外源性转化生长因子-β_3联合兔牙髓干细胞对兔骨缺损处成骨细胞转化生长因子-β_3表达的影响

目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β3)联合体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)对兔骨缺损处成骨细胞TGF-β_3表达的影响。方法 37只新西兰大白兔,取其中1只兔牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,体外培养,光镜下行细胞形态学观察,将DPSCs传代至第3代,冷冻储存待用。余36只新西兰大白兔随机分为PBS组、DPSCs组、TGF-β_3+DPSCs组,每组12只。在兔下颌前牙及磨牙区颊侧随机人工制备约8mm×2mm×3mm骨缺损区域,PBS组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+PBS 20μL,DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs 20μL,TGF-β3+DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs20μL+80ng/L TGF-β320μL。术后第4、8周3组分别处死6只兔,在骨缺损处行锥形束CT检查观察牙槽骨长度、宽度和高度丧失情况,采用茜素红染色观察骨缺损处骨愈合情况,采用免疫组织化学法观察种植体骨缺损处成骨细胞TGF-β_3表达水平。结果原代培养的兔DPSCs呈集落生长,多呈梭形,少数呈多角形或纺锤形;术后4周TGF-β_3+DPSCs组茜素红染色较PBS组、DPSCs组出现更多红色钙化结节,术后8周钙化结节进一步增多;术后4、8周,TGF-β_3+DPSCs组牙槽骨长度、宽度和高度丧失均少于DPSCs组和PBS组,DPSCs组少于PBS组(P0.05);术后4周,TGF-β_3+DPSCs组成骨细胞TGF-β_3表达水平(0.33±0.02)明显高于DPSCs组(0.15±0.01)和PBS组(0.09±0.03)(P0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P0.05);术后8周,TGF-β_3+DPSCs组成骨细胞TGF-β_3表达水平(0.46±0.01)明显高于PBS组(0.29±0.02)(P0.05),与DPSCs组(0.38±0.04)比较差异无统计学意义(P0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 DPSCs具有高度增殖的生物学特性,并具有成骨向分化潜能;外源性TGF-β_3联合DPSCs可增强内源性TGF-β_3的表达。     

骨形成蛋白-2与转化生长因子-β_3对牙髓干细胞成骨向分化的对比研究

目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β_3)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的影响。方法健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,镜下观察细胞形态及生长状况。将培养的第3代DPSCs分为BMP-2组和TGF-β_3组,分别加入浓度为80μg/L的BMP-2、TGF-β_3的完全培养液,采用免疫组织化学法于诱导第3、7天检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达,于第7、14天检测骨钙素(osteocalcin,OC)表达;诱导第7、14天,对BMP-2组、TGF-β_3组行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置显微镜下观察ALP活性染色结果。结果兔DPSCs分离、培养48h,组织块周围有细胞游出、贴壁生长,培养的第3代兔DPSCs大多为长梭形,也可为多角形,呈巢式或集落生长;TGF-β_3组诱导第3天COL-1表达的累计吸光度(integrated optiacal density,IOD)值(159 676.79±63 959.56)高于BMP-2组(44 047.33±15 853.65)(P0.05),诱导第7天COL-1表达的IOD值(245 378.26±60 084.60)与BMP-2组(223 294.43±80 266.72)比较差异无统计学意义(P0.05);TGF-β_3组诱导第7天OC表达的IOD值(109 568.82±14 079.88)高于BMP-2组(55 168.57±1 694.93)(P0.05),诱导第14天OC表达的IOD值(411 544.95±82 803.24)与BMP-2组(360 103.54±20 835.36)比较差异无统计学意义(P0.05);BMP-2组、TGF-β_3组诱导第7天出现少量淡蓝色ALP阳性区,诱导第14天蓝色ALP阳性区增大且蓝染颜色加重,镜下观察2组无明显差异。结论与BMP-2比较,TGF-β_3对早期兔DPSCs向成骨细胞分化有较明显的促进作用。     

