P38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对大鼠重症急性胰腺炎的作用

目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）抑制剂（SB203580）对重症急性胰腺炎的治疗作用.方法 将Wistar大鼠63只随机分为三组：假手术组（S组）,重症急性胰腺炎组（P组）,SB203580处理组（T组）,每组21只.SAP模型由5%牛磺胆酸钠大鼠胆胰管逆行注射诱发而成.模型成功后,P组不做处理 T组立即行SB203580 10 mg/kg腹腔注射 S组仅开腹,不做其他处理 术后各组于1 h、2 h、4 h 3个时间点处死大鼠,各时间点酶联免疫吸附测定（ELISA）法测血清TNF-α水平,并取胰腺组织行病理检查,免疫组化法检测p-P38MAPK表达,TUNEL法检测胰腺腺泡细胞凋亡.结果 血清TNF-α水平随SAP病情的进展而升高（P＜0.05）,其水平P组及T组各时间点均较S组高,但TNF-α水平T组各时间点显著低于P组（P＜0.05） p-P38MAPK表达随SAP病情进展而升高（P＜0.05）,1、2、4 h三个时间点P组及T组均升高（P＜0.05）,但T组活性显著低于P组（P＜0.05）：TUNEL显示假手术组胰腺组织存在极少量的凋亡细胞,T、P组细胞凋亡率均高于S组,T组凋亡率高于P组（P＜0.05） 胰腺病理损害光镜下T组明显轻于P组.结论 P38MAPK可能参与大鼠重症急性胰腺炎发病过程,SB203580可能通过抑制P38MAPK活化减少炎症递质释放,增加胰腺腺泡细胞凋亡,减轻SAP病理损害.     

p38抑制剂对缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的探讨p38抑制剂对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响。方法将44只大鼠随机分为4组:对照组(9只)、缺血组(15只)、缺血再灌注组(10只)和干预组(10只)。对照组大鼠只暴露心脏,缺血组大鼠制备心肌缺血模型,缺血再灌注组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,干预组大鼠在左冠状动脉前降支结扎前30 min注射p38抑制剂SB20358(100μg·kg-1),其余操作均与缺血再灌注组一致。观察各组大鼠心肌组织形态学变化及心肌组织中p38、c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)水平的变化。结果对照组大鼠心肌组织中未检测到p38、ERK1/2和JNK蛋白。缺血组缺血60、90 min时大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著高于缺血30 min时,差异均有统计学意义(P<0.05);各个时间点,干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著低于缺血组和缺血再灌注组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着再灌注时间的延长,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平逐渐降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。随着缺血和再灌注时间延长,缺血组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有升高,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MAPK中p38参与心肌缺血再灌注损伤,但JNK和ERK1/2的作用不显著。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与高血压血管重构

高血压时,血管平滑肌细胞的增殖、细胞外基质的改变、内皮细胞损伤等因素均可引起血管的重构。p38丝裂原活化蛋白激酶主要介导细胞的发生、分化、增殖、凋亡等多种病理生理过程。本文简要介绍了p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与高血压血管重构的关系。     

p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一。p38MAPK属于MAPK的一个亚族,是广泛存在于细胞浆内的含有丝氨酸/苏氨酸残基的蛋白质激酶。它通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平,参与多种胞内信息传递过程,能对广泛的细胞外刺激发生反应,介导细胞生长、发育、分化及死亡全过程。近年研究发现,p38MAPK在许多疾病的发病过程中具有重要作用。     

吡咯列酮对急性坏死性胰腺炎大鼠P38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)激动剂对急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)具有保护作用,但具体作用机制尚不清楚。文中观察吡咯列酮对ANP大鼠P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)的表达及有关细胞因子的影响,探讨其治疗机制。方法雄性Wistar大鼠54只,随机分为3组:假手术组、ANP组、吡咯列酮组。采用4%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射建立ANP模型;假手术组注射等量等渗盐水;吡咯列酮组在造模前2 h腹腔注射0.2%DMSO-吡咯列酮20 mg/kg。各组大鼠分别于术后3、6、12 h处死,检测血清淀粉酶、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;常规胰腺病理检查和评分;并观察胰腺组织磷酸化p38MAPK的表达情况。结果①各时间点ANP组血清淀粉酶、TNF-α、IL-1β水平、胰腺病理损伤均高...     

