地卓西平马来酸盐动物行为模型研究

目的 制作灵长类动物从氨酸Ｎ－甲基－天冬氨酸受体非竞争性拮抗剂地产马来酸盐（ＭＫ－８０１）功能低下行为模型：研究奥氮平治疗谷氨酸功能低下的疗效。方法：给Ｃｅｂｕｓ Ａｐｅｌｌａ猴皮下注射ＭＫ－８０１（０．０６ｍｇ／ｋｇ,０．０８ｍｇ／ｋｇ,０．１０ｍｇ／ｋｇ）或／和奥氮平（０．０２ｍｇ／ｋｇ,０．０４ｍｇ／ｋｇ,０．０８ｍｇ／ｋｇ）,用自编７分量表评定药物所致动物的行为变化。结果 注射药物３ｈ内动     

地卓西平马来酸盐精神分裂症模型大鼠前额叶皮质与外周神经调节蛋白-1基因表达的关系

目的 了解SD大鼠神经调节蛋白-1(Nrg1)基因mRNA在地卓西平马来酸盐(MK-801)作用下的表达变化及氯氮平干预的影响,初步探讨Nrg1基因mRNA在大鼠前额叶皮质和外周表达变化关系.方法 采用MK-801对66只清洁级雄性SD大鼠建立大鼠精神分裂症模型,分为模型组(30只)、对照组(30只)和干预组(6只).采用SMART小动物行为视频分析系统测定3组大鼠的自发活动,并对大鼠刻板行为和共济失调等行为进行评分;应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应同时检测不同时间点3组大鼠中枢前额叶皮质与外周血淋巴细胞Nrg1基因mRNA的表达水平.结果 3组大鼠自发活动结果、共济失调评分、刻板行为评分差异均有统计学意义(F=14.903,P=0.000;F =76.196,P=0.000;F =72.654,P=0.000).与对照组比较,模型组外周总Nrg1 mRNA(t=2.779,P=0.019)和前额叶皮质人神经调节蛋白(Hrg) mRNA(t=2.293,P=0.045)在药物作用90 min时表达增高,外周胶质生长因子(Ggf) mRNA在120m in时表达增高(t=2.728,P=0.035);在90 min时,干预组外周Ggf mRNA(F=4.484,P=0.030)表达低于模型组,模型组前额叶皮质HrgmRNA(F =4.238,P=0.035)的表达高于对照组和干预组,模型组和对照组前额叶皮质感觉-运动神经元衍生因子mRNA(F =4.739,P=0.025)的表达高于干预组.大鼠自身前额叶皮质与外周血淋巴细胞中总Nrg1 mRNA表达呈正相关(r=0.252,P=0.041).结论 MK-801可以影响部分Nrg1亚型mRNA表达,氯氮平能够部分减弱这种影响;大鼠总Nrg1 mRNA外周与前额叶皮质的表达具有一致性,外周血总Nrg1 mRNA表达情况可以在一定程度上反映前额叶皮质的变化.     

地卓西平马来酸盐对抑郁大鼠行为学和前额叶BDNF表达的影响

目的观察地卓西平马来酸盐(MK-801)预处理对利血平诱导的抑郁模型大鼠抑郁行为的改善作用及大脑前额叶脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法采用随机数字表法将32只成年雄性SD大鼠分为4组:对照组、利血平模型组、MK-801+利血平组和MK-801组,每组8只。MK-801+利血平组和MK-801组预先给予腹腔注射MK-801(0.3 mg/kg),对照组和利血平模型组腹腔注射相应体积的生理盐水。30 min后,利血平模型组和MK-801+利血平组腹腔注射利血平(4 mg/kg),对照组和MK-801组腹腔注射相同体积的乙酸溶剂。注射利血平48 h后利用强迫游泳实验观察大鼠的抑郁样行为表现,并在行为实验完成后处死大鼠,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大脑前额叶BDNF的表达水平。结果在强迫游泳实验中,利血平模型组强迫游泳不动时间[(49.38±7.85)s]长于对照组[(15.59±5.43)s],差异有统计学意义(t=11.91,P0.01);MK-801+利血平组强迫游泳不动时间[(12.32±4.25)s]短于利血平模型组,差异有统计学意义(t=13.06,P0.05)。ELISA结果显示,利血平模型组前额叶BDNF表达水平[(10.09±0.88)ng/mL]低于对照组[(13.29±1.10)ng/mL],差异有统计学意义(t=6.44,P0.01);MK-801+利血平组大鼠前额叶的BDNF表达水平[(12.56±1.83)ng/mL]高于利血平模型组,差异有统计学意义(t=3.44,P0.05)。结论 MK-801可改善大鼠的抑郁样行为,其机制可能与调节脑内BDNF的表达有关。     

