅢ期患者组cmtm5基因表达量(0.034±0.034)显著低于ISSⅠ期患者组的表达量(0.103±0.109,p0.01)。两种人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226及CZ1的cmtm5基因表达量(为0.014±0.009、0.004±0.006)均低于正常人骨髓细胞。15例治疗有效患者的cmtm5基因表达量与治疗前及复发时相比显著升高(0.020±0.005;0.227±0.038,p0.01)。cmtm5基因的表达量与骨髓浆细胞比例呈负相关(r=-0.307,p0.05),而与性别、年龄、血红蛋白水平、M蛋白量、免疫球蛋白分型、IgH是否阳性等没有明显的相关性。结论:多发性骨髓瘤患者骨髓细胞cmtm5基因表达水平降低,且与ISS分期有关,与骨髓浆细胞数呈负相关,此结果说明cmtm5基因在MM的发病机制中发挥一定作用。     

Wnt5a基因在血液病及白血病细胞株中的表达

本研究观察Wnt5a在部分血液病及白血病细胞株中的表达情况,为进一步研究Wnt5a在血液肿瘤中的作用及其机制打下基础。用人淋巴细胞分离液分离外周血和骨髓单个核细胞,以RT-PCR检测31例病例标本及3种白血病细胞株中Wnt5a的表达。结果表明:5例AML中4例均为阴性或弱阳性,仅1例完全缓解的病例表达呈强阳性。K562、HL-60细胞的Wnt5a表达也为阴性,Jurkat细胞的Wnt5a表达阳性。6例CML的Wnt5a表达均为阴性。4例ALL中3例为表达阳性或弱阳性,1例表达为阴性;2例CLL为阴性表达;2例MM中Wnt5a表达1例为弱阳性,1例为阴性;3例淋巴瘤中有1例为弱阳性,2例为阴性;2例AA、2例IDA、3例ITP、1例ET及PVWnt5a表达均为阳性或弱阳性。结论:在31例血液病标本及髓系白血病细胞株中,除ALL外,有明显的Wnt5a表达缺失或降低,而非恶性血液病例中Wnt5a表达普遍呈阳性,提示Wnt5a的表达下调可能与髓系白血病的发生有关。     

凋亡相关基因PDCD5表达与SLE临床相关性的研究

目的:通过检测程序化细胞死亡因子5(programmed cell death 5,PDCD5)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中的表达,探讨其与SLE发生与发展、自身抗体产生和肾脏损伤的关系.方法:采用RT-PCR和Western blot法,分别从mRNA和蛋白质水平检测PDCD5在67例SLE患者和50例健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中的表达.结果:SLE活动期患者PDCD5的阳性表达率和表达水平显著高于健康对照组(P＜0.01);活动期惠者PDCD5的表达水平显著高于稳定期患者(P＜0.01),阳性表达率相比差异无显著性;SLE稳定期患者PDCD5的表达量显著高于健康对照组(P＜0.01),但阳性表达率差异也无显著性.有2种或2种以上自身抗体阳性的SLE患者PDCD5表达量显著高于有1种或无自身抗体阳性的SLE患者(P＜0.01);SLE活动期合并狼疮性肾炎患者和无合并狼疮性肾炎患者的PDCD5表达差异无显著性(P＞0.05).结论:SLE患者PBMC中PDCD5的表达上调,活动期患者升高更为明显,提示PDCD5可能通过增加表达量而导致异常的淋巴细胞凋亡参与SLE发生和发展.     

磁刺激对大鼠神经干细胞CDK5基因表达的影响

目的：研究脉冲磁刺激对离体神经干细胞内CDK5蛋白和基因表达的影响。方法：神经干细胞克隆在体外培养传代后，置于0．5Hz，1．44T的磁刺激，每天1次，30个脉冲；作用3d后诱导分化，用CDK5的特异性引物对诱导分化后0、48和72h的神经干细胞进行RT—PCR分析，并用Western—Blot法检测神经干细胞中CDK5蛋白的表达。结果：通过RT-PCR可见，对照组CDK5在分化前已有表达，随着分化的进展，CDK5的表达逐渐增强，至48h达高峰，然后逐渐减低；磁刺激组与对照组呈现相同的趋势，但在不同时间点CDK5的表达均高于对照组。Western-Blot显示神经干细胞中CDK5蛋白的表达与RT-PCR的结果一致。结论：0．5Hz，1．44T磁刺激能够促进神经干细胞分化时CDK5基因和蛋白表达，这可能是磁刺激促进神经干细胞向神经元方向分化的机制之一。