过氧化还原蛋白酶2对颈动脉粥样硬化血管内皮细胞增殖和凋亡及迁移的影响

目的探讨过氧化还原蛋白酶2(peroxlredoxin 2, Prdx2)对颈动脉粥样硬化血管内皮细胞HCVSMCs增殖、凋亡与迁移的影响。方法对数生长期人颈动脉粥样硬化血管内皮细胞HCVSMCs随机分为空白组(不进行转染)、对照组(转染pcDNA3.0载体)和观察组(转染pcDNA3.0-Prdx2载体)。取转染24、48 h细胞,采用MTT法检测细胞增殖,双染法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测Prdx2、Myc蛋白相对表达量,Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果转染24、48 h后培养24 h,观察组细胞增殖指数[(66.77±8.22)%、(78.40±9.48)%]高于对照组[(35.68±7.11)%、(46.83±10.03)%]、空白组[(35.28±8.14)%、(49.02±8.11)%](P0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。转染24、48 h,观察组细胞凋亡指数[(5.66±0.20)%、(6.18±0.33)%]低于对照组[(15.76±0.55)%、(17.02±0.51)%]、空白组[(15.09±0.28)%、(17.03±0.77)%](P0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。转染48 h,观察组G_0/G_1期细胞比率[(59.52±4.63)%]高于对照组[(41.15±6.61)%]、空白组[(41.02±5.62)%](P0.05),S期和G_2/M期细胞比率[(13.97±2.56)%、(26.19±2.66)%]低于对照组[(25.05±4.87)%、(35.92±4.52)%]、空白组[(25.75±3.11)%、(35.44±4.55)%](P0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。转染24、48 h,观察组Prdx2蛋白相对表达量(7.92±0.40、8.45±0.08)、Myc蛋白相对表达量(4.55±0.09、4.58±0.16)高于对照组(Prdx2:1.82±0.67、1.91±0.02;Myc:1.14±0.08、1.51±0.09)和空白组(Prdx2:1.85±0.61、2.04±0.41;Myc:1.16±0.10、1.53±0.10)(P0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。转染24、48 h,观察组细胞迁移距离[(91.22±5.11)、(98.04±6.34)μm]较对照组[(45.45±6.23)、(54.11±7.22)μm]、空白组[(45.61±4.09)、(55.72±5.11)μm]远(P0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 Prdx2高表达能促进颈动脉粥样硬化血管内皮细胞HCVSMCs增殖与迁移,抑制其凋亡,调节细胞周期,促进Myc蛋白表达,抑制动脉粥样硬化进展。     

TRPV4活化调控炎性小体Nod样受体家族3在小鼠膀胱上皮细胞损伤中作用和机制研究

目的探讨瞬时受体电位离子通道香草素受体亚家族4(transient receptor potential vanilloid receptor 4, TRPV4)通道活化在小鼠原代培养的膀胱上皮细胞损伤中的作用及其分子机制。方法小鼠1只,原代培养膀胱上皮细胞,并分为对照组、刺激组、β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate, BHB)预处理组和细胞因子释放抑制药物3(cytokine release inhibitory drug 3, MCC950)预处理组,刺激组采用TRPV4激动剂GSK1016790A 100μmol/L进行刺激;BHB预处理组和MCC950预处理组分别给予10 mmol/L BHB和50μmol/L MCC950后采用TRPV4激动剂GSK1016790A进行刺激;对照组正常培养。4组细胞采用Calcein-AM/PI双染色法观察活细胞数和死细胞数;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)细胞毒实验检测细胞LDH水平;采用Western blot法检测刺激组GSK1016790A刺激前及刺激3、6、9 h时细胞Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(Nod-like receptor family pyrin domain-containing protein 3, NLRP3)及其下游活化产物胱冬肽酶-1(caspase-1 p10)相对表达量。结果刺激组Calcein-AM染色的活细胞数[(46.80±15.51)个]较对照组[(1 242.20±143.79)个]、BHB预处理组[(1 001.20±115.41)个]和MCC950预处理组[(1 144.00±138.62)个]减少(P0.05),BHB预处理组、MCC950预处理组少于对照组(P0.05),BHB预处理组与MCC950预处理组比较差异无统计学意义(P0.05);刺激组PI染色的死细胞数[(1 111.60±127.49)个]较对照组[(33.80±8.41)个]、BHB预处理组[(251.80±48.67)个]和MCC950预处理组[(265.20±31.57)个]增多(P0.05),BHB预处理组、MCC950预处理组多于对照组(P0.05),BHB预处理组与MCC950预处理组比较差异无统计学意义(P0.05);刺激组LDH水平[(85.27±7.18)u/L]高于对照组[(22.47±2.94)u/L]、BHB预处理组[(35.74±4.32)u/L]和MCC950预处理组[(37.09±4.09)u/L](P0.05),BHB预处理组、MCC950预处理组高于对照组(P0.05),BHB预处理组与MCC950预处理组比较差异无统计学意义(P0.05);刺激组GSK1016790A刺激3、6、9 h时细胞中NLRP3(0.68±0.07、0.86±0.08、0.79±0.09)、caspase-1 p10表达量(0.68±0.06、0.51±0.07、0.47±0.05)均高于刺激前(0.36±0.05、0.24±0.06)(P0.05)。结论 TRPV4可通过活化炎性小体NLRP3导致小鼠膀胱上皮细胞损伤,调控TRPV4-NLRP3可能为膀胱过度活动症治疗提供新靶点。     

