再生复血汤对再生障碍性贫血小鼠外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞及Foxp3 mRNA的影响

目的探讨再生复血汤对再生障碍性贫血(AA)小鼠外周血CD4~+CD25~+CD127~-调节性T细胞(Treg)及核转录因子Foxp3 mRNA的影响。方法将72只小鼠随机分成空白组,模型组,阳性对照组,再生复血汤高、中、低剂量组,每组12只。除空白组外,其余各组小鼠予~(60)Co-γ联合腹腔注射环磷酰胺和氯霉素建立AA小鼠模型。造模第7天再生复血汤高、中、低剂量组分别给予再生复血汤10、5、2.5 g/(kg·d)灌胃,模型组和空白组予等体积的生理盐水灌胃,阳性对照组予环孢素3 mg/(kg·d)灌胃,各组均干预30天。检测小鼠外周血白细胞数(WBC)、网织红细胞数(Ret)、血红蛋白数(Hb)及血小板数(PLT)、骨髓有核细胞数(粒系比例、红系比例、巨核细胞数,淋巴细胞比例)、Treg比例和单个核细胞Foxp3mRNA表达量。结果与空白组比较,模型组外周血WBC、Ret、Hb、PLT、骨髓粒系比例、红系比例、巨核细胞数、Treg比例、Foxp3 mRNA表达量降低,淋巴细胞比例升高(均P0.05)。与模型组比较,各干预组小鼠外周血WBC、Ret、Hb、PLT、骨髓粒系比例、红系比例、巨核细胞数、Treg比例、Foxp3 mRNA表达量升高,淋巴细胞比例下降(均P0.05)。与再生复血汤低剂量组比较,再生复血汤中、高剂量组和阳性对照组外周血WBC、Ret、Hb、PLT、骨髓粒系比例、红系比例、巨核细胞数、Treg比例、Foxp3 mRNA表达量升高,淋巴细胞比例下降(均P0.0 5),且再生复血汤高剂量组优于再生复血汤中剂量组和阳性对照组(均P0.05)。结论再生复血汤能通过促使AA小鼠外周血单个核细胞Foxp3 mRNA表达,使得Treg比例升高,诱导AA小鼠恢复自身免疫耐受,并且呈现剂量依赖性。     

牛角地黄汤对ITP大鼠外周血细胞因子IL-10和TGF-β1的影响

目的:探讨牛角地黄汤对ITP大鼠血清细胞因子IL-10、TGF-β1及血象、骨髓象的影响。方法:将30只SD大鼠随机分成实验组、模型组和正常大鼠组,每组各10只。实验组和模型组SD大鼠用APS法建立ITP大鼠模型。于造模第7天实验组ITP大鼠予牛角地黄汤干预,模型组ITP大鼠和正常大鼠组大鼠予等体积的生理盐水干预。4周后处死各组大鼠,用ELISA检测各组大鼠血清细胞因子IL-10、TGF-β1浓度,全自动血细胞分析仪检测外周血WBC、HGB及PLT三系变化,骨髓HE染色观察巨核细胞数。结果:与正常大鼠组比较,模型组ITP大鼠血清中IL-10、TGF-β1浓度及PLT数减低,差异有统计学意义(P0.05);骨髓巨核细胞数明显降低(P0.05)。与模型组ITP大鼠比较,实验组ITP大鼠血清中IL-10、TGF-β1浓度及PLT数上升,骨髓巨核细胞数增多,差异有统计学意义(P0.05)。结论:牛角地黄汤能使ITP大鼠血清IL-10、TGF-β1浓度上升,促进ITP大鼠外周血PLT数增多,具有免疫调节作用。     

