外源性表达VEGF165b对顺铂诱导人膀胱癌T24细胞损伤的影响及其机制

目的:观察人膀胱癌T24细胞中外源性表达血管内皮生长因子(VEGF)变构体VEGF165b对顺铂(DDP)诱导人膀胱癌T24细胞损伤的作用,并探讨相关机制。方法:构建VEGF165b表达载体pcDNA-VEGF165b;T24细胞分为对照组、VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体)、DDP组和VEGF165b+DDP组(DDP联合转染VEGF165b表达载体)。MTT法检测各组细胞存活率;Western blotting法检测各组T24细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase3表达;TUNEL法检测细胞凋亡数。结果:MTT法检测,与对照组比较, VEGF165b组24和48 h时T24细胞存活率无明显变化(P>0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组24和48 h时细胞存活率均明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。TUNEL法检测,与对照组(5.1±2.7)和VEGF165b组(7.4±3.2)比较,DDP组的凋亡细胞数(26.3±8.2)的凋亡细胞数增加(P<0.05)。与DDP组比较,VEGF165b+DDP组的凋亡细胞数(41.3±6.9)增加(P<0.05)。结论:外源性表达VEGF165b能通过增加细胞凋亡促进DDP对T24细胞的损伤,其机制与VEGF信号通路受抑制有关联。     

血管内皮生长因子165b抑制肿瘤血管生成的研究进展

研究认为血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因差异剪接后能够产生促进血管生成的VEGFxxx和抑制血管生成的VEGFxxxb。在VEGFxxxb家族中,VEGF165b在功能上具有代表性地位,表现出明显的抑制VEGF165所介导的血管生成作用。由于VEGF165b具有机体自然产生、不具有免疫原性的优势,有望通过强制高表达、外源性给予重组蛋白或促进VEGF外显子8b选择性剪接抑制肿瘤血管生成,从而用于肿瘤的治疗。     

VEGF165和VEGF165b与肿瘤关系的研究进展

目前已知肿瘤的生长和转移依赖于血管的形成,而血管形成主要是由促血管生成因子和抑制因子调控失衡,促血管生成因子增多所致.促血管生成因子中作用最强且研究最广泛的就是血管内皮生长因子(VEGF).VEGF根据VEGFmRNA剪接方式不同分为多个变构体,有VEGF121、VEGF145 、VEGF165 、VEGF183、VEGF189 和VEGF206,而VEGF165是体内最多的亚型,其生物活性最强且cDNA扩增丰度最高,故在临床和实验中应用最广.近年来又发现一种内源性剪接变构体,即VEGF165b,它因具有抑制VEGF165介导的血管生成作用[1]和潜在的临床应用价值而受到关注.作者就VEGF165和VEGF165b的结构、作用、作用机制以及与肿瘤的关系作一综述.……     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

VEGF165反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的利用本室构建的反义VEGF165（血管内皮生长因子,vascular endothelial growth factor）真核表达载体,研究VEGF反义RNA表达对人胃癌细胞生物学表型的影响. 方法用阳性脂质体介导的基因转染技术,将VEGF反义RNA重组体转入人胃癌细胞系,观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学表现. 结果 VEGF反义RNA重组体转染胃癌细胞后,斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,反义RNA基因转染技术可使VEGF的表达明显减弱;与未转染的细胞相比,G2/M期细胞增加(0.39),而S期细胞减少(0.54);克隆形成率(2.2%)低于未转染细胞(4.0%);肿瘤细胞接种裸鼠后33 d时,VEGF反义RNA表达人胃癌细胞所致的移植瘤体积（345±136) mm3明显小于未转染细胞所致的移植瘤体积（1534±363) mm3. 结论 VEGF反义RNA可以通过抑制肿瘤组织血管生成而防治肿瘤的生长,另外VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.     

