染料木黄酮对人成骨细胞增殖及分化影响

目的 研究大豆异黄酮主要成分染料木黄酮(genistein)对人成骨细胞增殖和分化的影响,以及影响的剂量效应关系.方法 取材成人松质骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,经纯化和传代培养获得人成骨细胞作为研究细胞来源,设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,雌二醇(1×10-8mol/L)阳性对照组,染料木黄酮1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L 4个剂量组.干预时间分别为24,48,72 h.用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,碱性磷酸酶活性测定检测细胞的分化.结果 成功获得人成骨细胞,低浓度染料木黄酮(10-9mol/L)在各时间点对成骨细胞增殖无明显影响,而10-7mol/L染料木黄酮作用72 h可以明显刺激成骨细胞增殖和分化.Spearman相关分析发现,染料木黄酮刺激成骨细胞增殖分化的作用呈时间和剂量效应关系.结论 染料木黄酮能够促进人成骨细胞的增殖和分化,其促进作用存在时效和量效关系.     

染料木黄酮对成骨细胞活性的影响

目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响,探索预防骨质疏松的机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠颅盖骨成骨细胞,二代细胞用于实验。在成骨细胞培养基中加入染料木黄酮(×10-5、×10-6、×10-7mol/L)培养48 h和72 h后,采用MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖,原位杂交方法测定c-fos表达。结果培养48 h后,×10-5、×10-6、×107mol/L染料木黄酮组MTT吸光度值与对照组比较,分别增加了105%、136%、143%;培养72 h后,染料木黄酮3个剂量组与对照组比较,分别增加了93%、113%、146%,差异均有显著性(P<0.05)。同时3H-TdR掺入量均显著增加(P<0.05),各组c-fos表达差异无显著性。结论染料木黄酮可促进成骨细胞的增殖与分化。     

叶酸配伍染料木黄酮对神经细胞早期凋亡的影响

目的:观察叶酸和染料木黄酮的单独及联合作用下对神经细胞早期凋亡的影响,并对其可能机制进行探讨。方法:在原代培养的神经细胞中加入环磷酰胺8μg/ml诱导其发生凋亡,在早期凋亡阶段以高、中、低三个浓度的叶酸和染料木黄酮进行单独及联合干预。用流式细胞仪和扫描电镜对凋亡的情况进行观察。结果:1.流式细胞仪检测结果提示:叶酸和染料木黄酮在一定浓度下均可对神经细胞的凋亡产生明显的抑制作用,且在一定的配伍下二者进行联合干预的效果要优于单独干预;2.由扫描电镜对神经细胞早期凋亡阶段所发生膜变化的观察也支持流式细胞仪检测的结果。结论:染料木黄酮可能通过增强叶酸对神经细胞早期凋亡的抑制作用而达到增强叶酸对神经管畸形的预防作用。     

染料木黄酮对人胃癌细胞生长抑制作用研究

目的 :　探讨染料木黄酮对体外培养的人胃癌 SGC- 790 1细胞的抑制和诱导细胞发生凋亡的作用。方法 :　用 MTT法、集落形成实验、透射电镜及流式细胞仪的方法 ,观察染料木黄酮处理 SGC- 790 1后细胞生长和细胞凋亡。结果 :　 (1 ) MTT法和集落形成实验证实染料木黄酮对 SGC- 790 1细胞生长有抑制作用 ,抑制作用呈剂量 -效应关系 ;　 (2 )透射电镜可见 SGC- 790 1细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂等凋亡细胞的形态学改变 ;　 (3)流式细胞仪检测到凋亡峰。结论 :　染料木黄酮对 SGC- 790 1细胞有抑制作用 ,而这一作用的机制之一是通过诱导人胃癌细胞发生凋亡 ,即诱导肿瘤细胞发生凋亡是染料木黄酮抑制肿瘤细胞生长的重要机制之一     