犀角地黄汤对免疫性血小板减少症模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞及Th17细胞的影响

目的探讨犀角地黄汤对免疫性血小板减少症(ITP)模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞(Treg)、Th17细胞及相关细胞因子的影响。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、醋酸泼尼松组及犀角地黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外,其余组均采用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)建立ITP模型,于造模开始后第7天开始,各给药组灌胃给予相应剂量药物,连续14 d。采用血细胞计数仪检测造模前、灌胃前、灌胃结束后各组大鼠外周血中血小板数目;灌胃结束后,采用流式细胞术检测各组大鼠Treg、Th17细胞比例,采用实时荧光定量PCR法检测淋巴细胞Foxp3 mRNA相对表达量,采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-35水平。结果灌胃结束后,与模型组比较,犀角地黄汤各剂量组大鼠血小板数目明显上升(P均0.05),外周血淋巴细胞中Treg所占比例、Foxp3 mRNA相对表达量及IL-35水平均明显上升(P均0.05),而Th17细胞所占比例及IL-17水平均明显下降(P均0.05),且具有剂量依赖性;犀角地黄汤高剂量组各指标与醋酸泼尼松组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论犀角地黄汤可能通过上调ITP大鼠外周血中Treg细胞表达,下调Th17细胞表达,维持Treg/Th17平衡,进而调节相关细胞因子IL-17、IL-35的表达发挥抗血小板减少作用。     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证痛经大鼠Th17、Treg细胞分化及其细胞因子表达的影响

目的观察温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证原发性痛经大鼠Th17、Treg细胞分化及其特征性细胞因子(IL-17A、TGF-β)表达的影响,探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的免疫机制。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药高剂量组和中药低剂量组。除空白组外,通过寒冷刺激法联合苯甲酸雌二醇和缩宫素建立寒凝血瘀证原发性痛经大鼠模型。从造模第7天开始,分别给予中药、布洛芬和蒸馏水治疗。检测各组Th17、Treg细胞比例、IL-17A、TGF-β含量及IL-17A、TGF-βmRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组Th17细胞比例、IL-17A含量、IL-17A mRNA表达和IL-17A/TGF-β比值均升高(P0.05,P0.01);Treg细胞比例、TGF-β含量和TGF-βmRNA表达降低(P0.01)。与模型组比较,西药组和中药低剂量组Th17细胞比例降低,中药高、低剂量组IL-17A含量降低,中药高剂量组IL-17A mRNA表达降低(P0.05,P0.01);各治疗组Treg细胞比例、TGF-β含量和TGF-βmRNA表达均升高,IL-17A/TGF-β比值降低(P0.01)。中药两组间比较,中药低剂量组调节Th17、Treg细胞比例和降低IL-17A含量优于中药高剂量组(P0.01);中药高剂量组升高TGF-β含量、降低IL-17A mRNA表达优于中药低剂量组(P0.01)。结论温经化瘀止痛法调节Th17、Treg细胞比例及IL-17A、TGF-β表达可能是其治疗寒凝血瘀证PD的免疫机制之一。     

安胎汤对先兆流产大鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞免疫调节的影响

目的:从CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞变化角度探讨安胎汤对先兆流产大鼠的影响及作用机制。方法:将大鼠雌雄以2∶1的比例配对后筛选出孕鼠48只,以缩宫素及针灸合谷、三阴交穴的方法建立先兆流产模型,随机分为6组,分别为正常妊娠组、安胎汤低剂量组、安胎汤中剂量组、安胎汤高剂量组、黄体酮组及先兆流产大鼠模型组。于妊娠第13天取大鼠外周血后即用流式细胞仪检测CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞百分率,然后处死大鼠,计数双侧子宫着床点数及活胎数。结果:安胎汤可提高先兆流产孕鼠胚胎吸收率和CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞百分率,降低胚胎吸收率(P0.01)。结论:安胎汤通过调节先兆流产大鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞百分率达到保胎目的,且疗效与剂量相关。     

梅毒血清固定患者外周血CD4~+CD25~+ Treg和CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg的表达及意义

目的检测并比较梅毒血清固定患者与治疗后快速血浆反应素环状卡生试验(RPR)转阴患者外周血CD4+CD25+Treg以及CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达情况。方法运用流式细胞术检测40例梅毒血清固定患者(实验组)和40例治疗后RPR转阴的梅毒患者(对照组)外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平并进行比较。结果实验组患者外周血CD4+CD25+Treg细胞占外周血CD4+T细胞总数的(11.90±0.64)%,对照组为(9.09±0.28)%,2组比较差异有统计学意义(t=4.01,P0.001);实验组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占外周血CD4+T细胞总数的(6.25±0.28)%,对照组为(3.37±0.24)%,2组比较差异有统计学意义(t=7.90,P0.001)。结论血清固定梅毒患者外周血中抑制性CD4+CD25+Treg细胞的比例明显高于RPR转阴梅毒患者,且其中大部分为具有抑制活性的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞亚群,推测这类Treg细胞在CD4+T细胞中所占的比例增加与梅毒患者血清固定有一定关系。     

