二氢石蒜碱对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨二氢石蒜碱(DL)对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法:用H2O2(200μmol.L-1)处理PC12细胞建立氧化应激模型,并加入二氢石蒜碱预处理作为保护。噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞存活率和细胞损伤程度,利用荧光探针DCFH-DA和JC-1分别检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位。结果:H2O2作用于PC12细胞后,细胞存活率下降,LDH活性和ROS含量增高,线粒体膜电位降低,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.01);10-7～10-5mol.L-1DL预处理后,细胞存活率提高,LDH和ROS变低,线粒体膜电位回升,且在一定范围呈剂量依赖性。结论:DL对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与减少ROS产生和稳定线粒体膜电位有关。     

绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。     

BAPTA-AM对HepG-2细胞MT的保护作用及其机制

目的观察BAPTA-AM抗H2O2诱导的HepG-2细胞MT损伤作用并探讨其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)、Rhodamine 123(Rh 123))荧光染色、细胞色素C酶联免疫分析、Caspase-9活性检测试剂盒、活性氧ROS检测法分别测定HepG-2细胞活性、线粒体(MT)膜电位、MT细胞色素C(CytC)的释放、Caspase-9的激活、活性氧(ROS)的产生量。结果 BAPTA-AM能抑制H2O2损伤HepG-2细胞所致MT跨膜电位的降低,减少CytC的释放,抑制Caspase-9激活和ROS的生成,提高受攻击H2O2的细胞活力。结论 BAPTA-AM通过减轻钙超载,保护MT,抑制凋亡通路的激活,产生抗细胞损伤、挽救细胞生命之效。     

木犀草素对大鼠皮层神经元氧化损伤的保护作用

目的研究木犀草素对于皮层神经元氧化损伤的保护作用及其机制。方法用200μmol·L-1H2O2处理皮层神经元造成神经元的氧化损伤,用LDH活性检测细胞死亡,MTT测定线粒体活性,荧光分光检测神经元线粒体膜电位,细胞内ROS的积累以及过氧化氢酶和谷胱甘肽的含量变化。结果20μmol·L-1的木犀草素能有效的保护H2O2导致的神经元死亡,有效维护线粒体膜电位和线粒体活性,减少细胞内ROS的累积,并能通过提高细胞内谷胱甘肽的含量有效对抗氧化损伤,同时对于H2O2造成的过氧化氢酶活力和谷胱甘肽含量的急剧下降也有很好的保护作用。结论木犀草素是一种比较有效的对抗神经元氧化损伤的保护剂,它很可能通过维持线粒体的活性而达到神经保护作用,并通过提高细胞内谷胱甘肽的水平,增强神经元抗氧化损伤的能力。     

松果菊苷对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用及机制研究

目的研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法用终浓度为0.4 mmol.L-1的H2O2损伤PC12细胞,测定细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活性;用激光共聚焦法(LSCM)检测线粒体膜电位(MMP);用RT-PCR法检测Bcl-2和p53 mRNA表达量的变化。结果10 mg.L-1松果菊苷可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活力、升高线粒体膜电位、降低p53 mRNA水平但增高Bcl-2 mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。结论松果菊苷可保护H2O2诱导的PC12细胞损伤,升高MMP、下调p53mRNA和上调Bcl-2 mRNA可能是其作用机制。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

枸杞多糖对氧糖剥夺再灌注损伤后大鼠海马神经元的保护作用

目的研究并探讨枸杞多糖对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用。方法以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。MTT法测定神经细胞的存活率,分光光度计检测乳酸脱羟酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量,激光共聚焦显微镜(CLSM)测定海马神经元内Ca2+浓度和线粒体膜电位水平(MMP)。结果与氧糖剥夺再灌注损伤组比较,枸杞多糖10,20和40 mg·L-1可显著提高细胞存活率(P<0.01),降低乳酸脱氢酶漏出率(P<0.05),升高SOD和GSH-Px活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.05),抑制Ca2+浓度升高(P<0.05),枸杞多糖20和40 mg·L-1能显著降低线粒体膜电位水平(P<0.01)。结论枸杞多糖对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤具有明显保护作用。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的:观察珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)孵育24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果:珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H2O2所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性.结论:珠子参总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase 9表达有关.     