孕早期外周血VEGF165b降低对预测子痫前期的作用研究

目的:分析血管内皮生长因子165b(VEGF165b)在子痫前期(PE)患者血清中的表达,探讨孕早期外周血VEGF165b作为预测PE发生的生物学指标的临床意义。方法:酶联免疫吸附试验(ELISA)和竞争性酶免疫分析(cEIA)分别检测47例PE患者和42例无高血压正常孕妇、40例未怀孕正常妇女血清中VEGF165b、VEGF的含量。ROC曲线分析孕12周VEGF165b预测PE发生的灵敏度。结果:孕12周,正常孕妇组血清VEGF165b含量[(4.49±1.57)ng.ml-1]与未怀孕组[(0.42±0.18)ng.ml-1]相比显著升高(P<0.01),发展成PE患者的外周血VEGF165b含量[(1.19±0.50)ng.ml-1]与正常孕妇组相比显著降低(P<0.01);ROC曲线显示孕12周VEGF165b预测PE发生具有较高的灵敏度(89.8%)。结论:孕早期母体外周血VEGF165b显著降低可预测PE发生。     

VEGF165b与泌尿系肿瘤

血管生成是伤口愈合、月经周期、肿瘤、各种缺血性和炎性反应性疾病的重要标志[1,2].血管生成由多种促血管生成因子和抑制因子相互作用的结果,而在众多促血管生成因子中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)作用最强.现已发现的VEGF家族成员包括VEGF-A(即通常所称的VEGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子(placenta growth factor,PIGF)[1].     

人血管内皮生长因子165的克隆和大肠杆菌中的表达

目的 克隆和在大肠杆菌中表达人血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）。方法 利用ＰＣＲ的方法众胎脑ＣＤＮＡ库扩增得到人ＶＥＧＦ１６５的全长ＣＤＮＡ并测定其核酸序列。利用基因重组技术构建ＶＥＧＦ１６５的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果 经测序表明,克隆的ＶＥＧＦ１６与文献报道相符。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果表明经用ＩＰＴＧ诱导后,ＶＥＧＦ１６５在大     

奥曲肽对人胆囊癌细胞VEGF表达的影响

目的：探讨奥曲肽在体外对人胆囊癌细胞VEGF表达的影响。方法：体外培养人胆囊癌细胞株GBC—SD，用RT-PCR法检测VEGFmRNA水平，用ELISA法检测培养液上清中的VEGF蛋白水平。结果：GBC-SD高水平表达VEGF；经奥曲肽作用后，VEGFmRNA／β-actin相对系数显著下降，呈剂量依赖效应；奥曲肽也显著降低培养上清液中的VEGF浓度，抑制作用随时间延长和奥曲肽剂量增加而增大。结论：奥曲肽能下调GBC—SD的VEGF的mRNA和蛋白表达水平。     

VEGF165表达载体的构建及其对人胃癌生长的作用

目的构建血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF165）真核表达载体,研究其对胃癌生成的作用. 方法用DNA重组方法,将编码VEGF165的全长cDNA克隆于pcDNA3载体中,构建VEGF165 mRNA真核表达载体;用阳性脂质体介导的基因转染技术,将重组体转入人胃癌细胞（SGC-7901）省系;观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学指标. 结果斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,正义VEGF基因转染技术可使VEGF的表达得到明显地加强. 与未转染细胞相比,转染细胞的G2/M期细胞增加(0.44)而S期细胞减少(0.17),克隆形成率(9.0%)明显高于未转染细胞(4.0%). 瘤细胞接种裸鼠后33 d,过表达VEGF人胃癌细胞所致的移植瘤体积（2351±638) mm3明显大于未转染细胞所致的移植瘤体积（1534±363) mm3. 结论 VEGF可以通过加强肿瘤组织血管生成而促进肿瘤的生长,另外,VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.     