益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的影响

目的探讨益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞的影响。方法用流式细胞仪检测18例经益气解毒方加常规治疗的中晚期鼻咽癌患者(观察组)及l5例常规治疗的中晚期鼻咽癌患者(对照组)外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞比例,RT-PCR法检测Foxp3 mRNA和ROR-γt mRNA转录水平,ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子-β(TGF-β)水平。结果观察组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例和Foxp3 mRNA的相对表达量均低于对照组(P0.05),而Th17细胞占CD4+T细胞的数量比例和ROR-γt mRNA的相对表达量均高于对照组(P0.05);观察组患者血清IL-6水平高于对照组(P0.05),而TGF-β水平低于对照组(P0.05)。结论益气解毒方可影响中晚期鼻咽癌CD4+CD25+调节性T细胞的比例与功能,增强Th17细胞的分化,其机制可能是通过调节IL-6和TGF-β水平而逆转鼻咽癌免疫耐受。     

鼻敏感颗粒调控变应性鼻炎Treg细胞诱导免疫耐受的研究

目的：探讨鼻敏感颗粒通过诱导Treg细胞变化,使变应性鼻炎的机体产生免疫耐受,达到治疗目的。方法：本研究以SD大鼠为实验动物,分为空白组、模型组和鼻敏感颗粒组,建立变应性鼻炎大鼠模型,并予以鼻敏感颗粒灌胃,借助流式细胞仪和ELISA法检测标本的 CD4+CD25+Foxp3+Treg和IL-4、IL-10、TGF-β1、IL-13的数值。结果：流式细胞仪检测结果表明,CD4+CD25+Foxp3+Treg在造模成功后下降（P<0.05）,但在鼻敏感颗粒治疗后上升（P<0.05）,达到正常空白组水平（P>0.05）。细胞因子ELISA法的结果表明,在造模成功后IL-10 和TGF-β1浓度明显下降（P<0.0001）,IL-4和IL-13浓度明显上升（P<0.0001）,而在鼻敏感颗粒治疗后IL-10和TGF-β1的血中浓度回升但未达到正常空白组水平,IL-4和IL-13血中浓度下降但未达到正常空白组水平。结论：鼻敏感颗粒可以上调变应性鼻炎大鼠的Treg细胞数量,使其分泌的IL-10 和TGF-β1量上升,抑制Th2细胞活性,使IL-4和IL-13分泌量下降,从而改善变应性鼻炎症状。     

中药天花粉蛋白增强诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量和功能的初探＊

目的 探讨中药天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）数量和功能的作用。方法 研磨6-8周C57BL/6小鼠脾脏，裂解红细胞后得到单个脾脏淋巴细胞悬液，按5×10⁵/mL细胞密度均匀接种在圆底96孔板，设空白组、对照组（增殖体系：1 μg·mL^-1 anti-CD3/28 mAb）、三个不同诱导方案组，培养7天后收集细胞运用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例以此确定最佳诱导方案；将低浓度Tk（0.25、0.5、1 μg·mL^-1）作用于诱导体系，7天后采用流式检测Tk对CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例的影响；Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡情况；Western blotting法测定各组中Treg细胞特异性转录因子Foxp3蛋白表达情况；实时荧光定量 PCR法检测转录因子Foxp3和细胞因子TGF-β、IL-10、IL-6、IFN-γ基因水平的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清中分泌IFN-γ和IL-10的浓度。结果 与对照组相比，添加TGF-β（5ng·mL^-1）诱导小鼠脾脏淋巴细胞生成Treg的数量和比例最高，此诱导方案最佳（P < 0.01）；与诱导组相比，低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量和比例，呈剂量依赖性（P < 0.01），且Tk需在诱导体系下发挥作用，单加不能诱导生成Treg细胞，此浓度Tk无细胞毒性；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组Treg特异性转录因子Foxp3蛋白和基因表达水平均显著上调（P < 0.01），II型辅助性T细胞（Th2）分泌的炎症抑制因子IL-10、TGF-β基因表达不同程度上调，反之，I型辅助性T细胞（Th1）分泌的促炎因子IFN-γ、IL-6基因表达呈相反趋势下调（P < 0.01）；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组细胞上清中分泌的IL-10浓度显著增加，IFN-γ浓度明显降低（P < 0.01）。结论 低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，上调Foxp3和Th2型炎症抑制因子IL-10、TGF-β的表达，下调Th1型促炎因子IFN-γ、IL-6的表达，从而发挥免疫抑制功能。     