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测Bcl-2表达;比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);细胞存活率升高,培养液LDH活性降低,细胞SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量与ROS生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。     

艾塞那肽预处理对过氧化氢损伤的H9c2心肌细胞的保护作用研究

目的:研究胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物艾塞那肽(EX)预处理对过氧化氢损伤的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:取体外培养的H9c2心肌细胞,分为正常对照组、模型组和0·01、0·1、1、10nmol·L-1EX预处理组。除正常对照组外,其余各组用过氧化氢诱导H9c2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,EX预处理组建模前30min加入相应浓度EX,共培养6·5h后,检测各组细胞细胞活力和培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与正常对照组比较,模型组H9c2细胞活力、SOD活性明显降低,LDH、CK-MB活性和MDA含量明显升高(P<0·05)。与模型组比较,0·1、1、10nmol·L-1EX预处理组细胞活力、SOD活性明显升高,LDH、CK-MB活性和MDA含量明显降低(P<0·05),并与剂量成正相关。结论:EX预处理对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤有保护作用,并与剂量呈正相关。     

合成红景天苷对H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的：研究合成红景天苷对过氧化氢所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：体外培养H9c2细胞,分为正常对照组、模型组、提取红景天苷（10-4 mol·L-1）组和合成红景天苷（10-6、10-5、10-4mol·L-1）组,药物孵育24 h后,加入过氧化氢终浓度400μmol·L-1损伤4h,检测各组细胞活力和培养液上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、SOD活性显著降低,LDH、CK活性和MDA含量显著升高（P〈0.01）。与模型组相比,红景天苷预处理组能明显提高细胞活力和SOD活性（P〈0.05）,明显降低LDH、CK活性及MDA含量（P〈0.05）,并与浓度呈正相关。结论：红景天苷对过氧化氢造成的心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,且合成红景天苷效果优于提取红景天苷。     

美洲大蠊提取物对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨美洲大蠊提取物(PAS840)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤模型的保护作用及机制。方法:采用H₂O₂刺激PC12细胞建立神经细胞氧化损伤模型,实验分为正常组(Con)、模型组(Mod)、PAS840低中高剂量组(20,50,125 μg·mL^-1的PAS840培养基溶液进行处理),采用倒置显微镜观察细胞形态并采用CCK-8法检测各组细胞存活率,生化试剂盒检测各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的水平;DCFH-DA荧光探针检测各组活性氧簇(ROS)的水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1法染色检测各组细胞线粒体膜电位(MMP);RT-qPCR检测各组Nrf2/HO-1通路因子(Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1)、凋亡因子(Bcl-2、Bax和Caspase-3)、炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)、乙酰胆碱酯酶(AchE)和过氧化氢酶(CAT) mRNA的表达水平;Western blot法检测各组Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平。结果:PAS840可显著提高氧化损伤细胞的存活率、MMP及SOD、GSH-Px和GSH的水平,降低LDH、MDA和ROS的水平;显著降低Keap1、TNF-α、IL-1β、IL-6和AchE mRNA表达的同时,显著增加CAT和NQO1 mRNA的表达,显著降低Nrf2、Bax和Caspase-3的mRNA及其蛋白表达,显著增加HO-1和Bcl-2的mRNA及其蛋白表达。结论:PAS840可以抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,减轻炎症,其机制可能与降低ROS、调控Nrf2/HO-1通路因子减轻细胞的氧化损伤程度有关。     

Protective effects of silybin on human umbilical vein endothelial cell injury induced by H2O2 in vitro