miR-326靶向MAPK/MEK信号通路抑制食管鳞状细胞癌恶性生物学行为

目的探讨miR-326靶向MAPK/MEK信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 20例食管鳞状细胞癌患者,取手术切除食管癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-326mRNA和MAPK mRNA相对表达量,采用免疫组织化学法检测MAPK蛋白表达。3种食管癌细胞系(KYSE150、EC9706、TE-9)和人正常食管上皮细胞系Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-326 mRNA和MAPK mRNA相对表达量,Western blot法检测细胞MAPK蛋白相对表达量。将对数生长期EC9706细胞随机分为miR-326组、转染对照组和空白对照组,miR-326组和转染对照组分别转染miR-326 mimic和mimic NC,空白对照组细胞不作任何处理,采用Western blot法检测细胞MAPK、p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量,克隆形成试验检测细胞克隆形成率,划痕试验检测细胞划痕闭合率,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。结果食管癌组织miR-326 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P0.05),MAPK mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P0.05)。KYSE150、EC9706和TE-9细胞miR-326 mRNA相对表达量均低于Het-1A细胞(P0.05),MAPK mRNA和MAPK蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P0.05),且EC9706细胞MAPK蛋白相对表达量最高。miR-326组细胞MAPK 3'UTR WT荧光素酶活性(0.53±0.05)明显低于转染对照组(1.22±0.14)(P0.05),MAPK 3'UTR MUT荧光素酶活性(0.86±0.06)与转染对照组(0.91±0.11)比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-326组细胞MAPK蛋白相对表达量(0.32±0.15)低于转染对照组(0.88±0.07)和空白对照组(0.91±0.06)(P0.05),细胞克隆形成率[(21.30±0.55)%]、划痕闭合率[(29.47±4.12)%]和侵袭细胞数[(113.86±3.15)个]低于转染对照组[(75.43±0.81)%、(80.52±2.51)%、(427.27±4.25)个]和空白对照组[(79.13±0.65)%、(83.44±1.87)%、(468.10±3.38)个](P0.05),G_0/G_1期细胞比率[(63.15±1.20)%]和细胞凋亡率[(18.54±0.60)%]高于转染对照组[(41.18±0.60)%、(5.28±1.30)%]和空白对照组[(45.11±0.80)%、(4.13±0.90)%],S期和G_2/M期细胞比率及p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量低于转染对照组和空白对照组(P0.05),转染对照组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-326靶向抑制MAPK/MEK信号通路的激活,影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。     

唐草片对注射丝裂霉素C小鼠造血功能的保护作用

目的探讨唐草片对化疗药物引起的小鼠白细胞减少症的防治作用。方法成年健康小鼠60只,随机分为正常对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药物对照组,每组10只。唐草片低、中、高剂量组分别灌服0.5、1.0、2.0g/kg唐草片,模型组、正常对照组灌服0.1mL/10g水。5d后除正常对照组外,每只动物腹腔注射3.0g/kg丝裂霉素C,第10天,再次腹腔注射2.0g/kg丝裂霉素C,阳性药物对照组在造模成功后皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子50μg/kg,连续注射4d。各组在完成2次丝裂霉素C注射后,每周测定1次外周血细胞。实验结束时取各组小鼠一侧股骨骨髓细胞,培养14d后计数红细胞集落生成单位、粒细胞-巨噬细胞集落生成单位、粒细胞-红细胞-巨噬细胞-巨核细胞集落生成单位数量,取另一侧股骨骨髓细胞,计数有核细胞数。结果注射丝裂霉素C后24d时,中、低剂量组和阳性药物对照组白细胞计数[(9.91±2.73)×109/L、(10.00±3.10)×109/L、(9.68±3.19)×109/L]明显高于模型组[(6.92±1.61)×109/L](P0.05),与正常对照组[(9.60±2.07)×109/L]比较差异无统计学意义(P0.05);40d时,低剂量组白细胞计数[(15.13±2.41)×109/L]高于模型组[(10.06±2.17)×109/L](P0.05);33d时,低剂量组红细胞数[(10.47±0.57)×1012/L]高于模型组[(9.10±1.15)×1012/L](P0.05);低剂量组红细胞集落生成单位[(29.0±9.9)个/105]、粒细胞-巨噬细胞集落生成单位[(31.0±9.9)个/105]克隆数明显高于模型组[(6.5±0.7)、(17.5±2.1)个/105](P0.05),中剂量组粒细胞-红细胞-巨噬细胞-巨核细胞集落生成单位克隆数[(16.0±2.8)个/105]明显高于模型组[(8.0±1.4)个/105](P0.05)。结论唐草片对丝裂霉素C造成的白细胞降低模型小鼠有升高白细胞计数、保护造血功能的作用。     

