应用CSP基因型简捷PCR鉴定法对间日疟原虫分型的初步评价

目的 初步评价CSP基因型简捷PCR鉴定法在对间日疟的虫进行分型时的实用性。方法 利用套式等位特异PCR,检测间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因结构多态,以产生的多样性DNA片段作为对间日疟原虫分型的依据。结果 经检测42份被镜检确诊为间日疟滤纸血样,被分型33份,分型率为78.57%,温带型占30.30%(10/33),热带型占69.70%(23/33),未检到PV-Ⅱ型间日疟原虫,当第二次33份血样检测时93.94%(31/33)被分型,其分型符合率为77.42%(24/31)。结论 该方法简便,快速,且分型不受采血时机限制,但作为云南间日疟的分型方法时,其稳定性仍需提高。     

广东省中山市间日疟原虫CSP基因型初步调查

应用改良的Ｃｈｅｌｅｘ－１００滤纸处理法对广东省中山市４０例间日疟病人滤纸血标本进行处理后经ＰＣＲ扩增,根据扩增结果判别ＣＳＰ基因型。结果４０例全部为ＰＶ－Ⅰ型温带族,未发现有ＰＶ－Ⅰ型热带族和ＰＶ－Ⅱ型病例。表明广东省中山市间日疟病人所感染的疟原虫优势虫株为ＰＶ－Ⅰ型温带族。     

广东省中山市间日疟原虫CSP基因型初步调查

应用改良的Chelex-100滤纸处理法对广东省中山市40例间日疟病人滤纸血标本进行处理后经PCR扩增,根据扩增结果判别CSP基因型。结果40例全部为PV-Ⅰ型温带族,未发现有PV-Ⅰ型热带族和PV-Ⅱ型病例。表明广东省中山市间日疟病人所感染的疟原虫优势虫株为PV-Ⅰ型温带族。     

海南省间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型及地理分布

目的 确定海南省疟区间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因型及地理分布,为制定合理的防治对策提供科学依据。方法 采用套式等位特异聚合酶链反应（PCR）技术,检测在海南省疟区内感染的间日疟病人滤纸血滴样本。结果 在99份受检血样中,有54份显示约700bp和约180bp二条扩增带,为温带族虫株,占54.54%;33份显示约700bp扩增带,为热带族虫株,占33.33% ;12份显示约700bp和588bp两条扩增带,为PV-2型虫株,占12.12%。结论 海南省流行的间日疟原虫CSP呈多态性,且存在地理分布差异。     

中缅边境间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型

根据间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因设计特异分型引物,利用巢式PCR技术(Nested-PCR)对采自中缅边境的间日疟患者血样作分型鉴定。检出的174份血样中,PV-I型热带族占54.6%(95/174)、温带族占35.6%(62/174)、PV-II型占2.9%(5/174)、混和感染占6.9%(12/174)。表明中缅边境的间日疟原虫存在4种基因型,以热带族为优势虫株,缅甸拉咱与云南腾冲间日疟原虫CSP基因型构成无差异(χ2=3.381,P0.05)。     

海南省间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型及地理分布

目的确定海南省疟区间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因型及地理分布,为制定合理的防治对策提供科学依据.方法采用套式等位特异聚合酶链反应(PCR)技术,检测在海南省疟区内感染的间日疟病人滤纸血滴样本.结果在99份受检血样中,有54份显示约700 bp和约180 bp二条扩增带,为温带族虫株,占54.54%;33份显示约700bp扩增带,为热带族虫株,占33.33%;12份显示约700 bp和588 bp两条扩增带,为PV-2型虫株,占1 2.1 2%.结论海南省流行的间日疟原虫CSP呈多态性,且存在地理分布差异.     

