逆转录病毒介导IL－2基因导入肝癌细胞的研究

利用逆转录病毒载体系统ＰＡ３１７／ＬＮＣ－ＩＬ－２所产生的含有ＩＬ－２基因及新霉素抗性基因（ｎｅｏｒ）的重组病毒，经共培养转染ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞株。ＩＬ－２基因受巨细胞病毒早期启动子调控，转染后的细胞置于含新霉素类毒性药物Ｇ４１８（４００ｕｇ／ｍｌ）培养基内培养、筛选３０天，结果果转染率约为１～２％。对存活下来的转染有ＩＬ－２基因和新霉素抗性基因的细胞形态和生长情况进行观察，同时从水平及蛋白质水平对外源性基因的转录和翻译进行检测。结果表明：ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞在ＩＬ－２基因转染前后形态及生长情况无明显变化；培养上清活性检测发现转染后为转染前的２０～３０倍；逆转录ＰＣＲ分析显示转染后的ＩＬ－２ｍＲＮＡ量明显高于转染前。研究表明我们已成功地将ＩＬ－２基因导入肝癌细胞并获得持续、稳定、高效表达。     

逆转录病毒介导IL—2基因导入肝癌细胞的研究

利用逆转录病毒载体系统ＰＡ３１７／ＬＮＣ－ＩＬ－２所产生的含有ＩＬ－２基因及新霉素抗性基因的重组病毒，经共培养转染ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞株。ＩＬ－２基因受巨细胞病毒早期启动子调控，转染后的细胞置于含新霉素类毒性药物Ｇ４１８（４００ｕｇ／ｍｌ）培养基内培养、筛选３０天，结果果转染率约为１￣２％。对存活下来的转染有ＩＬ－２基因和新霉素抗性基因的细胞形态和生长情况进行观察，同时从水平及蛋白质水平对外     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL—2基因疗法的肿瘤治 …

以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移,研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天,肿瘤局部 注射表达ＩＬ－２的重要腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达的ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ,然后连续０天给予５－氟胞嘧啶３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。     

B7基因转导非免疫原性肿瘤B16并联合应用IFN-γ的抗肿瘤研究

目的探索非免疫原性肿瘤的免疫基因治疗。方法将Ｂ７１基因导入非免疫原性肿瘤细胞Ｂ１６,在体外经ＩＦＮγ处理后,观察细胞表面分子的表达变化,以及肿瘤细胞在小鼠体内的成瘤性。结果单独Ｂ７基因转导的Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内持续生长。体外用ＩＦＮγ处理肿瘤细胞,可明显增加细胞表面ＭＨＣＩ类分子的表达,与Ｂ７－Ｂ１６比较,Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内的成瘤性明显降低。结论单独Ｂ７基因导入并表达,不能改变Ｂ１６在体内恶性增殖的特性。同时提高细胞表面Ｂ７与ＭＨＣＩ分子的表达,两者可协同发挥作用,诱发肿瘤排斥。     

小鼠B16黑色素瘤细胞HACs的提纯及其抑瘤作用和机理的探讨

目的：从小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞胞浆中提纯热休克蛋白抗原肽复合物（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ－ａｎｔｉｇｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐｌｅｓｅｓ．ＨＡＣＣｓ）,并观察其抑瘤作用及探索其机制。方法：ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析法纯纯Ｂ１６ ＨＡＣｓ,应用体内免疫法检测ＨＡＣ的抑瘤作用,结晶紫染色法检测γ－ＩＦＮ分泌活性,ＣｏｎＡ诱导的淋巴母细胞增殖法检测ＩＬ－２分泌活性,＾３Ｈ－     

IL—4基因转染人胃癌细胞的实验研究

目的：评价ＩＬ－４基因转染人胃癌细胞株分泌ＩＬ－４的可行性。方法：用脂质体转染法将ＩＬ－４基因转入ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株，并检测细胞分泌的ＩＬ－４和对ＬＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞作用的影响。结果：ＩＬ－４基因可以转染入人胃癌细胞，并表达有活性ＩＬ－４，基因转染可以明显增强ＩＬ－２激活的ＬＡＫ细胞的肿瘤杀伤作用，用大剂量的γ射线照射后，转染细胞仍可以持续分泌ＩＬ－４３～４周期。结论：ＩＬ－４基因转染不改变胃癌细胞的体外生长特性，但可以明显增强抗肿瘤免疫反应     

