冬凌草甲素诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及G2／M细胞周期阻滞作用研究

目的研究冬凌草甲素体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用，阐明其作用机理，为临床应用提供科学依据。方法用MTT方法测定冬凌草甲素体外抑制BGC-823细胞生长的作用。用共聚焦荧光显微镜和流式细胞仪分别观察诱导凋亡的情况。线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度分别用荧光探针标记后流式细胞仪测定。凋亡和细胞周期相关蛋白的表达用Westem blotting进行测定。结果冬凌草甲素对BGC-823细胞的半数生长抑制浓度IC50值为22．21μmol.L^-1，并诱导细胞凋亡，呈现浓度依赖性。此外，能够降低线粒体膜电位，升高细胞内钙离子浓度，激活caspase-3前体。同时，冬凌草甲素能够使得BGC-823细胞阻滞在细胞周期的G2／M期，伴随有cyclin A蛋白的表达下降。在发生凋亡和细胞阻滞之前，观察到p53蛋白的表达增加。结论冬凌草甲素能够诱导BGC-823细胞产生凋亡，并使细胞周期阻滞在G2／M期。其凋亡机理与caspase-3的激活，p53蛋白表达上调及cyclin A表达下调相关。     

冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞系生长抑制作用

目的研究冬凌草甲素(oridonin)对人胰腺癌SW1990细胞生长抑制作用并探究其可能机制。方法采用MTT法检测冬凌草甲素对SW1990细胞增殖抑制作用、Hoechst 33258染色法及透射电镜观察细胞的形态学变化、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率、RT-PCR法检测survivin、p21mR-NA表达。结果冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞具有明显的生长抑制作用,荧光显微镜和透射电镜下均见到典型的凋亡形态学改变,流式分析出现亚G1峰并显示G2/M期周期阻滞。RT-PCR分析结果显示p21mRNA表达增加而survivin mRNA表达减少。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来抑制人胰腺癌SW1990细胞生长,其分子机制可能与survivin和p21调节的信号途径有关。     

冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的抑制作用及机制

目的探讨冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法以10、20、40μmol/L不同浓度冬凌草甲素(Ori)作用于胰腺癌SW1990细胞,采用CCK-8检测胰腺癌SW1990细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;RT-PCR法检测Survivin、p21基因mRNA表达水平。结果不同浓度的Ori作用于胰腺癌SW1990细胞1、2、3 d后,胰腺癌SW1990细胞增殖抑制程度不等,药物浓度越高,抑制程度越高,两者间具有明显剂量与时间依赖性。0、10、20、40μmol/L的冬凌草甲素作用于胰腺癌SW1990细胞24 h后,凋亡率分别为0.87%±0.65%、1.85%±1.02%、5.38%±0.15%和16.60%±0.50%,出现明显的G2/M期周期阻滞。与对照组相比,10、20、40μmol/L的Ori作用于SW1990细胞24 h后,p21 mRNA表达增加,而Survivin mRNA表达下降。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来实现对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用,其机制可能与Survivin和p21调节信号有关。     

冬凌草甲素上调人肝癌HepG2细胞 PTEN基因表达与诱导凋亡作用

［摘要］目的研究冬凌草甲素诱导人肝细胞癌HepG2细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定冬凌草甲素诱导HepG2细胞的增长抑制；流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡；琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片；逆转录 聚合酶链式反应（RT PCR）半定量分析冬凌草甲素诱导人肝细胞癌HepG2细胞后PTEN mRNA的表达情况。结果MTT比色法测得冬凌草甲素对HepG2细胞增殖具有明显抑制作用，并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强；流式细胞术分析HepG2细胞经冬凌草甲素诱导后，细胞凋亡率随作用时间延长而增加；DNA电泳呈梯状条带。RT PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡增加而逐渐增高。 结论冬凌草甲素能够明显抑制HepG2细胞增殖，并诱导肝癌细胞凋亡， 其作用途径可能与上调PTEN mRNA表达有关。     