滋肾生血胶囊治疗急性髓系白血病的疗效机制研究

目的:观察滋肾生血胶囊(熟地、首乌、桑椹、枸杞、当归、白芍等)对急性髓系白血病(AML)化疗后造血及免疫功能的影响。方法:按照随机对照原则,将患者分为空白组、对照组和治疗组。观察患者外周血中白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)和中性粒细胞绝对值(NE#)计数,外周血T淋巴细胞亚群及活化水平,细胞因子IL-3、GM-CSF等指标的变化。结果:治疗组治疗后外周血白细胞(WBC)、IL-3、CD3+、CD4+HLA-DR+细胞及CD4+HLA-DR+/CD8+HLA-DR+比值高于空白组(P0.05),而GM-CSF低于空白组(P0.05)。结论:滋肾生血胶囊可以促进患者化疗后骨髓造血恢复,提高机体免疫功能,并增强化疗效果。     

基于TGF-β1/Foxp3/RORγt通路探讨清窍胶囊对分泌性中耳炎大鼠的作用机制＊

目的 基于TGF-β1/Foxp3/RORγt通路探讨清窍胶囊对分泌性中耳炎大鼠的作用机制。方法 36只雌性SD大鼠，其中30只构建分泌性中耳炎大鼠模型，造模成功后，30只大鼠随机分为模型组、强的松组（0.003 g/100 mL）、清窍胶囊低剂量治疗组（0.36 g/100 mL）、清窍胶囊中剂量治疗组（0.54 g/100 mL）、清窍胶囊高剂量治疗组（0.72 g/100 mL），每组6只，另6只设为空白对照组。治疗组分别按不同剂量灌胃给药，模型组与空白对照组灌服相同容积的蒸馏水，1次/天，连续14天。给药结束采血，处死，采样待检。苏木精-伊红染色（Hematoxylin-eosin stain，HE）染色观察各组大鼠中耳炎症细胞的变化；酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清白介素-4（Interleukin-4，IL-4）、β-转化生长因子（Transforming growth factor beta，TGF-β）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、γ-干扰素（Interferon γ，IFN-γ）、白介素- 10（Interleukin-10，IL-10）、白介素-17（Interleukin-17，IL-17）水平；流式细胞技术检测脾脏和胸腺Th17/Treg细胞含量；实时荧光定量PCR检测脾脏和胸腺组织叉头盒P3（Forkhead Box P3，FOXP3）、IL-17、维甲酸相关核孤儿受体γt（Retinoic acid-related orphan receptor γt，RORγt）mRNA表达；蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）检测脾脏和胸腺组织RORγT、Foxp3表达。结果 与空白组比较，分泌性中耳炎大鼠黏膜层明显增厚，有大量炎性细胞浸润；且TGF-β、IL-6、IFN-γ、Th17、Treg细胞、IL-17、RORγT水平明显升高，IL-10、IL-4、Foxp3水平明显降低（P<0.01）；与模型组比较，清窍胶囊高剂量组可明显改善中耳炎炎细胞浸润，明显降低模型大鼠TGF-β、IL-6、IFN-γ、IL-17水平，明显升高IL-10、IL-4水平（P<0.05），并明显降低模型大鼠Treg细胞、RORγT水平，明显升高Foxp3表达（P<0.05）。结论 清窍胶囊可有效地调节TGF-β/Foxp3/RORγt信号通路，进而调节Treg和Th17细胞介导的中耳炎的发生及发展，改善分泌性中耳炎。     