间日疟原虫MSP-1和CSP基因遗传多样性的分析

目的 比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP-1和CSP)的遗传多样性。方法 分别用MSP-1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株，并进行基因多态性比较和分析。结果 共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样，MSP-1等位基因型混合感染率为18．75％，平均克隆数1．16；CSP基因型混合感染率为35．29％，平均克隆数为1．47。如果同时考虑两种基因型，混合感染率则为50．0％。空间对应分析发现，热带族与Sal-1型关系密切，PvⅡ型与重组Ⅲ型分布靠近，其他基因型则较分散。结论 同时用MSF-1和CSP两种分子标志检测间日疟原虫，其基因型混合感染率高于用单一标志检测，两种标志检测结果存在一定对应关系。     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的：了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。方法 用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样31份，Chelex-100离子交换法用于提取滤纸血样中的DNA，改进的套式－等位特异－PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增，分析和鉴定。结果 在19份广西当地间日疟病例血样中17份鉴定为温带族虫株（89．5％），2份为热带族株（10．5％）；12份输入病例血样中，温带族8份（66．7％），热 带型3份（25．0％）PV－2型1份（8．3％）。结论 目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主，少数热带族病例出现在环江和防城县，但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

我国间日疟原虫基因型种群结构及其地理分布

目的　用分子技术调查中国间日疟原虫种群结构与地理分布。　方法　用滤纸血滴法采集我国 10个省 (自治区 )间日疟现症病人血样 ,用套式 、半套式 等位特异PCR基因分型法鉴定其型、族归属及其CSP基因型 ,并作流行病学统计分析。　结果　在 384个间日疟原虫分离株中 ,检出温带族 2 5 8株 ,分为 14个不同的(等位变异 )基因型 ,遍布全国各省 ,其中主带≤ 731bp的基因型仅见于南方 5省 ;热带族 79株 ,分为 5个不同基因型 ,分布于北纬 2 5°以南的 5个省 (自治区 ) ;PV 2型 16株 ,包括 2个基因型 ;另 33个分离株为不同型(族 )或不同基因型虫株的重复 (混合 )感染。　结论　目前我国北纬 2 5°以北各省是单一温带族间日疟原虫分布区 ,北纬 2 5°以南地区是温带族与热带族间日疟原虫重叠分布区 ,其中海南和云南两省局部地区同时尚存在PV 2型 ;温带族内存在地理分布明显不同的 2个基因类群。     

辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型分析

目的探讨辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的基因型与地理分布。方法采集镜检确诊的间日疟患者血样15份,Chelex-100离子交换法提取DNA,进行单管-套式PCR扩增,根据琼脂糖凝胶电泳结果判定环子孢子蛋白(CSP)基因型别。结果 12份本地感染间日疟血液标本中6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族虫株(占50.00%),6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型混合虫株(占50.00%);3例输入性间日疟病例中PV-Ⅰ型热带族和温带族各1例,PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型虫株混合感染1例。结论目前辽宁省间日疟原虫存在2种CSP基因型,即PV-Ⅰ型温带族虫株和温带族、PV-Ⅱ型混合感染虫株,无热带族虫株。     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的鉴别研究

[目的 ]建立间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因分型法用于地理株的鉴定。[方法 ]Chelex 10 0离子交换法提取滤纸血样中的微量DNA ;套式PCR和等位特异PCR技术、琼脂糖电泳分析法、斑点印迹和Southern印迹 探针杂交技术分别用于判别性片段的扩增、分析和鉴定。[结果 ]用本文描述的套式 等位 特异PCR分型法 ,从一小片滤纸血样提取的微量DNA中 ,扩增出不同长度范围的 3种判别性片段 :6 5 0～ 770bp(间日疟种特异 ) ,15 0～2 30bp(温带族特异 ) ,5 88～ 6 15bp(PV 2型特异 )。用本法检测参考虫株出现的带型和长度与设计的靶序列完全吻合。检测 5 9份国内感染血样 ,42份鉴定为温带族虫株 ,15份为热带族虫株 ,2份为PV 2型虫株。 4份境外感染血样中 ,2个巴基斯坦分离株均为温带族 ,缅甸和老挝各 1株均为热带族虫株。 [结论 ]①本法能同时区分PV 1型 ,PV 2型以及温带族与热带族虫株 ,且较现有 (PCR 探针杂交 )法更为简便、快捷 ;②现场血样初步检测结果显示 :我国存在PV 1型 (温带族与热带族 )虫株和PV 2型虫株 ,也可能存在温带族东南亚组虫株。     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的　了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。　方法　用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样 31份 ,Chelex- 10 0离子交换法用于提取滤纸血样中的 DNA,改进的套式 -等位特异 - PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增、分析和鉴定。　结果　在 19份广西当地间日疟病例血样中 17份鉴定为温带族虫株(89.5 % ) ,2份为热带族虫株 (10 .5 % ) ;12份输入病例血样中 ,温带族 8份 (6 6 .7% ) ,热带型 3份 (2 5 .0 % ) ,PV- 2型 1份(8.3% )。　结论　目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主 ,少数热带族病例出现在环江和防城县 ;但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因片段的扩增应用于诊断间日疟感染的研究

