Rb基因对肺腺癌细胞株生长的抑制作用

目的：探讨重组腺病毒载体的转染效率及其介导外Ｒｂ基因进肿瘤细胞的效果，观察外源Ｒｂ基因在肿瘤细胞内的表达及其对捉瘤细胞生长的抑制作用。为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法：构建Ｒｂ基因重组腺病毒载体。体外转染人肺腺癌细胞标ＧＬＣ－８２。应用免疫组化和聚合酶链反应等技术，观察Ｒｂ基因在细胞内的状态及表达情况。应用细胞计数及流式细胞仪检测肿瘤细胞的生长情况。结果：ＧＬＣ－８３细胞内存在基因组Ｒｂ基因，但     

Ad—p53与Ad—p16联合对人肺腺癌GLC—82细胞作用的研究

目的：探讨腺病毒介导的ｐ５３与ｐ１６基因联合对人肺腺癌ＧＬＣ－８２疗效提高的可能性。方法：将分别携有ｐ５３基因、ｐ１６基因重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３与 Ａｄ－ｐ１６）联合使用,通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、ＴＵＮＥＬ检测、ＲＴ－ＰＣＲ分析、免疫组织化学实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下,Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合导入ＧＬＣ－８２细胞,对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强,表明ｐ５３基因与ｐ１６基因在体外疗效上互为协同。结论：Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合,可以提高对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的疗效。     

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的 观察外源性野外型ｐ５３对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３突变的人肺巨细胞癌系８０１－Ｄ。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺｉＰ－ｐ５３。用基因枪介导外源基因。经Ｇ４１８筛选得到转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３。用ＰＣＲ检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果 转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３体外长期传代有外源性ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显     

腺病毒介导的野生型p53基因对肺腺癌细胞株生长的抑制作用

为研究野生型p53基因对肺腺癌细胞株GLC-82细胞生长的作用,确立腺病毒介导的野生型p53基因在肿瘤治疗中的意义,应用分子克隆技术首先构建了野生型p53复制缺陷型腺病毒重组体,应用生化染色方法确定了重组体的转染效率,以免疫组化法及PCR技术分别确定了腺病毒载体介导的p53基因转染GLC-82细胞后p53蛋白和p53 cDNA的表达情况;最后应用细胞生物学方法检测了p53对GLC-82细胞扩增及细胞周期的影响.结果表明所构建的重组体可以高效、快速转染GLC82细胞,抑制GLC-82细胞扩增,使细胞合成期和分裂后期的量减少,出现细胞凋亡现象:提示野生型p53基因导入可作为治疗肺腺癌的途径之一     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL—60,K562生长的抑制作用

目的 探索肿瘤抑制基因Ｐ５２对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法 选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体，体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０，Ｋ５６２。通过细胞生长曲线，ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果 ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ ｃＤＮＡ表达。     

重组腺病毒介导人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒介导人野生型p５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药 细胞生物学行为的影响,为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用p５３异常的ＫＢ-s（ＶＣＲ敏感）和ＫＢv２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞,感染携带人野生型p５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重 组腺病毒后,观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性０的变化,结果：药     

野生型p53基因抑制膀胱癌细胞株HTB9生长及其机理的研究

目的：探讨野生型ｐ５３基因抑制膀胱癌生长的作用及其机理,方法：将野生型ｐ５３基是组腺病毒载体转染入膀胱癌细胞ＨＴＢ９,观察细胞生长曲线,细胞周期变化及ＤＮＡ合成情况,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ２１ｍＲＮＡ水平,应用免疫组化法检测ｐ２１蛋白表达水平。结果：野生型ｐ５３基因导入可抑制ＨＴＢ９细胞生长和ＤＮＡ合成（ＡｄＣＭＶｐ５３）,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止静的细胞比例增高,而合成期细胞比例下降,另外,ＡｄＣＭＶｐ５３还提高了ｐ２１的ｍＲＮＡ和蛋白水平,结论：腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因转梁对于膀胱可能是很有前途的基因治疗方法。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