Krüppel样因子4对HeLa细胞生物学行为的影响

目的探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对HeLa细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 HeLa细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E细胞采用Western blot法检测KLF4蛋白相对表达量。对数生长期人HeLa细胞分为对照组、HeLa/KLF4组和阴性对照组,其中对照组细胞正常培养,不进行转染;HeLa/KLF4组和阴性对照组细胞分别转染人KLF4表达质粒和KLF4空载质粒;采用CCK-8增殖实验检测转染24、48、72 h后3组细胞生长抑制率,采用CCK-8黏附实验检测细胞黏附能力,采用Transwell侵袭和迁移实验检测3组细胞侵袭细胞数和迁移细胞数。结果 HeLa细胞中KLF4蛋白相对表达量(0.22±0.03)低于正常宫颈上皮Ect1/E6E细胞(0.78±0.10)(P0.05),HeLa/KLF4组细胞中KLF4蛋白相对表达量(0.75±0.09)高于阴性对照组(0.32±0.04)和对照组(0.34±0.05)(P0.05),阴性对照组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染24、48、72 h,HeLa/KLF4组细胞生长抑制率均高于阴性对照组和对照组(P0.05),阴性对照组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);培养1、2 h后,HeLa/KLF4组细胞黏附能力低于阴性对照组和对照组(P0.05),培养3、4 h后3组细胞黏附能力比较差异无统计学意义(P0.05);培养24 h后,HeLa/KLF4组侵袭细胞数[(28.48±4.33)个]和迁移细胞数[(97.73±17.88)个]明显低于对照组[(69.34±8.58)、(220.68±34.25)个]和阴性对照组[(62.25±6.78)、(208.14±25.83)个](P0.05),对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 KLF4在宫颈癌中可能起抑癌基因的作用,对宫颈癌细胞增殖、生长有抑制效果,并可降低癌细胞的黏附能力、侵袭和迁移能力,KLF4有可能成为宫颈癌发生、发展研究的新靶点。     

miR-708对肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-708对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移能力的影响。方法对数生长期人肺腺癌A549细胞株随机分为转染组和对照组,转染组通过质粒转染上调miR-708表达,对照组采用常规质粒转染。转染24h,EDU染色后荧光显微镜下观察,计算2组A549细胞增殖率;转染后24、48h,采用细胞划痕实验检测2组A549细胞迁移距离。结果转染24h,转染组A549细胞增殖率[(19.58±1.15)%]较对照组[(42.04±1.04)%]低(P0.05);转染24、48h,转染组细胞迁移距离[(0.47±0.03)、(0.90±0.02)cm]较对照组[(0.75±0.04)、(1.44±0.02)cm]短(P0.05)。结论miR-708可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移能力。     