4—乙酰胺苯基维甲酸酯抑制肿瘤细胞侵袭重组基底膜及其作用机理

目的研究新维甲类化合物４－乙酰胺苯基维甲酸酯（４－ＡＰＲ）对Ｂ１６－Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞侵袭能力的抑制作用,探讨其作用机理。方法癌细胞侵袭能力用重组基底膜侵袭试验衡量;ＰＡＧＥ底物酶谱方法检测Ⅳ型胶原酶活性;斑点杂交检测ＣＮＥ－２Ｚ细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达;以细胞生长曲线评价药物对Ｂ１６－Ｆ１０细胞的生长抑制作用。结果在１０－５ｍｏｌ／Ｌ和１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,４－ＡＰＲ对Ｂ１６－Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞侵袭重组基底膜的抑制率分别为５４．２％和４１．９％,对ＣＮＥ－２Ｚ细胞培养上清中的Ⅳ型胶原酶活性有降低作用。此外,４－ＡＰＲ可抑制Ｂ１６－Ｆ１０细胞与ＬＮ、ＦＮ和Ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附,诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达。结论４－ＡＰＲ抑制Ｂ１６－Ｆ１０细胞侵袭重组基底膜。４－ＡＰＲ的抗侵袭活性与抑制肿瘤细胞的粘附,降低肿瘤细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶的活性和（或）诱导肿瘤细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达等有关。     

人细胞色素p450 IA2基因的构建及其功能检测──该基因在啮齿类细胞中代谢

本文首先构建了含人类细胞色素ｐ４５０ＩＡ２ｃＤＮＡ的ｐＺｉｐ－ｐ４５０ＩＡ２的真核表达载体，并分别将其转染到Ｖ７９细胞和原代大鼠肝上皮细胞中．Ｎｏｒｔｈｃｒｎ杂交和免疫组化实验显示，Ｖ７９转染细胞中有人ｐ４５０ＩＡ２的ＲＮＡ和蛋白水平的表达。细胞毒实验和ＨＧＰＲＴ位点突变率检测结果证明，外源性ｐ４５０ＩＡ２基因可在Ｖ７９细胞中代谢活化黄曲霉毒素Ｂ１．转染有ｐＺｉｐ－ｐ４５０ＩＡ２质粒的原代大鼠肝细胞可代谢活化５ｎｇ／ｍｌ的黄曲霉毒素Ｂ１．本研究说明了人ｐ４５０ＩＡ２ｃＤＮＡ在ＭＭＬＶ的５′ＬＴＲ系统驱动下，可在体外啮齿类细胞中代谢活化黄曲霉毒素Ｂ１．它为ＡＦＢ１致癌机制的研究提供了一个新的、更为有效的途径。     

肺癌患者Ⅰ类和Ⅱ类辅助T细胞的变化

目的：研究肺癌患者血浆及外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）诱生ＩＬ－２、ＩＬ－４水平及患者Ⅰ类和Ⅱ类辅助Ｔ细胞（Ｔｈ１和Ｔｈ２）细胞功能。方法：用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ技术,测定３０例肺癌术前患者、１２例术后患者血清及外周血单个核细胞诱生的ＩＬ－２、ＩＬ－４水平,以ＩＬ－２水平反映Ｔｈ１细胞功能,以ＩＬ－４水平代表Ｔｈ２细胞功能。结果：肺癌患者血清及ＰＢＭＣ诱生产生ＩＬ２水平减低,而ＩＬ－４水平升高（Ｐ     

