AnnexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞中表达的研究

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达.方法采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达.结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC中的表达随胚胎的发育逐渐增强,在成人期表皮KC中的表达明显高于胚胎期.②annexinⅡ呈胞膜方式表达,主要分布于基底上层的分化KC中.结论annexinⅡ可能参与表皮KC分化的调控.     

小鼠表皮角质形成细胞中Ca^2＋对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的：探讨小鼠表皮角质形成细胞（KC）中Ca^2 对组织型纤溶酶原激活剂（tPA)表达的调节作用及其与分化的关系。方法：采用免疫组化及原位杂交技术定性，定量检测低Ca^2 (0.05mmol/L)及高Ca^2 （1．5mmol/L)浓度对tPA,tPA mRNA的表达及表皮KC分化的影响。结果：与未经Ca^2＋处理的对照相比，低Ca^2 浓度下培养的表皮KC中，tPA mRNA3及tPA量均增加（P＜0．05），KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性，KC胞体较小，细胞形态趋于圆形；而高Ca^2 浓度下的培养表皮KC中，tPA mRNA及tPA量显著增加（P＜0．001），K10抗原呈强阳性表达，KC胞体增大，形态为典型的多角形。结论：Ca^2 浓度的增高促进了tPA mRNA及tPA的表达，并与KC分化有关。     

表皮角质形成细胞分化中tPA分泌的研究

目的探讨表皮角质形成细胞中,tPA分泌的变化及其对细胞分化的影响.方法利用免疫细胞化学、酶联免疫吸附测定等方法,检测高浓度Ca2 作用下,培养的小鼠分化表皮角质形成细胞表面及培养上清中tPA表达的变化.结果高Ca2 浓度下,KC分化标记物K10在培养24h即有较强的表达,与此同时,在培养上清中检测到大量分泌tPA;培养24h以后,随着培养时间的延长,KC培养上清中分泌tPA的含量呈现出降低趋势,KC表面tPA量则呈现出增加趋势,当有L-精氨酸存在时,上述两种趋势均明显减弱.结论小鼠表皮KC分化过程中存在tPA的分泌,分泌tPA能通过其赖氨酸位点进一步吸附于KC表面,进而促进KC的分化.     

小鼠表皮角质形成细胞中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的探讨小鼠表皮角质形成细胞(KC)中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂(tPA)表达的调节作用及其与分化的关系.方法采用免疫组化及原位杂交技术定性、定量检测低Ca2+(0.05mmol/L)及高Ca2+(1.5mmol/L)浓度对tPA、tPAmRNA的表达及表皮KC分化的影响.结果与未经Ca2+处理的对照相比,低Ca2+浓度下培养的表皮KC中,tPAmRNA及tPA量均增加(P＜0.05),KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性,KC胞体较小,细胞形态趋于圆形;而高Ca2+浓度下的培养表皮KC中,tPAmRNA及tPA量显著增加(P＜0.001),K10抗原呈强阳性表达,KC胞体增大,形态为典型的多角形.结论Ca2+浓度的增高促进了tPAmRNA及tPA的表达,并与KC分化有关.     

EGF对小鼠角质形成细胞中组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的 探讨小鼠表皮角质形成细胞（KC）中,EGF对组织型纤溶酶原激活剂（tPA)表达的影响。方法 应用免疫组化及原位杂交技术, 结合图像分析,定性及定量检测在EGF作用下的小鼠表皮角质形成细胞中,tPA mRNA/蛋白质的表达。结果 小鼠表皮KC经EGF处理12、24、48、72h后,tPAmRNA/蛋白质的量均增加（P＜0．01）,tPAmRNA的表达的 高峰出现于EGF作用24h时,tPA蛋白质表达的高峰则出现于EGF作用48h时。EGF联合0．5、1．0、1．5mmol/L Ca^2 作用小鼠表皮KC48h,与EGF单独作用小鼠表皮KC48h时,tPAmRNAA／蛋白质的表达,均显著降低（P＜0．001）。结论 小鼠表皮KC中,EGF可以时间依赖方式促进 tPAmRNA／蛋白质的表达,但受Ca^2 浓度的影响。     