转化生长因子-β_3对兔牙髓干细胞增殖及骨向分化的影响

目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β_3)对体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖和分化的影响。方法采用酶解组织块法将兔DPSCs分离培养获得DPSCs,光镜下行形态学观察;将体外培养的第3代DPSCs分为5组,分别为对照组、20μg/L TGF-β_3组、40μg/L TGF-β_3组、80μg/L TGF-β_3组和100μg/L TGF-β_3组,分别加入0、20、40、80、100μg/L TGF-β_3;采用MTT法检测5组DPSCs A490值,采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原酶(collagenⅠ,Col-Ⅰ)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达情况,采用茜素红染色检测出现矿化结节情况,并进行比较。结果兔DPSCs呈集落状生长,在体外有一定克隆形成能力;对照组及20、40、80、100μg/L TGF-β_3组兔DPSCs A490值分别为0.34±0.55、0.34±0.19、0.33±0.47、0.33±0.30、0.34±0.47,各组间两两比较差异均无统计学意义(P0.05);80、100μg/L TGF-β_3组诱导后第3天出现Col-Ⅰ阳性表达,第7天开始消失,第5~7天出现BSP阳性表达,第7~14天出现OC阳性表达,第7天出现矿化结节;40μg/L TGF-β_3组第5~7天均有Col-Ⅰ阳性表达,第7天出现BSP阳性表达,第14天出现OC阳性表达,第14天出现矿化结节;20μg/L组第7天出现Col-Ⅰ阳性表达,第14天消失,第14天出现BSP阳性表达,第21天出现OC阳性表达,第21天出现矿化结节;对照组Col-Ⅰ、BSP和OC均为阴性,未出现矿化结节。结论TGF-β_3对体外培养的兔DPSCs增殖无影响,但对兔DPSCs向成骨细胞分化能力有一定促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖关系。     

沉默p21活化激酶1表达对人黑素瘤A375细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1, PAK1)基因表达对人黑素瘤A375细胞凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法对数生长期人黑素瘤A375细胞随机分为转染组(转染PAK1特异性shRNA)、阴性对照组(转染NC-shRNA)、空白对照组(不进行转染)。转染后培养72 h,采用实时荧光定量PCR法检测A375细胞PAK1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测A375细胞PAK1及p-PAK1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果转染后培养72 h,转染组PAK1 mRNA相对表达量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相对表达量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相对表达量(0.21±0.03)均低于阴性对照组(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白对照组(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P0.05),细胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于阴性对照组[(5.86±0.51)%]、空白对照组[(5.43±0.03)%](P0.05),迁移细胞数[(47.00±2.23)个]、侵袭细胞数[(30.00±4.44)个]较阴性对照组[(76.00±4.85)、(54.00±3.67)个]、空白对照组[(77.90±4.97)、(56.00±4.12)个]少(P0.05),阴性对照组上述各指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论沉默PAK1基因表达可促进人黑素瘤A375细胞凋亡,降低其迁移及侵袭能力。     

敲除SIRT1对急性髓细胞白血病小鼠白血病细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨急性髓细胞白血病小鼠SIRT1表达及对白血病细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 C57BL/6J小鼠10只,随机分为观察组和对照组各5只。2组小鼠应用半致死剂量X射线(4.75 Gy)照射7 min后,经尾静脉移植2.5×10~5个病毒感染的白血病细胞制备急性髓细胞白血病模型。移植第14天,观察组腹腔注射pIpC溶液5 mg/kg,隔天注射1次,共3次,诱导SIRT1敲除;对照组注射等量生理盐水。移植第24天处死2组小鼠,取股骨骨髓提取白血病细胞,采用实时荧光定量PCR法检测SIRT1 mRNA、细胞周期蛋白依赖性激酶1 mRNA、p19 mRNA、p21 mRNA、p27 mRNA相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果观察组SIRT1 mRNA相对表达量(0.11±0.01)低于对照组(1.01±0.01)(P0.05),p19 mRNA、p21 mRNA、p27 mRNA相对表达量(3.76±0.22、1.53±0.06、2.23±0.02)高于对照组(1.01±0.01、1.02±0.01、1.01±0.01)(P0.05),细胞周期蛋白依赖性激酶1 mRNA相对表达量(1.05±0.02)与对照组(1.01±0.02)比较差异无统计学意义(P0.05)。观察组细胞凋亡率[(30.3±0.3)%]与对照组[(27.3±0.4)%]比较差异无统计学意义(P0.05)。观察组G_0期细胞比率[(55.22±0.60)%]高于对照组[(19.20±0.30)%](P0.05),G_1期、S/G_2/M期细胞比率[(24.20±0.50)%、(20.10±0.30)%]与对照组[(56.11±0.60)%、(24.38±0.40)%]比较差异无统计学意义(P0.05)。结论敲除SIRT1不影响急性髓细胞白血病小鼠白血病细胞凋亡,可使白血病细胞停滞于G_0期,其机制可能与上调细胞周期抑制基因p19、p21、p27表达有关。     

