抗FLT3受体单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗FLT3受体的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以PET46-FLT3-His-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB／C小鼠,取其脾细胞与SP2／0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗FLT3受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗FLT3受体单克隆抗体的细胞株5F381181和D3H2C12,亚类鉴定两种单抗为IgG1,ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1：409600和1：102400,抗体相对亲和力为7．85×10^6L／mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原。细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别急性髓系白血病病人骨髓中原始细胞表达的FLT3受体。结论成功制备抗FLT3受体单克隆抗体,为进-步研究其与白血病等血液疾病的关系奠定了基础。     

FLT3基因突变与白血病的关系

FLT3属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员之一,研究表明,其在正常造血及免疫系统的发育中起重要调节作用。FLT3基因突变常见有两种,即内串联复制和点突变。FLT3在急性髓细胞白血病中有过度表达,FLT3基因的内部串联重复(FLT3-ITD)是急性髓细胞白血病最常见的基因异常。FLT3还可作为白血病基因诊断及微小残留病灶的检测标志。本文就FLT3及其突变与白血病的发生、发展及预后的关系予以综述。     

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法 采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果 63例ALL患者经PCR扩增发现41例(65.1%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%(14/15),77.8%(14/18),41.7%(5/12)和28.6%(4/14);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALLFLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL(41.7%,P<0.005);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者(28.6%,P<0.001)。63例ALL患者中仅有2例(3.2%)出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差。结论 B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠神经肽Y及其Y_2受体表达的影响

目的：探讨黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾脏神经肽Y（NPY）及其Y2受体（Y2R）表达的影响。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组、糖尿病组和黄芪多糖干预组;采用放射免疫法检测血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率（UAER）、肾重/体重。结果：①APS干预能显著削弱糖尿病大鼠血糖、UAER和肾重/体重的增加;②APS干预后显著降低糖尿病大鼠血浆和肾皮质NPY水平（P〈0.01）;③APS干预组大鼠肾皮质NPYmRNA和Y2R蛋白表达显著低于糖尿病组（P〈0.05）。结论：APS对糖尿病肾病的保护作用机制可能与下调肾脏NPY及其Y2R的表达有关。     

蒙古黄芪凝集素诱导HL-60细胞凋亡作用研究

目的:探讨蒙古黄芪凝集素(AMML)诱导HL-60细胞凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测AMML对HL-60细胞的增殖抑制作用。显微镜下检测细胞凋亡形态的变化,应用流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡,同时分析细胞周期。免疫细胞化学法检测Bcl-2、Caspase-3的表达。结果:MTT法显示AMML对HL-60细胞的生长具有明显的抑制作用。荧光显微镜下,细胞呈凋亡形态学变化,流式细胞仪检测结果为细胞凋亡率明显增高,出现G0/G1期阻滞。Bcl-2表达降低,Caspase-3表达增高。结论:AMML明显抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞凋亡。可应用于抗肿瘤药物的开发。     

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究进展

近年来对急性髓细胞性白血病（AML）中FLT3突变及FLT3抑制剂的研究十分广泛和深入。研究表明,野生型FLT3基因在AML中普遍高表达70％～100％,FLT3突变存在于部分AML中（成人约20％～30％）,FLT3基因突变已经被公认是AML中发生率最高的一种基因改变。目前认为FLT3突变在白血病的发生、预后判断、微小残留病变检测等方面具有重要意义。近来FLT3抑制剂治疗AML的研究很多,     

幼鼠颌下腺IP3受体免疫电镜观察

目的：观察IP3受体在幼年大鼠颌下腺的分布，探讨其增龄变化及其意义。方法：采用胶体金标免疫电镜观察IP3受体在幼年大鼠颌下腺的分布。结果：金标颗粒定位于大鼠颌下腺腺泡细胞内质网上，以及肌上皮细胞和内皮细胞，1d龄幼鼠颌下腺IP3受体免疫金标数量最多，随增龄而减少。结论：IP3受体可能在幼鼠颌下腺细胞的分化。发育中起一定作用。     

一种膜荚黄芪凝集素的分离纯化研究

目的 从膜荚黄芪根中分离纯化一种凝集素。 方法 通过硫酸铵分级沉淀和ConASepharose 4B亲和色谱从膜荚黄芪根浸提液中分离纯化一种凝集素。 结果 经过上述两步纯化得到电泳纯的凝集素, SDSPAGE和Superdex 75凝胶过滤色谱测定该凝集素的相对分子质量分别为315×104和335×104,糖蛋白染色显示其为糖蛋白,总糖的量为10.7%。结论 从膜荚黄芪根中分离纯化得到一种凝集素,该蛋白为单亚基糖蛋白,具有对兔血红细胞的凝集活性,凝集活性的比活力为391.9 U/mg。     

