重组可溶性人CD40L诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的:探讨重组可溶性人CD40L(rsh CD40L)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤作用及其在动脉粥样硬化中的作用。方法:应用rsh CD40L刺激人脐静脉内皮细胞12 h;MTS法观察HUVECs的生存活性,ELISA法测内皮细胞E-选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子(ICAM)-1、组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)表达的变化,比色法测脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与正常组比较,不同浓度的rsh CD40L(0.5、1、2、3 mg/L)对内皮细胞的生存活性无明显影响;0.5 mg/L rsh CD40L即可增加内皮细胞E-selectin、s ICAM-1、TF、TFPI的分泌,差异有统计学意义(P0.01),同时增加内皮细胞MDA的含量、降低SOD活性(P0.05)。结论:0.5~3 mg/L rsh CD40L对内皮细胞生存活性无明显影响,但已经引起内皮细胞功能障碍,增加内皮细胞炎症和外源性凝血反应,诱导内皮细胞脂质过氧化物损,使其抗氧化能力下降。     

脱氢表雄酮对人脐静脉内皮细胞血管舒张功能的影响

目的:分析脱氢表雄酮(DHEA)对CD40L刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)水平及ET-1mRNA和内皮源性NO合酶(eNOS)mRNA表达水平的影响,探讨DHEA对血管舒张的作用。方法:原代培养HUVECs,给予CD40L(1μg/m1)刺激(CD40L刺激组)和不同浓度DHEA(10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L,分别为低、中、高浓度DHEA组)干预,以不作干预的培养细胞为空白对照组。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HUVECs的ET-1、eNOS mRNA表达,采用ELISA和硝酸还原酶法分别检测细胞培养液中NO和ET-1浓度。结果:与空白对照组比较,CD40L刺激组ET-1mRNA和ET-1浓度明显增加,eNOS mRNA和NO水平明显降低(P0.05或P0.01)。与CD40L组比较,不同浓度DHEA组ET-1mRNA和ET-1水平降低,eNOS mRNA和NO水平增加,以高浓度DHEA组变化最明显(P0.05或P0.01)。结论:DHEA能通过抑制ET-1表达和促进NO生成来保护内皮细胞的舒张血管功能。     

脱氢表雄酮抑制高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨脱氢表雄酮对高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,以及全反式维甲酸(ATRA)在这一过程中的作用。方法:细胞实验:将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为正常对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+DHEA组、ox-LDL+DHEA+ATRA组和DHEA组。各组细胞均加入相应药物作用24 h,采用RT-PCR和细胞酶联免疫吸附法检测各组细胞ICAM-1 m RNA及蛋白的表达情况。动物实验:将大耳白兔分为正常对照组、高脂组、高脂+DHEA组、高脂+DHEA+ATRA组和DHEA组。各组白兔均用相应饲料喂饲10周后处死动物,采用RT-PCR和免疫组织化学等方法检测各组白兔主动脉ICAM-1的m RNA及蛋白的表达情况。结果:细胞实验:ox-LDL组ICAM-1的表达明显高于正常对照组(P0.05);与ox-LDL组相比,ox-LDL+DHEA组ICAM-1的表达明显降低(P0.05);DHEA组与正常对照组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05);ox-LDL+DHEA+ATRA组与ox-LDL+DHEA组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05)。动物实验:高脂组主动脉ICAM-1的表达明显高于正常对照组(P0.05);与高脂组相比,高脂+DHEA组ICAM-1的表达明显降低(P0.05);DHEA组与正常对照组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05);高脂+DHEA+ATRA组与高脂+DHEA组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05)。结论:DHEA能够抑制高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一,而全反式维甲酸对DHEA的这一作用并无明显增强作用。     

