Stat1蛋白在急性髓系细胞白血病患者外周血白细胞中的激活

背景与目的:了解急性髓系细胞白血病外周血白细胞Stat1蛋白表达情况,探讨Stat1蛋白的作用区域及与核基质的相互关系.材料与方法:用免疫印迹法检测急性髓系细胞白血病外周血白细胞中Stat1蛋白的表达;结果:在41例急性髓系细胞白血病外周血白细胞中,Stat1激活的阳性率为53.7%,正常对照15例阳性率为0%.激活的Stat1蛋白转移到细胞核内并与核基质结合;结论:Stat1蛋白在急性髓系细胞白血病外周血白细胞中有异常激活,并与核基质结合,可能通过核基质蛋白发挥作用.     

细胞凋亡的影响因素

血管细胞粘附分子一1(VCAM-1)是一种属于免疫球蛋白超家族成员的细胞粘附分子,其配体主要是整合素家族的α4β1/VLA一4(非常晚出现抗原一4).近年来发现VCAM一1亦在巨噬细胞、树突状细胞上有表达,但目前对其在这些专职抗原递呈细胞上表达的性质和作用尚不完全明确.本研究通过流式细胞仪(FACS发现VCAM一1是组成性地表达在巨噬细胞上,并且其表达可在抗原、TNF-a作用后上调;在混合淋巴细胞反应中发现VCAM-1/VLA-4在巨噬细胞活化T细胞中具有较强的刺激作用,抗VCAM一1和抗VIA一4单抗的阻断能降低混合培养上清中IL-2的表达水平.这些结果提示VCAM—1的表达不仅有助于巨噬细胞与其它细胞的粘附接触,而且在通过VLA-4共刺激活化T细胞中也起重要作用.     

69例恶性淋巴瘤骨髓侵犯后骨髓象与血象分析

目的了解恶性淋巴瘤骨髓侵犯后骨髓与外周血白细胞之间的关系.方法对69例恶性淋巴瘤具有骨髓侵犯的骨髓细胞分类及外周血白细胞检验结果作回顾性分析.结果 69例恶性淋巴瘤骨髓侵犯者外周血白细胞计数异常33例,分类计数异常35例,骨髓增生正常者19例,增生异常者50例.结论当恶性淋巴瘤发展到骨髓侵犯或淋巴瘤细胞白血病时,外周血白细胞计数和分类计数与骨髓象之间没有绝对的对应关系,但如明确诊断为恶性淋巴瘤时则应把骨髓涂片细胞形态学列为常规检查,如其外周血白细胞形态出现异常,则应高度怀疑有淋巴瘤细胞白血病.     

人arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的抑制

目的:观察人arresten因子对人脐静脉内皮细胞HUVEC与LOVO细胞黏附的影响,探讨与之相关的黏附分子表达的变化。方法:半定量RT-PCR检测arresten对人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mrRNA的影响,Western-hlot检测VCAM-1蛋白表达的变化。孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的影响。结果:RT-PCR及Western-blot结果表明VCAM-1在HUVEC细胞中高表达,但经过arresten因子处理的HUVEC细胞,其VCAM-1在mRNA水平及蛋白水平的表达均显著下降(P< 0．05)。孟加拉玫瑰红活细胞染色法显示arresten能抑制HUVEC细胞与LOVO细胞的黏附。结论:arresten因子通过降低内皮细胞VCAM-1的表达抑制内皮细胞与肿瘤细胞的黏附,这可能是其抑制肿瘤转移的一种途径。     

急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞IL-24表达及临床意义

目的 探讨急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞白细胞介素-24(IL-24)的表达及临床意义.方法 选取我院2018年1月至2020年6月收治的126例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组,另选取同期70例健康体检者作为对照组,采集并分离骨髓单个核细胞.实时荧光定量PCR(qPCR)检测IL-24表达水平;分析骨髓单个核细...     