牙髓再生术对Beagle犬牙体牙髓病模型中炎症微环境的作用

目的探讨牙髓病变程度与炎性因子水平的关系以及牙髓再生术对犬牙体牙髓病炎性因子的影响。方法 4个月龄雄性比格犬10只,随机分为根尖感染组和去牙髓组各5只(每组各20颗牙)。每组再根据手术方式分为牙髓再生术亚组和根尖诱导成形术亚组各10颗牙。4个亚组患牙均行X线检查,并行组织病理学检查HE染色,采用ELISA法检测牙髓P物质(substance P, SP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1, IL-1)水平。结果造模4周时,根尖感染组和去牙髓组X线检查可见患牙根尖暗影;术后12周,4个亚组患牙根尖病变区范围均有不同程度减小或消失,根尖孔闭合,根尖感染组牙髓再生术亚组较根尖诱导成形术亚组牙髓组织炎症细胞明显减少;术后12周,4个亚组犬牙髓组织SP、VEGF、TNF-α和IL-1水平均低于术前(P0.05);根尖感染组的根尖诱导成形术亚组牙髓组织SP[(33.28±2.39)ng/L]、VEGF[(41.35±9.35)ng/L]、TNF-α[(67.08±10.62)ng/L]和IL-1[(85.26±4.23)ng/L]水平低于牙髓再生术亚组[(82.12±2.66)、(98.18±7.82)、(124.62±9.20)、(120.75±5.40)ng/L](P0.05);去牙髓组的牙髓再生术亚组牙髓组织SP[(48.64±3.90)ng/L]、VEGF[(56.38±4.46)ng/L]、TNF-α[(58.25±9.04)ng/L]和IL-1[(42.42±5.68)ng/L]水平低于根尖诱导成形术亚组[(88.05±3.56)、(110.20±6.90)、(96.38±7.85)、(90.28±6.40)ng/L](P0.05);去牙髓组的牙髓再生术亚组牙髓组织SP、VEGF、TNF-α和IL-1水平低于根尖感染组的牙髓再生术亚组(P0.05),根尖诱导成形术亚组牙髓组织SP、VEGF、TNF-α和IL-1水平高于根尖感染组的根尖诱导成形术亚组(P0.05)。结论牙髓病变程度与牙髓组织炎症细胞因子IL-1、TNF-α、SP和VEGF水平具有一定相关性,牙髓再生术和根尖诱导成形术均可修复牙髓病变,但牙髓再生术对去牙髓患牙的治疗效果更佳。     

胃癌间质干细胞活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖及迁移作用的探讨

目的探讨胃癌间质干细胞(gastric-cancer-derived mesenchymal stem cells,GC-MSCs)活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法采用贴壁培养法从胃癌组织中分离GC-MSCs,成骨、成脂培养基诱导GC-MSCs分化。收集GC-MSC上清,胃癌细胞系HGC-27分别经L-DMEM培养液(Control组)、GC-MSC上清(GC-MSC组)、GC-MSC上清及20μmol/L ICG001(GC-MSC+ICG001组)处理24 h,克隆形成试验和Transwell迁移试验分别检测细胞增殖、迁移能力,免疫荧光染色或western blot检测Wnt/β-catenin信号相关蛋白(β-catenin、CD44、CyclinD3)的表达水平。结果 GC-MSC上清处理组HGC-27细胞增殖形成的克隆数[(203.700±8.762)个]显著高于Control组[(33.670±1.856)个](t=18.98,P0.01),且其迁移细胞数[(349.700±7.881)个]较Control组[(145.000±3.712)个]亦显著增多(t=23.46,P0.01)。GC-MSC上清可促进HGC-27细胞β-catenin入核,诱导Wnt/β-catenin信号下游蛋白CD44、CyclinD3的表达。Wnt/β-catenin信号抑制剂ICG001可下调上述分子的表达,逆转GC-MSC上清对HGC-27细胞的促增殖、促迁移作用。与GC-MSC组[(203.000±3.606)个]相比,GC-MSC+ICG001组的克隆细胞数[(70.667±2.603)个]显著减少(q=39.24,P0.01),且迁移细胞数[(166.000±3.215)个]较GC-MSC组[(352.700±4.096)个]显著降低(q=47.73,P0.01)。结论 GC-MSCs活化Wnt/β-catenin信号并促进胃癌细胞增殖及迁移。     