Oxidative injury induces cellular and nuclear damages that lead to cell injury. Agents or antioxidants that can inhibit production of reactive oxygen species can prevent injury. We tested the hypothesis that silybin can inhibit H2O2-induced injury in human umbilical vein endothelial cells. Eighteen hours of treatment with 750 micromol l(-1) H2O2 significantly stimulated expression of caspase-3 and cell apoptosis. In addition, it is observed that H2O2 increased the amounts of malondialdenhyde (MDA), the dehydrogenase (LDH) leakage, and decreased the activity of GSH-Px and NO contents in ECV-304 cells. In the H2O2 apoptosis model, the addition of 6.25-25 mg/L of silybin, which has in vitro radical scavenging activity, partially restored cell viability with a reduction in H2O2-induced apoptotic DNA damage, and decreased the expression of caspase-3. Moreover, it decreased other H2O2-induced damage in a concentration-dependent manner. The endothelial cell apoptosis was detected by AO/EB dual staining as well as flow cytometry, and the activity of pro-apoptotic factor caspase-3 was detected by immunocytochemical method. Our results suggest that the antioxidant, silybin, protects ECV-304 cells against H2O2-induced injury probably through its antioxidant activity, increasing the NO content, the activity GSH-Px and inhibiting signaling pathways mediated by caspase-3.     

丹皮酚对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用(英文)

目的探讨丹皮酚对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法建立H2O2致PC12细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞内活性氧含量,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果PC12细胞经H2O2100μmol.L-1处理10 h可致细胞存活率下降,并能诱导细胞凋亡,LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量明显增加;丹皮酚(12,25和50μmol.L-1)预处理1 h可提高细胞存活率,减少细胞凋亡、LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量。结论丹皮酚对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

龙牙楤木总皂苷对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究龙牙楤木总皂苷(AS)对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法分次消化法分离原代培养的乳鼠心肌细胞,建立H2O2诱导心肌细胞损伤模型;MTT法检测不同浓度AS对细胞保护作用的量效、时效关系;倒置显微镜下观察AS对细胞形态学和细胞搏动频率的影响;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量及丙二醛(MDA)含量,检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果不同浓度H2O2处理心肌细胞2 h,100～400μmol.L-1对心肌细胞具有明显的损伤作用,呈剂量依赖性;LDH漏出量增加,MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低。而12.5～25 mg.L-1AS预处理8、12 h可明显地减轻损伤,有效保护心肌细胞。明显减少LDH的漏出,降低MDA含量,提高SOD、CAT、GSH-Px活力;12.5～25 mg.L-1 AS于给药后4h明显减慢心肌细胞的搏动频率,并呈剂量依赖性,表明在该剂量范围内AS具有明显的负性频率效应。结论 AS对H2O2致心肌细胞氧化损伤具有明显的保护作用,呈时间、剂量依赖性。其作用机制可能与其清除自由基,提高心肌细胞的抗氧酶活力有关;同时提示AS的心肌保护作用可能与其减少心肌做功、降低心肌耗氧量、增加心肌细胞稳定性有关。     

淫羊藿苷对H2O2诱导的软骨细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的 探究淫羊藿苷（icariin,ICA）对H₂O₂诱导的软骨细胞氧化损伤的保护作用及相关机制。方法 分离SD新生大鼠软骨细胞,随机分为对照组、H₂O₂模型组、ICA低剂量组、ICA中剂量组、ICA高剂量组;采用CCK8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用ELISA试剂盒检测各组细胞中活性氧（reactive oxygen,ROS）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、过氧化氢酶（catalase,CAT）以及谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的表达情况;流式细胞术检测各组细胞周期情况,并计算增殖指数（proliferation index,PI）;Hoechst染色观察各组细胞核凋亡情况;分别采用荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting检测凋亡相关因子及Nrf2/HO-1通路的表达情况。结果 与对照组相比,H₂O₂模型组细胞增殖能力降低,ROS、MDA含量升高,SOD、CAT及GSH-Px含量下降,细胞凋亡情况加重;经ICA干预后,软骨细胞的增殖能力上升,ROS、MDA含量下降,SOD、CAT及GSH-Px含量增加,并且ICA能够有效抑制软骨细胞凋亡,上调Nrf2和HO-1蛋白的表达。结论 ICA对H₂O₂诱导的软骨细胞氧化损伤具有保护作用,能够抑制软骨细胞凋亡,其机制跟Nrf2/HO-1信号通路有关。     

丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。