染料木黄酮对成骨细胞Ⅰ型胶原表达及转化生长因子β1的影响

目的染料木黄酮（genistein，GEN）与新生SD大鼠颅骨成骨细胞（osteoblast，OB）共同孵育，研究GEN对OBI型胶原表达及转化生长因子β1（transforming growth factor—β1，TGF—β1）的影响。方法采用第二继代OB进行实验，实验分为对照组，GEN各浓度组（10^-8，10^-7，10^-6，10^-5mol／L），雌激素组（17-β estradiol，E2，10^-10mol／L）。测定指标包括四甲基偶氮唑盐（methythiazolyl tetrazolium bromide，MTT）、胞浆内蛋白、碱性磷酸酶活性（activity of alkaline phosphatase，ALP）、以及Ⅰ型胶原与TGFβ1表达。结果体外培养48h及72h，GEN各剂量组和E2组的MTT（OD）值均有显著性增高。与培养48h相比，对照组、10^-8、10^-7、10^-6mol／LGEN剂量组72h后细胞增殖有所增加，差异有显著性。10^-6、10^-5mol／LGEN剂量组和E2组可增高OB内蛋白含量，差别有显著性。GEN各组和E2组均可增高OB内ALP活性，差别有显著性。上述指标与GEN剂量呈显著相关。10^-7、10^-6、10^-5mol／LGEN组和E，组OB内Ⅰ型胶原的表达及TGFβ—1的合成高于对照组。Ⅰ型胶原表达和GEN剂量呈显著相关。结论GEN可刺激OB增殖、分化，增加OB内Ⅰ型胶原的表达及TGFβ—1的分泌，在10^-8M～10^-5M范围内与剂量相关；高浓度GEN与E2相比作用相似。     

染料木黄酮抗辐射作用的研究进展

染料木黄酮(Genistein,Gen)是大豆异黄酮的主要成分之一,化学名称为5,7,4’-三羟异黄酮,生物学作用非常广泛,因此受到普遍关注。电离辐射可诱发自由基,造成组织损伤。Gen可清除自由基,表现出抗辐射作用。此外Gen可调     

染料木黄酮对骨形成的促进作用研究

目的:用成年人成骨细胞体外培养的方法,观察染料木黄酮(genistein,GS)对骨形成的影响。方法:将生长状态良好的第三代成骨细胞用PBS洗涤后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清),实验设二甲基亚砜溶剂对照、雌二醇对照(E2)、抗雌激素它莫西芬对照(TAM)及三个GS剂量组,观察指标包括细胞增殖,碱性磷酸酶活性及细胞骨钙蛋白合成量。结果:与溶剂对照组相比,10-8mol/L E2、10-7mol/L GS和10-6mol/L GS对人成骨细胞处理48h,能够明显促进成骨细胞的增殖作用,使细胞骨钙蛋白合成量显著增加,细胞内碱性磷酸酶活性明显提高;同时,GS可保护因雌激素耗尽所造成的成骨细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。10-7mol/L TAM可拮抗GS对成骨细胞所产生的这些生物学效应。结论:GS具有雌激素效应,可模拟E2而刺激骨形成并保护成骨细胞因雌激素缺乏所造成的细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。由于这一效应可被TAM拮抗,此结果提示,GS的促进骨形成作用是通过与雌激素受体结合产生的。     

染料木黄酮对成骨细胞I型胶原表达及转化生长因子β_1的影响

目的染料木黄酮(genistein,GEN)与新生SD大鼠颅骨成骨细胞(osteoblast,OB)共同孵育,研究GEN对OBI型胶原表达及转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)的影响。方法采用第二继代OB进行实验,实验分为对照组,GEN各浓度组(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L),雌激素组(17-βestradiol,E2,10-10mol/L)。测定指标包括四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazoliumbromide,MTT)、胞浆内蛋白、碱性磷酸酶活性(activityofalkalinephosphatase,ALP)、以及I型胶原与TGFβ1表达。结果体外培养48h及72h,GEN各剂量组和E2组的MTT(OD)值均有显著性增高。与培养48h相比,对照组、10-8、10-7、10-6mol/LGEN剂量组72h后细胞增殖有所增加,差异有显著性。10-6、10-5mol/LGEN剂量组和E2组可增高OB内蛋白含量,差别有显著性。GEN各组和E2组均可增高OB内ALP活性,差别有显著性。上述指标与GEN剂量呈显著相关。10-7、10-6、10-5mol/LGEN组和E2组OB内I型胶原的表达及TGFβ-1的合成高于对照组。I型胶原表达和GEN剂量呈显著相关。结论GEN可刺激OB增殖、分化,增加OB内I型胶原的表达及TGFβ-1的分泌,在10-8M～10-5M范围内与剂量相关;高浓度GEN与E2相比作用相似。     