Statl蛋白在急性髓系细胞白血病患者外周血白细胞中的激活

背景与目的：了解急性髓系细胞白血病外周血白细胞Statl蛋白表达情况，探讨Statl蛋白的作用区域及与核基质的相互关系。材料与方法：用免疫印迹法检测急性髓系细胞白血病外周血白细胞中Statl蛋白的表达；结果：在41例急性髓系细胞白血病外周血白细胞中，Statl激活的阳性率为53．7％，正常对照15例阳性率为0％。激活的Statl蛋白转移到细胞核内并与核基质结合；结论：Statl蛋白在急性髓系细胞白血病外周血白细胞中有异常激活，并与核基质结合，可能通过核基质蛋白发挥作用。     

Survivin基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义

目的：探讨Survivin基因在急性白血病（acute leukemia,AL）患者骨髓中的表达及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR方法检测77例AL患者和20例正常人骨髓中Survivin及casepose-3基因的表达。结果：Survivin基因在初治的AL患者中的表达较正常对照组明显升高（P〈0.01）,治疗缓解后Survivin表达降低,复发的患者其表达再次升高。初治组casepase-3 mRNA表达水平较对照组明显降低（P〈0.01）,治疗缓解后表达升高,复发的患者其表达降低,初治和复发的患者两种基因表达均无明显差异（P〉0.05）。Survivin基因表达水平与白血病患者的性别、年龄、发热、出血、淋巴结肿大等临床特征及初诊白细胞数、血红蛋白、血小板计数等实验室数据无关（P〉0.05）。而与白血病分型、CD34抗原表达及骨髓中原始细胞比例有关（P〈0.05）。此外,Survivin基因表达与原始细胞比例呈正相关（r=0.785,P〈0.001）,而与casepase-3基因表达呈负相关（r=0.638,P〈0.001）。结论：Survivin基因异常表达可能在白血病发病中起着重要作用,并且与AL复发及预后密切相关。Survivin可能通过抑制cosepase-3的表达而抑制细胞凋亡,其过表达与白血病性造血及恶性增殖有关,是白血病患者预后不良的一个生物学标志。     

Syndecan-1与VCAM-1在多发性骨髓瘤中的表达及意义探讨

目的本研究旨在探讨多聚体蛋白聚糖(Syndecan-1)和血管细胞黏附分子-1 (VCAM-1)在MM患者骨髓单个核细胞(BMMCs)中表达水平,初步探讨Syndecan-1和VCAM-1对MM的发生、发展及预后的意义.方法收集45例MM患者及10例正常对照的骨髓标本,获取BMMCs,采用实时荧光定量PCR (Real time PCR)的方法检测BMMCs中Syndecan-1和VCAM-1 mRNA的表达,并同步抽取血浆,检测β2微球蛋白(β2-MG)分泌水平,按照Durie-Salmon (D-S)分期标准对MM患者进行临床分期.结果 (1) Syndecan-1和VCAM-1 mRNA在MM组中表达升高,与对照组比较差异有统计学意义,治疗后缓解或平台期Syndecan-1 mRNA表达水平明显减低(P＜0.05);(2)复发/难治性多发性骨髓瘤患者Syndecan-1和VCAM-1 mRNA的表达水平较正常对照组及平台期患者明显升高(P＜0.05),初发组与复发/难治组之间表达无显著差异.Syndecan-1和VCAM-1 mRNA表达与患者病程D-S分期和β2-MG水平有相关性.结论 MM患者Syndecan-1和VCAM-1 mRNA表达水平升高,并且MM初治组、复发/难治组Syndecan-1和VCAM-1 mRNA表达水平均高于平台组,提示Syndecan-1和VCAM-1可能参与MM的发生、发展的病理机制;Syndecan-1和VCAM-1 mRNA表达水平与MM肿瘤负荷呈正相关,说明Syndecan-1和VCAM-1可以作为评判MM患者预后的新指标.     