冬凌草甲素下调STAT3-HKⅡ通路诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的研究冬凌草甲素(Oridonin)诱导HepG2细胞凋亡的作用和机制。方法采用MTT法检测HepG2细胞的增殖;Hoechst 33342/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR检测STAT3和HK-ⅡmRNA水平;Western blot检测STAT3、pSTAT3和HK-Ⅱ蛋白表达。结果冬凌草甲素可降低STAT3和HK-Ⅱ的mRNA及蛋白表达水平,剂量依赖性抑制HepG2细胞生长,促进细胞凋亡;STAT3 siRNA可下调HK-Ⅱ水平;冬凌草甲素诱导的细胞增殖抑制及凋亡可被STAT3siRNA和3-BrPA消除。结论冬凌草甲素可能通过抑制STAT3-HK-Ⅱ通路诱导HepG2细胞凋亡。     

冬凌草甲素上调人前列腺癌PC-3细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用

目的：研究冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法：MTT比色法测定冬凌草甲素诱导PC-3细胞的增长抑制;流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡;RT-PCR半定量分析冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞后PTENmRNA的表达情况。结果：MTT比色法测得冬凌草甲素对PC-3细胞具有明显的增殖抑制作用,并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强;流式细胞术分析PC-3细胞经冬凌草甲素诱导后,细胞凋亡比率随作用时间延长而增加。RT-PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡的增加而逐渐增高。结论：冬凌草甲素能够明显抑制PC-3细胞的增殖,并诱导前列腺癌细胞凋亡,其作用途径可能与上调PTENmRNA表达有关。     

银杏叶提取物对重症胰腺炎胰腺细胞凋亡作用机制的探讨

目的　探讨银杏叶提取物 (EGb)对急性重症胰腺炎 (ASP)胰腺细胞凋亡的作用机制。方法　将 78只SD大鼠分为假手术 (SO)组、ASP组和治疗组。治疗组在ASP模型诱发后经腹腔注射金纳多注射液 2 0mg/kg ,每 6h注射一次 ,动态观察胰腺病理变化 ,免疫组化 (TUNEL法与SP法 )检测胰腺凋亡情况与细胞凋亡调控基因Bcl 2和C myc蛋白的表达。结果　治疗组胰腺病理损害程度较ASP组减轻。ASP组凋亡指数明显高于SO组 ,(P <0 0 1) ,且术后 3h达高峰 ,治疗组 3h、6h凋亡指数明显下降 (P <0 0 5 )。免疫组化 :ASP组Bcl 2表达明显增多 ,治疗组 3h的Bcl 2表达较ASP组同时相点上调 (P <0 0 5 ) ;ASP组C myc表达术后 6h达高峰 ,治疗组 3h、12h的C myc表达虽有增高 ,但无显著性差异。结论　金纳多能减轻胰腺病理损害、抑制胰腺细胞的凋亡 ,其抑制细胞凋亡可能与其上调凋亡调控基因Bcl 2的表达有关。     

苦参碱与氧化苦参碱抑制HepG2细胞增殖的对比研究

目的比较研究苦参碱与氧化苦参碱体外抑制肝癌HepG2细胞增殖的效果并初步探讨其机制。方法不同剂量苦参碱与氧化苦参碱注射液处理细胞 ,细胞计数及溴化四唑蓝实验观察细胞增殖抑制 ;光镜观察细胞形态改变 ;流式细胞仪和Tunnel实验观察细胞凋亡并检测细胞周期 ;免疫组化观察凋亡相关基因Bax与Bcl 2的表达。结果 0 .8g/L苦参碱处理细胞 3d即可明显抑制HepG2细胞增殖 ,细胞存活率为 5 1% ;1.5g/L苦参碱可明显诱导细胞凋亡 ,用药后大量细胞被阻滞于S期 ;1.5g/L的苦参碱使HepG2细胞凋亡相关基因Bax表达增强 ,Bcl 2的表达减弱。与苦参碱同浓度的氧化苦参碱不能抑制细胞增殖 ,1.5g/L氧化苦参碱处理细胞 3d ,细胞存活率仍为84 .2 % ;氧化苦参碱的浓度增至 8.0g/L时才出现明显凋亡峰。结论体外苦参碱诱导HepG2细胞凋亡能力强于氧化苦参碱 ,并调控了凋亡相关基因的表达 ,而氧化苦参碱浓度 6倍于苦参碱时细胞才出现凋亡。     