氧化低密度脂蛋白及抗氧化剂对人脐静脉内皮细胞表达CD40和CD40 L的影响

目的探讨OX -LDL和VitE对人脐静脉内皮细胞表达CD40 和CD40L的影响。方法应用流式细胞技术检测细胞表面CD40和CD40L表达水平。结果低浓度OX -LDL(<200μg/L)可使内皮细胞表达CD40 和CD40L含量明显增加 ,具有浓度和时间依赖效应。高浓度(>200μg/L)OX -LDL刺激时 ,CD40 和CD40L表达明显下降。抗氧化剂VitE呈剂量依赖性部分逆转OX -LDL对内皮细胞表达CD40 和CD40L。结论OX -LDL刺激内皮细胞高表达CD40和CD40L可能是其致动脉粥样硬化的重要机制。     

雌激素对人脐静脉内皮细胞HSP27表达的影响

目的：观察人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中热休克蛋白27（HSP27）表达在雌激素（estrogen,E）诱导下的改变。方法：分别用10–9 M、10–8 M、10–7 M雌二醇（estradiol,E2）以及10–6 M雌激素受体拮抗剂他莫昔芬（tamox ifen）处理HUVEC后,采用Western blot法和RT-PCR法检测HUVEC中HSP27蛋白和m RNA的表达水平。结果：与对照组相比,无论是蛋白水平还是m RNA水平,10–9 mol/L E2对HUVEC中HSP27表达没有明显影响;10–8、10–7 mol/L E2诱导HUVEC中HSP27表达逐渐增加（P〈0.05）;而HUVEC与10–6 M他莫昔芬、10–7 M雌二醇共同孵育,其HSP27水平和单纯10–7 M雌二醇处理相比明显减少（P〈0.05）。结论：外源性E2能诱导HUVEC中HSP27的表达,呈剂量依赖性。他莫昔芬能阻断E2的这种上调HSP27的作用,提示雌激素诱导内皮细胞HSP27的表达依赖ER。     

尼古丁对人脐静脉内皮细胞凋亡及坏死的影响

目的不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡及坏死的影响。方法用CD34以免疫组织化学法鉴定HUVECs。通过3种不同浓度的尼古丁（3、30、300 ng/ml）刺激HUVECs 24 h后,用流式细胞仪检测其凋亡及坏死率。结果低浓度尼古丁促进细胞凋亡最强,而随着尼古丁浓度的增加,细胞凋亡率反而逐渐降低,各组差异具有统计学意义（P〈0.05）;此外,随着尼古丁浓度增加,细胞坏死率也日益增多,各组差异具有统计学意义（P〈0.05）。细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关（r=0.675）。结论尼古丁对HUVECs凋亡的影响具有浓度依赖性,细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关。     

尼古丁促人脐静脉内皮细胞凋亡

目的研究不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用及作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,根据尼古丁浓度分组为10-6、10-7和10-8mol/L组及对照组。尼古丁作用24 h后,用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC荧光双染色法检测细胞凋亡。Western blot检测Bax、Bcl-2和PARP-1蛋白表达,对其作用机制进行研究。结果与对照组相比,10-6、10-7mol/L尼古丁组细胞增殖活性下降(P0.05);凋亡数目增多(P0.01)。促凋亡蛋白Bax的表达量增加(P0.01);抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少(P0.01);PARP-1表达增加(P0.01)。结论一定浓度的尼古丁对血管内皮细胞具有促凋亡作用,加速动脉粥样硬化性疾病的发生发展。     

L-NAME对人脐静脉内皮细胞VE-cadherin表达的影响

目的　探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的eNOS、VE-cadherin蛋白表达的影响。 方法 HUVEC传代培养并用CD31特异性抗体进行鉴定,实验分为对照组、0.1 mmol/L L-NAME组、1.0 mmol/L L-NAME组,运用MTT比色法检测L-NAME对HUVEC细胞活性的影响,并采用免疫荧光细胞化学法或Western blot检测实验各组HUVEC细胞的eNOS、VE-cadherin等蛋白的表达,以观察L-NAME对HUVEC的eNOS蛋白、VE-cadherin蛋白的影响。 结果 95%以上传代后的细胞为CD31免疫阳性细胞。MTT比色法结果显示,随着L-NAME的浓度增加,HUVEC的细胞活力值逐渐减弱。免疫荧光细胞化学或Western blot结果显示,与对照组比较,0.1 mmol/L L-NAME组和1.0 mmol/L L-NAME组 HUVEC中eNOS的表达减弱（P<0.01）,并呈剂量依赖性降低;与对照组比较,0.1 mmol/L L-NAME组和1.0 mmol/L L-NAME组 HUVEC中VE-cadherin的表达增强（P<0.01）,呈剂量依赖性增加。 结论 L-NAME能抑制HUVEC 的eNOS表达和细胞活性,并影响细胞粘附连接的主要蛋白-VE-cadherin的表达。     

