人类线粒体tRNAs基因在CagA阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞中表达

目的 研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）作用的机制。方法 将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES－1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES－1细胞进行mRNA差异显示,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因。结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN2,仅在Hp(CagA^ )培养滤液处理的GES－1细胞中表达,斑点杂交结果与之一致。与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN2与人类线粒体tRNAs同源性100％,即为人类线粒体tRNAs基因的一部分。结论 人类线粒体tRNAs基因可能参与了Hp的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程。     

CagA 阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞表达泛素活化酶E1基因

目的 研究CagA阳性Hp培养滤对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）作用的机制。方法 将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES－1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES-1细胞进行mRNA差异显示，以寻找Hp致胃癌发病的相关基因。结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN1，仅在Hp(CagA^ )培养滤液处理的GES－1细胞中表达，斑点杂交结果与之一致。与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN1与泛素活化酶E1同源性99％，即为人类泛素活化酶E1基因的一部分。结论 泛素－蛋白水解酶复合体通路中的泛素活化E1在与了Hp的CagA诱导的胃上皮细胞恶化转化过程。     

细胞毒素相关蛋白表达阳性的幽门螺杆菌感染与胃粘膜上皮细胞异型增生的关系

目的探讨幽门螺杆菌(HP)与胃上皮细胞异型增生的关系.方法对240例浅表性胃炎和胃粘膜上皮细胞异型增生患者进行HP检测和免疫印迹法测定细胞毒素相关蛋白(CagA).结果浅表性胃炎HP阳性者54例(38.1%),CagA阳性者12例(8.5%);轻、中、重度异型增生分别HP阳性者34例(63.0%)、27例(84.4%)、10例(83.3%),CagA阳性者19例(35.2%)、20例(62.5%)、8例(66.7%).异型增生患者HP感染率及CagA阳性HP感染率均高于浅表性胃炎患者(x2=31.87、26.71,P＜0.01).结论HP感染尤其是CagA阳性HP菌株感染与重度异型增生有关.     

探讨幽门螺杆菌感染对胃粘膜上皮细胞增殖及树突状细胞的影响

目的　研究幽门螺旋杆菌 (HP)感染对上皮细胞增殖及抗原呈递细胞 树突状细胞 (DC)的影响。通过Hp相关性胃炎、胃癌组DC83 表达的差异 ,探索免疫反应在Hp致癌中的作用。方法　分别对 72例Hp阳性胃炎胃癌组及 75例Hp阴性胃炎胃癌组应用流式细胞仪检测PCNA和DC83 表达。结果　Hp相关性胃炎胃癌组PC NA、DC83 均明显高于Hp非相关性胃炎胃癌组 (P <0 .0 1)。在Hp阳性胃病组中 ,胃癌组PCNA高于胃炎组 (P <0 .0 1) ,而DC83 明显低于胃炎组P <0 .0 1。结论　Hp相关性胃炎胃粘膜细胞增生活跃 ,免疫反应增强 ,Hp相关性胃癌上皮细胞过度增殖 ,免疫功能受损 ,可能为肿瘤的发生提供了机会     

VacA／CagA阳性Hp感染与胃粘膜病理组织学改变的关系

幽门螺杆菌(Ｈｐ)在胃肠道疾病中的作用,主要取决于其是否表达细胞空泡毒素(ＶａｃＡ)和细胞毒素相关蛋白(ＣａｇＡ),它们被认为是Ｈｐ的标志。本文采用北京元康医学技术有限公司ＢｌｏｔＶｉｓｉｏｎＨＰ-128检测患者血清ＨｐＶａｃＡ/ＣａｇＡ抗体,结合胃镜及病理,探讨ＶａｃＡ/ＣａｇＡ阳性Ｈｐ对胃粘膜炎性损害的关系。1　材料与方法11　病例选择　①两周内未服用过治疗上消化道疾病及抗Ｈｐ药物者,②胃镜及病理诊断为慢性胃炎者。12　方法　①快速尿素酶试验和ＷＳ银染法检测Ｈｐ,双阳性为Ｈｐ感染者。②取胃窦部粘膜两块做ＨＥ染色,按…     

幽门螺杆菌感染对胃粘膜上皮细胞增殖的影响

用免疫组织化学染色方法，对３０例幽门螺杆菌（Ｈｐ）相关慢性胃炎和１５例Ｈｐ阴性胃粘膜基本正常胃占膜中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）标记指数（ＬＩ％）和表皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）的表达进行了检测，结果表明：Ｈｐ阳性患ＰＣＮＡＬＩ％为１３．９４±１．６４，Ｈｐ阴性对照组为７．７１±０．９２，有显差别（Ｐ〈０．００１）。ＥＧＦ－Ｒ表达与ＰＣＮＡ呈正相关（ｒ＝０．４４８７，Ｐ〈０．０１），ＰＣＮＡＬＩ     

