快速纯化甲型肝炎病毒及相关性状的检测

甲型肝炎病毒(HAV)在宿主细胞的胞浆内增殖．很少释放到细胞培养的上清液中，因此，给病毒的纯化带来一定困难。本实验室针对制备甲肝诊断试剂盒所需大量病毒抗原问题，对提高抗原的收获率、浓度和纯度等方法进行改良，建立了以冻融、超声，聚乙二醇(PEG)浓缩，蔗糖/甘油不连续密度梯度离心为主要步骤的快速纯化HAV的方法，并对得到的纯化病毒样品进行相关的性状检测。现将结果报告如下。     

甲型肝炎病毒的分子生物学研究进展

本文对甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的基因组结构与功能、细胞适应及其减毒的分子机制、体外培养时致细胞病变的机制以及ＨＡＶ的细胞受体作了综述。     

甲型肝炎病毒的分子生物学进展

近年来,有关甲型肝炎病毒的基因结构、不同株间变异、抗原部位及减毒的分子基础等方面已进行了深入的研究,本文从分子水平综述甲型肝炎病毒研究的最新进展,并阐明其和新疫苗发展的关系。     

维生素C—铜体系对甲型肝炎病毒的灭活作用

为探讨维生素Ｃ－铜体系对甲型肝炎病毒的灭活作用，将ＨＡＶ Ｎｊ－３株用ＰＬＣ／ＰＲＦ／Ｔ细胞株进行培养，在磷酸盐缓冲液中进行灭活试验，单独使用维生素Ｃ或铜离子接触３０ｍｉｎ，不能灭活污染ＰＢＳ中的甲型肝炎病毒。     

甲型肝炎病毒受体HAVcr-1及其与过敏性疾病的关系

甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus,HAV)是广泛传播的肝炎致病因子,儿童接种HAV疫苗,可以有效控制HAV感染和甲型肝炎流行。近年来对HAV受体的研究也取得很大进展,主要包括:HAV受体(HAVcr-1)的发现、HAVcr-1的结构特征、HAVcr-1与HAV的相互作用等方面,这对阐明HAV吸附和进入宿主细胞的分子机制具有重要意义,尤其最近有关HAVcr-1与过敏性疾病的相关性报道,更使人们对HAV的感染性有了新的认识。本文即针对以上几方面进行综述。     

甲型肝炎病毒受体HAVcr-1及其与过敏性疾病的关系

甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，Hw)是广泛传播的肝炎致病因子，儿童接种HAV疫苗，可以有效控制HAV感染和甲型肝炎流行。近年来对HAV受体的研究也取得很大进展，主要包括：HAV受体(HAVcr-1)的发现、HAVcr-1的结构特征、HAVcr-1与HAV的相互作用等方面，这对阐明HAV吸附和进入宿主细胞的分子机制具有重要意义，尤其最近有关HAVcr-1与过敏性疾病的相关性报道，更使人们对HAV的感染性有了新的认识。本文即针对以上几方面进行综述。     

青海省首例甲型H1N1流感病例的实验室检测

目的 青海省疾控中心流感网络实验室利用中国疾控中心病毒病所国家流感中心统一配发的引物探针对青海省一例输入性疑似甲型H1N1流感病例的临床鼻咽双拭子标本进行检测.方法 采用Real-time PCR和RT-PCR两种方法进行检测.结果 临床鼻咽双拭子标本经检测为甲型H1N1流感病毒核酸阳性.结论 该疑似甲型H1N1流感病例成为青海省首例确诊的甲型HIN1流感病例.     

甲型H1N1流感病人护理体会

加强院感控制措施是控制甲型H1N1流感关键，对患要严密观察病情，防止并发症的发生，加强消毒隔离制度，做好宣教工作，是预防流感的主要手段。     

轮状病毒星状病毒和甲型肝炎病毒的单管多重荧光定量RT-PCR检测方法研究

目的建立能同时检测星状病毒、轮状病毒和甲型肝炎病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法根据Gen Bank上下载的上述3种病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析多重荧光RT-PCR的重复性、特异性和敏感性;以所建立方法对128例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果所建立的多重荧光RT-PCR检测方法对轮状病毒、星状病毒和甲型肝炎病毒具有很好的特异性和重复性,轮状病毒灵敏度达到101拷贝,星状病毒和甲型肝炎病毒灵敏度达到102拷贝。128份粪便标本中,轮状病毒和星状病毒的检出率分别为17.97%和3.13%,甲型肝炎病毒未检出。与基因测序比对结果相符。结论用于轮状病毒、星状病毒和甲肝病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏,可用于临床病原诊断和流行病学调查。     