染料木黄酮对乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响及其与c-jun的关系

目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其相关机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠盖骨成骨细胞,Ⅱ代细胞用于实验。MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖和DNA合成,原位杂交的方法测定c-jun表达。结果成骨细胞培养基中加入(10-5、10-6和10-7mol/L)染料木黄酮或10-9mol/L和10-10mol/L雌激素培养48h和72h后,MTT的吸光度值与对照组相比均明显升高,48h和72h后对照组、染料木黄酮组和雌激素组MTT值分别为0.19、0.15;0.39、0.45、0.46;0.29、0.32、0.37和0.35、0.38;0.50、0.49。3H-TdR掺入量均显著增加,对照组、染料木黄酮组和雌激素组3H-TdR掺入量分别为68.47;101、844、512和1108.8、1204.2。c-jun表达各组差异无显著性。结论染料木黄酮不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化。     

染料木黄酮对MCF-7细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:用基因芯片技术观察染料木黄酮(genistein,GS)对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7肿瘤相关基因表达的影响。方法:75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h,收集细胞并提取总mRNA,用Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录反应将mRNA分别标记成两种探针,与载有一组靶基因的人肿瘤相关基因表达谱芯片杂交、经计算机扫描分析得出GS处理后的差异表达基因。结果:筛选出包括与细胞增殖、细胞凋亡、雌激素反应等相关的差异表达基因共22条(7.3%,22/300)。18个下调基因(占81.8%)主要是促进细胞增殖活力的原癌基因和与肿瘤细胞逃逸、扩散有关的肿瘤细胞表面抗原基因;4个上调基因均为雌激素反应性基因。结论:GS所影响的基因多与细胞增殖和肿瘤细胞免疫逃逸调节有关,调节此类基因的表达可能是GS发挥抗癌防癌作用的主要机制;GS上调的4个基因均属于雌激素上调基因,表明GS与雌激素受体结合后,除产生抗雌激素样效应外,还能激活雌激素反应元件而表现一定的雌激素效应。     

Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用

目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖中的作用。方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Westernblotting检测Rb基因、细胞周期素cyclinE蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达。结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclinE蛋白的表达。结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclinE蛋白表达。     

三羟异黄酮对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响

目的探讨三羟异黄酮(Genistein)对乳腺癌细胞系MCF-7的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法培养MCF-7细胞,在其对数生长期加入三羟异黄酮,通过MTT试验,流式细胞仪技术及Giemsa染色法,观察三羟异黄酮对MCF-7生长的影响。结果(1)MTT试验显示,细胞培养第1天,三羟异黄酮20、40、80、160μmol.L-14个剂量组的吸光度值(该值反映对MCF-7细胞生长的抑制作用)分别为0.460±0.018、0.450±0.020、0.440±0.020、0.385±0.040,明显低于对照组(0.520±0.023,P<0.05),第2、3、4天的变化趋势相同于第1天。(2)三羟异黄酮80、160μmol.L-12个剂量组的细胞周期G2%分别为50.0%、57.5%,而对照组为6.8%。(3)三羟异黄酮10、80μmol.L-12个剂量组晚期细胞凋亡率分别为6.51%、20.03%,而对照组为0.50%。结论三羟异黄酮对MCF-7的生长有明显的抑制作用;能阻滞细胞周期的正常进行,但主要在细胞周期的后期(G2期)发挥作用;能诱导细胞凋亡。     