重组腺病毒介导入野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒分导入野生型ｐ５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响,为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用ｐ５３异常的ＫＢ－ｓ（ＶＣＲ敏感）和ＫＢ－ｖ２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞,感染携带人野生型ｐ５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重组腺病毒后,观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性）的变化。结果：药物敏感和耐药细胞都对腺病毒易感,重组腺病毒携带的三个外源基因（ｐ５３、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１基因）在两种细胞中都能得到有效表达,并且能抑制它们的生长及诱导其凋亡。耐药细胞 ＫＢ－ｖ２００在转染该重组腺病毒 ４８ｈ后,其细胞膜上 Ｐｇｐ糖蛋白的泵出药物的功能却受到显著影响,表现为罗丹明１２３在其细胞内的积累增加。ＭＴＦ的实验结果也显示出其对ＶＣＲ药物敏感性的增加,裸鼠体内实验证实了感染上述重组腺病毒的ＫＢ－ｖ２００细胞的致瘤性降低,同时能增加对化疗药物ＶＣＲ的敏感性。结论：实验研究结果提示,使用该重组腺病毒并结合化疗药物,对临床治疗多药耐药的肿瘤可能会更有效。     

外源野生型p53基因表达对人肺癌细胞药物敏感性影响

了解外源野生型ｐ５３（ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｐ５３,ｗｔｐ５３）基因表达对人大细胞肺癌８０１－Ｄ细胞对化疗药物敏感性的影响。方法选用Ｐ５３基因突为的人大细胞肺癌８０１－Ｄ系。用脂质体介导构建的含ｗｔｐ５３基因载体转染８０１－Ｄ细胞,ＰＣＲ检测外源ｗｔｐ５３在宿主细胞存在情况,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定８０１－Ｄ细胞转染ｗｔｐ５３后药物敏感性变化,流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞死亡情况。结果转染ｗｔｐ５     

抑癌基因p16INK4真核表达载体的构建及其表达 *

目的：探讨融合自杀基因ｐＣＥＡｅｄ－ｔＫ在导入到肺癌细胞后,其体外旁观者效应的细胞差异性。方法：融合基因ｐＣＥＡｅｄ－ｔｋ提取后,脂质体介导的方法转染到６训肺癌细胞株（ＳＰＣＡ－１,ＧＬＣ－８２,Ａ５４９,ＳＣ,ＨＬＡＭＰ,Ｌ－７８）,用ＭＴＴ法测定染前后对前体药物５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）和丙氧岛苷（ＣＣＶ）的敏感性和在体外的旁观者效应。结果：（１）脂质体介导找历历志染效应低低。（２）在和种已转染     

腺病毒介导的RA538基因转移及其对人结肠癌细胞

目的 进上步研究ＲＡ５３８对人结肠癌细胞生物学效应，选用介导ＲＡ５３８重组体腺病毒，观察其对人结肠癌细胞系ＨＣＴ的作用。方法 通过重组体腺病毒将ＰＡ５３８基因转导到人结肠癌细胞系ＨＣＴ中，观察转染ＲＡ５３８基因后的肿瘤细胞生长情况。经流式细胞仪、ＤＮＡ片段化分析及ＴＵＮＥＬ检测分析抑瘤机制。结果 由重组体腺病毒Ａｄ－ＲＡ５３８介导基因ＲＡ５３８转导在ＨＣＴ获得较主的转导效率，ＭＯＩ为１００时使８０     

外源性p53基因增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

 目的 探讨外源性ｐ５３基因转染对人卵巢癌细胞株的化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的转染技术，将人野生型ｐ５３基因的真核表达载体导入不表达ｐ５３的卵巢癌ＳＫＯＶ－３细胞中，经Ｇ４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定后，观察其对顺铂作用后的 ＳＫＯＶ－３细胞的集落形成及凋亡的影响。结果 外源性Ｐ５３基因在转染细胞中有效表达，并增强了顺铂对ＳＫＯＶ－３细胞集落形成的抑制作用及促进了顺铂诱导的细胞凋亡。结论 外源性ｐ５３基因能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，两者联合作用能更大程度地杀灭肿瘤细胞。     

p53转染对肝癌细胞系Hep3B的作用

目的：研究野生型和突变型p５３基因cＤＮＡ转染对肝癌细胞系Ｈep３Ｂ的作用。方法：通过采用脂质体介导转染技术,将野生型、突变型p５３的真核表达重组质空载体质粒分别导 入一种p５３和Ｒb基因缺失的肝癌细胞系Ｈep３Ｂ。结果：经Ｇ４１８筛选获得稳定的整合了野生型p５３的克隆（wide-type p53, wt-p53)、突变型p53细胞表达p53细胞的p２１＾wafl/cipl蛋白表达水平升高。wt-p53细胞生长较ＴＤＮ Ｐ５３、pＮeo细胞缓慢,但不出     