血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞侵袭性的影响

目的:探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)基因对胃癌细胞侵袭性的影响及可能机制.方法:通过体外培养人胃腺癌细胞BGC-823,观察胃癌细胞转染VEGF165基因对其迁移能力及侵袭相关分子MMP-2、u-PA mRNA表达的影响.应用Millicell小室分析VEGF165转染前后胃癌细胞迁移能力的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究VEGF165转染前后BGC-823的MMP-2、u-PA mRNA表达变化.结果:迁移实验结果显示Ad-VEGF165组胃癌细胞迁移能力高于Ad-GFP组及对照组[(212.000 0±10.148 8) vs (142.666 7±14.502 8) and (148.333 3±7.571 8),P<0.05];RT-PCR结果显示VEGF165转染后促进了BGC-823的MMP-2、u-PA mRNA表达,Ad-VEGF165组MMP-2、u-PA的mRNA水平明显高于Ad-GFP组及对照组[MMP-2 mRNA:(0.664 6±0.048 6)vs (0.409 6±0.066 8) and (0.380 3±0.025 4);u-PA mRNA:(0.821 6±0.079 8) vs (0.406 0±0.115 8) and (0.404 3±0.062 0);均为P<0.05].结论:经VEGF165转染后,胃癌细胞迁移能力增强,MMP-2、u-PA的mRNA表达增加,提示VEGF在肿瘤的侵袭过程中发挥促进作用,MMP-2、u-PA可能与此作用有关.     

VEGF真核双表达载体构建及对Lewis肺癌体外侵袭能力的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)基因转染后对Lewis肺癌细胞体外侵袭能力的影响.方法利用基因重组技术构建了含全长 VEGF cDNA的真核双表达载体,脂质体法转染Lewis肺癌细胞株.借助Boyden小室膜侵袭培养系统观察转染后Lewis肺癌细胞对基底膜侵袭能力的改变.结果转染后下室浸润的癌细胞数为(48±1.0),显著高于空载体转染对照组(27±0.4)(P<0.05), 表明转染pEGFP-VEGF表达载体的Lewis细胞系侵袭能力增强.结论 VEGF诱导Lewis肺癌转移的机制可能与增强肿瘤细胞的迁移能力有关.     

VEGF165真核表达载体的构建及其在鼠膀胱平滑肌细胞的表达

目的 构建血管内皮生长因子(VEGF165)真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165,转染鼠膀胱平滑肌细胞并检验其生物学活性.方法 将VEGF165 cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(-),构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165;并转染入鼠膀胱平滑肌细胞,采用RT-PCR和免疫荧光染色检测VEGF165基因在鼠膀胱平滑肌细胞中的表达,并用MTT法检测转染后细胞上清液中VEGF165的生物学活性.结果 和结论将构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165转染入鼠膀胱平滑肌细胞后,VEGF的表达增高,转染后细胞上清液具有促使内皮细胞增殖的生物学活性.     

人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤模型的建立及其VEGF的表达

目的 建立人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤动物模型,研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在人浸润性膀胱癌的表达水平,探讨应用抗－ＶＥＧＦ抗体抑制血管生成治疗膀胱癌的应用前景。方法 裸鼠皮下接种人浸润性膀胱癌Ｔ２４细胞建立动物模型;应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学技术检测人浸润性膀胱癌Ｔ２４细胞及其裸鼠移植瘤组织血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达。结果 裸鼠皮下接种Ｔ２４细胞的成瘤率为９４．４％;Ｔ２４细胞及其移植瘤组织     

槲皮素对人肾癌细胞株细胞增殖、侵袭及其VEGF表达的影响

目的研究槲皮素对人肾癌细胞株(ACHN)细胞增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养ACHN细胞,加入不同浓度的槲皮素进行处理后,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率,采用涂有Matrigel胶的Tr-answell小室模型对传代培养的ACHN细胞进行体外侵袭检测,以Western blot法检测ACHN细胞内血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果不同浓度的槲皮素均能抑制ACHN细胞的增殖,并有明显的浓度和时间依赖性(P<0.05);Tr-answell试验结果显示,与空白对照组比较,槲皮素处理组肾癌细胞侵袭能力明显下降;槲皮素处理组VEGF蛋白表达水平均明显低于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论槲皮素可明显抑制ACHN细胞的增殖、侵袭力,其机制可能与下调VEGF表达有关。     

反义VEGF165真核载体的构建

以质粒pcDNA3.1为载体，将血管内皮基因（VEGF）165cDNA片段反向插入得到反义VEGF165真核表达载体，经过酶切电泳和基因测序证实获得的载体插入方向正确，可以进一步用于反义基因表达的实验研究。