Twist-1基因在髓系白血病细胞中的表达及其作用

目的:检测Twist-1基因在白血病患者和造血系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况,并探讨其高表达对髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响.方法:用Real-time PCR检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoid leukemia,ALL)、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者和正常人的骨髓单个核细胞对照以及造血系统恶性肿瘤细胞系中Twist-1 mRNA表达情况.构建Twist-1过表达及干扰载体,制备慢病毒并感染髓系白血病细胞系K562、U937、KG-1a,通过细胞计数实验、集落形成实验、流式细胞术、Annexin V/PI方法评价Twist-1对白血病细胞增殖、集落形成能力、周期、凋亡的影响.结果:Twist-1在AML及CML患者中的表达水平显著高于对照(均P＜0.05),而ALL患者与对照组没有显著差异(P＞0.05).在K562、U937、KG-1a中过表达及干扰实验证实,Twist-1高表达促进肿瘤细胞增殖、集落形成并抑制细胞凋亡;干扰Twist-1表达则效果相反.结论:Twist-1高表达于AML、CML髓系白血病细胞,并促进白血病细胞的增殖和抑制凋亡.     

骨髓微环境中成骨细胞与白血病细胞相互作用的实验研究

目的 研究骨髓微环境中成骨细胞对白血病细胞存活、凋亡以及白血病细胞对成骨细胞细胞因子表达的影响及机制.方法 将小鼠急性髓系白血病AML1-ETO9a-Rac1细胞与小鼠颅骨成骨细胞体外共培养,流式细胞技术检测白血病细胞的存活比例;Annexin Ⅴ/PI标记流式细胞术检测白血病细胞凋亡,Western blot法检测白血病细胞内的凋亡相关信号分子的活化水平;实时定量反转录PCR检测成骨细胞内细胞因子TPO、N-cadherin、OPN、Ang1的转录水平.结果 与成骨细胞共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞的GFP阳性率明显高于单独培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞.与成骨细胞共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞凋亡率显著低于单独培养4d的AML1-ETO9a-Rac1细胞,且共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞的PARP活化水平比单独培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞明显偏低.AML1-ETO9a-Rac1白血病小鼠的原代成骨细胞的N-cadherin转录水平显著升高,Ang1、OPN两类因子的转录水平则显著下降,TPO的转录水平较正常小鼠的升高.结论 成骨细胞能够支持白血病细胞的存活,抑制白血病细胞的凋亡.同时,白血病细胞也能反作用于成骨细胞,使其产生的微环境相关因子表达发生改变.     

DIG掺入PCR半定量检测AML中Flt3基因的表达

目的 :观察 Flt3基因在 AML(急性髓细胞性白血病 )病人骨髓中的表达水平及正常对照骨髓、外周血表达水平的变化及其与病情、疗效的关系。方法 :应用血细胞 Percoll不连续密度梯度分离法分离出骨髓中恶性细胞 ,采用 DIG掺入半定量 RT- PCR,检测 Flt3基因在 2 2例 AML初治病人、5例 AML CR病人的骨髓、10例正常人和非恶性血液病病人 13例外周血、17例骨髓以及 5种白血病细胞株中的表达水平。结果 :5种白血病细胞株中测得 Flt3表达值分别为 NB40 .97,HL- 6 0 1.1,KG- 10 .96 ,K5 6 2及 U937均为 0 ;正常人骨髓为 0 .18～ 0 .45 ,平均 0 .2 2 ;正常人外周血未见表达 ;AML CR骨髓表达为 0 .2～ 0 .6 5 ,平均 0 .2 8。初治 AML 骨髓中 Flt3基因 m RNA表达率为 10 0 % ;其表达水平为 0 .75～ 1.2 4,平均为 0 .96 ,为正常骨髓的 4倍。结论 :在 AML中 Flt3基因为高水平表达 ,主要来源于白血病细胞 ,其检测水平可作为诊断疾病、判断预后的一项灵敏指标。     