幽门螺杆菌对体外培养胃粘膜组织的损伤作用

在排除了炎症及免疫反应的条件下,探讨幽门螺杆菌本身因素对胃粘液细胞的损伤作用。方法将胚胎胃粘膜组织与Ｈｐ共培养２,４,６ｈ,利用光镜及电镜对胃粘膜组织进行形态学研究。结果光上液细胞水肿且凋亡增加,电镜观察除见有凋记细胞,凋亡小体外,粘液细胞还出现微绒毛丢失、粘液颗粒减少,细胞内出现多少等的空泡等改变。上述变化随着胃粘液细胞与ＨＰ共培养时间的延长而加重。在共培养６ｈ后,少部分粘液细胞发生坏死。结论Ｈ     

胃粘膜PCNA、Fas表达与Hp感染及癌变关系的研究

目的：探讨胃上皮细胞增殖、凋亡与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系及Hp 感染致癌的可能机制。方法：应用快速尿素酶试验与W－S银染色法将各种病变分为Hp感染阳性组和阴性组，应用免疫组化SP法对各种病变增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡相关蛋白（Fas)的表达进行检测。结果：Hp阳性组PCNA表达明显高于Hp阴性组（P＜0．005），Fas表这随病变程度的加重而逐渐加重，但只有汪表性胃炎组中Hp阳性者Fas表达高于Hp阴性者（P＜0．02）。结论：Hp感染可促进胃上皮细胞PCNA及Fas表达增加，且Hp的这种作用主要发在胃粘膜病变的早期。Hp促进增和凋亡可能是其致癌的重要机制之一。     

液体培养VacA 幽门螺杆菌上清液粗提蛋白对胃上皮细胞增殖/凋亡的影响

[摘要] 背景：幽门螺杆菌感染可以导致胃上皮慢性炎症、粘膜萎缩、上皮细胞增殖与凋亡的失衡,从而引起慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌等不同临床结局。然而,幽门螺杆菌导致胃癌发生的确切机制还不十分清楚。本研究通过体外实验探讨液体培养幽门螺杆菌上清液粗提蛋白（BCF-P）对人胃永生上皮细胞株（GES-1）和胃癌上皮细胞株（AGS）增殖与凋亡的影响。 方法：以人胃永生上皮细胞株（GES-1）和胃癌细胞株（AGS）作为研究对象,进行了下述研究：1）应用MTT方法分析BCF-P对GES-1和AGS细胞增殖的影响。2）应用流式细胞术分析BCF-P对GES-1和AGS细胞凋亡的影响。3）应用RT-PCR技术检测BCF-P和EGF对GES-1和AGS细胞Fas /COX-2 mRNA表达水平的影响。4）免疫沉淀和酶联法检测BCF-P对GES-1和AGS细胞EGFR酪氨酸激酶活性的影响。 结果：1）BCF-P抑制GES-1和AGS细胞增殖,具有浓度依赖性。2）在与抑制增殖相同的剂量和作用时间下,BCF-P未能诱导出GES-1和AGS细胞凋亡。3）BCF-P作用使GES-1和AGS细胞Fas mRNA表达下调（P<0.05）;与EGF的作用一致。BCF-P使AGS细胞COX-2 mRNA表达下调（P<0.05）;与EGF作用相反（P<0.05）。4）BCF-P作用使GES-1和AGS细胞EGFR酪氨酸激酶活性提高3倍以上。 结论： BCF-P体外抑制AGS和GES-1细胞增殖,其增殖抑制作用与凋亡无关。BCF-P体外对胃上皮细胞的作用不完全等同于EGF。     

Effects of broth culture filtrate protein of VacA+ Helicobacter pylori on the proliferation and apoptosis of gastric epithelial cells

Background Infection with Helicobacterpylori (H.pylori) may lead to chronic inflammation of the stomach epithelium,mucosal atrophy,imbalance of proliferation and apoptosis of epithelial cells; resultin...     

幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)体外诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的状况.方法:逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IL-8在Hp诱导的胃上皮细胞的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-8表达产物的量.结果:经Hp标准菌株CCUG17874刺激后,在胃上皮细胞株MKN 45、MKN 28、SGC 7901均检测到IL-8 mRNA;共同培养60 min 开始明显表达(P<0.05),120～180 min时表达最强(P<0.01).刺激24 h后, MKN 45分泌IL-8蛋白最高,为(1 480±360) pg/ml,SGC7901为(1 120±290) pg/ml, MKN 28最低,为(710±220) pg/ml,而未刺激对照组为(63±21 )、(52±16)和(30±18)pg/ml, 刺激组与各自未刺激对照组间有显著差异(P＜0.01),其相差倍数分别为23.5、 21.5、23.7倍,不同细胞株间的无统计学意义.结论:Hp能体外诱导胃上皮细胞株表达分泌IL-8,该作用可能与Hp感染后胃黏膜的炎症损伤机制有关.     

幽门螺杆菌CagA基因的原核表达及抗原性测定

目的：合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的 CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性。方法：选取前期研究确定的与胃癌相关的H.pylori CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-CagA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性。结果：设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列（AF289435）基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100%;含pET32a-CagA的BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后能表达CagA融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,融合蛋白相对分子质量大小与预期一致(45 kD);Western印迹检测结果显示该融合蛋白可与抗H.pylori全菌抗体结合反应。结论：本实验构建的原核表达系统表达的CagA融合蛋白具有良好的抗原性,为临床胃癌相关H.pylori菌株的筛选和针对性治疗奠定了基础。     

幽门螺杆菌CagA抗原性多态性分析

目的 了解我国幽门螺杆菌CagA抗原性的多态性，为临床血清学诊断CagA阳性菌株感染提供实验依据，以及是否存在特定胃十二指肠疾病相关的CagA抗原性型提供线索。方法 采用Western blots方法，比较38株我国幽门螺杆菌分离株的CagA与3种不同胃肠疾病分离株兔免疫血清的反应强度。分析不同抗原性类型CagA与疾病的关系。结果 任何一种血清均不能识别所有CagSA，但任一CagA至少可被一种血清识别，多数菌株CagA的抗原性与CAPM N62接近；抗原性与NCTC11637接近的CagA可能与消化性溃疡相关，但不显著。结论 我国不同幽门螺杆菌菌株CagA抗原性存在明显多态性，血清学方法诊断CagA阳性菌株感染时应至少使用3种抗原或抗体，不同抗原性类型CagA与胃十二指肠疾病的关系有待进一步研究。     

幽门螺杆菌感染对猪胃粘膜上皮增生的影响

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与猪胃粘膜上皮增生的关系。方法应用“中国1号小型猪”建立Hp相关性胃炎模型,定量检测Hp感染与增殖细胞核抗原(PCNA)、DNA倍体含量变化的相互关系。结果Hp感染阳性组(n=13)的猪胃粘膜上皮细胞PCNA标记指数(LI%)(40.95±3.6),明显高于Hp阴性对照组(n=10)的猪胃粘膜上皮细胞PCNALI%(29.41±2.82),Hp感染阳性组的猪胃粘膜上皮细胞DNA二倍体与近二倍体含量(70.78%)低于对照组(90.65%),而增殖倍体与非整倍体含量均高于对照组。结论猪胃粘膜上皮细胞增生增强可能与Hp感染有关。     

幽门螺杆菌CagA抗体与胃十二指肠疾病的相关性探讨

目的探讨本地区表达细胞毒素相关蛋白A(CagA)的幽门螺杆菌(HP)与胃十二指肠疾病的关系。方法将127例消化系统疾病患者分为四组。采用金标免疫斑点法检测各组患者血清中HP抗体,采用间接ELISA法测定各组CagA-IgG,并作组间的比较。结果慢性胃炎(CG),十二指肠溃疡(DU),胃溃疡(GU),胃癌(GC)患者及无症状组(AC)血清中HP抗体的检出率分别为74.2%,85.7%,81.5%,77.8%,61.6%,CagA-IgG的检出率分别为61.3%,66.7%,63.0%,70.4%,34.0%。经χ2检验显示,在DU与GU组,HP及CagA HP感染率均明显高于AC组(P<0.05、P<0.01),而CG及GC组与AC组比较,HP感染率无显著性差异(P>0.05),而CagA HP感染率仍有显著性差异(P<0.01)。各胃肠疾病组间的HP及CagA HP感染率均无显著性差异(P>0.05)。结论在广州地区,仅DU与GU组的HP感染率高于AC组,而CagA HP感染率在CG、DU、GU与GC组,均高于AC组,可见CagA-IgG的表达情况,可为胃十二指肠疾病的致病因素与诊疗、防治提供依据,但不能作为区分CagA HP感染所致胃十二指肠疾病的单一指标。