地卓西平马来酸盐对雄性大鼠自发活动和前脉冲抑制及再认记忆的影响

目的 观察急性腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂地卓西平马来酸盐(MK-801)刘大鼠自发活动、感觉运动门控和物体再认记忆的影响,探讨MK-801模拟精神分裂症不同内表现型的适宜剂量.方法 成年雄性SD大鼠共104只,按照体质量采用分层随机化方法进行分组.(1)取SD大鼠48只,分为MK-801小剂量组、MK-801中剂量组、MK-801高剂量组和对照组,每组12只,观察不同剂量MK-801 (0.1、0.2、0.4 mg/kg)对大鼠自发活动的影响;(2)取SD大鼠32只,分为MK-801小剂量组、MK-801中剂量组、MK-801高剂量组和对照组,每组8只,观察不同剂量MK-801(0.1、0.2、0.4 mg/kg)对大鼠前脉冲抑制(PPI)的影响;(3)取SD大鼠24只,分为MK-801小剂量组和对照组,每组12只,观察小剂量MK-801 (0.1 mg/kg)对大鼠物体辨别测试的影响.结果 (1)中高剂量MK-801 (0.2,0.4 mg/kg)呈剂量依赖性诱导大鼠自发活动的增加以及PPI的损害(P＜0.05或P＜0.01),小剂量(0.1 mg/kg)组在自发活动和PPI上与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).(2)小剂量MK-801组在物体辨别测试中对新物体的偏爱指数显著低于对照组[(57.79±10.66)％比(73.34±18.52)％,P＜0.05].结论 中高剂量MK-801可引起自发活动和感觉运动门控功能异常,而小剂量在排除运动系统异常的前提下可特异性地破坏大鼠的再认记忆,提示MK-801模拟精神分裂症的不同内表现型时应根据研究目的选择适宜剂量.     

急慢性注射地卓西平马来酸盐对小鼠额叶microRNA-181b表达的影响

目的研究急慢性注射地卓西平马来酸盐(MK-801)对小鼠额叶中与精神分裂症相关的微小RNA(microRNA,miRNA)-181b表达的影响,探讨其参与精神分裂症病理学的可能机制。方法急性注射实验中40只小鼠随机分成四组,分别腹腔注射不同剂量(0.125 mg/kg,0.25 mg/kg,0.50 mg/kg)的MK-801和生理盐水(简称急性对照组),15 min后用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测额叶miRNA-181b的相对表达量;慢性注射实验中22只小鼠随机分成两组,分别腹腔注射0.25 mg.kg-1.d-1的MK-801和生理盐水(简称慢性对照组),连续14 d,然后检测miRNA-181b的相对表达量。结果急性注射0.125 mg/kg、0.25 mg/kg、0.50 mg/kgMK-801的各组小鼠额叶miRNA-181b的相对表达水平分别为0.65±0.05、0.61±0.05和0.91±0.08。前两个剂量组miRNA-181b的表达明显低于对照组(1.00±0.13),P<0.05,而0.5 mg/kg的MK-801则对miRNA-181b表达无影响(P>0.05)。慢性MK-801注射组miRNA-181b的相对表达量为1.86±0.19,显著高于慢性对照组(1.00±0.10),P<0.05。结论急性和慢性MK-801对额叶中miRNA-181b表达的影响不同,结合miR-181b的分子功能,提示miRNA-181b在急性和慢性模型鼠的构建中起到不同的作用。     

核转录因子NF-κB与脑损伤的研究进展

核转录因子NF-κB是具有多向性转录激活功能的调节因子,脑损伤后它在神经系统中广泛高水平表达,与其调控的细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)等一起积极参与炎症反应、神经细胞凋亡等生物进程。同时,NF-κB又具有神经保护作用。因此,如何从分子水平上阻断NF-κB的损伤作用,充分发挥其保护作用,有望成为脑损伤的临床治疗的一个新思路。     