三羟异黄酮对丙烯酰胺致大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨不同浓度三羟异黄酮(GEN)对丙烯酰胺(ACR)诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响。方法取新生5-7 d SD大鼠小脑皮质细胞培养,采用神经元特异性烯醇化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经元,将培养8 d的神经元进行随机分组,正常对照组、ACR染毒组(浓度为10 mmol/L)、GEN预处理组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(浓度为10、25、50、100μmol/L的GEN预先处理细胞12 h,再予ACR作用24 h)。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测神经元活性;相差显微镜及Hoechst33342染色分别观察细胞及其核形态学变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察神经元凋亡细胞数。结果 10μmol/L组及25μmol/L组GEN可拮抗ACR所致的大鼠CGNs凋亡,提高神经元活性,降低TUNEL阳性细胞数,减少ACR所致的神经元胞体皱缩、细胞核固缩等特征;而50μmol/L组及100μmol/L组对ACR引起的神经元凋亡没有保护作用。结论一定浓度范围的三羟异黄酮可以保护丙烯酰胺所致的大鼠CGNs凋亡。     

染料木黄酮的雌激素活性对辐照小鼠免疫功能的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)的雌激素效应对辐射损伤的防护作用,为抗辐射功能食品的开发和对原有辐射防护剂的改进提供实验依据。方法观察应用他莫西芬(ERα阻断剂)和Faslodex(ERβ阻断剂)阻断受照小鼠雌激素受体(ER)活化情况下,Gen对接受4Gy全身照射小鼠血白细胞和淋巴细胞计数、血清溶血素及迟发型变态反应的影响。结果Gen可以降低辐照小鼠的血白细胞和淋巴细胞的减少幅度,增强免疫功能;他莫西芬与Gen合用对小鼠血白细胞和淋巴细胞计数及免疫功能无明显影响,表明他莫西芬不能阻断Gen对辐照的保护作用。Faslodex与Gen合用则仍降低受照小鼠血白细胞和淋巴细胞数量,也抑制免疫功能。表明Faslodex能阻断Gen的保护作用。结论Gen通过激活ERβ途径,增强辐射小鼠的免疫功能。     

染料木黄酮抑制DU145细胞的作用及其机制研究

目的: 研究大豆异黄酮主要成分染料木黄酮 (GEN)对离体培养DU145前列腺癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法: DU145前列腺癌细胞接受不同浓度的GEN处理,克隆形成试验用于测定DU145细胞的生存曲线及IC50;DNA ladder和DAPI(4-6-二氨基-2-苯基吲哚)染色法用于检测细胞凋亡;流式细胞仪和免疫印迹法分别用于观察细胞周期改变和相关蛋白表达。结果: 克隆形成试验显示: GEN能抑制离体培养DU145细胞的生长,其作用于DU145细胞的IC50约为30 mmol。GEN 处理24h后,早发细胞凋亡仅见于高浓度GEN处理组,72 h后凋亡亦见于较低浓度GEN组。流式细胞仪显示GEN可导致DU145细胞G2/M期阻滞;细胞周期相关蛋白分析显示随着GEN浓度的提高,p21cip1蛋白表达稳步上升,周期素B1呈双相改变,cdc-2则变化较小。结论: GEN可抑制离体培养DU145前列腺癌细胞的生长,其作用机制可能与GEN诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关,后者同时伴有细胞周期相关蛋白表达的改变。     

染料木黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子、腺苷酸激活蛋白激酶磷酸化的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子产生和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞,加入1、5、10、50、100 mol/L的Gen共同培养,MTT法检测其对细胞活性的影响。将RAW264.7细胞随机分为4组:空白对照组不加任何药物,模型组加入终浓度为1 g/ml的LPS进行刺激,Gen高、低剂量组分别加入终浓度为10、5 mol/L的Gen预处理1h后,再加入终浓度为1 g/ml的LPS刺激,24h后收取细胞上清用酶联免疫(ELISA)方法检测TNF-α、IL-6含量,Westernblot检测AMPKα蛋白及其磷酸化的表达水平。结果 100 mol/L的Gen对体外培养RAW264.7细胞的增殖有影响,而其他浓度则无。LPS处理的RAW 264.7细胞与对照组比较,TNF-α、IL-6生成显著增多(P<0.01)、AMPKα磷酸化水平显著降低(P<0.01),而AMPKα总蛋白表达水平无差异(P>0.05)。Gen干预可减少LPS诱导的TNF-α、IL-6生成,上调AMPKα磷酸化水平的表达,与LPS组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gen能抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,减少TNF-α、IL-6生成,这可能与Gen促进AMPKα磷酸化,从而激活AMPKα有关。