人表皮角质形成细胞中PAI-3/PCI的表达及作用

目的探讨人表皮角质形成细胞(KERATINOCYTE,KC)中,PAI-3/PCI的表达及作用。方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高CA2 浓度作用下,培养的人分化表皮KC及KC提取物角质壳中PAI-3的表达变化。结果高CA2 浓度下培养24H后,分化标记物K10弱阳性表达,PAI-3呈阳性表达;培养48H后,K10强阳性表达,而PAI-3的阳性表达明显增加,72H后,表达开始降低,在低CA2 浓度下阳性染色主要位于细胞核膜周围而高CA2 浓度下主要位于细胞质,同时,PAI-3存在终末分化KCS角质壳中。结论人表皮KC分化过程中,PAI-3的表达随着分化的增加而增加,PAI-3存在终末分化KCS角质壳蛋白中,表明PAI-3参与KC分化的作用。     

uPAR在人毛囊发育中的表达及其规律

目的 探讨人胚胎毛囊形成发育过程中,尿激酶型纤溶酶原激活剂受体（uPAR）的表达及其规律。方法 用免疫细胞化学和原位杂交分别对人胚胎毛囊起始期、延长期、分化期和胎毛阶段的表皮及毛囊的uPAR蛋白及mRNA的表达进行了检测,用图像分析系统进行了定量测定。结果 uPAR在起始期和延长期的整个毛囊中有表达,在分化期和胎毛前期毛囊的外根鞘有表达。在起始期、延长期、分化期和胎毛阶段前期表皮的基底层、最外层细胞有阳性表达。阳性表达在延长期最高,呈现出先增后减的趋势。结论 uPAR与角质形成细胞的增殖和迁移密切相关。     

角蛋白14在胎儿表皮发育中表达的研究

目的 了解角蛋白１４（Ｋ１４）在人胎儿表皮发育中的变化及意义。方法 早、中、晚期胎儿皮肤做冰冻切片,进行Ｋ１４的免疫细胞化学染色（Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ,ＩＣＣ）和原位杂交染色（ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＩＳＨ）,通过图像分析和统计学处理分析Ｋ１４的变化及规律。结果 人胚胎１２周表皮已表达Ｋ１４,中期表达量最高,晚期也有较高表达,但主要局限于表皮基底层细胞。结论 胎儿表皮基底层角朊细胞（ＫＣ）表达Ｋ１４,对维护ＫＣ形态,防止细胞溶解起重要作用。     

Ca2+调节人表皮角质形成细胞中PAI-3的表达

目的探讨Ca2 对人表皮角质形成细胞(keratinocyte, KC)中PAI-3表达的调节作用.方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高低Ca2 浓度作用下,培养的人表皮KC中PAI-3的表达变化.结果 PAI-3 mRNA及蛋白质在高低Ca2 浓度下培养的人表皮KC中均有表达,并且高Ca2 浓度培养条件下较低Ca2 浓度下明显增强.PAI-3阳性染色在低Ca2 浓度培养下主要位于核膜周围,而在高Ca2 浓度培养条件下主要位于细胞质.结论 Ca2 调节人表皮KC中PAI-3的表达,PAI-3可能具有调节KC分化的作用.     