核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。 目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。 方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10 μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-α作用30 min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600, 1 000 mg/L;PDTC组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-α作用30 min后,再加入终浓度18 μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。 结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1 000 mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10 μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多(P < 0.01或P < 0.05),200,400,600 mg/L的川芎嗪及18 μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达(P < 0.01),且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关(r=0.980,P < 0.01)。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

核因子-κB抑制剂对偏头痛患者血清培养正常人单核细胞株表达的血清促炎细胞因子的影响

目的观察偏头痛患者血清培养细胞后,细胞上清液中所产生的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-17(IL-17)的水平,以及应用NF-κB抑制剂BAY11-7082后二者含量的变化,探讨TNF-α、IL-17、NF-κB在偏头痛的发生发展中的关系。方法选取偏头痛发作期患者及正常对照者各40例,采取单侧颈静脉血血清。采用人单核细胞株THP-1进行培养,将THP-1随机分成偏头痛血清组、偏头痛血清+NF-κB抑制剂组及正常血清对照组。各组血清培养THP-124h后,分别收集细胞上清液,采用双抗体酶联免疫吸附法检测上清液中TNF-α、IL-17的水平。结果偏头痛组血清培养上清液中TNF-α、IL-17水平高于正常血清对照组,差异有统计学意义(P0.05);偏头痛血清+NF-κB抑制剂组上清液中TNF-α含量低于偏头痛血清组,差异有统计学意义(P0.05),和正常血清组相比差异无统计学意义;该组上清液中IL-17含量低于偏头痛血清组,但差异无统计学意义(P0.05),但仍高于正常血清组,差异具有统计学意义(P0.05)。相关分析显示3组TNF-α与IL-17水平均呈正相关。结论偏头痛患者发作期可能存在NF-κB导致的促炎性细胞因子TNF-α、IL-17的分泌增加。     

首发精神分裂症NF-κB活性与细胞因子mRNA表达及蛋白水平的关系

目的探讨精神分裂症中核转录因子-κB(NF-κB)活性与白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及其血清蛋白水平的关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定83例首发精神分裂症患者和65名健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中NF-κB的活性,同时采用ELISA和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血清细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白水平和PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达。结果患者组的NF-κB活性及血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者组PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者组中NF-κB的活性与血清IL-1β、TNF-α水平及二者的mRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.578、0.532、0.536、0.454,P均小于0.05),而对照组中NF-κB的活性与血清IL-1β、TNF-α水平及二者的mRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.456、0.549、0.519、0.513,P均小于0.05)。两组中NF-κB的活性与血清IL-6及其mRNA均无明显相关(P均大于0.05)。结论精神分裂症患者存在免疫激活,激活状态的PBMC是细胞因子的主要来源之一;精神分裂症中活化的NF-κB对IL-1β、TNF-α的基因转录起了重要的调控作用。     

氢气抑制核因子-κB通路对糖尿病周围神经病变的保护作用

目的观察氢气对链脲霉素致糖尿病周围神经病变模型大鼠坐骨神经功能和疼痛行为学的影响,并探讨其可能的作用机制。方法腹腔注射链脲霉素(65 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,6周后腹腔注射富氢生理盐水(5 ml/kg),连续治疗2周后观察不同处理组大鼠坐骨神经功能和疼痛行为学变化,并检测坐骨神经炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL 6)]及核因子κB(NFκB)p65亚基表达变化。结果 (1)与正常对照组相比,模型制备成功第8周时模型组大鼠体质量降低、血糖水平升高(均P=0.000);与模型组相比,氢气治疗组大鼠体质量和血糖水平无明显改善(均P>0.05)。(2)与正常对照组相比,模型制备成功第8周时模型组大鼠坐骨神经传导速度减慢、热痛阈和机械性痛阈降低(均P=0.000);而与模型组相比,氢气治疗后大鼠坐骨神经传导速度增加、热痛阈和机械性痛阈提高(均P=0.000)。(3)经氢气治疗后,大鼠坐骨神经TNFα和IL 6表达水平降低(均P=0.000),NFκB p65亚基阳性细胞数目减少(P=0.000)。结论糖尿病周围神经病变与炎症反应有关,而氢气可以通过抑制NFκB及其下游炎性因子的表达而发挥对糖尿病周围神经损害的保护作用。     