中医药与p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路研究

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路广泛存在于哺乳动物细胞中,与机体多种生理病理过程(如糖尿病,心血管疾病,脑发育等)密切相关,是20世纪90年代以来生命科学研究的热点。MAPK分为4个家族,即细胞外调节激酶、c-jun氨基末端激酶、p38和大丝裂原活化蛋白激酶1/细胞外调节激酶5。综述近几年来从p38 MAPK信号通路角度进行的中医药研究,提示从细胞信号转导角度进行中医药研究有着十分广阔的发展前景。     

电针对糖尿病神经痛大鼠背根神经节磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶的干预作用

目的 观察电针对糖尿病神经痛大鼠背根神经节磷酸化（DRG）P38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）表达的影响。 方法 将20只健康雄性SD大鼠随机分为空白组（n=6）、造模组（n=14）,造模组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素（65mg/kg）建立糖尿病神经痛模型,造模成功的12只大鼠随机分为模型组和电针组（n=6）;电针组于2周后介入电针,取双侧足三里和昆仑穴,1次/日,30 min/次,干预1周。测大鼠造模前、模后1周、模后2周、模后3周机械痛阈（PWT）,采用免疫荧光法检测大鼠腰4至腰6背根神经节中p-p38MAPK阳性细胞表达。 结果 1）与空白组比较,模后1周模型组和电针组大鼠PWT无显著性差异,模后2周、模后3周模型组大鼠PWT显著降低（P＜0.05）;与模型组比较,模后3周电针组大鼠PWT显著升高（P＜0.01）;2）与空白组比较,模型组大鼠腰4至腰6背根神经节上的p-p38MAPK阳性细胞个数表达显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,电针组大鼠腰4至腰6背根神经节上的p-p38MAPK阳性细胞个数表达显著降低（P＜0.05）。 结论 电针对糖尿病神经痛大鼠有良好的镇痛效果,其机制可能和抑制背根神经节神经元上p-p38MAPK阳性细胞表达相关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号级联在炎症反应中的作用

在急、慢性疾病中，细胞释放的炎症介质可以活化多种信号转导级联反应，丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通道在招募白细胞于炎症部位聚集起着重要的作用。同时，p38MAPK异构体的活化可以激活致炎细胞因子，而后刺激白细胞活化。然而，p38MAPK引起的白细胞招募这一系列的功能过程包括：粘附、游走和效应器的功能如氧化爆发以及p38MAPK介导的复杂细胞因子网络在炎症中的作用仍有待研究。针对减少炎症介质产生和以p38MAPK为治疗靶点的研究正在进行中，不远的将来可能会成为治疗炎症疾病的新策略。     

P38丝裂原活化蛋白激酶对溃疡性结肠炎大鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的观察大鼠实验性结肠炎肠组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化及对淋巴细胞凋亡的影响。方法 30只健康SD大鼠随机均分为正常对照组、结肠炎模型组、SB203580组。以三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,采用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)检测凋亡细胞,免疫组织化学方法检测活化转录因子2(p-ATF2)、Bcl-2和Bax表达。同时分析p-p38,p-ATF2水平与肠道病理损伤指数、MPO含量、Bcl-2和Bax表达的关系。结果与正常组相比,模型组大鼠肠组织磷酸化p38、p-ATF2,Bcl-2表达和凋亡阳性细胞数百分比及MPO含量显著增高(P<0.01),SB203580组显著降低。Bax表达在模型组明显降低,与SB203580组相比无明显差异。结论 p38蛋白激酶激活参与了溃疡性结肠炎发病,其机制可能与延迟肠组织淋巴细胞凋亡有关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在雄性小鼠生殖细胞株中的表达