多发性骨髓瘤细胞对血管内皮细胞tPA及PAI⁃1表达的影响

目的：研究多发性骨髓瘤细胞（multiple myeloma cells,MMCs）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）组织型纤维蛋白溶酶原激活剂（tissue?type plasminogen activator,tPA）、纤维蛋白溶酶原激活物抑制剂?1（plasminogen activator inhibitor?1,PAI?1）蛋白表达水平及mRNA表达水平的影响,了解多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者纤溶活性,从而进一步了解MM患者血栓形成的原因及机制。方法：MM细胞株U266与HUVEC共培养24、48、72 h,以同期单独培养的HUVEC、MMCs作为对照,ELISA法检测共培养组和对照组细胞培养上清中tPA、PAI?1的蛋白表达水平,PCR检测HUVEC、MMCs tPA、PAI?1 mRNA的表达水平。结果：无论是ELISA法还是PCR,均未检测到MMCs培养上清中tPA、PAI?1蛋白和mRNA的表达。与同期单独培养的HUVEC相比,ELISA法检测共培养体系中的HUVEC tPA、PAI?1表达水平均升高（P < 0.05）;对照组中,PAI?1与tPA的表达水平呈正相关（rs=0.80,P=0.01）;HUVEC与MMCs共培养体系中,PAI?1与tPA的表达水平呈正相关（rs =0.88,P=0.002）;HUVEC单独培养组中,t?PA、PAI?1表达水平与时间呈正相关（rs=0.90,P=0.001;rs=0.90,P=0.001）;共培养组中,t?PA、PAI?1表达水平与时间呈正相关（rs=0.95,P＜0.001;rs=0.84,P=0.004）;两组中tPA、PAI?1与GAPDH条带灰度值比值无明显差异（P > 0.05）。结论：MMCs可促进HUVEC对tPA及PAI?1的分泌,在保证细胞活力的前提下,随共培养时间延长,两者分泌增加,且PAI?1与tPA的表达呈一定相关性,然而,MMCs对HUVEC tPA及PAI?1 mRNA的表达无明显影响。     

表皮角质形成细胞分化无血清培养方法的建立

目的建立一种研究角质形成细胞分化的细胞培养方法.方法细胞培养采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(keratinocyte growth medium,KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化状态,并对分化标记物K10以及在银屑病患者受损表皮中表达异常增高的组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activa-tor,tPA)通过免疫细胞化学技术(immunocytochemistry,ICC)分别进行检测.结果低钙(0.09mmol/L)培养条件下,细胞处于未分化状态,K10染色为阴性,tPA呈弱阳性表达;高钙(1.5 mmol/L)条件下,细胞出现分层分化,K10染色为阳性,tPA的表达明显增强.结论通过改变KGM的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化,可用于角质形成细胞分化的研究.     

人胚胎干细胞分化为角质形成细胞过程中标志物的表达特点

目的：诱导人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）定向分化为角质形成细胞K-hESCs（keratinocyte derived from human embryonic stem cells）, 并分析诱导过程中K-hESCs不同标志物的表达特点。方法：运用含骨形成蛋白4、维甲酸和N2添加剂的上皮分化培养基直接诱导hESCs分化为K- hESCs,通过染色体核型分析检测K-hESCs核型,通过实时定量PCR检测K-hESCs在分化的不同时期基因的表达及其与原代人牙龈上皮细胞（human gingival epithelial cells,HGECs）、人永生化口腔上皮细胞（human immortalized oral epithelial cells,HIOECs）、人永生化皮肤角质形成细胞HaCaT的基因表达差异;利用免疫组织化学检测不同标志物在K-hESCs的蛋白表达。结果：运用上皮分化培养基成功地诱导hESCs分化为上皮样细胞K-hESCs; K-hESCs核型具有正常46条染色体,无结构异常;K-hESCs中角质形成细胞标志物基因p63的表达明显低于HaCaT细胞（P<0.05）,而与HGECs和HIOECs中的表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：运用上皮分化培养基可成功诱导hESCs分化为具有正常核型的K-hESCs;标志物的表达特点提示诱导hESCs分化为K-hESCs的过程是从hESCs向单层上皮干细胞分化继而转向复层上皮终末分化发展的趋势,最终得到的K-hESCs类似于单层鳞状上皮干细胞向终末分化初始阶段的角质形成细胞,该阶段的细胞由上皮干细胞静止状态被激活,处于分化初始高增殖活力阶段。     