肺癌患者Th1／Th2细胞的变化

「目的」观察肺癌患者血浆及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）诱生ＩＬ－２、ＩＬ－４水平,进而反映患者Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞功能。「方法」运用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ技术,测定４８例肺癌术前患者和２４例术后患者血清及外周血单个核细胞诱生的ＩＬ－２、ＩＬ－４水平。以ＩＬ－２水平反映Ｔｈ１细胞功能,以ＩＬ－４水平代表Ｔｈ２细胞功能。「结果」肺癌患者表及ＰＢＭＣ诱生产生ＩＬ－２水平减低,而ＩＬ－４水平升高。ＰＢＭＣ     

rBCG-IL-2对小鼠肿瘤局部和全身免疫功能的影响

目的：将ｒＢＣＧ－ＩＬ－２应用于动物实验,观察其对肿瘤生长和免疫功能的影响。方法：采用基因工程技术构建ｒＢＣＧ－ＩＬ－２,用黑色素瘤细胞株Ｂ１６接种于小鼠小腿外侧皮下,再用ｒＢＣＧ－ＩＬ－２局部治疗,２周后处死小鼠,用ＥＬＩＳＡ法检测脾淋巴细胞培养上清中ＩＬ－２,ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ的含量和肉眼及镜下观察肿瘤生长和局部免疫效应细胞浸润情况。结果：ｒＢＣＧ－ＩＬ－２对肿瘤生长的抑制作用明显优于对     

甲氰咪呱对鼠体内IL—2／LAK抗肿瘤作用的影响

为探讨甲氰咪呱（ＣＩＭ）对鼠体内ＩＬ２／ＬＡＫ抗肿瘤作用的影响,将Ｂ１６细胞经尾静脉接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,第３ｄ分别应用ＤＨａｎｋｓ液、ＣＩＭ（１０ｍｇ／ｍｌ）＋ＣＩＭ（１μｇ／ｍｌ）诱导的脾细胞,ＩＬ２＋ＩＬ２（５００Ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ细胞,ＣＩＭ（１０ｍｇ／ｍｌ）＋ＩＬ２＋ＣＩＭ（１μｇ／ｍｌ）和ＩＬ２（５００Ｕ／ｍｌ）共同诱导的ＬＡＫ细胞,观察鼠肺转移结节和生存期。结果显示,单用ＣＩＭ并不能减少肺转移结节和延长生存期;ＣＩＭ＋ＩＬ２／ＬＡＫ治疗组与ＩＬ２／ＬＡＫ治疗组相比,可减少肺转移结节（Ｐ＜０．０５）和显著延长生存期（Ｐ＜０．０１）。结果表明,ＣＩＭ能够增强ＩＬ２／ＬＡＫ抗肿瘤作用,可用于治疗肿瘤。     

CD4抗原在急性髓系白血病细胞上的表达及其意义

目的：探讨ＣＤ４抗原在急性髓系白血病细胞上的表达及意义。方法：对８２例急性髓系白血病患者进行免疫表型、细胞遗传学分析。结果：ＣＥ４在ＡＭＬ患者中表达率为４０．２％，Ｍ５中阳性率最高９２．９％，Ｍ４次之为５５％，ＣＤ４＾＋ＡＭＬ高表达ＨＬＡ－ＤＲ，ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１５、ＣＤ１４、ＴＢ系列抗原阴性。ＣＤ４＾＋ＡＭＬ中可见１１ｑ２３、ｉｎｖ（１６）、ｔ（９；２２），未见特异性染色体异常。但伴１１ｑ２３和ｉｎｖ（１６）异常的ＡＭＬ频繁表达ＣＤ４，阳性率分别为８６．３％、６０．２％。ＣＤ４＾＋ＡＭＬ在年龄、性别、肝脾肿大、ＣＮＳ－Ｌ、ＤＩＣ、１疗程ＣＲ率等临床特征方面无明显不同。结论：ＣＤ４＾＋ＡＭＬ是一种起源较高的具有单核细胞特征的髓系白血病，ＣＤ４的表达对ＡＭＬ－Ｍ４、Ｍ５尤其是Ｍ５亚型的鉴别诊断有重要价值。     

联合应用MLV-rIL-2、TIL、CY抗鼠H22肝癌的实验研究

表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（ＣＤ）基因的重组腺病毒ＡｄＣＤ体外转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６Ｆ１０，结果显示转梁了ＣＤ基因的Ｂ１６Ｆ１０细胞对５－氟胞嘧啶（５ＦＣ）的敏感性显著提高。将经ＡｄＣＤ／５ＦＣ系统处理的Ｂ１６Ｆ１０细胞止清倍比稀释后，加至野生型了Ｂ１６Ｆ１０细胞中，发现当上清仅占６．２５％时即可对野生型Ｂ１６Ｆ１０细胞发挥明显的杀伤作用，提示ＡｄＣＤ／５ＦＣ介导的旁观者效应可能是通过５ＦＣ经Ｃ     