ICOS/ICOSL、OX40/OX40L及CD40/CD40L在系统性红斑狼疮患者外周血表达水平及其临床意义

本研究旨在检测SLE患者外周CD4+T细胞表面ICOS、OX40、CD40L及B细胞表面ICOSL、OX40L、CD40分子的表达情况,并探索其临床意义。采用流式细胞术,我们检测SLE患者及健康对照外周CD4+T细胞表面ICOS、OX40、CD40L及B细胞表面ICOSL、OX40L、CD40分子的表达,并分析其与SLE临床指标的相关性。结果显示,SLE患者外周CD4+T细胞上ICOS、OX40、CD40L及B细胞上ICOSL、OX40L、CD40分子的表达均明显高于健康对照组(均P0.05),且SLE患者CD4+T细胞表面ICOS的表达与患者血清IgG水平呈现正相关,B细胞表面ICOSL的表达与患者血清抗dsDNA抗体水平正相关,B细胞表面OX40L的表达与患者血清抗核抗体水平正相关(均P0.05)。上述结果表明SLE患者外周CD4+T细胞上ICOS、OX40、CD40L及B细胞上ICOSL、OX40L、CD40分子均发生上调,并与SLE自身抗体水平呈现正相关,提示分别表达于T细胞和B细胞表面的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L及CD40/CD40L分子,通过相互作用参与SLE的致病过程。     

不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养效果的影响

目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为（29.07±1.48）%,RPMI-1640培养基组S期细胞为（17.58±3.49）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。     

人脐静脉内皮胞在支架上粘附的影响因素研究

目的　研究人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)在支架上的粘附生长的影响因素 ,寻求最佳细胞粘附条件 .方法　HUVEC培养按文献方法进行 .利用免疫组化方法 (Sp法 )检测Ⅷ因子以鉴定细胞纯度 ,分别比较细胞代数、Fibronectin、poly-L -lysine及Ca2 浓度对HUVEC在支架上的粘附率的影响 .结果　 (1)第 2、3、4代HUVEC在裸支架上的粘附率分别为 (2 0 .0 5± 2 .1) %、(16 .12± 4.0 2 ) %、(10 .6 1± 5 .0 1) % (n =4) ;(2 )Fibronectin(n =6 )、poly-L -lysine(n =4)处理支架 ,HUVEC的粘附率分别为 (6 4.3± 6 .19) %、(39.88± 1.31) % ;(3)与 1mM、2mM、3mM、4mM、5mMCa2 相对应的细胞粘附率分别为 (5 9.81± 2 .5 8) %、(6 6 .88± 3.15 ) %、(78.35± 3.43) %、(81.6 7± 1.91) %、(84.83± 1.31) % .结论　 (1)Fibronectin、poly -L -lysine可提高HUVEC在支架上的粘附 .(2 )Ca2 在一定剂量范围内呈剂量依赖性地提高HUVEC在Fibronectin包被支架上的粘附 .     

A Unique Monoclonal Antibody mNI-11 Rapidly Enhances Spread Formation in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