目的 检测p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)在雄性小鼠生殖细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)中的表达,为深入研究p38 MAPK基因在雄性小鼠精子发生中的作用机制奠定理论基础.方法 应用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)检测雄性小鼠生殖细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)中p38 MAPK基因的表达.结果 p38 MAPK基因在TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)细胞株中均为阳性表达.结论 p38 MAPK基因的表达在雄性小鼠精子发生中可能发挥重要作用.     

大黄素通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导PC12细胞COX-2表达的实验研究

目的探讨大黄素能否通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导的PC12细胞COX-2表达。方法将神经元PC12细胞分为3组:对照组(Control组)、大黄素+H2O2组(Emodin+H2O2组)和H2O2组。在300μM的H2O2干预4小时后使用RT-PCR法和western blot法对各组PC 12细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对PC12细胞p38MAPK磷酸化水平(Phospho-p38MAPK/total p38MAPK比值)进行测量。结果与对照组相比较,在300μM的H2O2干预4小时后PC12细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平以及p38 MAPK磷酸化水平均明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);但H2O2组较Emodin+H2O2组COX-2mRNA和蛋白的表达的升高以及p38 MAPK磷酸化水平的增加更加显著,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论大黄素可以有效抑制H2O2诱导的PC12细胞COX-2表达,并与下调p38 MAPK活化水平密切相关。     

应用双向启动子RNA干扰技术抑制大鼠血管平滑肌细胞MAPK的表达

目的 应用双向启动子技术构建针对MAPK的干扰载体,观察其对MAPK表达的影响.方法 设计MAPK的干扰序列,构建基于双向启动子的干扰载体pHippy-MAPK,RT-PCR检测大鼠血管平滑肌细胞MAPK转录水平受抑制情况,免疫印迹检测大鼠血管平滑肌细胞MAPK蛋白表达受抑制情况,3H-TdR掺入法检测大鼠血管平滑肌细胞的增殖,免疫沉淀法检测大鼠血管平滑肌细胞MAPK活性.结果 构建了针对大鼠MAPK 3段序列的干扰载体pHippy-MAPK,并证实其中的1个干扰载体pHippy-MAPK3能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞MAPK的表达.结论 基于双向启动子的编号为3的pHippy-MAPK干扰载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞MAPK的表达,为干预MAPK信号途径通路提供了有效手段.     

PKC介导P38MAPK通路调控结直肠癌细胞MMP-9表达及侵袭的研究

目的 研究MAPK信号通路对结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及细胞侵袭作用的影响。方法 观察蛋白激酶C激活剂TPA诱导下SW480细胞形态学的改变;蛋白免疫印迹法检测MMP-9、P38MAPK蛋白的表达,zymography法检测MMP-9蛋白的分泌,利用Transwell实验观察细胞侵袭能力。结果 显微镜下观察,随着TPA浓度的升高,细胞形态逐渐改变成针尖样;蛋白免疫印迹法显示,TPA处理下P38磷酸化增加,MMP-9蛋白表达和分泌增加,呈时间依赖性;并且肿瘤细胞侵袭能力随之增强;而通过预处理PKC抑制剂和P38抑制剂,可明显抑制TPA诱导的MMP-9表达和细胞侵袭能力。结论 在结直肠癌SW480细胞中PKC激动剂TPA通过激活P38MAPK信号通路调控MMP-9表达及细胞侵袭,为阻止结直肠癌侵袭转移研究提出多方位的作用靶点和新思路。     