根据间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因序列，设计并合成间日疟原虫特异性引物一对，采用聚合酶链反应技术，进行间日疟原虫感染的检测。结果：（１）从间日疟原虫患者的全血ＤＮＡ中扩增出约７７２ｂｐ的基因片段，经限制性内切酶切，证实为间日疟原虫ＣＳＰ基因片段；（２）与间日疟原虫亲缘关系相近的三株恶性疟原虫、弓形虫、利什曼原虫和正常人全血核酸抽提物经扩增后均未见特异性的扩增条带；（３）该检测体系可检测出间日疟原虫感染血样中２．８虫／μｌ血的水平；（４）将该检测体系用于深圳地区及湖北随州地区间日疟感染患者血样的检测，１４７份患者的血样中１４４份检出阳性，可见一条特异性扩增带，与镜检的符合率达９８％，而２０正常人血样均为阴性。上述结果表明该法灵敏、特异且稳定性好，适用于间日疟感染的检测。     

湖北省间日疟原虫分离株环子孢子蛋白部分序列分析

目的 :为了确定湖北省间日疟原虫虫株环子孢子蛋白 ( CSP)的分型和探讨 CSP多态性的生物学特征。方法 :采用常规的克隆和 Sanger链终止法 ,首次对湖北省间日疟原虫的环子孢子蛋白 ( CSP)基因测序。结果 :HB2株 CSP基因的 N- C-端非重复区包括重复区后可变区核苷酸序列与北朝鲜 ( NK)株和中国株 ( CH2 - CH7)相同 ,而中央前后重复区则有较大变异。在 HB2 CSP中央前后重复区 ,有 8种变异型。与其它已发表的间日疟原虫 CSP核苷酸序列相比 ,重复体 GNGAG-GQP/AA和重复后可变区有明显的地理学特征。此外同一份 HB2 CSP基因 PCR产物克隆后获得含两个大小不等插入片段的阳性克隆 ,分别为 0 .75kb和 1.1kb。两者非重复区的核苷酸序列相同 ,在中央前后重复区除了重复数次不同外 ,仅有 3处隐性核苷酸变异和 1处显性核苷酸变异。结论 :CSP基因变异 ,尤其是重复区的变异不仅与 DNA聚合酶的自身作用有关 ,而且还可能牵涉到间日疟原虫潜伏期的改变。     

不同地区间日疟原虫环子孢子蛋白基因两侧翼DNA序列的比较

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术、引物标记周期反应测序法和自动核酸序列分析仪直接测定我国和３个西太平洋国家共１８个间日疟分离株的环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因两侧翼ＤＮＡ序列，并与ＢＺＬ、Ｂｅｌｅｍ、Ｓａｌ－１、Ｎ．Ｋ．和Ｔｈａｉ等地区株进行比较。结果表明不同地区间日疟ＣＳＰ基因Ｎ端和Ｃ端非重复序列高度保守；１８个分离株与５个地区株的上述序列基本一致。但在Ｃ端可变区则有较多变异，包括一些尚无记载的地理局限性变异。     