We previously reported a novel monoclonal antibody (MAb), designated mNI-11, recognizing an adhesion-associated antigen distinct from any previously reported ones. In this article, this adhesion-associated antigen with a molecular weight of about 97 kDa was found to be strongly expressed on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) by fluorescence-activated cell sorter (FACS) analysis. Expression of this antigen on HUVECs was slightly increased in response to the exposure to tumor necrosis factor- (TNF-) or phorbol myristate acetate (PMA). As a biological function exerted by this antigen, it was of great interest that immobilized mNI-11 directly and rapidly enhanced the spread formation of HUVECs, whereas MAbs binding other adhesion-associated antigens such as mNI-58A (anti-CD11a), L130 (anti-CD18), L133.1 (anti-CD31), L178 (anti-CD44), L25.3 (anti-CD49d), or LB-2 (anti-CD54) did not carry such activity under the same conditions. The HUVECs spread formation enhanced by mNI-11 was completely blocked in the presence of a microfilament formation inhibitor, cytochalasin D (CyD), a Ca²⁺-calmodulin inhibitor, W-7, EDTA, and was partially blocked by a microtubule formation inhibitor, nocodazole, a protein kinase C (PKC) inhibitor, H-7, and a protein synthesis inhibitor, cycloheximide (CHX). However, a protein tyrosine kinase (PTK) inhibitor, genistein, did not affect the spread formation under the same conditions. Taken together, it was suggested that the spread formation of HUVECs enhanced by mNI-11 was mainly associated with the influx of Ca²⁺ and microfilament reorganization. In addition, the novel property associated with mNI-11 to enhance the spread formation of HUVECs was possibly mediated through its reaction against a unique epitope on HUVECs.     

替格瑞洛对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的 探究不同浓度的替格瑞洛对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞在蛋白及RNA水平表达细胞间黏附分子-1的影响。方法 离体培养人脐静脉内皮细胞,平均接种于6孔培养板,待细胞生长至融合状态时取三孔加入ox-LDL（50 μg/ml）,再分别加入不同浓度的替格瑞洛（0、20、40 μmol/L）。刺激干预24 h后采用Western Blot法测定ICAM-1的蛋白表达水平。重复实验,采用Real-time PCR法测定ICAM-1的RNA表达水平。结果 ①oxLDL能明显上调ICAM-1的表达;②Western Blot蛋白定量结果显示,oxLDL诱导组ICAM-1的蛋白表达明显高于对应的非诱导组（P＜0.05）;未予替格瑞洛干预组ICAM-1的蛋白表达高于替格瑞洛低浓度组（P＜0.05）;替格瑞洛低浓度组ICAM-1的蛋白表达高于替格瑞洛高浓度组（P＜0.05）;③Real-time PCR结果与Western Blot蛋白定量结果一致。结论 oxLDL能在RNA水平提高ICAM-1表达,替格瑞洛能在RNA水平抑制ICAM-1的表达,并与浓度正相关。     

The role of CD40 and CD154/CD40L in dendritic cells

In this review, we focus on the function of CD40–CD40L (CD154) interactions in the regulation of dendritic cell (DC)–T cell and DC–B cell crosstalk. In addition, we examine differences and similarities between the CD40 signaling pathway in DCs and other innate immune cell receptors, and how these pathways integrate DC functions. As research into DC vaccines and immunotherapies progresses, further understanding of CD40 and DC function will advance the applicability of DCs in immunotherapy for human diseases.     

Piper Sarmentosum Increases Nitric Oxide Production in Oxidative Stress: A Study on Human Umbilical Vein Endothelial Cells

OBJECTIVE:

Nitric oxide produced by endothelial nitric oxide synthase (eNOS) possesses multiple anti-atherosclerotic properties. Hence, enhanced expression of eNOS and increased Nitric oxide levels may protect against the development of atherosclerosis. Piper sarmentosum is a tropical plant with antioxidant and anti-inflammatory activities. This study aimed to investigate the effects of Piper sarmentosum on the eNOS and Nitric oxide pathway in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).

METHODS:

HUVECs were divided into four groups: control, treatment with 180 μM hydrogen peroxide (H₂O₂), treatment with 150 μg/mL aqueous extract of Piper sarmentosum, and concomitant treatment with aqueous extract of PS and H₂O₂ for 24 hours. Subsequently, HUVECs were harvested and eNOS mRNA expression was determined using qPCR. The eNOS protein level was measured using ELISA, and the eNOS activity and Nitric oxide level were determined by the Griess reaction.

RESULTS:

Human umbilical vein endothelial cells treated with aqueous extract of Piper sarmentosum showed a marked induction of Nitric oxide. Treatment with PS also resulted in increased eNOS mRNA expression, eNOS protein level and eNOS activity in HUVECs.