全蝎蜈蚣对CIA大鼠外周血CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg细胞的调节

目的:观察全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎(Collagen-Induced Arthritis,CIA)大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的调节作用。方法:Wistar大鼠60只,随机分成6组,分别为正常对照组、模型对照组、全蝎蜈蚣高(0.4 g/kg)、中(0.2 g/kg)、低剂量(0.1 g/kg)组和Ⅱ型胶原蛋白(60μg/kg)治疗组(CⅡ组),二型胶原蛋白诱导大鼠关节炎,并采用流式细胞术检测大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及酶联免疫吸附试验检测血清中IL-2表达水平。结果:与模型组比较,全蝎蜈蚣高、低剂量组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞水平显著升高,且中、低剂量组血清IL-2水平显著下降。结论:全蝎蜈蚣治疗关节炎大鼠可能是通过上调外周CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞表达水平以恢复或重建免疫耐受而实现的。     

苏木乙酸乙酯对急性冠脉综合征外周血CD4+T淋巴细胞增殖及Th17/Treg平衡的影响

目的 观察苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对急性冠脉综合征患者外周血CD4+T淋巴细胞的体外增殖及Th17/Treg比例的影响。方法 通过SAEE干预急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞,以稳定型心绞痛患者作为对照。运用MTT法检测外周血CD4+T淋巴细胞的增殖,流式细胞术检测Th17、Treg百分比含量,RT-PCR检测白细胞介素-17A(IL-17A) mRNA、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3) m RNA的表达。结果 与稳定型心绞痛患者比较,急性冠脉综合征患者CD4+T淋巴细胞体外增殖能力显著增加,IL-17A的表达显著增加,Foxp3的表达显著降低,Th17/Treg比值显著增高,差异均具有统计学意义(P 0.01);与急性冠脉综合征组比较,SAEE能够显著抑制CD4+T淋巴细胞体外增殖能力,降低IL-17A的表达,升高Foxp3的表达,调控Th17/Treg的比值,其中以苏木乙酸乙酯高剂量组效果最佳,差异均具有统计学意义(P 0.01)。结论SAEE能够通过抑制外周血CD4+T淋巴细胞增殖,调控Th17/Treg的平衡,达到抑制免疫反应和抗动脉硬化的作用。     

贞芪扶正胶囊对再生障碍性贫血大鼠EPO,IL-2,IL-11及CD34+细胞的影响

目的:观察贞芪扶正胶囊对再生障碍性贫血(AA)模型大鼠重组人红细胞生成素(EPO),CD34~+细胞,白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-11(IL~(-1)1)的影响,探讨其相关的作用机制。方法:按随机数字将60只清洁级Wistar大鼠分为6组,分别为正常组、模型组、贞芪扶正胶囊低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg~(-1))及阳性药组(司坦唑醇混悬液,0.004 g·kg~(-1)),除正常组外,其余均釆用5-氟尿嘧啶(5-FU)与马利兰联合建立大鼠AA模型。模型成功后,给药组给予相应药物给药,阳性药组给予司坦唑醇混悬液,正常组与模型组给予相同体积的生理盐水,连续ig 30 d,以外周血细胞计数,骨髓单个核细胞(BMNC)计数,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-2,IL~(-1)1,EPO,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,CD34~+抗原和Fas抗原检测为主要观察指标综合评价贞芪扶正胶囊的干预效果。结果:与正常组比较,模型组的外周血白细胞(WBC),血小板(PLT),红细胞(RBC)及血红蛋白(Hb),BMNC,IL~(-1)1,CD3~+T细胞比例,CD3~+CD4~+T细胞比例,CD34~+抗原荧光量均明显降低,IL-2,EPO,TNF-α,Fas抗原荧光量明显升高(P0.01);与模型组比较,司坦唑醇组、贞芪扶正胶囊高剂量组的WBC,RBC,PLT,Hb,BMNC均有所升高(P0.05,P0.01),贞芪扶正胶囊中、高剂量组的IL~(-1)1,CD3~+T细胞,CD3~+CD4~+T细胞比例,CD34~+抗原荧光量升高,IL-2,EPO,TNF-α,Fas抗原荧光量降低降低(P0.05,P0.01);与司坦唑醇组比较,贞芪扶正胶囊中、高剂量组的WBC,CD3~+T细胞比例,CD3~+CD4~+T细胞比例,IL~(-1)1,CD34~+抗原荧光量较高(P0.05),IL-2,TNF-α,Fas抗原荧光量较低(P0.05)。结论:贞芪扶正胶囊能够改善AA大鼠外周血细胞状况、骨髓造血组织功能的恢复,增强免疫功能,可能与调控因子EPO,IL-2,IL~(-1)1水平和CD34~+细胞密切相关。     