外源性野生型p53基因在K562－n细胞表达的意义

目的研究外源性野生型ｐ５３基因在红白血病细胞表达的意义。方法采用重组逆转录病毒载体介导的方法将人野生型ｐ５３基因ｃＤＮＡ转移入Ｋ５６２－ｎ细胞，用形态学、流式细胞仪和联苯胺染色试验检测转基因后的Ｋ５６２－ｎ细胞。结果野生型ｐ５３基因可以诱导Ｋ５６２－ｎ细胞编程性细胞死亡和分化的形态特征，且伴有细胞周期Ｇ１期的生长阻滞。结论野生型ｐ５３基因能抑制人红白血病细胞生长的某些机制。     

糖皮质激素诱导p53基因转染的人胃粘膜上皮细胞的凋亡反应

为了研究糖皮质激素对表达不同ｐ５３基因的人胃粘膜上皮细胞所诱导的凋亡反应，将外源性的野生型和突变型ｐ５３基因导入体外培养的人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１细胞中。在浓度为０．２～０．８ｇ／Ｌ的氢化可的松诱导下，转染细胞发生凋亡，但转染有不同的ｐ５３基因的细胞所发生的凋亡反应是不同的。实验结果表明，转染野生型ｐ５３基因的ＧＥＳ－１细胞凋亡反应明显强于突变型ｐ５３基因转染的细胞。由此推测，当胃上皮细胞处于炎症状态时，体内自生分泌的糖皮质激素在抑制炎症反应的同时亦诱导上皮细胞的凋亡。而当胃上皮细胞的ｐ５３基因发生了突变，则在糖皮质激素作用下使得带有ｐ５３基因突变细胞具有选择性生长优势，促进了肿瘤演进     

腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

PCR－SSCP－银染方法检测肺癌患者支气管活检标本的p53基因突变

ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染方法检测肺癌患者支气管活检标本的ｐ５３基因突变朱朝晖，李龙芸，朱元珏，司静懿，李昆ｐ５３基因在小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）和非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的突变频率均很高（４０～１００％），是肺癌发生过程中的重要基因。实验已证明，野生型...     

胃泌素及其受体拮抗剂对胃癌BGC—823细胞系p53基因蛋白表达的 …

胃泌素是胃肠道Ｇ细胞分泌折一种多肽激素，对胃肠道粘膜细胞及某些恶性肿瘤细胞有显著促生长作用。这种作用可被其受体拮抗剂Ｌ－３６５２６０所阻断。本实验用胃泌素－１７及其受体拮抗剂Ｌ－３６５２６０分别或单独对ＢＧＣ－８２３细胞系作用７２ｈ后，发现胃泌素对细胞Ｐ５３基因蛋白的表达普遍有促进作用，而Ｌ－３６５２６０对Ｐ５３的表达却表现为明显抑制。．     

野生型p53基因的导入对膀胱癌细胞抑制作用的观察

转染外源野生型ｐ５３基因对膀胱癌ＥＪ细胞的抑制作用。方法将含外源野生型ｐ５３基因的（ａｄ┐Ｗｔｐ５３）转染膀胱癌ＥＪ细胞,观察生长曲线,细胞周期变化及裸鼠体内抑瘤试验。结果转染了ａｄ┐Ｗｔｐ５３的ＥＪ细胞在体外生长速率下降,在裸鼠体内致瘤性丧失,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止期的细胞比例增高。另外,ａｄ┐Ｗｔｐ５３直接注射到肿瘤组织内,可使外源野生型ｐ５３基因在肿瘤细胞内有效、稳定的表达,肿瘤表现为生长减缓,最后停止生长并有缩小。结论腺病毒载体介导基因转染效率高,速度快,安全,是很有前途的体内基因治疗载体。