活性氧抑制剂增强胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的作用机制研究

目的探讨活性氧抑制剂在胰腺癌细胞中促进吉西他滨敏感性的作用机制。方法胰腺癌细胞株Miapaca-2分为对照组、吉西他滨组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组和吉西他滨+NAC组,分别采用PBS、吉西他滨、NAC和吉西他滨+NAC进行处理。处理48h后,采用流式细胞仪检测4组细胞中活性氧表达情况及细胞凋亡率,采用显微镜观察4组药物处理后存活细胞数,采用实时定量PCR法检测4组细胞中p21、白细胞介素(interleukin,IL)-8mRNA表达情况。结果处理48h后,吉西他滨组活性氧阳性表达率[(67.32±3.75)%]、p21mRNA(52.26±1.53)和IL-8mRNA表达量(27.05±0.74)明显高于对照组[(25.32±2.23)%、0.95±0.08、0.90±0.10]、NAC组[(36.73±5.42)%、5.26±0.89、3.23±0.97]和吉西他滨+NAC组[(45.32±7.23)%、31.24±3.24、7.33±0.56](P0.05),吉西他滨+NAC组高于对照组(P0.05);吉西他滨+NAC组存活细胞数[(1.06±0.07)×104个/mL]明显少于对照组[(4.23±0.40)×104个/mL]、吉西他滨组[(1.97±0.03)×104个/mL]和NAC组[(4.17±0.56)×104个/mL](P0.05),吉西他滨组少于对照组和NAC组(P0.05),对照组与NAC组比较差异无统计学意义(P0.05);吉西他滨+NAC组细胞凋亡率[(49.23±3.07)%]明显高于对照组[(9.63±3.37)%]、吉西他滨组[(25.32±5.15)%]和NAC组[(15.57±5.76)%](P0.05),吉西他滨组高于对照组(P0.05),对照组、吉西他滨组与NAC组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论活性氧抑制剂NAC可提高吉西他滨对胰腺癌细胞株的敏感性,可能与活性氧抑制剂能明显促胰腺癌细胞凋亡及抑制细胞中IL-8、p21基因表达有关。     

牛磺酸上调基因1对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及迁移和凋亡的影响

目的探讨牛磺酸上调基因1(taurine-upregulated gene 1,TUG1)在人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、迁移和凋亡中的作用。方法采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术构建TUG1慢病毒载体。将对数生长期人绒毛膜癌JEG-3细胞随机分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照靶序列慢病毒载体)和转染组(转染siRNA-TUG1慢病毒载体)。采用实时荧光定量PCR法检测3组TUG1mRNA、caspase-3mRNA、caspase-9mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组TUG1、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量,采用Transwell小室试验检测3组培养24h细胞侵袭能力,采用CCK-8法检测3组细胞培养72h吸光度值,采用流式细胞术检测3组培养72h细胞凋亡率。结果构建siRNA-TUG1载体的慢病毒滴度为3×108 TU/mL;转染72 h,转染组TUG1 mRNA、caspase-3mRNA、caspase-9mRNA相对表达量(0.42±0.02、0.31±0.01、0.21±0.01)低于阴性对照组(1.09±0.03、1.29±0.03、1.02±0.01)和空白对照组(1.01±0.01、1.02±0.02、1.00±0.01)(P0.05),TUG1、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量(0.24±0.07、0.49±0.23、0.11±0.02)低于阴性对照组(7.32±0.05、10.12±1.47、9.98±2.78)和空白对照组(6.08±0.19、9.88±0.93、9.91±1.44)(P0.05);培养24h,转染组迁移细胞数[(52.11±4.09)个]较阴性对照组[(142.11±14.02)个]和空白对照组[(131.32±18.39)个]少(P0.05);培养72h,转染组细胞吸光度值(24.27±3.11)较阴性对照组(51.12±2.47)和空白对照组(60.34±1.24)低(P0.05),细胞凋亡率[(35.21±13.31)%]较阴性对照组[(3.09±1.13)%]和空白对照组[(4.21±1.24)%]高(P0.05);阴性对照组各观察指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 TUG1沉默表达慢病毒载体可明显抑制人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