补骨脂素通过调控CD4~+T细胞分化抑制RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收

探讨补骨脂素(psoralen)是否通过调控CD4~+T细胞分化抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及骨吸收作用,初步阐明补骨脂素抗骨质疏松作用的骨免疫学机制。采用免疫磁珠分选法从Balb/c小鼠脾脏细胞分离制备CD4~+T细胞,分为空白组和补骨脂素组接种于24孔板,加入补骨脂素诱导培养3 d,第4天收集各组细胞用于共培养实验。共培养实验分为RAW264.7细胞组(a组)、RAW264.7细胞~+psoralen-CD~+4T细胞组(b组)、RAW264.7细胞~+补骨脂素组(终浓度为10μmol·L-1,c组)、RAW264.7细胞~+psoralen+CD4~+T细胞组(d组)等4组,共培养5 d后,TRAP染色检测破骨细胞数目,共培养8 d后,骨片用甲苯胺蓝染色评价骨吸收情况,RT-PCR检测CD4~+T细胞RORγt,Foxp3,IL-17,TNF-α,TGF-β和IL-10等基因的表达,以及破骨细胞相关基因MMP-9,TRAP和Cat-K的表达,ELISA试剂盒检测IL-17,TNF-α,TGF-β和IL-10等细胞因子的水平。结果显示,补骨脂素显著促进CD4~+T细胞的Foxp3,TGF-β和IL-10的表达,抑制CD4~+T细胞的RORγt,IL-17和TNF-α的表达。psoralen-CD~+4T细胞能显著促进RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,psoralen~+CD4~+T细胞能显著抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及骨吸收作用。补骨脂素通过促进CD4~+T细胞中CD4~+CD25~+Treg/Th17平衡向CD4~+CD25~+Treg发展,从而抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及骨吸收作用。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠肺功能、Th细胞漂移及调节性T细胞的影响

目的观察新风胶囊不同剂量组对佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠肺功能、Th1/Th2细胞、调节性T细胞(Treg)的影响。方法将8 4只大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型(M)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TGT)组和新风胶囊低剂量(XFC-L)组、新风胶囊中剂量(XFC-M)组、新风胶囊高剂量(XFC-H)组,每组12只,分别向除NC组外的其余动物右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 m L致炎,致炎后第19 d开始给药。NC组及M组给予生理盐水,其余5组分别给予MTX、TGT、XFC。观察各组大鼠各指标的变化。结果 (1)与NC组比较,M组大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺系数(LI)、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺泡炎积分、TNF-α、Th1/Th2细胞、TGF-β_1表达明显升高(P0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、CD4~+Treg、CD4~+CD25~+Treg、IL-10、Foxp3表达明显降低(P0.01)。(2)与M组比较,各治疗组大鼠体重、FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF、IL-10及Treg、Foxp3的表达升高;E、AI、LI、FEV1/FVC%及TNF-α、Th1/Th2细胞、TGF-β_1表达降低(P0.05,P0.01)。(3)与XFC-M组比较,其他各治疗组LI、肺泡炎积分及TNF-α、Th1/Th2细胞、TGF-β_1升高;FVC、FEF25、FEF50、FEF75及IL-10、CD4~+Treg、CD4~+CD25~+Treg、Foxp3降低(P0.05,P0.01)。结论 AA大鼠在关节局部肿胀同时肺功能降低;新风胶囊能明显改善AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数和提高肺功能,其机制是通过促进IL-10、CD4~+Treg、CD4~+CD25~+Treg及Foxp3的表达、抑制TNF-α、Th1/Th2细胞及TGF-β_1的表达,降低炎症反应和免疫复合物对组织器官的损伤,改善关节和肺部症状。     

愈障散神阙穴灸疗对肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者外周血IL-17 mRNA影响的临床研究