SDF-1/CXCR4轴在白血病患者骨髓中的表达及与血管新生的关系

目的：探讨SDF-1/CXCR4轴在白血病患者骨髓中的表达及与血管新生的关系。方法:采用 CD45/SSC设门四色流式细胞仪检测55例白血病患者骨髓的CXCR4表达。采用ELISA法检测SDF-1/VEGF;采用Envinson二步法检测骨髓组织MVD;多重PCR法检测白血病患者IgH、TCRγ链V区和J区,采用G-显带技术进行细胞遗传学核型分析。结果:AML组SDF-1(2145.21±329.45)pg/ml、CXCR4阳性表达率 (60.01±18.5)％;ALL组SDF-1(2549.02±303.4）pg/ml、 CXCR4阳性表达率（70.22±12.73）％;CML组SDF-1(1929.72±253.81)pg/ml、CXCR4阳性表达率（40.05±16.69）％;CRAL组SDF-1(2070.98±159.98)pg/mL、CXCR4阳性表达率(58.4±11.8)％;与对照组相比均明显增高,P<0.05。急淋SDF-1/CXCR4表达率高于其他白血病组;白血病SDF-1/CXCR4表达与相关因素的分析中发现,ALL与外周血WBC数量有相关性(r=0.534、 0.567, P<0.01),与急性白血病伴髓外浸润者有意义(P<0.05）;SDF-1/CXCR4 表达与白血病患者血小板计数、年龄、性别差异、骨髓增生程度、染色体改变、急性白血病骨髓细胞CD34+表达、ALL的IgH和TCRγ链V区和J区基因重排等因素无明显关系。白血病患者骨髓SDF-1、CXCR4、VEGF的相关系数为0.552, 0.553, 0.531,P<0.05。三者具有显著相关性。结论:白血病骨髓液中SDF-1含量及各群细胞CXCR4高表达,其中ALL表达最高;急性白血病缓解后依然高表达;SDF-1/CXCR4表达与ALL的外周血白细胞数量、有髓外浸润者有关,白血病中SDF-1/CXCR4、VEGF高表达并且相互之间存在有相关性,与白血病血管新生有关联。     

亚小型及其它巨核细胞在慢粒中诊断价值的探讨

目的探讨亚小型、正常型及小型、微型巨核细胞在慢粒的诊断价值。方法采用骨髓细胞形态学观察,对４０例慢粒慢性期初诊骨髓的亚小型、正常型巨核细胞（个／片）计数分类和小及微型巨核细胞在片尾计数１０００个有核细胞中的数量及其分类,同时对１８例正常骨髓用以上方法计数分类作为对照组,并进行统计学处理分析。结果亚小巨核细胞及其他巨核细胞增生是慢粒主要病变特征之一,特别是亚小型巨核细胞对慢粒具有极其显著性意义。结论亚小型、正常型及小（微）型巨核细胞在慢粒形态学诊断与鉴别诊断上具有重要价值     

Long-term effect of homoharringtonine on chronic granulocytic leukemia

From 1996, low-dosage (1.5 mg/m2) homo- harringtonine (HHT) was used to treat chronic granulocytic leukemia in chronic phase (CGL-CP) patients for remission induction and long term maintenance treatment. It was found that the period of chronic phase intervals was longer in low-dosage HHT group than that in hydroxyurea (HU) group and HHT could induce apoptosis of bone marrow CD34+ cells from CGL-CP patients. MATERIALS AND METHODS Patients Newly diagnosed CGL-CP patients …     

Recurrence of Philadelphia Chromosome-Positive Leukemia in Donor Cells after Bone Marrow Transplantation for Chronic Granulocytic Leukemia