CONCLUSION:

Aqueous extract of Piper sarmentosum may improve endothelial function by promoting NO production in HUVECs.     

健胎液对人脐静脉内皮细胞分泌血管活性物质的影响

目的：探讨健胎液防治胎儿宫内生长迟缓的机理，应用血清药理学方法研究健胎液对缺氧人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）分泌血管活性物质内皮素（ＥＴ）、前列环素（ＰＧＩ_２）、一氧化氮（ＮＯ）的影响，以及该方药对缺氧ＨＵＶＥＣ形态结构上的保护作用。方法：将ＨＵＶＥＣ随机分成四组：正常组、缺氧组、血清组、健胎液组，观察细胞形态的改变；检测内皮素（ＥＴ）、前列环素（ＰＧＩ_２）和一氧化氮（ＮＯ），进行统计学处理。结果：健胎液可显著提高缺氧ＨＵＪＶＥＣ合成分泌ＰＧＩ_２、ＮＯ（Ｐ ＜ ０．０５～０．０１），同时，ＥＴ的释放显著降低（Ｐ_４ｈ＜ ０．０５）。从超微结构上观察，健胎液能明显减轻缺氧对ＨＵＶＥＣ的细胞器和细胞核的损伤，尤以保护线粒体免受缺氧损伤的作用更显著。结论；通过增强血管内皮细胞对缺氧的耐受性，调节血管性物质的分泌是健胎液防治胎儿宫内生长迟缓的机制之一。     

CD40/CD40L交联在CD4+T细胞诱导肿瘤细胞凋亡中的机制研究

目的探讨CD40/CD40L交联在CIK细胞中CD4 T细胞(CD4 CIK)诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制.方法体外扩增CIK细胞并纯化CD4 T细胞亚群,AnnexinV染色法观察CD4 CIK诱导肿瘤细胞凋亡的作用;半定量PCR、流式细胞法及ELISA法比较CD4 CIK激活前后CD40L的表达变化;将转染质粒pIRES2-EGFP-sCD40L的CHO细胞(CHO-sCD40L)与乳腺癌细胞T47D共孵育,监测24小时后其表面分子Fas的表达变化及对Fas介导凋亡的敏感性.结果CD4 CIK细胞可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡率随孵育时间和效靶比的升高而增加,且肿瘤细胞表面分子Fas水平升高,可从1.98%±0.23%升高到31.62%±7.07%;CD4 CIK细胞被激活后,CD40L表达水平均较激活前明显增加;成功转染的CHO-sCD40L细胞与T47D共培养后,T47D表面分子Fas可被诱导升高,加入CH-11 24小时后可观察到明显T47D细胞的凋亡.结论CD4 CIK可能通过CD40/CD40L交联提升肿瘤细胞表面功能性Fas表达来诱导其凋亡.     

CD40/CD40L expression in leukocytes from chronic granulomatous disease patients

Chronic granulomatous disease (CGD) is an inherited disorder caused by defects in the NADPH oxidase complex, which generates superoxide, the precursor of hydrogen peroxide (H(2)O(2)) and other reactive oxygen derivatives with microbicidal activity. Because CGD patients are at risk of chronic inflammatory manifestations, including inflammatory bowel disease and autoimmune diseases, and it is not clear whether these pathologies are exclusively secondary to altered superoxide production, or whether distinct immunologic defects are involved, we explored cell proliferation, lymphocyte cell counts, immunoglobulin levels, presence of autoimmune antibodies and expression of costimulatory molecules in leukocytes from CGD patients. We found that CGD patients have a diminished phytohemagglutinin-induced proliferation of blood mononuclear cells. Following stimulation with PMA plus ionomycin, a reduced percentage of CD40L expression in T lymphocytes and a diminished expression of CD40 molecules in neutrophils were observed on leukocytes from these patients. Our results suggest an altered interplay between elements of innate and adaptive immunity in CGD patients, which may be reflected in an increased susceptibility to opportunistic infections.