五味子乙素通过上调miR-486-5 p的表达对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究五味子乙素对miR-486-5p表达及人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和侵袭的影响.方法 实时定量PCR检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中miR-486-5p的表达量,Western-blot法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达.脂质体转染方法构建过表达miR-486-5p的人甲状腺癌B-CPAP细胞,MTT法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的增殖率,流式细胞仪检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的凋亡率.结果 与空白对照组比较,随着五味子乙素浓度的增加人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖率和Bcl-2表达呈不断降低趋势(P<0.05),miR-486-5p、Caspase-3和Bax表达呈不断增加趋势(P<0.05).转染miR-486-5p模拟物组的细胞增殖率在转染3 h与4 h后低于转染miRNA模拟物组,细胞凋亡率显著高于转染miRNA模拟物组(P<0.05,P<0.01).结论 五味子乙素可能通过上调miR-486-5p表达,诱导人甲状腺癌B-CPAP细胞发生凋亡,miR-486-5p可作为对人甲状腺癌靶向治疗的靶点.     

补骨脂乙素通过调控Sirtuins相关信号通路抑制非小细胞肺癌进程

目的：观察补骨脂乙素对人非小细胞肺癌增殖、凋亡和周期的影响,探究补骨脂乙素抑制H460细胞活性的分子机制。方法：采用MTT法检测补骨脂乙素对H460细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测补骨脂乙素对H460细胞周期阻滞的影响;Annexin V-FITC/PI染色法探究补骨素乙素对H460细胞凋亡的影响;免疫印迹法检测细胞内信号通路中关键蛋白的表达情况。结果：与空白对照组相比,补骨脂乙素(60μM)和SirReal2(50μM)给药组明显抑制细胞增殖,促使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞内ROS生成以及细胞凋亡,并且明显抑制了SIRT1和SIRT2的去乙酰化活性,促使其相关蛋白C-myc,Cyclin D1,Bcl-2表达减少,Bax和乙酰化的α-tubulin表达明显增多。结论：补骨脂乙素对H460细胞的增殖和细胞周期具有明显抑制作用,并且还会诱导ROS生成从而导致细胞凋亡,其分子机制可能是通过影响细胞内Sirtuins相关的信号通路实现的。     

五味子乙素通过Traf6/TAK1信号通路介导人胃癌细胞凋亡

目的研究五味子乙素介导人胃癌HGC27细胞凋亡发生的作用及对Traf6/TAK1信号通路的影响。方法不同浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)干预细胞后,采用CCK8法检测HGC27细胞增殖情况,流式细胞术分析五味子乙素诱导HGC27细胞发生凋亡的情况,免疫印迹法分析五味子乙素对HGC27细胞中Bax、Bcl-2、Traf6、TAK1及p-TAK1蛋白表达量的影响。结果与对照组比较,五味子乙素能显著抑制HGC27细胞增殖,诱导细胞凋亡;诱导促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达;显著抑制Traf6、p-TAK1蛋白表达,且呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论五味子乙素能明显抑制HGC27细胞增殖、诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用及相关机制

目的研究水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法设置对照组及不同浓度水飞蓟素组,作用人骨肉瘤Saos-2细胞。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法测定细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2及cleaved caspase-3蛋白表达。结果水飞蓟素抑制Saos-2细胞增殖,呈时间及浓度依赖性;水飞蓟素诱导Saos-2细胞凋亡,呈浓度依赖性;水飞蓟素降低Saos-2细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加Saos-2细胞cleaved caspase-3蛋白表达,呈浓度依赖性,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论水飞蓟素能够抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路及上调caspase-3蛋白表达有关。     

冬凌草甲素通过改变Bax/Bcl-xL表达激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的作用原理。方法　形态学观察 ,DNA凝胶电泳法及WesternBlot法。结果　冬凌草甲素能明显诱导A375 S2细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带 ;caspase 3的抑制剂能阻止caspase 3的活力升高 ;免疫印迹结果显示冬凌草甲素作用A375 S2细胞 12h改变Bax与Bcl xL蛋白的表达 ;且发现caspase 3的底物PARP蛋白在 12h时被降解。结论　冬凌草甲素 (34 3μmol·L-1)诱导A375 S2细胞凋亡 ,这种作用是通过改变了Bax/Bcl xL的表达比率 ,激活caspase 3而实现的。     

黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理。方法MTT法测细胞毒活性，Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞Bcl-2，Fas和Caspase 3蛋白表达情况。结果黄芩苷元能选择性抑制人白血病K562细胞生长且呈浓度依赖关系，并能诱导细胞凋亡，细胞增殖被阻滞于S期；同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高，而Bcl-2蛋白表达不变。结论黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达，诱导人白血病K562细胞凋亡且呈时效量效关系，此作用与Fas蛋白表达上调有关，与Bcl-2蛋白表达无关。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞的凋亡诱导效应的研究