目的观察愈障散神阙穴灸疗治疗肾阳虚型慢性再生障碍性贫血的临床疗效及其对患者IL-17 mRNA的影响。方法将70例慢性再生障碍性贫血患者随机分为治疗组与对照组,每组35例。对照组采用西医常规治疗,治疗组在对照组治疗措施基础上加用愈障散神阙穴灸疗。两组疗程均为6个月,观察临床疗效以及血象指标(Hb、WBC、PLT)、血清IL-17水平、外周血T淋巴细胞中IL-17 mRNA表达变化情况。结果 1疗程结束时,最终完成试验者63例,治疗组32例,对照组31例。2治疗组、对照组总有效率分别为87.50%、61.29%;组间临床疗效,差异有统计学意义(P0.05)。3治疗前后组内比较,两组Hb、WBC、PLT差异有统计学意义(P0.05);组间治疗后比较,Hb、WBC差异有统计学意义(P0.05)。4治疗前后组内比较,两组血清IL-17及外周血T淋巴细胞中IL-17 mRNA相对值差异有统计学意义(P0.05);组间治疗后比较,血清IL-17及外周血T淋巴细胞中IL-17 mRNA相对值差异有统计学意义(P0.05)。5两组均未见明显不良反应。结论愈障散神阙穴灸疗治疗肾阳虚型慢性再生障碍性贫血,可显著改善血象;其机制可能与降低血清IL-17及外周血T淋巴细胞IL-17mRNA表达有关。     

益气通阳汤对血小板减少性紫癜小鼠模型的作用

目的:观察益气通阳汤对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠外周血血小板(PLT)数、骨髓巨核细胞数和巨核细胞数分类、外周血T,B淋巴细胞亚群变化的影响。方法:设计用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)连续注射小鼠,造成ITP小鼠模型,分别给益气通阳汤(150,75,37.5 g.kg-1.d-1)组,正常对照组、模型对照组给予生理盐水,连续给药14 d。应用血细胞分析仪测定PLT、显微镜观察巨核细胞形态分类、塑料包埋法计数小鼠股骨巨核细胞数、流式细胞仪检测T,B淋巴细胞亚群。结果:模型小鼠外周血PLT数持续明显减低、骨髓巨核细胞数增多、其中原幼巨核细胞比例明显增高,产板巨核细胞比例明显减低,外周血CD3+CD4+T细胞减低,CD3+CD8+T细胞明显增高,CD4+/CD8+明显降低。给予益气通阳汤治疗小鼠的PLT明显增高、巨核细胞数减少、产板巨核细胞比例明显增高,CD3+CD4+T细胞增高,CD3+CD8+T细胞比例降低,CD4+/CD8+升高。结论:益气通阳汤能提升ITP模型小鼠PLT数,提高产板巨核细胞比例,改善T淋巴细胞的失衡,达到治疗ITP的作用。     

芪参汤对肝纤维化大鼠肝组织辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的观察芪参汤对肝纤维化大鼠肝组织辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响,探讨其抗肝纤维化作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、芪参汤组及秋水仙碱组,每组10只。采用四氯化碳腹腔注射法制备肝纤维化大鼠模型。造模期间芪参汤组及秋水仙碱组分别给予芪参汤(2 g/mL)及秋水仙碱混悬液(20 mg/L)灌胃,空白组、模型组予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续8周。全自动生化分析仪检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及总胆红素(TBil)水平;ELISA检测肝组织白细胞介素(IL)-17A和IL-10含量;免疫组化检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测肝组织Th17和Treg比例;Westernblot和RT-PCR分别检测肝组织维甲酸相关孤儿受体γt(ROR-γt)、叉头状转录因子p3(Foxp3)蛋白和m RNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠肝纤维化评分、胶原染色面积明显增加(P0.05),血清AST、ALT、TBil水平明显升高(P0.05),IL-17A含量明显增加、IL-10含量明显减少(P0.05),肝组织TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显升高(P0.05),Th17比例增加、Treg比例减少,Th17/Treg比值明显增加(P0.05),肝组织ROR-γt蛋白和m RNA表达明显升高,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,芪参汤组和秋水仙碱组肝纤维化评分、胶原染色面积明显减少(P0.05),血清AST、ALT、TBil水平明显降低(P0.05),IL-17A含量明显减少,IL-10含量明显增加(P0.05),肝组织TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显降低(P0.05),Th17比例减少,Treg比例增加,Th17/Treg比值明显降低(P0.05),肝组织ROR-γt蛋白和m RNA表达明显降低,Foxp3蛋白表达明显升高(P0.05)。结论芪参汤可抑制大鼠肝纤维化,其作用机制可能与减少胶原纤维增生、改善大鼠肝功能、降低炎症因子水平、恢复Th17/Treg平衡有关。