应用RNA干扰抑制目的基因在小鼠体内表达

目的研究RNA干扰(RNAi)对体外和体内基因表达的沉默作用。方法以PCR方法从基因组DNA中克隆出依赖于RNA聚合酶Ⅲ的H1启动子,并用于驱动RNAi片段的合成;构建特异性针对目的基因(绿色荧光蛋白,GFP)的RNAi载体(Pi)。将RNAi干扰载体和GFP载体转染NIH3T3细胞,应用荧光显微镜观察、RT-PCR、流式细胞技术(FACS)分析上述细胞中RNAi对目的基因GFP表达的抑制效果,进一步在个体水平将RNAi载体注入小鼠体内,研究RNAi对GFP表达的抑制情况。结果RNAi能有效地使NIH3T3细胞中GFP表达量降低约60%以上,并能有效地抑制GFP在转基因小鼠体内的表达。结论RNAi技术能抑制目的基因在体内外的表达,是一种有效的基因治疗工具。     

P38MAPK信号通路在大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF中的作用

目的研究P38信号通路(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)在大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells, RMCs)表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)中的作用,从而探讨P38MAPK在糖尿病肾病中的作用机制.方法分别以高葡萄糖、糖基化终末产物(Advanced glycation end product ,AGEs)、高胰岛素和过氧化氢孵育RMCs;以P38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理RMCs,再以上述4种因素孵育RMCs,观察RMCs P38MAPK和VEGF蛋白的表达.结果 4种刺激因素均可独立激活P38MAPK,VEGF表达量也明显增加;SB203580预处理后,VEGF表达被明显抑制.结论 P38MAPK是VEGF的上游激酶,P38MAPK和VEGF可能参与了糖尿病肾病的发生发展.     

LXA4通过p38MAPK/Nrf2信号通路诱导H9c2心肌细胞HO-1高表达

目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)诱导心肌细胞H9c2中血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1表达可能涉及的信号转导通路?方法:分别用核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)的抑制剂ATRA?p38MAPK的抑制剂SB203580?LXA4联合ATRA?LXA4联合SB03580预处理H9c2细胞后进行缺氧/复氧处理,RT-PCR?Western blot?免疫荧光等检测HO-1?Nrf2以及p38MAPK mRNA和蛋白表达的变化?结果:与只行缺氧/复氧处理的细胞相比,LXA4预处理的H9c2细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P < 0.05),而ATRA?SB203580分别抑制了Nrf2的聚集和p38MAPK的磷酸化(P < 0.05),从而抑制了LXA4对HO-1的诱导(P < 0.05)?结论:LXA4预处理诱导心肌细胞H9c2的HO-1高表达,具有抗缺氧/复氧损伤的作用,其机制与p38MAPK/Nrf2信号通路有关?     

shRNA抑制人骨髓间充质干细胞SMN1基因表达的研究

目的 构建在哺乳动物细胞中表达SMN1 shRNA的质粒,并初步探讨其对人骨髓间充质干细胞全长SMN mRNA及蛋白的抑制作用,为进一步建立脊髓性肌萎缩症细胞模型提供实验依据。方法 根据GenBank中SMN1 cDNA序列设计5条SMN1靶向shRNA并将其克隆至pRNAT-156．1／Neo载体中U6启动子的下游,形成能在细胞内表达SMN1特异性短发夹状RNA的重组质粒pshRNA-SMN1;在脂质体介导下将重组质粒pshRNA-SMN1转染人骨髓间充质干细胞（hMSC）,RT-PCR、Western印迹分别检测fl-SMNmRNA及fl-SMN蛋白的表达。结果 琼脂糖凝胶电泳及DNA测序证实重组质粒pshRNA-SMN1构建成功,其中pshRNA-SMN1-1组和pshRNA-SMN1-4组转染后明显抑制了hMSCsfl-SMNmRNA及蛋白的表达（均P〈0．05）,在mRNA水平上千扰效率分别为64．05％、61．04％,蛋白水平上干扰效率分别为52．97％和61．57％,而未影响△7-SMN mRNA的表达。结论 构建的pshRNA-SMN1重组质粒能有效地抑制人骨髓间充质干细胞fl-SMNmRNA及蛋白的表达。