Allogeneic bone marrow transplantation has been shown to be a very effective therapy for Chronic Granulocytic Leukemia with long term disease free survivals in excess of 60%. Relapse rates remain low at 15% following histocompatible sibling transplants and lower rates following matched unrelated donor grafts. Relapse rates however, are higher if BMT is carried out in transformation or blast crisis. Leukemic relapse in donor cells following transplantation for CGL is a rare event. The occurrence of donor leukemia however, may be under reported as accurate and sensitive investigation of the origin of relapsed leukemia following BMT requires DNA based technologies. A possible mechanism of donor leukemia in CGL is trans-fection of donor cells with the chimeric gene which is unique to this disease. It is possible that the malignant cells found in transformed or blast crisis of CGL may have a greater potential to transfect donor haematopoietic material. Careful evaluation of the incidence of donor leukemia using molecular biology methods may elucidate the frequency of this event following BMT for CGL.     

急性白血病患儿生存率的影响因素分析

目的 分析急性白血病患儿生存率的影响因素.方法 选择急性白血病患儿80例,整理患儿的病例资料,采用Cox回归模型分析急性白血病患儿生存率的影响因素.结果 性别、肝肋下、脾肋下、初诊外周血小板与患儿的生存率无关(P>0.05);年龄、免疫分型、泼尼松诱导、复发、治疗依从性、诱导35 d骨髓检验、初诊外周白细胞是影响患儿生存率的独立危险因素(P<0.05).结论 年龄、免疫分型、泼尼松诱导、复发、治疗依从性、诱导35 d骨髓检验、初诊外周白细胞是影响患儿生存率的独立危险因素,临床上应当加强对此类因素的重视,提高患儿生存率.     

BRD7、NGX6基因在急性白血病中的表达

 目的探讨急性白血病患者骨髓单个核细胞BRD7、NGX6基因的表达水平。方法采用RT-PCR对52例急性白血病(acute leukemia,AL)患者及30例正常骨髓对照进行NGX6、BRD7基因mR-NA水平的检测,对其中7例AL患者用免疫组化法检测BRD7蛋白表达水平。结果在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中BRD7、NGX6基因均存在明确表达。NGX6 mRNA的相对表达量在AL组与正常对照中差异无统计学意义(t=-1.014,P=0.982)。而BRD7 mRNA的表达水平AL组高于正常对照组,差异有统计学意义(t=3.672,P=0.001),但在AL各亚型之间BRD7 mRNA的表达差异无统计学意义(t=1.076,P=0.287),且BRD7 mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。其中,对部分样品检测了BRD7蛋白的表达,结果发现AL患者BRD7阳性表达细胞百分率均值高于正常骨髓对照。结论AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞均表达BRD7和NGX6,且BRD7基因在急性白血病细胞中表达上调,但BRD7 mRNA表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。     

Folate receptor type beta is a neutrophilic lineage marker and is differentially expressed in myeloid leukemia

BACKGROUND: The membrane-associated folate receptor (FR) type beta is elevated in the spleen in patients with chronic myeloid leukemia (CML) and acute myeloid leukemia (AML). In this study, the authors investigated possible cell type and differentiation stage specificity of expression of FR-beta in normal and leukemic hematopoietic cells. METHODS: An affinity-purified rabbit polyclonal antibody specific for FR-beta was employed for immunostaining representative bone marrow smears and peripheral blood smears from normal individuals and from a limited number of patients with various leukemias. Multiple samples of normal bone marrow and peripheral blood were analyzed for the expression of FR-beta and selected CD antigens by two- or three-color flow cytometry. RESULTS: Of the morphologically identifiable cells, only neutrophils were positive for FR-beta. The leukemic blasts in CML patients showed expression of FR-beta with no apparent relation to the occurrence of the Philadelphia chromosome. Among acute nonlymphocytic leukemias, FR-beta was expressed in promyelocytic leukemia, in the myeloblast populations of myelomonocytic and erythroleukemias, and variably in M1/M2 AML. Neither the blasts of acute lymphocytic leukemia nor the more mature cells of chronic lymphocytic and hairy cell leukemias expressed FR-beta. The less differentiated FR-beta positive AML samples also were positive for CD34 and HLA-DR. Flow cytometric analysis of normal bone marrow and peripheral blood revealed low or insignificant coexpression of FR-beta with CD34, CD19, and CD3, whereas significant coexpression was observed with high levels of CD33, CD13, and CD11b; coexpression of FR-beta with CD14 was high in the immature bone marrow cells, comparable to that in myeloid cells, but relatively low in peripheral blood. CONCLUSIONS: The results of this study suggest a narrow expression pattern of FR-beta marking the neutrophilic lineage and the possibility of defining a subtype or subtypes of myeloid leukemia based on FR-beta expression. The identification of FR-beta positive leukemias and the absence of the receptor in normal CD34 positive cells may enable selective receptor-mediated targeting of leukemic cells.     