细胞色素P4501A1,2D6和谷胱甘肽硫转移酶基因多态性与肺癌易感性的研究

目的探讨细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（ＣＹＰ１Ａ１），２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴＭ１）基因多态性与肺癌易感性的关系。方法用病例对照研究方法及ＰＣＲ┐ＲＦＬＰ等技术检测原发性肺癌和住院对照各５９例，分析ＣＹＰ１Ａ１基因ＭｓｐＩＣ型、ＣＹＰ２Ｄ６Ｃｈ型（Ｔ／Ｔ型）和ＧＳＴＭ１缺陷型〔ＧＳＴＭ１（－）〕三种纯合突变型频率分布及其交互作用。结果突变型在病例和对照组的频率分别为（ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐＩＣ型２５．４％、１５．３％（Ｐ＝０．１７），ＣＹＰ２Ｄ６ＣｈＴ／Ｔ型３５．６％，４７．５％（Ｐ＝０．２６），ＧＳＴＭ１（－）型５７．６％、４９．２％（Ｐ＝０．４６），无显著性差异。协同分析发现在男性中，１１．６％（５／４３）肺癌兼有ＭｓｐＩＣ型和ＧＳＴＭ１（－）型，对照组无１例（０／４３），Ｐ＝０．０３。结论结果提示在男性中ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐＩＣ型和ＧＳＴＭ１（－）型可能协同增加患肺癌的危险性。     

共刺激因子B7和LFA3对人外周T细胞增殖和IL—2产生的效应

目的 观察不同的共刺激因子在抗原提呈细胞存在情况下，地人外周Ｔ细胞的增殖反应及ＩＬ－２产生作用。方法 用选择性淘洗法经人外周Ｔ细胞，以葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）为抗原，在体外培养的纯化Ｔ细胞中（１０＾６／ｍｌ）加入１０＾５／ｍｌ用ＨＬＡ－ＤＲ４，Ｂ７，ＴＬＦＡ５单纯，双重或天重转染的人仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）作为抗原提呈细胞（分别用ＣＨＯ－ＤＲ４、ＣＨＯ－ＤＲ４／ＬＦＡ３，ＣＨＯ－ＤＲ４／Ｂ７，ＣＨ     

逆转录病毒介导的IL6／IL2融合基因转导对小鼠B16细胞…

为探讨细胞因子之间对肿瘤细胞修饰的协同效果及融合基因用于肿瘤细胞转染的可行性，我们采用ＰＣＲ及柔性接头连接的方法。构建了含人ＩＬ６／ＩＬ２融合基因的逆转录病毒载体，将其转梁小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，对基因转导后细胞的粘附及实验性肺转移能力进行了测定。     

肝癌细胞CD80表达与MHC-I分子的关系

研究共刺激分子ＣＤ８０在肝癌细胞中的表达与ＭＨＣ－１（Ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ）分子相互关系，，以探讨在肿瘤细胞所诱发的免疫排以应中共刺分子对抗的提呈机制的影响。方法：通过逆转录病毒载体介导，将ＣＤ８０基因转入肝癌细胞系ＨＨＣＣ，以流式细胞仪检测其表面ＭＨＣ－Ｉ分子的表达情况。同时检测ＬＡＫ细胞转染前后的细胞的杀伤效果。结果：表达ＣＤ８０的肝癌细胞基表达ＭＨ     

成纤维细胞介导的人α型干扰素基因疗法与过继免疫化疗联合治…

作者以皮下接种人肝细胞癌细胞ＳＭＭＣ７７２１的裸鼠为荷瘤模型，由人外周血单个核细胞经体外ＩＬ－２和丝裂霉素Ｃ灭活的人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１共同刺激培养后激活的杀伤细胞（ＡＫ），研究了将成纤维细胞介导的人ＩＦＮ－α基因疗法与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素过继免疫化疗联合应用后对肝癌的治疗作用。结果表明：（１）给肝癌鼠单独腹腔埋植人ＩＦＮ－α基因转移的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α＾＋）就