谷氨酸能低下精神分裂症模型大鼠不同脑区核因子-кB表达分析

目的 了解地卓西平马来酸盐[Dizocilpine maleate,MK-801]所致谷氨酸能低下精神分裂症大鼠前额皮质、海马、纹状体核因子-кB(Nuclear factor-кB,NF-кB)基因的表达,探讨其参与精神分裂症的病理机制.方法 12只雄性Spragus-Dawley大鼠随机分为模型组和对照组,前者给予腹腔注射Mк-801(0.8 mg/kg)建立精神分裂症模型,后者只注射生理盐水.采用小动物行为分析系统记录大鼠90 min内自发活动,采用TransAM技术检测大鼠前额皮质、海马、纹状体的NF-кB p65亚基蛋白活性,半定量PCR检测NF-кB p65亚基基因mRNA的表达.结果 ①与对照组相比,模型组大鼠白发活动增加(P＜0.05),并有典型的刻板行为和共济失调,表现出了类似精神分裂症的行为.②模型组前额皮质、海马、纹状体的NF-кB p65亚基蛋白活性均低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).③模型组前额皮质、海马、纹状体3个脑区NF-кB p65亚基mRNA表达均不同程度高于对照组相应脑区,但只有在前额皮质和纹状体两组之间的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 谷氨酸能低下精神分裂症模型人鼠前额皮质、海马、纹状体NF-кB的活性受到了抑制,而mRNA表达上凋,提示NF-кB可能参与了精神分裂症的病理过程.     

参附注射液对大鼠全脑缺血再灌注时核转录因子-κB表达的影响

目的探讨参附注射液（Shenfu Injection）对大鼠全脑缺血再灌注时核转录因子-κB（nuclearfac—torkappaB，NF-κB）表达的影响及其治疗作用。方法采用四血管阻塞的方法复制出大鼠全脑缺血再灌注模型，采用免疫组化法、原位杂交法和原位末端标记法分别检测假手术组（A组）、全脑缺血再灌注组（B组）、参附注射液治疗组（C组）海马CA1区NF-κB、肿瘤坏死因子-amRNA（TNF-amRNA）表达及细胞凋亡数的变化。结果与假手术组比较，全脑缺血再灌注组海马CAl区NF-κB和TNF-amRNA的表达及细胞凋亡数明显增加（P〈0．01）；NF-κB和TNF-amRNA的表达分别于再灌注6h和12h达到高峰，并持续到48h；细胞凋亡数随再灌注时间的延长而逐渐增多（P〈0．01）。参附注射液治疗后NF-κB和TNF-amRNA的表达下降，细胞凋亡数减少（P〈0．01）。结论在脑缺血再灌注救治过程中参附注射液可能通过抑制NF-κB与TNF-amRNA的表达，进而减少细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

颈动脉狭窄动物模型的构建及核因子-κB和胰岛素样生长因子-1的表达

目的 探讨建立经济实用、稳定可靠的适合颈动脉粥样硬化性狭窄外科治疗研究的动物模型的条件.通过测量核因子(NF)-κB、胰岛素样生长因子(IGF)-1的表达,探讨它们在颈动脉粥样硬化性狭窄发生、发展中的作用.方法 日本大耳白兔40只,采用血管内膜气体干燥损伤法在动物的颈总动脉上造成特定条件的损伤(160 ml/min×15 min),然后以特定高脂饲料(饲料中含2%的胆固醇和6%的花牛油)喂养动物不同时间(30、60和90 d).通过血脂测定、DSA、HE染色评价各组动物血管狭窄程度,再观察其病珲改变特点.应用免疫组织化学方法观察NF-KB和IGF-1在动脉粥样硬化斑块中的表达特点.结果 病理检查证实:随着喂养时间的延长,动脉粥样硬化程度加重,高脂喂养加干燥气体损伤90 d时,血管狭窄率达71.53%±3.65%(q=568.417,P=0.000),动脉的粥样硬化病理改变已属较成熟的粥样斑块期.正常血管的内膜和中膜内均未见明显的NF-κB和IGF-1的表达,模型组血管斑块内NF-κB、IGF-1表达呈强阳性,表达面积分别为59.66%±12.04%(t=22.98,P＜0.01)、54.48%±12.92%(t=5.76,P＜0.01),明显高于对照组(分别为8.34%±2.66%和16.38%±8.22%).结论 按本实验方法,90 d时颈动脉狭窄程度和病理改变程度符合颈动脉粥样硬化性狭窄外科治疗的实验研究需要.NF-κB及其靶基因IGF-1的激活与动脉粥样硬化病变的发生和发展密切相关,在颈动脉粥样硬化斑块形成过程中发挥重要作用.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中NF-κB p65,TNF-α表达及雷公藤多甙的干预研究