黄芪多糖与粒细胞集落刺激因子对化疗后骨髓功能的影响

目的 :了解化疗药物环磷酰胺(CTX)对骨髓粒细胞释放过程的影响,并比较黄芪多糖(APS)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在连续给药后的作用特点。 方法 :利用免疫组织化学和ELISA方法分别检测药物干预后不同时间点小鼠骨髓粒细胞L-选择素(CD62L)表达情况及血清可溶性L-选择素(sCD62L)的浓度,同时计数外周血白细胞数量,并做统计学分析。 结果 :1)实验小鼠在给予化疗药物后外周血白细胞数量在第7、10、14天与化疗前(第0天)比较均出现显著降低(2.02±0.27、2.96±0.65、3.43±1.37比6.13±0.70,P均<0.05),但呈逐渐上升趋势。骨髓粒细胞CD62L阴性表达率第7天与化疗前比较无明显变化(13.20±1.30比14.25±1.89,P>0.05),第10天和第14天比化疗前均显著升高(25.00±1.41、25.00±2.65比14.25±1.89,P<0.05),且与外周血白细胞数量呈正相关(r=0.8988,P>0.05);2)APS和G-CSF均能提高小鼠经化疗药物干预后外周血白细胞数量,APS能在第7天快速下调骨髓粒细胞CD62L的表达;3)APS组血清sCD62L浓度波动范围为1.02～1.49μg/m(l任一时间点与化疗前比较P均<0.05);而G-CSF组第14天出现明显升高,与APS组比较有差异(2.04±0.33比1.49±0.17,P<0.05),且与另两个指标均具有正相关性。 结论 :实验小鼠在注射化疗药物第7天出现骨髓粒细胞释放功能障碍;APS可通过促进骨髓粒细胞释放来提高外周血白细胞数量,作用缓和、持久;而G-CSF主要促进骨髓粒细胞增殖,作用强烈,并可能促进幼稚粒细胞释放。     

Factors associated with prolonged survival in chronic myeloid leukemia.

Four patients who demonstrated unusually prolonged survival with Philadelphia chromosome positive Ph' (+) chronic myeloid leukemia (CML) were analyzed for factors associated with survival. Survival duration from initial diagnosis ranged from 120 to 222 months, with a mean of 170 months. At diagnosis, age, symptoms, liver or spleen size, hematocrit, white blood cell count, absolute peripheral myeloblast plus promyelocyte count, and uric acid did not have unique prognostic significance. At diagnosis all four patients had normal or low-normal platelet counts, (range: 170,000 to 248,000/mm3). Thrombocytopenia occurred during treatment in three patients. None of the four patients, however, developed severe marrow hypoplasia or leukopenia during treatment for the chronic phase. Cytogenic studies performed from 103 to 156 months after diagnosis did not reveal a large subpopulation of marrow cells with a normal karyotype or cells with the XO genotype in the male patients. These observations suggest that prolonged survival in CML 1) is not contingent upon intensive treatment resulting in marrow hypoplasia, and 2) does not require the persistence of a clone of karyotypically-normal bone marrow cells or a clone of marrow cells in males which has lost the Y chromosome. A normal or low-normal platelet count at diagnosis may be a favorable prognostic indicator.