人表皮角质形成细胞Toll样受体表达

目的 研究人表皮角质形成细胞Toll样受体表达谱.方法 培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK),采用分散酶分离表皮.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测10种Toll样受体mRNA表达,流式细胞仪检测HaCaT细胞和NHEK表面Toll样受体2和4蛋白的表达.结果 HaCaT细胞、NHEK以及分离的表皮均有全部10种Toll样受体mRNA表达,其表达强弱各不相同.流式细胞仪检测显示HaCaT细胞和NHEK表面有Toll样受体4蛋白的表达,而Toll样受体2无明显表达.结论 人表皮角质形成细胞中有Toll样受体1～10 mRNA的组成性表达.     

Omega-3多不饱和脂肪酸对角化细胞及成纤维细胞的作用

目的 观察Omega 3多不饱和脂肪酸对人表皮角化细胞增殖和人皮肤成纤维细胞分化的作用.方法 体外培养人表皮角化细胞和人皮肤成纤维细胞,用不同浓度Omega-3多不饱和脂肪酸(EPA)干预角化细胞,BrdU法测角化细胞增殖;不同浓度EPA干预成纤维细胞,ELISA法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)及人胶原蛋白1的表达;MTT法观察EPA对成纤维细胞活性的影响.结果 EPA浓度在200 μmol/L时,对人表皮角化细胞有明显的促增殖作用,显著提高成纤维细胞培养液中a-SMA的表达,降低人胶原蛋白1的表达.结论 EPA可能通过促进角化细胞增殖、诱导成纤维细胞分化改善伤口愈合.     

人子宫内膜上皮钙粘素的表达及意义

目的 :探讨上皮钙粘素 (E -cadherin)在人正常子宫内膜组织中的表达和变化规律的意义。方法 :采用免疫组化SP法 ,检测 35例人正常月经周期子宫内膜E -cadherin的表达水平。结果 :各期子宫内膜腺上皮均见E-cadherin的表达 ,增生期E -cadherin仅有弱表达 ,分泌期表达显著增加 (P <0 .0 5 ) ;在分泌中期表达最强 ,进入分泌晚期表达减弱。在分泌中期 ,也观察到间质细胞的中度表达 ,分泌晚期仅有弱表达。结论 :E -cadherin在人正常子宫内膜腺上皮和间质细胞规律性的表达 ,可能有利于胚胎着床。     

成纤维细胞生长因子10 mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达

目的:研究成纤维细胞生长因子10 mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达,探讨其在银屑病发病中的作用机制.方法:应用原位杂交法检测FGF10 mRNA在22例正常皮肤组织、银屑病皮损和未受累皮肤中的表达和分布.结果:原位杂交法检测发现,在22例正常皮肤组织、银屑病皮损和未受累皮肤表皮的全层或表皮中下层可见FGF10 mRNA表达(95%);在正常皮肤表皮的基底层或少量细胞内可见FGF10 mRNA的表达(5%);在寻常型银屑病非皮损表皮的中下层或个别细胞内可见FGF10 mRNA的表达(82%).寻常型银屑病皮损表皮中FGF10 mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.05).结论:FGF10 mRNA在银屑病发病早期阶段的表达增高可能与银屑病的早期发病有关.     

诱导表皮角质形成细胞体外分层的途径及机制

目的探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制.方法在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度.结果胚胎龄16 d的胎鼠皮片经气液界面培养3 d后,其表皮基底上角质形成细胞由2层增加为5层;经气液界面培养7 d后,胎鼠皮片表皮基底上角质形成细胞的局部区域分层已可达8层,细胞呈现更为分化的形态.在高浓度Ca2 (1.5 mmol/L)条件下培养7 d后,培养角质形成细胞发生了分层,分化标记物角蛋白K10在分层角质形成细胞中的表达明显增加.结论气液界面培养法及高浓度钙离子能诱导表皮角质形成细胞的体外分层,同时促进其分化.