5-羟色胺3受体及其应用的研究进展

5-羟色胺3受体(5-HT3R)广泛分布在中枢神经系统和外周神经系统中,现已分离出5-HT3A、5-HT3B、5-HT3C、5-HT3D和5-HT3E5种受体亚型。这些亚型可构成功能性受体,包括同源受体和异源受体,并表现出不同的生理药理特性。5-HT3R与呕吐及肠易激综合征的发病机制联系紧密,并参与精神情绪的调节,对抑郁症的治疗提供了新靶点,其受体拮抗剂得到了广泛的应用。     

荧光定量PCR方法探讨黄芪注射液对巨噬细胞吞噬结核杆菌的影响

目的: 探讨黄芪注射液对巨噬细胞吞噬结核杆菌的作用.方法: 以浓度为0(对照组),0.05,0.2,0.6,1.5,4 g/L的黄芪注射液100 μL与RPMI1640灌洗小鼠腹腔获得的巨噬细胞及结核杆菌共同孵育,采用荧光定量PCR法检测巨噬细胞对结核杆菌的吞噬能力.结果: 在黄芪注射液浓度为0.2,0.6,1.5,4 g/L时,黄芪对巨噬细胞吞噬结核杆菌有明显的促进作用.并且以1.5 g/L浓度为最佳.结论: 黄芪可以提高巨噬细胞对结核杆菌的吞噬作用,并具有双相性,当其浓度过高时具有抑制巨噬细胞吞噬结核杆菌的作用.本研究为临床治疗结核病提供了理论依据和新的思路.     

喉癌花生凝集素受体的研究

应用ＡＢＣ免疫组化技术观察了１７例喉癌、癌旁及正常喉粘膜上皮内花生凝集素（ＰＮＡ）受体的分布。结果表明癌细胞ＰＮＡ呈强阳性染色，毗邻正常喉粘膜上皮细胞未见阳性表达；在不同的喉癌组织学分级之间，ＰＮＡ的表达呈不同程度，其差异具有显著性（Ｐ＜０．００５）。提示ＰＮＡ受体可能是喉癌的一种重要标志，其分布与喉癌的分化、增殖有关，并为喉癌早期诊断和鉴别诊断提供了一种辅助手段。     

黄芪注射液对肺结核患者T细胞亚群的影响及近期疗效

目的：探讨黄芪液对肺结核患者细胞免疫功能的影响及近期疗效。方法：将５６例初治活动性肺结核患者随机分为治疗组和对照组,在相同痨方案基础上,治疗组加用黄芪注射液２０ｍＬ１次／ｄ静脉滴注,分别在治疗前后采空血检测外周血中Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３,ＣＤ４和ＣＤ８,以痰涂片及治疗前后胸一改变考核疗效。结果：治疗组与治疗前及对照组治疗后比较ＣＤ３,ＣＤ４显著升高,ＣＤ８变化不大,肺部病灶吸收率治疗组显著高于对照组     

FLT3激酶抑制剂及其在急性髓系白血病治疗领域的研究进展

急性髓系细胞白血病(AML)是成年人最常见的急性白血病,FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)突变是AML中发现的第1个突变,其所引发的AML预后甚差。近年来,一些FLT3靶向抑制剂显示出了对体内FLT3信号通路传导的抑制,为AML的治疗提供了新途径。本文对FLT3激酶抑制剂,按结构分成吲哚酮类、吲哚并咔唑类、苯并咪唑/吡唑类、喹啉、喹喔啉和喹唑啉类、三环类、嘧啶类等共7类进行综述。     

稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定

构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型。筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长。然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞。收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况。207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长。双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证。慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增。同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况。通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型。     

C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备

目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a（＋）中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a（＋）-Dectin-2和pET28a（＋）-Dectin-3,并在E.coli BL21（DE3）中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示：单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

肾移植受者T、B淋巴细胞及红细胞活性观察

目的观察肾移植术后受者T、B淋巴细胞及红细胞活性的变化并探讨其关系。方法测定41例肾移植受者T、B淋巴细胞增殖反应及红细胞C3b受体花环形成率(C3bRR)。结果T淋巴细胞增殖反应在术后1～3周明显增强，7～8周减弱；B淋巴细胞增殖反应在术后6～8周明显增强；急性排斥期间，T淋巴细胞增殖活性增强，未观察到B淋巴细胞增殖反应和红细胞C3b受体活性的明显改变。术后红细胞活性逐渐增强，与血红蛋白的变化呈正相关，与淋巴细胞活性无明显相关关系。结论术后早期T淋巴细胞活性增强与移植物的刺激有关；动态观察T淋巴细胞增殖反应有助于急性排斥反应的诊断。术后B淋巴细胞活性逐渐增强的意义尚待阐明。红细胞活性测定是否可作为移植后免疫监测指标尚需进一步探讨。