目的:考察冬凌草甲素是否能诱导MG-63细胞凋亡。方法:用不同浓度的冬凌草甲素作用于MG-63细胞,用Hochest33258染色鉴定MG-63细胞凋亡的形态学特征;用流式细胞仪分析MG-63早期凋亡细胞的百分率;用Caspase-8蛋白印迹分析证明MG-63细胞凋亡发生的分子特征。结果:凋亡细胞形态学鉴定、流式细胞仪检测均有力证明冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡;冬凌草甲素诱导MG-63细胞凋亡伴有Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活。结论:冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。     

灯盏花素促进阿霉素诱导的K562细胞凋亡

目的观察灯盏花素对淋巴细胞增殖和阿霉素致肿瘤细胞死亡的影响。方法MTT法检测细胞增殖,Western blot检测p53/bcl-2表达,Histone/DNA ELISA和流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA检测细胞色素C释放,分光光度法检测caspase-8和caspase-3激活。结果灯盏花素能增强小鼠淋巴细胞对阿霉素的抵抗,但促进阿霉素引起的K562细胞生长抑制、细胞色素C释放、caspase-8和caspase-3激活,上调其p53/bcl-2表达比率,增加细胞凋亡。结论灯盏花素有增强阿霉素抗肿瘤作用,激活肿瘤细胞凋亡通路可能是其化疗增敏的主要机制。     

齐墩果酸诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡作用研究

目的研究齐墩果酸（oleanolic acid,OA）诱导人结肠癌LoVo细胞株凋亡的机制。方法应用浓度为2.00～32.00 mg&#8226;L 1OA作用于人结肠癌LoVo细胞12～96 h后,采用噻唑蓝（MTT）法检测OA对LoVo细胞的抑制作用,采用流式细胞术、Western blot印迹法等检测细胞周期变化、凋亡及Bcl 2、Bax、p53、Caspase 3蛋白表达,在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果OA呈时间 剂量依赖性抑制LoVo细胞增殖,能诱导LoVo细胞凋亡及阻滞细胞于G2/M期,OA作用LoVo细胞48 h后,各组的细胞凋亡率为10.32%～14.24%（P＜0.05),并出现Bcl 2蛋白表达抑制, p53、Bax及Caspase 3活性增强。结论OA可以促进人结肠癌LoVo细胞凋亡,其促凋亡机制与抑制Bcl 2表达及促进p53、Bax及Caspase 3表达有关。     

牡蛎天然活性肽对人胃腺癌BGC-823细胞周期与基因表达的调控

目的 比较研究牡蛎天然活性肽（BPO）对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的生物学效应，并进一步探索其对胃癌细胞的作用机制。方法 采用酸抽提、凝胶柱层析等方法，从牡蛎体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分BPO-1，以姜黄素和HMBA处理组为平行对照，流式细胞仪检测细胞周期变化及以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化。结果 BPO-1能有效抑制BGC-823细胞增殖活动，出现亚G1期细胞，细胞进入凋亡现象。BPO-1，姜黄素及其组合均能不同程度地上调BGC-823细胞p16，c-myc，Fas，p2^WAF1/CIP1蛋白表达，下调突变型p53，bcl-2蛋白表达。结论 BPO-1对胃癌细胞具有显著的诱导凋亡作用。其诱导癌细胞凋亡机制与其调节和干预bcl-2，c—myc等癌基因和p53，p16，p21^WAF1/CIP1等抑癌基因的表达有关。     

鲎素激活FAS途径促使HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 鲎素是来源鲎血细胞的一种抗菌肽,它能抑制HL-60细胞生长,诱导细胞凋亡.但是鲎素诱导细胞凋亡的确切机制尚未清晰.本研究探讨鲎素是否可以促进Fas/FasL的表达,诱导HL-60细胞凋亡,揭示鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制.方法 Hoechst 33258和PI双荧光染色观察细胞调亡,流式细胞仪检测细胞调亡.Western blotting检测easpase-3,caspase-8活性变化,Fas,FasL,FADD表达变化.结果 鲎素处理HL-60细胞后,细胞调亡,caspase-3,caspase-8被激活,Fas,FasL,FADD表述时间依赖性上调.结论 鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能与死亡受体介导的途径相关.