细胞工厂制备冻干甲型肝炎减毒活疫苗的研究

[目的]采用细胞工厂代替传统转瓶培养人胚肺二倍体细胞（2BS细胞），制备冻干甲型肝炎减毒活疫苗，扩大产量。[方法]2007年10月采用传统转瓶、2层、10层和40层的细胞工厂培养2BS细胞，比较相同细胞在接种相同占地面积、不同培养容器上的生长情况，感染甲型肝炎病毒L—A-1株减毒株，按照现行版《中国药典》制备甲型肝炎病毒原液、半成品和成品，并通过各项检定进行比较。[结果]细胞工厂可以有效提高产量3倍以上，细胞生长情况和病毒免疫荧光强度均较好。传统转瓶和细胞工厂不同规格的培养容器制备的病毒原液、半成品和成品经检定，各项指标均符合标准。[结论]采用细胞工厂制备冻干甲型肝炎减毒活疫苗，在有限培养空间内，具有提高产量、简化操作、降低污染、降低人员劳动强度等优点，可代替传统转瓶规模化生产冻干甲型肝炎减毒活疫苗。     

甲型肝炎减毒活疫苗H2株在狨猴体内传代的实验

为探索甲型肝炎减毒活疫苗的残余毒力及毒力返祖的可能性，将血清抗－ＨＡＶ阴性、肝功能下沉遥普通狨猴用甲型肝炎活疫苗Ｈ２株传代试验。即用甲型肝炎疫苗接种普通狨猴，将其粪便排出的子代病毒，直接用粪便悬液或／和用组织培养增殖液接种狨猴进行传代。     

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)的开发研究

1992年我国研究开发成功甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗 (H2 株 )。十几年中建立了普通狨猴动物模型 ;将细胞-病毒培养系统的生产工艺做了重大改进 ;对 1989～ 1997年生产的 16批疫苗做了现场人体观察 ,未见不良反应及血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)升高 ,接种后抗体阳转率为 81 8%～ 10 0 0 % ,几何平均滴度 (GMT)为 1∶2 1～ 1∶5 0。K7疫苗病毒为IB基因亚型 ,经体内外多次传代或从接种者排出的病毒做序列分析 ,其与K7株的同源性达99 3%～ 10 0 0 % ,显示减毒性质、遗传稳定性不变。易感者接种疫苗后粪便排毒率为 85 7%～ 90 3% ,接触者为6 3 6 %～ 71 9% ,说明活疫苗接种后有次传播能力 ,但毒株均显弱毒性质 ,无毒力返祖现象。结果表明 :H2 株甲肝减毒活疫苗的安全性、免疫原性良好 ,应该继续推广使用     

甲型肝炎减毒活疫苗生产中病毒释放的最低方法探索

目的：探索甲肝炎减毒活疫苗（简称甲肝活疫苗）生产中感染细胞释放病毒的最佳方法。方法：采用超声波细胞粉碎仪、－70℃及液氮冻融3种方法粉碎细胞,对细胞破碎情况、病毒抗原滴度和感染性滴度进行了比较。结果：超声波连续粉碎 3次（90秒／次）、－70℃反复冻融粉碎4次和液氮冻融粉碎6次,细胞破碎率分别为94％、82％和81％;病毒抗原滴度和感染性滴度均达高峰;抗原滴度均为1：256,感染性滴度（logCCID50/ml)分别为8．67、6．5和6．0。继续超声和－70℃冻融粉碎细胞,病毒抗原滴度和无感染性滴度基本不变,而液氮冻融至第10次时,抗原滴度无明显变化,感染性滴度下降2．0lgCCID50/ml。结论：超声波破碎率最高,细胞碎片最小病毒充分释放,且不损伤病毒;－70℃和液氮冻融破碎率较低,细胞碎片较大,病毒释放效率低,病毒损伤以液氮冻融为重。     

中国控制甲型肝炎之前景

展望中国控制甲型肝炎 (甲肝 )之前景 ,考虑与甲肝流行相关的几个问题 :甲肝病毒 (HAV)的致病特点 ;HAV经粪 口途径传播及人群抗体水平状况。控制甲肝流行的有利因素 :HAV的基因结构稳定 ;绝大多数人HAV可归于Ⅰ型 ,株间核苷酸差异 <15 % ,且HAV只有 1个血清型 ,中和抗体可以中和不同基因型的HAV ;中国控制甲肝已取得显著的效果 ,甲肝减毒活疫苗的研究、开发与应用 10余年取得了显著的成就。在理论上甲肝是一种可用疫苗消灭的疾病 ,中国应为此做出贡献。     