PI3K/Akt信号通路对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的探讨PI3K/Akt信号通路在人结肠癌HT-29细胞增殖中的作用。方法人结肠癌HT-29细胞分为结肠癌组和抑制剂组,癌旁正常细胞株为对照组,均取对数生长期细胞进行实验。结肠癌组和对照组应用培养基+等量生理盐水进行培养,抑制剂组应用培养基+PI3K/Akt信号通抑制剂LY294002 10μL进行培养。MTT法检测3组培养24、48、72h时细胞增殖情况,Western blot法检测3组PI3K、Akt、磷酸化Akt、P-糖蛋白表达,流式细胞仪检测3组细胞周期及凋亡情况。结果培养24、48、72h,对照组和抑制剂组细胞吸光度值均小于结肠癌组(P0.05),对照组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);培养24h,对照组和抑制剂组PI3K、Akt、磷酸化Akt和P-糖蛋白表达均低于结肠癌组(P0.05),对照组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);流式细胞仪检测结果显示,结肠癌组G_1期细胞比率[(62.54±5.15)%]、细胞凋亡率[(45.18±6.76)%]均高于对照组[(39.47±3.84)%、(10.98±0.62)%]和抑制剂组[(37.18±2.03)%、(9.31±0.41)%](P0.05),G_2/M期细胞比率[(11.34±2.06)%]低于对照组[(29.32±3.77)%]和抑制剂组[(28.71±2.35)%](P0.05),S期细胞比率[(26.75±2.46)%]与对照组[(29.81±3.18)%]和抑制剂组[(30.44±2.87)%]比较差异均无统计学意义(P0.05);抑制剂组G_1期、G_2/M期、S期细胞比率及细胞凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,其机制可能与抑制其转导通路下游P-糖蛋白表达、使细胞周期阻滞于G_1期有关。     

经皮椎体成形术联合骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折效果观察

目的探讨骨质疏松性椎体压缩性骨折(osteoporotic vertebral compression fracture,OVCF)患者应用经皮椎体成形术(percutaneous vertebroplasty,PVP)联合骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗的临床效果和安全性。方法 40例OVCF患者,依据治疗方式分为观察组22例和对照组18例。对照组行PVP术,观察组PVP术后24h静脉注射第3代BMSCs混悬液(细胞浓度为1×109/L)200mL。比较2组术前,术后1、4周及3个月视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)和椎体高度压缩率,记录骨水泥渗漏发生情况。结果观察组术前VAS评分[(8.32±1.06)分]、椎体高度压缩率[(38.91±8.12)%]与对照组[(8.37±1.13)分、(38.76±7.83)%]比较差异无统计学意义(P0.05);术后1、4周及3个月,观察组VAS评分[(3.39±0.42)、(2.17±0.31)、(1.85±0.19)分]、椎体高度压缩率[(19.49±7.74)%、(17.06±8.85)%、(16.53±7.42)%]低于术前(P0.05),对照组VAS评分[(3.51±0.54)、(2.42±0.24)、(2.16±0.32)分]、椎体高度压缩率[(26.74±8.63)%、(24.31±7.92)%、(20.85±7.71)%]低于术前(P0.05);观察组术后4周及3个月VAS评分,术后1、4周及3个月椎体高度压缩率低于对照组(P0.05);观察组骨水泥渗漏发生率(25.81%)低于对照组(52.00%)(P0.05)。结论 OVCF患者应用PVP联合BMSCs治疗效果满意,安全性好。     

转化生长因子-β_1对人牙周膜干细胞生物学行为的影响

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-β1)和对照组(培养液),采用CCK-8法检测2组培养第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖能力;培养48h,采用Transwell小室法检测2组细胞迁移能力,Western blot法检测2组Notch1胞内段(Notch1intracellular domain,NICD)蛋白相对表达量。结果 TGF-β1组培养第1天细胞吸光度值(0.45±0.02)与对照组(0.45±0.03)比较差异无统计学意义(P0.05),培养第2、3、4、5、6、7天细胞吸光度值(0.81±0.08、1.82±0.07、2.14±0.09、2.49±0.11、2.69±0.12、2.78±0.08)均高于对照组(0.61±0.04、1.17±0.05、1.47±0.10、1.99±0.11、2.20±0.03、2.29±0.08)(P0.05);培养48h,TGF-β1组迁移细胞数目[(61.40±2.30)%]较对照组[(31.80±1.48)%]多,NICD蛋白相对表达量(0.49±0.01)较对照组(0.35±0.01)高(P0.05)。结论 TGF-β1可激活Notch1信号通路,促进人PDLSCs增殖和迁移。