目的 观察Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑组织中核转录因子-κBp65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)的表达情况,用雷公藤多甙(TWP)进行干预,探讨TWP对EAE的防治效果及作用机制.方法 建立Wistar大鼠EAE模型,并选用TWP、泼尼松(PRD)干预治疗.65只Wistar大鼠随机分成5组:对照组5只,EAE组、TWPⅠ组(EAE+TWP 10 mg·kg-1·d-1)、TWPⅡ组(EAE+TWP 30mg·kg-1·d-1)和PRD组(EAE+PRD 5 mg·kg-1·d-1)各15只.观察各组大鼠发病情况并进行神经功能评分.大鼠脑和脊髓腰膨大段组织切片:苏木素-伊红(HE)染色+罗克沙尔坚牢蓝(LFB)髓鞘染色,光镜下进行炎性病灶计数,并免疫组化方法检测大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α的表达.结果 EAE组及干预组大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α表达水平随病情加重而升高,随病情缓解而降低.与EAE组比较,干预组大鼠发病率减低,潜伏期延长,神经功能评分及体重损失明显降低,脑组织炎性病灶数明显减少;同时脑组织NF-κB p65和TNF-α阳性细胞数量明显减少.TWP大剂量组与PRD治疗效果相当,且优于TWP小剂量组.结论 NF-κB p65、TNF-α过表达可能参与EAE发生及进展;TWP有明显防治大鼠EAE作用,在一定程度上呈剂量相关性,其机制可能与下调NF-κB p65、TNF-α表达有关.     

桂皮醛对脑缺血小鼠的脑保护作用及对Toll样受体6/核因子-κB信号通路的影响

目的探讨桂皮醛对局灶性脑缺血小鼠的脑保护作用及机制。方法雄性CD-1小鼠通过腹腔注射的方法给予桂皮醛干预,应用改良线栓法建立小鼠右侧永久性大脑中动脉闭塞模型,将成年健康雄性CD-1小鼠随机分为大脑中动脉闭塞(MCAO)组及桂皮醛(CA)低、中、高剂量干预组,即CA25组、CA50组和CA75组(在MCAO小鼠模型基础上腹腔给予25 mg/kg、50 mg/kg及75 mg/kg桂皮醛)。术后24 h通过测定小鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑组织含水量来评价桂皮醛的脑保护作用。通过Western blot法和实时荧光定量PCR法测定Toll样受体6(TLR6)、肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)和核因子-κB(NF-κB)在脑组织中的表达。结果与MCAO组相比,CA50组神经功能评分显著改善(中位数2.0 vs.3.5),病变侧脑组织含水量降低[(83.72±0.73)%vs.(85.09±0.95)%],脑梗死体积缩小(0.45±0.06 vs.0.54±0.02),均P0.05。同样与MCAO组相比,CA50组TLR6、TRAF6及NF-κB基因表达明显下调(TLR6:3.26±0.03 vs.6.32±0.07;TRAF6:1.88±0.21 vs.3.33±0.48;NF-κB:1.47±0.33 vs 4.21±0.57,均P0.05)。TLR6、TRAF6及胞核NF-κB蛋白表达明显下降(TLR6:0.12±0.01 vs.0.19±0.03;TRAF6:0.45±0.09 vs.0.67±0.07;胞核NF-κB:0.32±0.06 vs.0.46±0.06,均P0.05)。结论桂皮醛可能通过抑制TLR6/TRAF6/NF-κB通路对局灶性脑缺血小鼠发挥脑保护作用。