甲型肝炎病毒TZ84株单克隆抗体在甲型肝炎抗体检测中的应用

将不同位点的甲型肝炎 (甲肝 )病毒 (HAV)TZ84单克隆抗体 (单抗 )或酶标单抗进行混合做包被和酶 ,代替现有试剂中的多克隆抗体 (多抗 ) ,采用竞争抑制法对试剂的灵敏度和可靠性进行测定 ,并通过 2 2 9份甲肝灭活疫苗临床观察血清甲肝病毒抗体的检测 ,对单抗试剂的应用进行研究 ,并对该单抗试剂进行评价。结果表明 :该单抗试剂的灵敏度为 94 % ,特异度均为 98% ,最低检出浓度的变异系数为 9 3% ;单抗试剂、多抗试剂和雅培试剂的最低检出浓度分别为 5 5、98、31mIU/ml。单抗试剂的灵敏度高于多抗试剂 ,特异度低于多抗试剂。     

毛蚶中甲肝病毒检测方法的探讨

我国沿海各省毛蚶养殖点广泛,但受生物性污染的情况不一。为了解毛蚶受甲肝病毒(HAV)污染程度,作者对浙江毛蚶主要养殖点内的33个组份毛蚶进行了检测。结果用ELISA法测到可疑阳性5份,在再次复测时均为阴性。用cDNA—RNA杂交法复核均呈阴性结果。实验表明,ELISA法简便、节约、快速、敏感,然特异性及重复性尚不及cDNA—RNA杂交法,但因其在基层便于实施,故在大量检测时,适于作为初筛广加应用。     

冻干甲肝减毒活疫苗安全性及免疫原性观察

目的评价国产冻干甲肝减毒活疫苗的安全性和免疫原性。方法选择部分18~24月龄健康儿童接种1剂甲肝减毒活疫苗,使用统一的"疫苗接种日记卡"观察记录疫苗接种后副反应,于免后28 d采集血清检测抗-HAVIgG。结果共接种18~24月龄健康儿童354人,14 d内副反应发生率10.73%,发热反应发生率为7.06%,未观察到严重异常反应;检测有效血清标本333份,免后28 d抗-HAV阳性率为92.79%,抗-HAV GMT为14.60 mIU/ml。结论国产冻干甲肝减毒活疫苗具有良好的安全性和免疫原性。     

甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗不同免疫程序效果对比研究

为了探索国产甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗不同剂量、不同免疫程序的免疫效果,并与甲肝灭活疫苗进行比较,在河北省正定县某乡3个村筛选3～13岁的甲肝易感儿童211名,按年龄分层随机分为甲肝减毒活疫苗A组(0、6、12个月)、B组(0、6个月)和甲肝灭活疫苗C组(0、6个月).这3个组按不同免疫程序减毒活疫苗或灭活疫苗免疫后1、6、7、12、13、24个月采血,检测抗甲肝病毒抗体(抗-HAV).结果显示A、B、C3个组在首剂疫苗免疫后1个月时抗-HAV阳转率均较低(33.87%～42.22%);第2剂疫苗免疫后1个月抗体水平均有大幅度提高,抗-HAV阳转率为97.67%～100.00%,几何平均滴度(GMT)为1?107.16mIU/ml～2?477.52mIU/ml,升高20倍以上;首剂免疫后12个月抗-HAV阳性率均为100.00%,但GMT下降了64.9%～57.0%.仅A组首剂免疫后12个月时注射了第3剂减毒活疫苗,1个月后抗体GMT呈5.7倍增长.首剂免疫后24个月时,3个组抗-HAV阳性率为92.98%～98.11%,GMT为213.87～642.69mIU/ml.低滴度减毒活疫苗基础免疫后再免疫能诱导很好的免疫回忆反应.     

规范化甲肝减毒活疫苗（LA—1株）大规模免疫近期效果观察

为研究国产规范化甲肝减毒活疫苗（ＬＡ－１株）大规模免疫的安个性、免疫原性和保护效果,对广西８个县（市）１．５～１０岁儿童１７１６３４人随机分成疫苗接种组（９７２７８人）和对照组（７４３５６人）。疫苗组接种１针国产甲肝减毒活疫苗（ＬＡ－１株）,滴度１０６．７５ＴＣＩＤ５０）。结果甲肝疫苗接种者均无局部和全身不良反应。免前阴性的疫苗组儿童于免后３、６、１２个月定人采血,用Ａｂｂｏｔ公司的ＩＭｘｍＥＩＡ试剂检测甲肝抗体阳性率分别为７３．９％（８８／１１９）、８３．２％（７９／９５）和８１．７％（４９／６０）,ＧＭＴ分别为１２２．７、８０．７和８３．６ｍＩＵ／ｍｌ。随访９～１３个月,对照组发现１８例临床甲型肝炎病例,发病率２４．２／１０万,疫苗组无一病例发生,保护率１００％,保护率９５％可信限下限为８６．２％。