PREVALENCE OF ANTIBODY TO CIRCUMSPOROZOITE PROTEIN REPEATS AND CHARACTERIZATION OF PlASMODIUM VIVAX IN HUBEI PROVINCE, CHINA

收集湖北省间日疟现症病人、无症状病人及复发病人滤纸血，按ＥＬＩＳＡ法检测抗间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）Ⅰ型（ＧＤＲＡＤＧＱＰＡ）、Ⅱ型（ＡＮＧＡＧＮＱＰＧ）和Ⅲ型（“Ｐ．ｖｉｖａｘ－ｌｉｋｅ”）（ＡＰＧＡＮＱＥＧＧＡＡ）重复体抗体。结果发现８３例受检血样中有３２例至少存在１型抗体，其中有Ⅰ型抗体的２７例、Ⅱ型抗体的５例、Ⅲ型抗体的１６例，包括两型混合感染的１０例和三型混合感染的４例。但只有Ⅰ型能被ＰＣＲ－探针确认。所收集的４份湖北间日疟病人全血中，虽然无１例检测到抗重复体抗体，但有３例被ＰＣＲ－探针确定为Ｉ型ＣＳＰ间日疟原虫单纯感染。本文还首次注意到间日疟原虫复发与Ⅰ型抗ＣＳＰ重复体ＩｇＧ抗体水平相关，并认为是休眠体刺激的结果。     

间日疟原虫MSP-1 和 CSP 基因遗传多样性的分析

目的比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP-1 和 CSP)的遗传多样性. 方法分别用MSP-1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株,并进行基因多态性比较和分析. 结果共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样,MSP-1等位基因型混合感染率为18.75%,平均克隆数1.16;CSP基因型混合感染率为35.29%,平均克隆数为1.47.如果同时考虑两种基因型,混合感染率则为50.00%.空间对应分析发现,热带族与Sal-1型关系密切,PvⅡ型与重组Ⅲ型分布靠近,其他基因型则较分散. 结论同时用MSP-1和CSP两种分子标志检测间日疟原虫,其基因型混合感染率高于用单一标志检测,两种标志检测结果存在一定对应关系.     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因片段的体外扩增、鉴定与克隆

目的：体外扩增、鉴定并克隆间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因约772hP的基因片段,包容CSP基因的Ⅰ区、中央9肽重复区、重复后可变区及Ⅱ区。方法：采用PCR法扩增出CSP目的基因片段,以低熔点琼脂糖回收纯化,并以限制性内切酶BstNI酶切鉴定后,采用T载体连接方案,插入中间载体PUC19的多克隆位点,构建重组体PUC19／CSP,并转化大肠杆菌JM107,蓝白菌斑初筛阳性重组子,并以PCR法与限制性酶切分析对阳性克隆进一步鉴定。结果：从间日疟患者血样核酸提取物中扩增出约772hPDNA条带,而正常人血与空白对照无特异性扩增条带,经酶切鉴定证实为CSP基因片段;所构建的PUC／CSP重组体阳性克隆经双酶切与PCR鉴定与预期结果一致。结论：体外成功扩增并克隆间日疟原虫CSP基因片段,为下一步的基因序列分析及CS诊断抗原的制备打下基础。     

恶性疟原虫FCC—1／HN株环子孢子蛋白基因在耻垢分枝杆菌M.Smegmatis mc^2155中的表达

目的 探讨恶性疟原虫环子孢子蛋白基因在耻垢分枝杆菌M.Smegmatis mc^2155中的表达。方法 采用电穿孔转化法将重组大肠杆菌－分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG/CSP导入耻垢分枝杆菌M.Smegmatis mc^2155,重组分枝杆菌培养48－72h后于45℃诱导表达30min,表达产物进行SDS-PAGE芨免疫印迹分析。结果 SDS－PAGE及免疫印迹分析结果均显示在约42kDa的位置上可见明显的蛋白条带。结论 恶性疟原虫环子孢子蛋白可在分枝杆菌中表达。